一种替韦立马干混悬剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种替韦立马干混悬剂及其制备方法。本发明所提供的替韦立马干混悬剂，包括下述质量份的组分：替韦立马一水化物的单斜晶体微粉20-30份、填充剂40-80份、助悬剂5-10份和润湿剂1-5份；其中，所述替韦立马一水化物的单斜晶体的单斜晶系的空间群为C2/c，晶胞参数：a＝28.724(2)，b＝10.533(1)，β＝112.18(1)°；晶胞体积晶胞内分子数Z＝8。本发明干混悬剂固体粉末的流动性好，加水搅拌后可迅速转变为均匀、稳定的混悬剂，泡沫少，沉降速率慢，再分散性良好，便于患者服用。经动物实验证实，本制剂半衰期长，血药浓度高，抗鼠痘病毒活性强。

权利要求

1.一种替韦立马干混悬剂，由下述质量份的组分组成：替韦立马一水化物的单斜晶体微粉25份，乳糖60份，羧甲基纤维素钠6份，泊洛沙姆4071.25份，二甲基硅油3份，微粉硅胶3份，阿斯巴甜0.25份和香橙0.25份；其中，所述替韦立马一水化物的单斜晶体的单斜晶系的空间群为C2/c，晶胞参数：a＝28.724(2)，b＝10.533(1)， β＝

112.18(1)°；晶胞体积 晶胞内分子数Z＝8。

2.根据权利要求1所述的替韦立马干混悬剂，其特征在于：所述替韦立马一水化物的单斜晶体微粉的平均粒径小于2μm、跨距小于1.5。

3.制备权利要求1所述替韦立马干混悬剂的方法，包括下述步骤：

1)称取处方量的乳糖、羧甲基纤维素钠、微粉硅胶、阿斯巴甜和香橙，分别过60-100目筛；

2)将替韦立马一水化物的单斜晶体进行微粉化处理，得到平均粒径小于2μm、跨距小于1.5的替韦立马一水化物的单斜晶体粉末；

3)称取处方量的泊洛沙姆407及等质量的乳糖混合均匀，粉碎过60-100目筛；

4)称取处方量的二甲基硅油与剩余质量的乳糖混合均匀；

5)将经过步骤1)一4)处理后的原料混合均匀，即得所述替韦立马干混悬剂。

说明书

一种替韦立马干混悬剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种替韦立马干混悬剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 替韦立马是一种小分子化合物(又叫ST-246，Tecovirimat)，能有效的对抗牛痘、猴痘、骆驼痘、鼠痘及天花等多种正痘病毒属病毒，并具有选择性(J.Virol，2005(20)：13139-13149；Antimicrob.Agents.Chemother，2007(51)：689-695)。受生物恐怖的威胁，作为一个口服抗天花病毒药物，替韦立马于2006年5月被美国FDA批准进行临床试验研究，目前处于临床I期研究阶段。美国专利US20080004452报道了替韦立马的胶囊剂配方(中国同名专利CN101702904)，中国专利(CN101912389)报道了替韦立马的片剂配方，但均未报道制剂的生物利用度及药代动力学参数，以及制剂的体内抗病毒活性。

[0003] 干混悬剂是一种细微粒剂型，它在肠胃的分布面积大，吸收快，生物利用度高，非常适合难溶性药物。另外，干混悬剂以固体形式储存，以混悬液形式口服，具有保存时间长、容易吞服的等优点，可适用儿童和部分有吞咽困难的成人。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种半衰期长、血药浓度高且抗痘病毒活性强的替韦立马干混悬剂及其制备方法。

[0005] 本发明所提供的替韦立马干混悬剂，包括下述质量份的组分：替韦立马一水化物的单斜晶体微粉20-30份、填充剂40-80份、助悬剂5-10份和润湿剂1-5份；

[0006] 其中，所述替韦立马一水化物的单斜晶体的单斜晶系的空间群为C2/c，晶胞参数：a＝28.724(2)，b＝10.533(1)， β＝112.18(1)°；晶胞体积晶胞内分子数Z＝8。

[0007] 对于活性成分“替韦立马一水化物的单斜晶体”的选择。本发明的发明人在前期进行替韦立马的研究中，制备出了上述替韦立马一水化物的单斜晶体，已获得中国发明专利授权，专利号为ZL200810118686.9。该晶体在空气和高湿(75％)的条件下稳定性好，不易吸潮，故以“替韦立马一水化物的单斜晶体”作为活性成分。

[0008] 所述替韦立马一水化物的单斜晶体微粉的平均粒径小于2um、跨距小于1.5。

[0009] 上述替韦立马干混悬剂中，填充剂可选自下述至少一种：乳糖、木糖醇和甘露醇；优选乳糖。

[0010] 上述替韦立马干混悬剂中，助悬剂为水溶性助悬剂，如羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。

[0011] 上述替韦立马干混悬剂中，润湿剂可选自下述至少一种：泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、吐温80和十二烷基硫酸钠(SDS)；优选泊洛沙姆407。

[0012] 为了减少替韦立马干混悬剂加水配制悬浮液时产生的大量气泡，其处方中还可包括1-4质量份的消泡剂。所述消泡剂具体可为二甲基硅油。

[0013] 由于消泡剂二甲基硅油的加入，会影响干混悬剂的流动性并且有结块的趋势，为了减小其对替韦立马干混悬剂流动性的影响，干混悬剂的处方中还需包括助流剂，其质量份可为1-4份。微粉硅胶具有良好的助流、抗结作用，并具有较强的吸附能力，作为药用辅料得到了广泛的应用。故可选用微粉硅胶作为本发明替韦立马干混悬剂中的助流剂。

[0014] 此外，为了改善替韦立马干混悬剂的口感和气味，其处方中还可包括0.1-1质量份的矫味剂。本发明中的矫味剂主要包括甜味剂和芳香剂。所述甜味剂包括阿斯巴甜、蔗糖等，所述芳香剂包括香橙等。

[0015] 作为一种优选的技术方案，所述替韦立马干混悬剂由下述质量份的组分组成：替韦立马一水化物的单斜晶体25份，乳糖60份，羧甲基纤维素钠6份，泊洛沙姆(407)1.25份，微粉硅胶3份，二甲基硅油3份，阿斯巴甜0.25份和香橙0.25份。

[0016] 以制成的袋装替韦立马干混悬剂为例，每袋替韦立马干混悬剂由替韦立马一水化物的单斜晶体500mg、乳糖1200mg、羧甲基纤维素钠120mg、泊洛沙姆(407)25mg，微粉硅胶60mg、二甲基硅油60mg、阿斯巴甜5mg和香橙5mg组成。

[0017] 将一袋替韦立马干混悬剂加入20-40ml水中，搅拌后可迅速形成均匀、稳定的混悬剂。

[0018] 制备所述替韦立马干混悬剂的方法，包括下述步骤：

[0019] 1)称取处方量的乳糖、羧甲基纤维素钠、微粉硅胶、阿斯巴甜和香橙，分别过60-100目筛；

[0020] 2)将替韦立马一水化物的单斜晶体进行微粉化处理，得到平均粒径小于2μm、跨距小于1.5的替韦立马一水化物的单斜晶体粉末；

[0021] 3)称取处方量的泊洛沙姆407及等质量的乳糖混合均匀，粉碎过60-100目筛；

[0022] 4)称取处方量的二甲基硅油与剩余质量的乳糖混合均匀；

[0023] 5)将经过步骤1)-4)处理后的原料混合均匀，即得所述替韦立马干混悬剂。

[0024] 本发明以替韦立马一水化物的单斜晶体为活性成分，添加适宜辅料如填充剂、助悬剂、润滑剂和矫味剂，混匀后制成干混悬剂。本发明干混悬剂固体粉末的流动性好，加水搅拌后可迅速转变为均匀、稳定的混悬剂，泡沫少，沉降速率慢，再分散性良好，便于患者服用。经动物实验证实，本制剂半衰期长，血药浓度高，抗鼠痘病毒活性强。

附图说明

[0025] 图1为实施例1制备的替韦立马一水化物的单斜晶体的显微照片。

[0026] 图2为实施例1制备的替韦立马两种环糊精包合物的溶解度柱形图。

[0027] 图3为实施例1中不同方法制备的替韦立马羟丙基倍他环糊精包合物的溶解度柱形图。

[0028] 图4为替韦立马干混悬剂的抗鼠痘病毒活性。

具体实施方式

[0029] 下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

[0030] 下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

[0031] 下述实施例中所用的材料均符合药用标准：乳糖(Foremost Farms USACooperative)，羧甲基纤维素钠(赫克力士化工)，CL-611(美国FMC公司)，吐温80(上海申宇医药化工有限公司)，泊洛沙姆407(BASF SE)，微粉硅胶(CABOT)，二甲基硅油(自贡晨光药业有限公司)，阿斯巴甜(江苏甜味剂有限公司)，香橙(浙江巨邦新技术有限公司)。

[0032] 下述实施例中所述替韦立马均指替韦立马一水化物的单斜晶体，按照中国专利ZL200810118686.9中的方法制备。

[0033] 实施例1、考察提高替韦立马一水化物的单斜晶体溶解度的方法

[0034] 替韦立马的使用有效剂量大，在水中溶解度低(测得值1.52微克/毫升)，且加酸不能提高溶解度，加碱导致降解，这对替韦立马的制剂研究提出不少挑战。

[0035] 为提高替韦立马一水化物晶体的生物利用度，发明人通过探索减小粒径、加增溶剂、环糊精包合以及固体分散体等方法来增加替韦立马一水化物的单斜晶体在水中的溶解度。

[0036] 1)替韦立马微粉化

[0037] 将药物微粉化处理，显著降低了粒径，可以提高药物与溶剂接触的表面积增加溶解度，还可以改善吸收。将替韦立马一水化物的单斜晶体进行微粉化处理，粉碎条件：气流粉碎机(JFC-10，北京航空航天大学)，转速2500rpm，工作压力0.8MPa。结果得到平均粒径小于2μm、跨距小于1.5的粉末(见图1)。

[0038] 2)环糊精包合替韦立马及溶解度测定

[0039] 药物经β-环糊精包合后，能增加其溶解度和溶出速率，提高其稳定性，减少其刺激性，改善不良气味及拓宽药物剂型等。为了增加替韦立马的溶解度，发明人选取倍他环糊精及具有更好水溶性的羟丙基倍他环糊精进行包合。

[0040] 制备方法(替韦立马微粉与环糊精以质量比1∶1，1∶3和1∶6制备的包合物)：

[0041] 将环糊精置于研钵中，加适量水使其润湿，加入替韦立马乙醇溶液，研磨至干粉状，真空干燥12h，即得。

[0042] 溶解度测定：按照药典2005年版凡例中的试验方法，取过量的研成细粉的供试品，置于25+2℃一定容量的水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟，30分钟后过0.45μm膜，进行HPLC检测。色谱仪器及相关试剂如下：液相色谱仪，SHIMADZU 20A紫外多波长检测器、Shimadzu LC-solution色谱工作站；试剂：乙腈(色谱纯，Feisher)，磷酸二氢钾(分析纯，天津市华东试剂厂，批号：080605)，三乙胺(分析纯，北京红星化工厂，批号：080310)。倍他环糊精及羟丙基倍他环糊精(药用级，山东新大有限公司)。液相分析色谱条件：流动相：乙腈-水相(0.01M磷酸二氢钾溶液，用三乙胺调pH值至7.0)(46∶54)；色谱柱，Diamonsil C18，5μ250×4.6mm；检测波长，223nm；流速，1.0ml/min；柱温，25℃。

[0043] 我们试验测定替韦立马在水中的溶解度为1.52微克/毫升，而倍他环糊精中替韦立马的溶解度增加显著，在替韦立马与倍他环糊精的质量比为1∶1，1∶3和1∶6的包合物中，替韦立马的溶解度分别为4.26，6.09及7.01微克/毫升(见图2)，而在替韦立马与羟丙基倍他环糊精的质量比为1∶1，1∶3和1∶6的包合物中，替韦立马的溶解度分别为28.88，30.96及64.34微克/毫升(见图2)。结果表明替韦立马与羟丙基倍他环糊精包合物溶解度更好。

[0044] 为进一步考察不同制备方法对替韦立马的羟丙基倍他环糊精包合物的溶解度的影响，发明人分别采用研磨法、搅拌法和超声法制备包合物。研磨法：同上述。搅拌法：羟丙基倍他环糊精加适量水溶解，滴入替韦立马乙醇溶液，75℃搅拌1h，停止加热，继续搅拌5h，真空干燥即得。超声法：将羟丙基倍他环糊精水溶液加替韦立马乙醇溶液，超声10min，真空干燥即得。然后测定以上不同制备方法对替韦立马溶解度的影响，色谱分析方法同上，结果见图3。

[0045] 从图3可以看出，用搅拌法和超声法制得的替韦立马羟丙基倍他环糊精包合物的溶解度高于研磨法，其中1∶6的超声法制得的包合物，在水中的溶解度达到99.27微克/毫升。

[0046] 3)替韦立马固体分散体及溶解度测定

[0047] 固体分散技术是将难溶性药物与适宜载体制成固体分散体，由于载体材料的抑晶作用，药物以微晶态、无定型态、胶体分散态或分子分散态存在，具有很大的分散度，并增加了药物的可润湿性。从而提高难溶性药物的溶解度，改善吸收。

[0048] 发明人分别采用熔融法和溶剂-熔融法制备以PEG4000、PEG6000和泊洛沙姆407为载体的固体分散体。

[0049] 制备方法：熔融法，先将载体置80℃水浴上，待其完全熔融后，加入替韦立马微粉搅拌均匀，迅速置-20℃冷冻固化8h，真空干燥约12h后粉碎即得。溶剂-熔融法，先将载体置80℃水浴上，待其完全熔融后，加入替韦立马乙醇溶液，搅拌至乙醇挥干，迅速置-20℃冷冻固化8h，真空干燥约12h后粉碎即得。将制备的替韦立马固体分散体进行溶解度测定，测定方法同2)，具体结果见表1。

[0050] 表1采用熔融法和溶剂-熔融法制备的不同载体替韦立马固体分散体的溶解度[0051]

[0052] 表1结果显示，替韦立马制成固体分散体后溶解度有所增加，其中泊洛沙姆407载体增加替韦立马的溶解度较好，优于PEG4000、PEG6000。

[0053] 实施例2、替韦立马干混悬剂处方的初步筛选

[0054] 考察了替韦立马在不同助悬剂及增溶剂配方的生物利用度，CL-611(美国FMC公司)是微晶纤维素和羧甲基纤维素钠进行特殊混合后制成的产品，助悬效果良好，因此尝试应用。另外，为了改善替韦立马的润湿性，尝试处方中分别加入了SDS、吐温80泊洛沙姆407和188等表面活性剂；而微粉硅胶有抗结块和助流的能力，可以使制剂具有良好的粉体学性质。羟丙基倍他环糊精包合替韦立马后可药物增加溶解度，也列入配方筛选。处方设计见表2，各处方均符合中国药典2010年版二部附录IO的要求。

[0055] 表2干混悬剂处方筛选

[0056]

[0057] 生物利用度测定：

[0058] 1)给药方法：将干混悬剂加水配制替韦立马浓度为6mg/ml混悬液，每组6只SD大鼠(雌雄各3只)(体重(200±20)g，合格证号为：SCXK-(军)2002-001)，禁食12小时(自由饮水)后按1ml/100g灌胃，给药剂量为60mg/kg，给药前(0h)及给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、24、36和48h由眼眶静脉采血0.2ml，3000r/min离心15min，分离血浆，置-20℃冰箱存放待处理。取大鼠血浆0.05ml，加入0.1ml水，再加入0.05ml甲苯磺丁脲(内标，1μg/ml)，摇匀后加入0.25ml乙腈，充分振荡后，10000r/min离心7min，取上清
10μl进样于LC/MS(液相/质谱连用)进行定量分析测定。替韦立马的大鼠静脉给药2mg/kg(溶解方法参照文献(J.Virology，2005(20)：13139-13149)，给药前禁食12小时，自由饮水。于给药前(0h)及给药后0.25、0.5、1、1.5、2、4、6、8、12和24h由眼眶静脉采血0.2m，
3000r/min离心15min，分离血浆置-20℃冰箱存放待处理。

[0059] 2)检测仪器及分析条件：色谱条件：液相色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(3.5μm，100mm×2.1mm)，流动相为含0.1％甲酸的乙腈∶水(60∶40，v∶v)，流速为0.2ml/min，进样10μl。质谱条件：Agilent 1100型LC-MS液质联用质谱仪，电喷雾离子源(ESI)，选择性离子检测(Selected Ion Monitoring，SIM)，雾化气压为35psi，干燥气流速为8ml/min，干燥气温度为350℃，四极杆温度保持在99℃，峰宽为0.04min，选择负-离子模式[M-H]，替韦立马(m/z)：375，甲苯磺丁脲(m/z)：269.3，EC №200-594-3，COO Germany)。

[0060] 3)数据分析：采用DAS药代动力学程序对所测数据进行分析，计算主要药代动力学参数，采用单因素方差分析和t检验对药代动力学参数进行显著性检验。

[0061] 结果表明，大鼠单次灌胃60mg/kg的替韦立马上述处方制剂，处方1、2、3、4的绝对生物利用度分别为7.3％、6.6％、16.5％和16.2％。从上述结果可看出，加入乳糖生物利用度明显提高。考虑替韦立马的用量大及成本，选择处方3继续进行优化。

[0062] 实施例3、替韦立马干混悬剂处方的优化

[0063] (1)润湿剂的筛选

[0064] 将500mg替韦立马加入到50mL水中，按照5mg的梯度递加润湿剂，观察替韦立马是否全部被润湿、沉入液面下，并且产生的泡沫较少。

[0065] 通过考察吐温80、十二烷基硫酸钠、泊洛沙姆407和188几种润湿剂对替韦立马的润湿效果，发现泊洛沙姆407加入量为20-25mg时，有很好的润湿效果。

[0066] (2)消泡剂的筛选

[0067] 混悬状态时，润湿剂会产生大量气泡，为了保证替韦立马的润湿只能加入消泡剂来减少泡沫的产生。二甲基硅油，无味无毒，具有生理惰性、良好的化学稳定性，由于二甲基硅油表面张力小，且不溶于水，用作为消泡剂已广泛用于石油、化工、医疗、制药、食品加工、纺织、印染、造纸等行业中，只要加入少量的就具有良好的消泡剂作用，因此我们选用二甲基硅油作为消泡剂。

[0068] 将500mg替韦立马加入到50mL水中，并向其中加入25mg泊洛沙姆407，按照10mg的梯度递加二甲基硅油，观察泡沫情况，至60mg时，显著减少了泡沫。

[0069] (3)微粉硅胶的筛选

[0070] 微粉硅胶具有良好的助流、抗结作用，并具有较强的吸附能力，作为药用辅料得到了广泛的应用。本处方中由于二甲基硅油的加入，会影响干混悬剂的流动性，并且有结块的趋势，向(2)确定的处方的基础上，加入不同量的微粉硅胶，观察干混悬剂的流动性，试验发现加入60mg微粉硅胶，能使替韦立马干混悬剂具有良好的粉体学性质。

[0071] (4)羧甲基纤维素钠(CMC-Na)用量的筛选

[0072] 羧甲基纤维素钠，溶于水后形成粘稠透明溶液，是一种理想的助悬剂。除羧甲基纤维素钠外，按(1)-(3)确定的处方称取制剂，加50mL水，从10mg开始，每10mg递加CMC-Na，震摇，观察混悬状态，直至CMC-Na加入量为120mg时产生良好的混悬状态，并且沉降体积比合格，确定助悬剂羧甲基纤维素钠的用量。

[0073] (5)矫味剂的筛选

[0074] 通过品尝，在(4)确定的处方基础上，加入5mg阿斯巴甜和5mg香橙后，替韦立马干混悬制剂的口味比较理想，故选用。

[0075] 实施例4、优化的替韦立马干混悬剂处方及制备工艺

[0076] 根据上述筛选试验，得到了替韦立马干混悬剂的最佳处方。

[0077] 替韦立马干混悬剂以每袋计，其处方组成为：替韦立马一水化物的单斜晶体微粉500mg，乳糖1200mg，羧甲基纤维素钠120mg，泊洛沙姆(407)25mg，微粉硅胶60mg，二甲基硅油60mg，阿斯巴甜5mg，香橙5mg。

[0078] 制备方法如下：

[0079] 1、根据处方计算投药量，分别将乳糖、羧甲基纤维素钠、微粉硅胶、阿斯巴甜和香橙过100目筛，贮存备用；

[0080] 2、取替韦立马原料微粉化处理，得到平均粒径小于2μm、跨距小于1.5的粉末；

[0081] 3、称取泊洛沙姆407及等质量乳糖混合均匀，粉碎过60目筛，贮存备用；

[0082] 4、称取二甲基硅油及剩余乳糖混合均匀，贮存备用；

[0083] 5、将全部原料及辅料混合均匀；

[0084] 6、选用符合国家标准(YYB00132002)的药品包装用复合膜袋，按照处方量封装即得。

[0085] 沉降比测定：

[0086] 干混悬剂的沉降比是合格制剂的一个重要指标，对上述方法制备的干混悬剂的沉降比进行测定。

[0087] 试验方法：称取干混悬剂样品5.0g(20090301批)，分别将其置于50ml有塞的玻璃试管中，加水适量，使样品颗粒均匀分散，再加水至50ml刻度处，密塞，用力振摇1分钟，记下混悬物的开始高度H0，静置3小时，记下混悬物的最终高度H，计算沉降体积比(沉降体积比＝H/H0)。结果表明该样品的沉降比为1.0。根据中国药典2010年版二部附录IO规定混悬液静置3小时后，沉降体积比应不低于0.90。故该实施例样品的沉降体积比合格。

[0088] 实施例5、替韦立马干混悬剂的药代动力学评价

[0089] 实施例4制备的替韦立马干混悬制剂具有流动性良好，加水容易混悬均匀，泡沫少，沉降体积比合格，口感口味好等特点。药代动力学(测定方法同实施例2)结果表明该制剂的半衰期长，血药浓度高(见表3)，体内抗鼠痘病毒活性强。

[0090] 表3大鼠口服替韦立马的药代动力学参数(n＝6， )

[0091]

[0092] 实施例6、替韦立马干混悬制剂的抗病毒活性

[0093] SPF级4～6周龄雌性昆明小鼠，每组12只，购自湖北省疾控中心医学实验动物中心。替韦立马干混悬剂(实施例4制备的500mg替韦立马/1975g制剂，批号：20090301)。将干混悬剂加水配制灌胃用量0.2ml中含给药剂量10mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的混悬液。给予鼠痘病毒后(均滴鼻感染20μl鼠痘病毒原液(感染量为6000TCID50))[0094] 上述鼠痘病毒中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所保证可在符合国家和军队有关规定且经相关部门批准后向公众提供；参考文献：安学芳，刘峰松，方明刚，朱幼玲，王汉中。鼠痘病毒的分离鉴定及感染性研究。中国病毒学，2003，18(6)：563-565。

[0095] 当天口服给予替韦立马混悬剂或辅料阴性对照，连续14天，观察28天内小鼠的死亡情况。另设健康组及阳性对照组(西多福韦，纯度大于98％，用无菌生理盐水溶解，配制腹腔注射用量0.1ml中含给药剂量15mg/kg)。结果表明(图4)，28天内，健康对照组和阳性对照组小鼠全部存活，没有死亡。阴性对照组小鼠在第6天开始出现死亡，到第10天12只小鼠全部死亡。替韦立马制剂的各剂量组小鼠也全部存活，没有死亡，这说明替韦立马在很低剂量下(10mg/kg)时，即可对小鼠起到很好的保护作用。