GHGKHKNK八肽对5-氟尿嘧啶抗肿瘤增效作用的医药用途

摘要

本发明公开了GHGKHKNK八肽在制备对5-氟尿嘧啶抗肿瘤增效作用的药物中的用途，提供了GHGKHKNK八肽对抗癌药物的协同增效作用，与5-Fu联用时效果更好，在增强5-Fu抗癌作用的同时还能明显的降低其毒副作用，为癌症的治疗提供更好的方法。

权利要求

1.GHGKHKNK八肽在制备对5-氟尿嘧啶抗肝癌腹水增效作用的药物中的用途。

说明书

GHGKHKNK八肽对5-氟尿嘧啶抗肿瘤增效作用的医药用途

技术领域

[0001] 本发明涉及GHGKHKNK八肽对抗癌药物的增效作用，尤其是公开了GHGKHKNK八肽在制备对5-氟尿嘧啶抗肿瘤增效作用的药物中的用途，属于医学制药技术领域。

背景技术

[0002] 目前，癌症已经成为致使人类死亡的主要疾病之一。据世界卫生组织报告，每年世界上有超过1000万起新的癌症病例发生。目前治疗癌症的主要方法包括：手术治疗、抗癌药物的化学治疗、放射治疗和生物反应调节剂及其它治疗。但是，抗癌药物的选择性差，毒副作用大，所以在癌症治疗中的使用受到限制。例如：5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，简称：5-Fu) 是世界上应用最广的抗癌药之一，也是最常用的腹腔内化疗药物之一，临床上用于治疗结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等多种癌症。5-Fu抗瘤谱广，但体内代谢快，半衰期短，并且有严重毒性反应，会引起患者骨髓抑制及出血性肠炎等。因此，5-Fu一般与其他抗肿瘤药物配伍使用。因此，设计一种物质与抗癌药物联合用于癌症的治疗，并且通过充分发挥各自的优势，以提高药物的抗癌活性、降低抗癌药物的毒性，这是一种被普遍接受的治疗癌症的方法。

[0003] 将GHGKHKNK八肽与抗癌药物5-FU联合应用，以增强5-FU的抗癌作用，降低其毒副作用，以更好的应用于癌症的治疗，是本发明要实现的任务。

发明内容

[0004] 本发明提供了GHGKHKNK八肽在制备对5-氟尿嘧啶抗肿瘤增效作用的药物中的用途，目的是通过联合用药降低药物毒性，提高抗癌药物药性。

[0005] 本发明涉及的GHGKHKNK八肽（以下简称：八肽）具有下列一级结构：

[0006] Gly-His-Gly-Lys-His-Lys-Asn-Lys，是从人高分子激肽原的第5结构域中选择的含有能在体外抑制细胞黏附和浸润关键模序His-Gly-Lys的八肽化合物，它是一种天然的小分子多肽，由甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、赖氨酸八个氨基酸组成。

[0007] 通过GHGKHKNK八肽与5-Fu联用用药增敏增效的大量实验，证明八肽对肝癌细胞和动物肝癌肿瘤模型表现出高度的抑制作用，抑制肝癌细胞的转移，抑制小鼠肝癌腹水的生成，延长肿瘤模型鼠的生存期，可以增强多种药物的抗癌药性，其可制备成新的抗肿瘤药物和抗肿瘤增敏剂，特别是GHGKHKNK八肽在增强 5-Fu抗癌作用的同时还能明显的降低其毒副作用。

[0008] GHGKHKNK八肽作为抗肝癌药物增敏增效剂的剂型可为口服药剂或注射药剂，所述口服药剂可为滴丸、软胶囊或冻干粉针等，所述注射药剂可为注射用乳剂等，注射用乳剂可为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂等。

[0009] 本发明的积极效果在于：

[0010] 提供了GHGKHKNK八肽对抗癌药物的协同增效作用，与5-Fu联用时效果更好，在增强 5-Fu抗癌作用的同时还能明显的降低其毒副作用，为癌症的治疗提供更好的方法。

附图说明

[0011] 图1 为发明实验例各组小鼠体重变化曲线图；

[0012] 图2 为发明实验例流式细胞仪检测结果；

[0013] 图3 为发明实验例各组小鼠生存期曲线；

[0014] 其中，1、空白对照组；2、八肽低剂量组；3、八肽中剂量组；4、八肽高剂量组；5、5-FU高剂量组；6、5-FU低剂量组；7、联合给药组。

具体实施方式

[0015] 按照医药工业中已知的方法，将GHGKHKNK八肽作为5-Fu的联合增效作用的药物，与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂相混合，可以制成各种不同剂型的药物组合物。包括口服药剂或注射药剂，所述口服药剂可为滴丸、软胶囊或冻干粉针等，所述注射药剂可为注射用乳剂等，注射用乳剂可为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂等。

[0016] 以下实验例通过GHGKHKNK八肽与5-Fu联用抗癌的药理药效实验来进一步说明本发明，但并不表示本发明只限于该实施例。

[0017] 以下实验进一步表明本发明提高抗癌药物药性治疗效果：

[0018] 本实验采用GHGKHKNK八肽与5-Fu联用对肝癌腹水瘤鼠进行治疗，观察GHGKHKNK八肽对5-Fu的增效作用及二者联用的治疗效果。

[0019] 八肽、5氟尿嘧啶组合药物的药效学实验：

[0020] 1、动物模型的建立

[0021] 将H22细胞培养于37℃、5%CO2含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中，收集对数生长期的细胞用RPMI-1640稀释，制成单细胞悬液，用0.4%台盼蓝染色计数活细胞数＞7
95%，随后用NaCl稀释至细胞数为10/uL。取200 μl此细胞悬液接种于2只KM小鼠（雄
6
性，20-22g）腹腔，一周后无菌抽取小鼠腹水，用生理盐水调整细胞浓度至2.5×10/mL，每
5
只小鼠腹腔注射0.2mL（5×10cell/只）构建小鼠腹水瘤模型。

[0022] 2、实验分组与给药

[0023] 取12只正常小鼠做空白组，将模型鼠随机分为7组，分别为空白对照组（生理盐水）、八肽低剂量组（12.5 μg/kg.d）、八肽中剂量组（50 μg/kg.d）、八肽高剂量组（200 μg/kg.d）、5-Fu高剂量组（20 mg/kg.d）、5-Fu低剂量组（5 mg/kg.d）、八肽与5-Fu联合用药组（5 mg/kg.d 5-Fu﹢12.5 μg/kg.d 八肽），每组18只。分组后分别给予药物处理，每组每次注射的药物均为0.2 ml，连续用药30d。仅5-Fu高剂量组每隔1日给药一次，其余用药组连续给药30d。停药后第2天以颈椎脱位法处死各组小鼠进行相关指标检测。在生存期研究方面，各组小鼠在肿瘤细胞接种后开始观察直到死亡。

[0024] 3、检测指标和检测方法

[0025] 3.1 观察各组小鼠的一般状态

[0026] 在实验过程中，隔日观察各组小鼠饮食、精神状态和体型的变化等。

[0027] 3.2 观察各组小鼠体质量变化

[0028] 自接种之日起，隔日监测8组小鼠（每组选择12只）体重并记录，结果进行统计学处理，绘制表格。

[0029] 3.3 记录各组小鼠腹水平均体积及小鼠腹水中瘤细胞和红细胞数目[0030] 每组取6只小鼠，颈椎脱位法处死后无菌条件下开腹，用无菌吸管收集腹水入离心管，计算腹水体积。并留取腹水标本行相关指标的检测。在上述标本中每个标本取腹水50 μl，稀释10倍，按白细胞计数法记录白细胞和红细胞数目。

[0031] 3.4 流式细胞仪检测小鼠腹水中的细胞周期

[0032] 处死小鼠，收集小鼠腹水，加入氯化铵红细胞裂解液，于1500 r /min离心3 min后，用PBS 洗涤离心3次，加入70%的冷乙醇0.5 ml固定。在4℃条件下放置30 min后上机检测细胞周期。

[0033] 3.5 观察并记录各组小鼠的生存期

[0034] 记录各组小鼠的存活时间，结果进行统计学处理，绘制表格。

[0035] 4、实验结果

[0036] 4.1 各组小鼠的一般状态

[0037] 接种5-8d后空白对照组小鼠体质量迅速增加，随后逐渐出现精神萎靡不振、呆滞少动、步态不稳，反应性差，进水进食减少，粪便干燥，晚期腹部极度膨隆，呈恶液质状态，死亡速度很快，30天内全部死亡。八肽与5-Fu联合组体质量增加较慢，精神较好，生存期很长。其他组虽有改善，但联合用药组疗效最好。

[0038] 4.2 各组小鼠体重变化

[0039] 小鼠体重变化统计如图1所示，小鼠体重变化曲线表明，与空白对照组相比，除八肽高剂量组与其趋势相似外，其余各用药组小鼠体重增加均比较缓慢，但联合用药组的增加速度是最慢的，几乎与正常组相同。虽然5-Fu组的体重变化也很缓慢，但毒性大，小鼠体重下降快且死亡率高。

[0040] 4.3 各组小鼠腹水平均体积及小鼠腹水中瘤细胞和红细胞数目

[0041] 小鼠腹水平均体积及小鼠腹水中瘤细胞和红细胞数目统计结果见表1，与空白对照组相比，各用药组小鼠的腹水平均体积变小，腹水中瘤细胞和红细胞数目下降，其中5-Fu高剂量组和联合用药组小鼠的腹水平均体积最小，腹水中瘤细胞和红细胞数目下降最多，但5-Fu高剂量组小鼠死亡率高，而联合用药组小鼠状态良好且无死亡。

[0042] 表1 各组小鼠腹水平均体积及小鼠腹水中瘤细胞和红细胞数目

[0043]分组 n 腹水体积(ml) 瘤细胞数（107/mL） 红细胞数（107/mL）
空白对照 5 7.9±1.91 8.06±1.48 13.52±7.47
八肽低剂量 6 4.13±2.80 5.47±2.03 2.57±2.85
八肽中剂量 6 1.6±1.55 2.43±2.3 1.6±1.74
八肽高剂量 4 5.4±3.91 7.6±3.58 8.98±5.89
5-Fu高剂量 4 0.1±0.14 0 0
5-Fu低剂量 6 4.38±2.65 5.38±2.95 2.77±2.17
本发明联合给药 6 0.38±0.48 0.58±0.94 0

[0044] 4.4 流式细胞仪检测小鼠腹水中的细胞周期

[0045] 如图2，联合给药组小鼠腹水中处于S期的瘤细胞数目明显少于空白对照组。

[0046] 4.5 各组小鼠的生存期情况

[0047] 各组小鼠的生存期情况统计如图3，各组小鼠生存期均比空白对照组长，其中八肽与5-Fu联合用药组小鼠生存期最长。

[0048] 通过以上实验结果可知，虽然GHGKHKNK八肽与5-Fu单独用药时在减轻小鼠腹腔肿瘤负荷、抑制腹水生成和延长生存期方面均有一定的作用，但二者联用时效果更好，这充分显示了GHGKHKNK八肽在增强 5-Fu抗癌作用的同时还能明显的降低其毒副作用。