丹酚酸A镁盐的制备方法

摘要

本发明一种了一种丹酚酸A镁盐，尤其涉及丹酚酸A镁盐及制备方法及应用及其冻干粉针组合物，属于医药技术领域。丹酚酸A镁盐的制备方法，包括以下步骤：取氢氧化镁，加入水中，通入CO2至澄清，超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A，在20-40℃反应20-40min得反应液；加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋后再进行离心，冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐。本发明提供的丹酚酸A镁盐在水溶液中稳定性强、溶解度高、刺激性小;丹酚酸A镁盐的制备方法工艺好、操作简单;含丹酚酸A镁盐的冻干粉针组合稳定性好、均匀度高、符合药品复水性要求；本发明中提供的丹酚酸A镁盐可用于制备治疗缺血性脑中风的药物。

权利要求

1.丹酚酸A镁盐的制备方法，其特征在于结构式如下：

其制备方法包括以下步骤：取氢氧化镁，加入水中，通入CO2至澄清，超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A，在20-40℃反应20-40min，得反应液；加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋后再进行离心，冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐，所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1：0.2-1。

2.根据权利要求1所述的丹酚酸A镁盐的制备方法，其特征在于所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1：0.4-0.6。

3.根据权利要求2所述的丹酚酸A镁盐的制备方法，其特征在于所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1：0.5。

4.根据权利要求1所述的丹酚酸A镁盐的制备方法，其特征在于所述的涡旋时间为

3-7min，离心时间为3-7min，涡旋和离心重复操作2-6次。

说明书

丹酚酸A镁盐的制备方法

技术领域

[0001] 本发明一种丹酚酸A镁盐，尤其涉及丹酚酸A镁盐及制备方法及应用及其冻干粉针组合物，属于医药技术领域。

背景技术

[0002] 丹酚酸A为存在于唇形科植物丹参中的一种酚酸类化合物。丹酚酸A具有抗血小板聚集、抗凝、抗血栓形成、抗氧化等多种药理活性，对心脑血管疾病具有潜在的治疗价值。 [0003] 丹酚酸A水溶性差，且其pH较小，刺激性大，使其在制剂中的使用受到很大的限制，使丹酚酸A良好的医药用途难以得到发挥，因此应该通过各种方法来提高丹酚酸A的水溶性，并降低其刺激性，从而扩大其在心脑血管疾病治疗中的应用。

[0004] CN101361728A公开了丹酚酸A的注射制剂工艺，但其研制的丹酚酸A水溶性较差，刺激性较大；CN101134726公开了丹酚酸A的衍生物及其作为抗氧剂的应用，强调的是丹酚酸A不同结构上进行修饰的产物作用，与本发明的所研制的镁盐化合物其结构存在明显不同。CN101497570A公开了丹酚酸A氨基酸盐制备和粉针组合，其刺激性虽然有所降低，但仍然存在一定的刺激性，现有技术中还没有一种方法不但能提高丹酚酸A的水溶性，又能降低其刺激性。

发明内容

[0005] 为解决上述技术问题本发明提供一种丹酚酸A镁盐及制备方法及用途和冻干粉针组合物，目的是在水溶液中增强稳定性、提高溶解度和均匀度、减小刺激性，工艺性好，操作简单并可以用于制备治疗缺血性脑中风。

[0006] 为达上述目的本发明是通过下述技术方案实现的。

[0007] 丹酚酸A镁盐，其结构式如下：

[0008] 。

[0009] 所述的丹酚酸A镁盐的制备方法，它包括以下步骤：取氢氧化镁，加入水中，通入CO2至澄清，超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A，在20-40℃反应20-40min得反应液；加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋后再进行离心，冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐。 [0010] 所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1：0.2-1。

[0011] 所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的优选摩尔比为1：0.4-0.6。

[0012] 所述的丹酚酸A与碳酸氢镁的最佳摩尔比为1：0.5。

[0013] 所述的涡旋时间为3-7min，离心时间为3-7min，涡旋和离心重复操作2-6次。 [0014] 所述的丹酚酸A镁盐在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用。

[0015] 所述的丹酚酸A镁盐的冻干粉针组合物，它是由下述原料按重量份数比制备而成：包括丹酚酸A镁盐30份、抗氧剂2份和冻干支撑剂100份。

[0016] 所述的抗氧剂为亚硫酸氢钠、亚硫酸钠，硫代硫酸钠，偏重亚硫酸钠和抗坏血酸中的一种或几种；冻干支撑剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖和右旋糖酐中的一种或几种。 [0017] 所述的抗坏血酸浓度为0.05%-0.25%，优选浓度0.20%；甘露醇浓度为5%-20%，优选浓度为10%。

[0018] 由于采用上述技术方案，使得本发明具有如下优点和效果：

[0019] 由于丹酚酸A水溶性差，且其pH较小。所以将其制备成镁盐。解决了丹酚酸A溶解性差的问题，并且其pH增大，降低了刺激性，并且镁离子同样可以降低刺激性，进一步降低了药物的刺激性。

[0020] 由于丹酚酸A镁盐具有很强的抗氧活性，存在着易被氧化、稳定性差，制备注射液很难保证其长期稳定，因此将丹酚酸A镁盐制成冻干制剂成为最优选注射剂型。 [0021] 本发明的丹酚酸A镁盐可以大大提高丹酚酸A在水中的溶解性，特别是在形成丹酚酸A镁盐后，在水溶液中的溶解度达到100mg/ml以上。

[0022] 本发明所述丹酚酸A镁盐的使用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化。用以治疗疾病剂量可以是10-100mg/人。

[0023] 综上所述，本发明提供的丹酚酸A镁盐在水溶液中稳定性强、溶解度高、不易被氧化；丹酚酸A镁盐的制备方法工艺性好、操作简单；含丹酚酸A镁盐的冻干粉针组合物稳定性好、均匀度高、符合药品复水性要求；本发明中提供的丹酚酸A镁盐主要用于缺血性脑中风的治疗。

附图说明

[0024] 图1为丹酚酸A氢谱图。

[0025] 图2为丹酚酸A镁盐氢谱图。

[0026] 图3为丹酚酸A碳谱图。

[0027] 图4为丹酚酸A镁盐碳谱图。

[0028] 图5为丹酚酸A红外光谱图。

[0029] 图6为丹酚酸A镁盐红外光谱图。

具体实施方式

[0030] 下面结合实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为本发明的几个具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

[0031] 下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

[0032] 下述的实施例中的百分含量如无特别说明，均为质量百分含量。

[0033] 实施例1

[0034] 称取氢氧化镁0.82g，加入1L水,通入CO2至澄清,超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A 36.0g，30℃反应30min得反应液；加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋5min，离心5min，涡旋和离心重复操作3次。冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐。丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1:0.2。

[0035] 实施例2

[0036] 称取氢氧化镁4.10g，加入1L水,通入CO2至澄清,超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A 36.0g，30℃反应30min得反应液，加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋5min，离心5min，涡旋和离心重复操作3次。冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐。丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1:1。

[0037] 实施例3

[0038] 称取氢氧化镁2.05g，加入1L水,通入CO2至澄清,超声除去水中CO2得碳酸氢镁；加入丹酚酸A 36.0g，30℃反应30min得反应液，加入与反应液等体积的乙酸乙酯，涡旋5min，离心5min，涡旋和离心重复操作3次。冷冻干燥即得丹酚酸A镁盐。丹酚酸A与碳酸氢镁的摩尔比为1:0.5，为最优比例。

[0039] 对丹酚酸A镁盐结构确证如下：

[0040] 核磁共振氢谱（CD3OD,300MHz）的解析：

[0041] 通过核磁共振氢谱可以看出H-8″的化学位移变化最大，丹酚酸A的δ（H-8″）=5.16，丹酚酸A的δ（H-8″）=5.06，△δ=0.10,而其它氢信号的化学位移变化很小，说明丹酚酸A镁盐成盐的部位在羧基上。

[0042] 核磁共振碳谱（CD3OD,300MHz）的解析：

[0043] 丹酚酸A和丹酚酸A镁盐的碳谱数据比较（溶剂：CD3OD）Pos 丹酚酸A（文献） 丹酚酸A 丹酚酸A镁盐 差值
9″ 174.0 173.5 178.0 +4.5
7′ 168.7 168.6 169.3 +0.7
3′ 148.2 148.1 147.9 -0.2
147.3 147.3 146.4 -0.9
4 146.7 146.6 146.3 -0.3
2′ 146.5 146.3 146.1 -0.2
4″ 146.1 146.0 145.7 -0.3
3″ 145.2 145.1 144.5 -0.6
3 144.4 144.3 144.0 -0.3
7 137.8 137.8 137.4 -0.4
1′ 131.4 131.2 131.2 0
1″ 130.7 129.2 130.7 +1.5
1 128.3 128.3 128.0 -0.3
6 126.1 126.0 125.9 -0.1
6″ 122.0 122.0 121.9 -0.1
8 120.7 120.6 120.5 -0.1
6 120.4 120.4 120.2 -0.2
5′ 120.1 120.0 120.0 0
2″ 117.4 117.3 117.3 0
5″ 116.3 116.4 116.4 0
4′ 116.1 116.3 116.2 -0.1
115.7 115.4 116.2 +0.8
5 114.8 114.7 114.8 +0.1
2 113.9 113.9 113.9 0
8″ 75.0 74.6 77.3 +2.7
7″ 38.0 37.8 38.3 +0.5

[0044] 由表中数据可以看出：丹酚酸A生成镁盐后，其C9″位的羧基碳的化学位移变化最大，由δ173.5向低场位移至δ178.0。与-COOH相邻的C8″，7″，1″δ值也有较明显地改变，分别向低场位移2.7，0.5，1.5。由以上分析可以推断，丹酚酸A镁盐以离子键成盐的。丹酚酸A通过C9″-COOH与镁离子以离子键结合形成。

[0045] 红外光谱解析：-1

[0046] 丹酚酸A的—COOH的C=O的伸缩振动为1693.8cm ，生成镁盐后，出现对称伸缩和-1不对称伸缩两个峰，其中丹酚酸A镁盐的C=O的不对称伸缩为1618.5 cm ，符合羧酸盐的-1 -1
C=O的不对称伸缩振动（1610-1550 cm ），丹酚酸A镁盐的C=O的对称伸缩为1400.2 cm ，-1
符合羧酸盐的C=O的对称伸缩振动（1440-1360 cm ）进一步证明了丹酚酸A镁盐的生成。

[0047] 实施例4

[0048] 称取30g丹酚酸A镁盐（实施例3方法制备），2g抗氧剂抗坏血酸，加入500ml注射用水使其溶解，再加入100g冻干支撑剂甘露醇使其溶解，补加注射用水至1000ml，加入1g针用炭（0.01%w/v）加热至30℃，搅拌30min，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，装量为每支含丹酚酸A30mg，真空压塞，压盖，贴签，包装即得丹酚酸A镁盐的冻干粉针组合。

[0049] 实施例5

[0050] 称取30g丹酚酸A镁盐，2g的亚硫酸氢钠，加入500ml注射用水使其溶解，再加入50g的甘露醇和50g右旋糖酐使其溶解，补加注射用水至1000ml，加入1g针用炭（0.01%w/v）加热至30℃，搅拌30min，用0.22μm微孔滤膜过滤，分装，装量为每支含丹酚酸A30mg，真空压塞，压盖，贴签，包装即得丹酚酸A镁盐的冻干粉针组合。

[0051] 实施例6

[0052] 实施例4中的抗氧剂为2g亚硫酸氢钠，其它同实施例4。

[0053] 实施例7

[0054] 实施例4中的抗氧剂为2g偏重亚硫酸钠，其它同实施例4。

[0055] 实施例8

[0056] 实施例4中的抗氧剂为2g亚硫酸钠，浓度为0.20%，其它同实施例4。

[0057] 实施例9

[0058] 实施例4中的抗氧剂为2g硫代硫酸钠，浓度为0.20%，其它同实施例4。

[0059] 实施例10

[0060] 实施例4中的抗氧剂为1g硫代硫酸钠和1g抗坏血酸，其它同实施例4。

[0061] 实施例11

[0062] 实施例4中的抗氧剂为1g硫代硫酸钠和1g亚硫酸氢钠，其它同实施例4。

[0063] 实施例12

[0064] 实施例4中的抗氧剂为1g抗坏血酸和1g亚硫酸氢钠，其它同实施例4。

[0065] 实施例13

[0066] 实施例4中的抗氧剂为0.5g抗坏血酸，其它同实施例4。

[0067] 实施例14

[0068] 实施例4中的抗氧剂为1g抗坏血酸，其它同实施例4。

[0069] 实施例15

[0070] 实施例4中的抗氧剂为1.5g抗坏血酸，其它同实施例4。

[0071] 实施例16

[0072] 实施例4中的抗氧剂为2.5g抗坏血酸，其它同实施例4。

[0073] 实施例17

[0074] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为100g乳糖，其它同实施例4。

[0075] 实施例18

[0076] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为100g葡萄糖，其它同实施例4。

[0077] 实施例19

[0078] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为100g蔗糖，其它同实施例4。

[0079] 实施例20

[0080] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为100g右旋糖酐，其它同实施例4。

[0081] 实施例21

[0082] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为50g甘露醇和50g右旋糖酐，其它同实施例4。

[0083] 实施例22

[0084] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为50g甘露醇和50g蔗糖，其它同实施例4。

[0085] 实施例23

[0086] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为50g甘露醇和50葡萄糖，其它同实施例4。

[0087] 实施例24

[0088] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为50g甘露醇和50乳糖，其它同实施例4。

[0089] 实施例25

[0090] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为50g甘露醇，其它同实施例4。

[0091] 实施例26

[0092] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为75g甘露醇，其它同实施例4。

[0093] 实施例27

[0094] 实施例4中的抗氧剂为2g抗坏血酸，冻干支撑剂为200g甘露醇，其它同实施例4。

[0095] 实施例28

[0096] 抗氧剂种类对丹酚酸A镁盐冻干制剂的影响。

[0097] 实验方案：

[0098] 方案1：实施例4的丹酚酸A镁盐和抗氧剂抗坏血酸。

[0099] 方案2：实施例6的丹酚酸A镁盐和抗氧剂亚硫酸氢钠。

[0100] 方案3：实施例7的丹酚酸A镁盐和抗氧剂偏重亚硫酸钠。

[0101] 方案4：实施例8的丹酚酸A镁盐和抗氧剂焦亚硫酸钠。

[0102] 方案5：实施例9的丹酚酸A镁盐和抗氧剂硫代硫酸钠。

[0103] 实验方法：

[0104] 分别取100mg抗氧剂加入100ml丹酚酸A镁盐（30mg/ml）水溶液（抗氧剂含量0.10%），对其进行分装在30℃水浴中放置24小时，测定含量。结果如下：
方案 24h后含量与初始含量的比（%）
方案198.9
方案297.0
方案396.5
方案494.0
方案580.0

[0105] 实验结论：

[0106] 通过上述实验表明，抗氧剂抗坏血酸对丹酚酸A镁盐的氧化保护作用最好。所以优选抗坏血酸。

[0107] 实施例29

[0108] 抗坏血酸的浓度对丹酚酸A镁盐冻干制剂的影响。

[0109] 实验方案：

[0110] 方案1：实施例13的抗坏血酸的含量0.05%。

[0111] 方案2：实施例14的抗坏血酸的含量0.10%。

[0112] 方案3：实施例15的抗坏血酸的含量0.15%。

[0113] 方案4：实施例4的抗坏血酸的含量0.20%。

[0114] 方案5：实施例16的抗坏血酸的含量0.25%。

[0115] 实验方法：

[0116] 分别配制以上抗坏血酸的含量的丹酚酸A镁盐（30mg/ml），进行冷冻，观察状态。加水复溶24小时后，测其含量变化，结果如下：
方案 冷冻后状态 复溶后的含量与初始含量的比（%）
方案1良好 98.0
方案2良好 98.8
方案3良好 99.2
方案4良好 99.5
方案5不好 99.4

[0117] 实验结论：

[0118] 通过上述实验表明，抗坏血酸含量0.20%对丹酚酸A镁盐的氧化保护作用最好。所以优选0.20%抗坏血酸。

[0119] 实施例30

[0120] 冻干支撑剂种类的选择。

[0121] 实验方案：

[0122] 方案1：实施例17的乳糖浓度10%。

[0123] 方案2：实施例18的葡萄糖浓度10%。

[0124] 方案3：实施例19的蔗糖浓度10%。

[0125] 方案4：实施例4的甘露醇浓度10%。

[0126] 方案5：实施例20的右旋糖酐浓度10%。

[0127] 实验方法：

[0128] 分别加入10%的支撑剂到含有0.20%抗坏血酸的丹酚酸A镁盐水溶液（30mg/ml），冷冻干燥后，观察产品外观，复溶性，复溶的澄清度，结果如下：方案 外观复溶性（秒） 澄清度
方案1萎缩21 澄清
方案2萎缩19 澄清
方案3萎缩30 澄清
方案4饱满28 澄清
方案5饱满55 澄清

[0129] 实验结论：

[0130] 通过上述实验表明，优选甘露醇为冻干支撑剂。

[0131] 实施例31

[0132] 甘露醇的比例对丹酚酸A镁盐冻干注射剂的影响。

[0133] 实验方案：

[0134] 方案1：实施例25中的甘露醇浓度5%。

[0135] 方案2：实施例4中的甘露醇浓度10%。

[0136] 方案3：实施例26中的甘露醇浓度15%。

[0137] 方案4：实施例27中的甘露醇浓度20%。

[0138] 实验方法：

[0139] 分别加入不同比例的甘露醇到含有0.20%抗坏血酸的丹酚酸A镁盐水溶液（30mg/ml），冷冻干燥后，观察产品外观，复溶性，复溶的澄清度，复溶后的丹酚酸A的含量与初始含量的比，结果如下：方案 外观 复溶性（秒） 澄清度 含量比（%）
方案1萎缩 10 澄清 98.3
方案2饱满 28 澄清 99.6
方案3饱满 35 澄清 99.5
方案4饱满 47 澄清 99.7

[0140] 实验结论：

[0141] 通过上述实验表明，15%和20%复溶时间太长，所以优选10%的甘露醇作为支撑剂。

[0142] 实施例32

[0143] 丹酚酸A及丹酚酸A镁盐对大鼠局部脑缺血损伤的影响。

[0144] 1.分组与试验方法

[0145] Wistar大鼠随机分为(1)假手术组、（2）模型对照组、（3）丹酚酸A组、（4）丹酚酸A镁盐低剂量组、（5）丹酚酸A镁盐中剂量组和（6）丹酚酸A镁盐高剂量组。每组10只。禁食12小时后，水合氯醛（350mg/kg,i.p.）麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉、颈外动脉近心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm的栓线由颈外动脉插入至颅内，与轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离，以上实验均在23℃~25℃进行。术后各组动物静脉注射相应药物，24小时后观察并记录大鼠的行为障碍:(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面,计为0分,如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分,肘屈曲计为2分,肩内旋计为3分,既有腕弯曲和/或肘屈曲,又有肩内旋者,计为4分。（B）将动物至于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。（C）将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧张力下降程度不同计为1，2和3分。（D）动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。

[0146] 行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑（TTC）染色，正常组织染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相计算梗塞面积比。并测脑皮层MDA含量。

[0147] 2.结果

[0148] 如表所示，缺血24小时后，大鼠表现明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的25%左右；给予不同剂量的丹酚酸A镁盐，动物的行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显好转，且呈剂量依赖性。与丹酚酸A组相比有明显性差异。详见下表。

[0149] 与空白对照组比较 ﹡P<0.05，﹡﹡P<0.01,与丹酚酸A组比较#P<0.05，##P<0.01 [0150] 实施例33

[0151] 丹酚酸A镁盐对脑缺血大鼠血小板的影响。

[0152] 1.分组和方法

[0153] 动物随机分为空白对照组（冻干支撑剂），血栓通组（40mg/kg），SAL（40mg/kg），丹酚酸A镁盐小剂量组（2.5mg/kg），丹酚酸A镁盐中剂量组（5mg/kg），丹酚酸A镁盐高剂量组（10mg/kg）。每组10只。禁食12小时后，尾静脉注射相应药物，5min后，腹主动脉取血5ml，以3.8%枸橼酸钠抗凝。650rpm离心15min，移出上层血浆即富血小板血浆（PRP）0.5ml，余下部分再以3000rpm离心10min，上层清夜即为乏血小板血浆（PPP）。调整PRP的血小板数<200万个/ml，移取0.3ml调整好浓度的血小板至比浊管内，将比浊管放入用PPP调零后的血小板聚集仪中。37℃温育3min后加入10μl的ADP，同时开启血小板聚集仪进行记录，记录时间为5min，打印记录结果。

[0154] 最大聚集率用 ±s表示，并与空白对照组比较，T-Test检验。

[0155] 2、结果：

[0156] 结果如表所示，丹酚酸A镁盐2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg剂量组血小板最大聚集率明显低于空白对照组。

[0157]﹡ ﹡﹡ #

[0158] 与空白对照组比较 P<0.05， P<0.01；与丹酚酸A组比较 P<0.05

[0159] 实施例34

[0160] 丹酚酸A镁盐对大鼠静脉血栓形成的影响。

[0161] 1、分组和方法

[0162] 动物随机分为空白对照组（冻干支撑剂），血栓通组（40mg/kg），SAL（40mg/kg），丹酚酸A镁盐小剂量组（2.5mg/kg），丹酚酸A镁盐中剂量组（5mg/kg），丹酚酸A镁盐高剂量组（10mg/kg）。每组10只。禁食12小时后，各组动物尾静脉注射相应药物，15min后水合氯醛麻醉（350mg/kg，i.p.），开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉，缝合腹部。6小时后重新开腹，在结扎处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称重。

[0163] 数据用 ±s表示，并与空白对照组比较，T-Test检验。

[0164] 2、结果：

[0165] 结果如表所示，丹酚酸A镁盐5mg/kg、10mg/kg剂量组血栓重量明显低于空白对照组。

[0166] 与空白对照组比较 ﹡P<0.05，﹡﹡P<0.01；与丹酚酸A组比较#P<0.05 [0167] 实施例35

[0168] 丹酚酸A镁盐的刺激性试验。

[0169] （1）小鼠抓挠试验 ：

[0170] 将实验小鼠随机分2组，每组10只。每只小鼠背部皮下注射0.1 ml待测液后，记录10min内每只小鼠抓挠给药部位的首次时间和次数。

[0171]

[0172] 丹酚酸A镁盐的刺激性较小。

[0173] （2）大鼠舔足试验：

[0174] 将实验大鼠（70～120g）随机分为2组，每组10只。给每只大鼠的右后足内注射0.1ml待测液后，记录15min内每只大鼠舔足的首次时间和舔足时间。

[0175]

[0176] 丹酚酸A镁盐的刺激性较小。

[0177] (3)大鼠尾静脉刺激性试验

[0178] 将实验大鼠（180～220g）随机分为2组，每组6只。以0.3ml·min-1的速度尾静脉给药100mg·kg-1，连续给药三天。给药过程中及给药后24 h内观察给药部位是否变色、出现红斑和肿胀。

[0179]

[0180] 由大鼠尾静脉刺激性实验结果可见，丹酚酸A镁盐的刺激性明显比丹酚酸A的小。 [0181] （4）丹酚酸A镁盐的血管刺激性

[0182] 取健康家兔6只，随机分成2组，每组3只。第一组每日一侧耳缘静脉缓慢注射浓度为0.375mg/ml的丹酚酸A镁盐3.33ml/kg,第二组同法注射氯化钠注射液，连续3日。于注射完后24小时，肉眼观察组织变性或坏死等明显刺激反应。试验结果表明，肉眼观察注射部位血管均未见明显充血水肿等刺激反应，病理切片观察结果丹酚酸A镁盐与氯化钠注射液对照组相似，耳廓皮肤的的表皮和真皮结构完好，未见变性、坏死、缺失及过度角化，耳缘静脉未见扩张充血、未见血栓形成，周围组织未见出血、水肿。说明丹酚酸A镁盐的刺激性。