一种环脂肽化合物或其盐的纯化方法

摘要

本发明公开了一种环脂肽化合物或其盐的纯化方法，所述的方法包括步骤：(1)将式I化合物粗品上样至大孔吸附树脂；(2)将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗涤液洗涤大孔吸附树脂；和(3)将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗脱液，将式I化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来。所述的纯化方法与公开技术相比具有有机溶媒用量少，不使用硅胶，对环境的危害性小的优点，并且收集到的式I化合物的纯度也比以前公开的方法有所提高。

权利要求

1.一种如式Ⅰ化合物或其盐的纯化方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：（1）将式Ⅰ化合物粗品上样至大孔吸附树脂；

（2）将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗涤液洗涤大孔吸附树脂；和（3）将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗脱液，将式Ⅰ化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来；

式I;

步骤（1）中所述的吸附树脂为含卤素元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂；

或

步骤（1）中所述的式I化合物粗品中含有可电离的盐，且所述的大孔吸附树脂选自由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香族吸附树脂。

2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）是将含有式Ⅰ化合物粗品的溶液流过装载有大孔吸附树脂的层析柱或将含有式Ⅰ化合物粗品的溶液和大孔吸附树脂混合，使式Ⅰ化合物粗品上样至大孔吸附树脂。

3.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述的流过速度为每小时0.1－10个柱床体积。

4.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的含卤素元素以化学键键合苯乙烯聚合体的吸附树脂选自：SP-207、SP207ss或它们的混合物；所述由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香族吸附树脂选自：XAD-1、XAD-2、XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-16、XAD-16HP、HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、HP-40、HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、、XAD-6、XAD-7、XAD-7HP、XAD-8或它们的混合物。

5.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的含卤素元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂为含溴元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂。

6.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，可电离的盐选自硫酸盐，硝酸盐，含卤盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，硅酸盐，过硫酸盐，铬酸盐，乳酸盐，草酸盐或它们的混合物。

7.如权利要求1－3任一所述的纯化方法，其特征在于，所述的有机溶剂选自C1-4醇、C1-4酮。

8.如权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、丁酮、或它们的混合物。

9.如权利要求1－3任一所述的纯化方法，其特征在于，步骤（2）中，以洗涤液的总体积计，其中有机溶剂的体积百分比为0-3％。

10.如权利要求9所述的纯化方法,其特征在于,所述的洗涤液中也包括加入可电离的盐，可电离的盐选自硫酸盐，硝酸盐，含卤盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，硅酸盐，过硫酸盐，铬酸盐，乳酸盐，草酸盐或它们的混合物。

11.如权利要求9所述的纯化方法,其特征在于,所述有机溶剂的体积百分百比为

0-2%。

12.如权利要求1－3任一所述的纯化方法，其特征在于，步骤（3）中，以洗脱液的总体积计，其中有机溶剂的体积百分比为0－20％。

13.如权利要求12所述的纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂的体积百分百比为

0-5%。

14.如权利要求12所述的纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂的体积百分百比为

2-5%。

15.如权利要求1－3任一所述的纯化方法，其特征在于，步骤（1）中，式Ⅰ化合物粗品和大孔吸附树脂的重量体积比为0.1－15g/L。

说明书

一种环脂肽化合物或其盐的纯化方法

技术领域

[0001] 本发明涉及有机化学领域，尤其涉及一种如式I所示的环脂肽化合物或其盐的纯化方法。

背景技术

[0002] 真菌感染已经成为免疫缺陷病人发病率和死亡率居高不下的主要原因。在过去的20年里，霉菌感染的发病率显著增加。真菌感染的高危人群包括重症病人，外科病人以及那些患有HIV感染，血癌和其它肿瘤疾病的病人。那些经过器官移植的病人同样是真菌感染的高危人群。

[0003] 棘球白素作为一类新的抗真菌药物，在治疗由念珠菌或曲霉引起的感染方面效果良好。这类药物又以卡泊芬净和米卡芬净为代表。棘球白素类药物通过抑制1，3-β糖苷键的形成来抑制真菌，从而更好地减小了对人体的伤害，在高效的同时尽可能的降低了副作用，因此它们在使用过程中比传统抗真菌药更安全。

[0004] FK463(米卡芬净)是如式III所示的化合物，它是以式II化合物FR901379(M0)为前体通过切侧链得到式I化合物FR179642(M1)，然后经过合成添加侧链的方法方法得到的。所以，要得到高纯度的米卡芬净，纯度高的式I化合物很关键。

[0005]

[0006] 已经报道的式II化合物转化为式I化合物的酰基侧链脱酰的酶有链霉菌属的细菌有环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)4811号菌株，环圈链霉菌8703号菌株、链霉菌(Streptomyces sp.)6907号菌株，以及IFO13244，IFO6798，IFO31963，IFO9951，NRRL12052等。US5376634公开了一种将式II化合物通过酶反应转化为式I化合物后，先将转化液过滤，通过活性炭柱初步纯化，然后上硅胶柱进一步纯化的纯化方法，经过减压浓缩后，得到白色固体状的式I化合物。这种方法使用有机溶媒数量大，且使用的活性炭和硅胶不能循环利用，易造成了环境污染，并严重影响了操作人员的身体健康，不适合工业化大规模生产。

[0007] 因此，本领域急需找到一种不需要大量溶媒，不使用硅胶的纯化方法，克服上述现有技术中存在的缺陷，同时提高式I化合物的纯度。

发明内容

[0008] 本发明旨在提供一种纯化式I化合物的方法。

[0009] 本发明提供了一种如式I化合物或其盐的纯化方法，所述的方法包括步骤：

[0010] (1)将式I化合物粗品上样至大孔吸附树脂；

[0011] (2)将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗涤液洗涤大孔吸附树脂；和

[0012] (3)将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗脱液，将式I化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来；

[0013]

[0014] 在本发明提供的上述纯化方法中，所述的大孔吸附树脂选自：由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香族吸附树脂、或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂。

[0015] 在另一优选例中，所述的吸附树脂选自：XAD-1、XAD-2、XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-16、XAD-16HP、HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、HP-40、HP-50、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP-207、SP207ss、XAD-6、XAD-7、XAD-7HP、XAD-8、HP-2MG、或它们的混合物。

[0016] 在另一优选例中，所述的吸附树脂为含卤素元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂。

[0017] 在另一优选例中，所述的吸附树脂为含溴元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂。

[0018] 在另一优选例中，所述的吸附树脂选自：SP-207、SP207ss或它们的混合物。

[0019] 在另一优选例中，所述步骤(1)是将含有式I化合物粗品的溶液流过装载有大孔吸附树脂的层析柱或将含有式I化合物粗品的溶液和大孔吸附树脂混合，使式I化合物粗品上样至大孔吸附树脂；所述的流过速度为每小时0.1-10个柱床体积。

[0020] 在另一优选例中，所述含有式I化合物粗品的溶液中含有可电离的盐；所述的大孔吸附树脂选自由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香族吸附树脂、或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂；可电离的盐包括硫酸盐，硝酸盐，含卤盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，硅酸盐，过硫酸盐，铬酸盐，乳酸盐，草酸盐等，或它们的混合物。

[0021] 在本发明提供的上纯化方法中，步骤(2)中，以洗涤液的总体积计，其中有机溶剂的体积百分比为0-3％，优选0-2％。

[0022] 在本发明提供的上纯化方法中，步骤(3)中，以洗脱液的总体积计，其中有机溶剂的体积百分比为0-20％，优选0-5％。

[0023] 在本发明提供的上纯化方法中，步骤(1)中，式I化合物粗品和大孔吸附树脂的重量体积比为0.1-15(g/L)；优选5-10(g/L)。

[0024] 在本发明提供的上纯化方法中，所述的有机溶剂选自C1-4醇、C1-4酮；较佳地，所述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、丁酮、或它们的混合物；最佳地，选自甲醇、乙醇或丙酮。

[0025] 据此，本发明提供了一种不需要大量溶媒，不使用硅胶的纯化方法，克服了现有技术中存在的缺陷，同时提高了式I化合物的纯度。

附图说明

[0026] 图1显示了实施例1式I化合物的粗品1的HPLC图谱。

[0027] 图2显示了实施例6中经纯化后的式I化合物的HPLC图谱。

具体实施方式

[0028] 本发明人经过大量的试验研究发现，选用芳香族系大孔吸附树脂，特别是芳香族系衍生型树脂，例如把溴结合在芳香族系的骨架上。强化了疏水吸附力，对于式I化合物这样亲水性很强的物质有较强的吸附能力，在纯化式I化合物及其相关的杂质时，有非常显著的效果。另外在选用普通的由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的芳香族吸附树脂、或具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂时，疏水吸附力较弱，对式I化合物这样亲水性很强的物质，吸附能力不强，本发明人创造性地在式I化合物与大孔吸附树脂吸附时，加入可电离的盐，从而提高目标物质的疏水性，使得式I化合物更容易的吸附在树脂上，实现纯化式I化合物的目的。

[0029] 本发明提供的式I化合物的纯化方法包括步骤：

[0030] 第一步，将式I化合物粗品上样至大孔吸附树脂；

[0031] 第二步，将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗涤液洗涤大孔吸附树脂；

[0032] 第三步，将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗脱液，将式I化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来。

[0033] 第一步可以通过将含有式I化合物粗品的溶液与大孔吸附树脂接触实现。所述的接触可以是a.将吸附树脂直接投入含有式I化合物粗品的溶液中，然后搅拌5-120分钟；或者是b.将吸附树脂装在层析柱等层析装置中，使含有式I化合物粗品的溶液流过层析柱，流速在每小时0.1-10个柱床体积。

[0034] 在本发明的一个实施例中，所述的纯化方法包括步骤：

[0035] A，将吸附树脂直接投入含有式I化合物粗品的溶液中，然后搅拌5-120分钟；

[0036] B，使含有式I化合物粗品的溶液与所述树脂分离；

[0037] C，将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗涤液洗涤步骤B中留下的大孔吸附树脂；

[0038] D，将水、有机溶剂、或有机溶剂和水的混合溶液作为洗脱液对步骤C中得到的洗涤过的吸附树脂进行洗脱，然后收集含有式I化合物的洗脱液，得到纯化的式I化合物。

[0039] 步骤B中所述的分离包括过滤、离心等方法使树脂与滤液相分离。

[0040] 在本发明提供的所有纯化方法中，所述的有机溶剂选自C1-4醇、C1-4酮或其它们的混合物，优选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、丁酮或它们的混合物。

[0041] 在本发明提供的所有纯化方法中，所述的吸附树脂选自：由苯乙烯与二乙烯苯聚合而成的非极性的脂肪族吸附树脂或者具有甲基丙烯酸酯单元结构的中等极性的甲基丙烯酸吸附树脂。优选自：美国罗门哈斯公司(RohmHaas)生产的XAD系列吸附树脂，及日本三菱化学公司生产的Diaion HP系列吸附树脂和含溴元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂。更优地，选自XAD-1、XAD-2、XAD-3、XAD-4、XAD-5、XAD-6、XAD-7、XAD-7HP、XAD-8、XAD-16、XAD-16HP、HP-10、HP-20、HP-20ss、HP-21、HP-30、HP-40、HP-50、HP-2MG、SP-825、SP-850、SP-70、SP-700、SP207、SP207ss或它们的混合物。最优地，选自HP20、XAD-16、XAD-16HP、SP207或者是它们的小颗粒化产品，例如HP-20ss、SP207ss，其粒径为0.063mm-0.150mm，可更大程度上提高分离性能。

[0042] 另外，本发明的作者在完成本发明时，发现含卤元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂具有更高的吸附力和分离效率。优选含溴元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂，最优的吸附树脂为SP207，SP207ss或它们的混合物。目前市场上有售的含卤元素以化学键键合苯乙烯聚合基体的吸附树脂，主要以三菱化学的SP207，SP207ss为主，但不限于这两种型号的树脂。

[0043] 对于不含卤素的吸附树脂，上述第一步在式I化合物粗品上样前，将式I化合物粗品和可电离的盐混合，以增加上样液的电导率和目标物质式I化合物的疏水性，增强树脂对目标化合物的吸附能力。可电离的盐包括硫酸盐，硝酸盐，含卤盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，硅酸盐，过硫酸盐，铬酸盐，乳酸盐，草酸盐等，或它们的化合物。优选自下述的一种或一种以上最常用盐的混合：卤化盐，硫酸盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐和柠檬酸盐等。最优选自：NaCl，KCl和(NH4)2SO4。

[0044] 在本发明提供的纯化方法的第二步中，所述洗涤液中有机溶剂的浓度为0-3％，优选0-2％。洗涤液中也包括加入可电离的盐。可电离的盐包括硫酸盐，硝酸盐，含卤盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，硅酸盐，过硫酸盐，铬酸盐，乳酸盐，草酸盐等，或它们的混合物。优选自下述的一种或一种以上最常用盐的混合：卤化盐，硫酸盐，磷酸盐，醋酸盐，碳酸盐和柠檬酸盐等。最优选自：NaCl，KCl和(NH4)2SO4。

[0045] 在本发明提供的纯化方法的第三步中，所述洗脱液中有机溶剂的浓度为0％-20％，优选0-5％。

[0046] 在本发明提供的纯化方法中，洗涤可以进行1、2、或3次。洗涤速度在每小时0.1-10个柱床体积。洗脱速度在每小时0.1-10个柱床体积。

[0047] 如本文所用，“如式I所示化合物”或“式I化合物”可以互换使用，都是指具有以下结构式的化合物或其药学上可接受的盐：

[0048]

[0049] 如本文所用，“药学上可接受的盐”是指同选自下述碱形成的盐类：无机碱如钠、钾、镁、钙、铝等；有机碱如甲胺、乙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己醇胺、赖氨酸、鸟氨酸等，或其它药学上可接受的盐有关的碱。

[0050] 如本文所用，“如式I所示化合物的纯度”、“式I化合物的纯度”或“式I化合物的HPLC纯度”可以互换使用，都是指在本发明提供的高效液相色谱(HPLC)检测条件下，测得的式I化合物的峰面积和所有峰的峰面积之和的百分比。

[0051] 如本文所用，“如式I所示化合物的粗品”或“式I化合物的粗品”可以互换使用，都是指在本发明提供的高效液相色谱(HPLC)检测条件下，式I化合物的含量＜80％的混合物。可以使用本领域现有的方法得到式I化合物的粗品，例如但不限于，参照EP0431350B1实施例1中描述的方法，通过Coleophoma sp.F-11899(FERM BP2635)菌发酵，然后将菌体用有机溶剂抽提所得。优选的是，将发酵液直接加入两倍体积的有机溶剂抽提。优选的有机溶剂选自：甲醇、乙醇或丙酮。

[0052] 如本文所用，“含有如式I所示化合物的粗品的溶液”或“含有式I化合物的粗品的溶液”可以互换使用，是指含有目标式I化合物和一种或多种非目标化合物的溶液，可以是式I化合物的粗品溶解于水或者缓冲溶液获得，也可以是任何过程得到的式I化合物的反应液。可以使用本领域现有的制备式I化合物的方法所获得的式I化合物的反应液，参见CN1040541C实施例1。例如但不限于，通过在含有式I化合物的转化后液中加入一定量的水或有机溶剂获得的溶液。式I化合物的粗品溶液中的有机溶剂的浓度为0％-2％。

[0053] 如本文所用，“上样”是指将含有式I化合物的粗品的溶液和大孔吸附树脂接触，使式I化合物的粗品吸附到大孔吸附树脂上的过程。所述的接触包括将大孔吸附树脂直接投入溶液中，然后搅拌吸附；还有将大孔吸附树脂装入层析装置中，使溶液流过层析柱。

[0054] “洗涤”大孔吸附树脂，指使合适的缓冲液在大孔吸附树脂中或上通过。

[0055] 如本文所用，“洗涤缓冲液”指在洗脱目标式I化合物之前，用来洗涤(主要是有机相)大孔吸附树脂的缓冲液。方便的，洗涤缓冲液和加样缓冲液可以是同一极性，但这不是必须的。

[0056] 将分子从大孔吸附树脂上“洗脱”下来，指通过改变大孔吸附树脂周围的缓冲液极性从大孔吸附树脂上除下该分子，该极性能使缓冲液与分子竞争大孔吸附树脂上的吸附位点。

[0057] 如本文所用，“洗脱缓冲液”用来将目标式I化合物从固相上洗脱下来。洗脱缓冲液能使目标式I化合物从大孔吸附树脂上洗脱下来。

[0058] 从含有目标式I化合物和一种或多种非目标化合物的组合物中“纯化”式I化合物，指通过从组合物中(完全或部分的)除去至少一种非目标化合物来提高组合物中式I化合物的纯度。

[0059] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

[0060] 本发明的主要优点在于：

[0061] 1、本发明提供了一种成本低廉的纯化环脂肽化合物，特别是棘白菌素类化合物的新方法。

[0062] 2、本发明提供的方法所经过的纯化步骤具有路线短、条件温和、纯化收率高、使用有机溶剂的量非常小、处理简单、对环境污染小等特点，在很大程度上减轻了工艺操作和对设备要求，降低了生产成本。

[0063] 3、本发明提供的方法能得到较稳定的目标产物，有利于终产品的质量控制，有利于工业化大生产。

[0064] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

[0065] 本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

[0066] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

[0067] 下述实施例中式I化合物HPLC检测所用的方法：

[0068] 在Waters分析性HPLC体系上进行分析。反相HPLC分析用于测定FR179642、棘白菌素B核物质及其它类似物。反相分析采用PLATISIL ODS色谱柱(粒径5μm，4.6mmi.d×250mm)，并且保持在30℃。以3％乙腈/0.5％磷酸二氢钠作流动相，流速为1ml/分钟，并在210nm下UV检测。

[0069] 实施例1

[0070] 制备式I化合物的粗品1

[0071] 参照US5376634实施例1中描述的方法，制备含有式I化合物的溶液，其中式I化合物的含量为7.3g/L，HPLC纯度为73.91％。HPLC图谱参见附图1和表1。

[0072] 表1

[0073]保留时间 面积 峰高 ％面积
1 5.257 52004 4607 1.15
2 5.815 202507 25208 4.49
3 6.432 87928 6165 1.95
4 6.895 8923 1043 0.20
5 7.291 121333 10471 2.69
6 7.710 44199 2234 0.98
7 8.353 11225 1099 0.25
8 9.578 3334358 165845 73.91
9 11.460 134324 9884 2.98
10 13.681 11436 779 0.25
11 14.848 9766 729 0.22
12 15.163 23807 1379 0.53
13 19.268 307011 6129 6.81
14 24.014 162338 6277 3.60

[0074] 实施例2

[0075] 式I化合物的纯化

[0076] 取500mL实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中含式I化合物共3.65克。

[0077] 在粗品溶液中加入25g NaCl，溶解后将粗品溶液上样到一个装有370mlHP20ss树脂的层析柱，上样流速为每小时1个柱床体积。上样结束后，以3％的氯化钠水溶液洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以1000ml 纯水为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为3.4克(收率93.2％)，纯度为97.2％。

[0078] 实施例3

[0079] 式I化合物的纯化

[0080] 取1L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为7.3克。

[0081] 将粗品溶液加入40gKCl溶解后，上样到一个装有0.8L XAD-16树脂的层析柱，上样流速为每小时1个柱床体积。上样结束后，以纯水洗涤5个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以2.5L3％甲醇为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为6.6克(收率90.4％)，纯度为96.5％。

[0082] 实施例4

[0083] 式I化合物的纯化

[0084] 取1L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为7.3克。

[0085] 将粗品溶液装到一个5L塑料白壶中，加入1.4L XAD-16HP树脂和50g(NH4)2SO4，于室温下搅拌120分钟然后将含有树脂的滤液倾倒于铺有滤纸的布氏漏斗中过滤，滤液弃去，树脂装入层析柱中，以3L纯水洗涤，洗涤完毕以5L 4％丙酮洗脱，收集含有式I化合物的部分，收集液经HPLC检测，其中的式I化合物为6.7克(收率92.5％)，纯度97.3％。

[0086] 实施例5

[0087] 式I化合物的纯化

[0088] 取0.5L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为4.6克。

[0089] 将粗品溶液上样到一个装有300mL SP207ss树脂的层析柱，上样流速为每小时5个柱床体积。上样结束后，以1％乙醇洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积，以2％乙醇洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以3.6L 3％乙醇为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为4.33克(收率94.2％)，纯度为99.0％。HPLC图谱参见附图2和表2。

[0090] 表2

[0091]保留时间 面积 峰高 ％面积
1 6.481 100952 8789 0.41
2 6.890 29266 406 0.12
3 7.509 34144 889 0.14
4 9.464 24141515 1222680 99.00
5 11.387 82921 1983 0.33

[0092] 实施例6

[0093] 式I化合物的纯化

[0094] 取0.5L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为4.6克。

[0095] 将粗品溶液上样到一个装有600mL SP207ss树脂的层析柱，上样流速为每小时5个柱床体积。上样结束后，以纯化水洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以7.2L 2％乙醇为洗脱液，洗脱流速为每小时2个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为4.4克(收率95.6％)，纯度为99.0％。

[0096] 实施例7

[0097] 式I化合物的纯化

[0098] 取0.5L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为4.6克。

[0099] 将粗品溶液上样到一个装有46L SP207树脂的层析柱，上样流速为每小时5个柱床体积。上样结束后，以纯化水洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以150L 20％乙醇为洗脱液，洗脱流速为每小时2个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为4.02克(收率87.4％)，纯度为98.1％。

[0100] 实施例8

[0101] 式I化合物的纯化

[0102] 取0.5L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为4.6克。

[0103] 将粗品溶液上样到一个装有460mL SP207树脂的层析柱，上样流速为每小时5个柱床体积。上样结束后，以1％的乙醇洗涤2个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以3.0L 5％乙醇为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为4.4克(收率95.6％)，纯度为97.9％。

[0104] 对比实施例1

[0105] 式I化合物的纯化

[0106] 取500mL实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中含式I化合物共3.65克。

[0107] 将粗品溶液上样到一个装有370ml HP20ss树脂的层析柱，上样流速为每小时1个柱床体积。上样结束后，以1000ml 纯水为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为3.4克(收率93.2％)，纯度为75.2％。

[0108] 对比实施例2

[0109] 取1L实施例1获得的含有式I化合物的粗品溶液，其中式I化合物的含量为7.3克。

[0110] 将粗品溶液上样到一个装有0.8L XAD-16树脂的层析柱，上样流速为每小时1个柱床体积。上样结束后，以纯水洗涤5个柱体积，洗涤流速为每小时1个柱床体积。洗涤完毕后，以2.5L3％甲醇为洗脱液，洗脱流速为每小时1个柱床体积，收集含有式I化合物的部分并混匀。收集液经HPLC检测，其中的式I化合物含量为6.6克(收率50.4％)，纯度为79.5％。

[0111] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。