本发明涉及一种含有复合益生素的饲料添加剂及其制备方法，其原料组分如下：熟化玉米皮，玉米浆，低聚异麦芽糖，低聚甘露糖，低聚半乳糖；以及，布拉酵母(Saccharomyces boulardii)菌液，地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)菌液，乳酸杆菌(lactobacillus)菌液；本发明所述的饲料添加剂不仅克服了现有饲料添加剂原料单一的缺陷，而且产品中益生菌的存活菌量高，具有安全、环境可降解及成本低的特点。
1.一种含有复合益生素的饲料添加剂，其特征在于，原料组分如下，均为重量份：熟化玉米皮80～100份，玉米浆10～20份，低聚异麦芽糖0.5～5份，低聚甘露糖
1.5×10cfu/ml ～2.5×10cfu/ml 菌 体 浓 度 的 布 拉 酵 母（Saccharomyces
boulardii）菌液5～15份，5.0×10cfu/ml～8.5×10cfu/ml 菌体浓度的地衣芽孢杆菌
（Bacillus Licheniformis）3～10份，1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml菌体浓度的乳酸杆菌（lactobacillus ）5～15份；
熟化玉米皮是将玉米皮在0.08MPa～0.12MPa压力下，115℃～121℃，pH4.0～5.8的条件下进行蒸气加热30～50min；
所述低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖均以纯品计。
2.如权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于，原料组分如下，均为重量份：熟化玉米皮85～100份，玉米浆10～12份，低聚异麦芽糖3～5份，低聚甘露糖0.8～
1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml菌体浓度的布拉酵母菌液8～10份，5.0×10cfu/
ml～8.5×10cfu/ml 菌体浓度的地衣芽孢杆菌4～6份，1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml菌体浓度的乳酸杆菌10～12份。
3、权利要求1或2所述的含有复合益生素的饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤如下： （1）取布拉酵母，经28℃～32℃活化培养30h～38h，然后经28℃～32℃、160r/min～
180r/min摇床扩大培养30h～36h，获得菌体浓度1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的布拉酵母菌液；
（2）取地衣芽孢杆菌，经35℃～38℃活化培养10h～16h，然后经34℃～36℃、160r/
min～200 r/min摇床扩大培养10h～15h，获得菌体浓度5.0×10cfu/ml～8.5×10cfu/ml的地衣芽孢杆菌菌液；
（3）取乳酸杆菌，经32℃～38℃活化培养20h～30h，然后经30℃～36℃扩大培养
18h～24h，获得菌体浓度1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的乳酸杆菌菌液；
（4）按比例，将步骤（1）制得的布拉酵母菌液、步骤（2）制得的地衣芽孢杆菌菌液、步骤（3）制得的乳酸杆菌菌液和熟化玉米皮、玉米浆、低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖混合均匀，即得；
所述步骤（1）中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖4%～6%，蛋白胨0.8%～1.2%，琼脂1.5%～2%，余量水；
所述步骤（1）中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖2%～4%，玉米浆8%～10%，CaCO3 0.2%～0.3%，余量水，pH 4.0～5.0；
所述步骤（2）中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：蛋白胨0.8%～1.2%， NaCl 1%～1.2%，酵母膏0.5%～0.8%，琼脂1.5%～2%，余量水，pH7.0～7.5；
所述步骤（2）中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：蛋白胨0.8%～1.2%， NaCl0.8%～1%，玉米浆8%～10%，余量水，pH 7.0～7.5；
所述步骤（3）中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖 2%～4%，蛋白胨0.8%～1.2%，牛肉膏1%～1.2%，酵母提取物0.5%～0.6%，柠檬酸二胺 0.1%～0.2%，磷酸氢二钾0.15%～0.2%，MgSO4·7H2O 0.05%～0.06%，MnSO4·H2O
0.02%～0.03%，吐温80 0.1%～0.12%，乙酸钠0.2%～0.5%，琼脂1.5%～2%，余量水， pH6.5～7.0；
所述步骤（3）中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖2%～4%，蛋白胨0.8%～1.2%，牛肉膏1%～1.2%，酵母提取物0.3%～0.5%，柠檬酸二胺 0.1%～0.2%，磷酸氢二钾0.1%～0.2%，MgSO4·7H2O 0.05%～0.06%，MnSO4·H2O
0.02%～0.03%，吐温80 0.1%～0.12%，乙酸钠0.2%～0.5%，琼脂1.5%～2%，余量水，pH
一种含有复合益生素的饲料添加剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种含有复合益生素的饲料添加剂及其制备方法，特别是一种利用玉米加工副产物及多种益生元制得的含有复合益生素的饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂技术领域。
[0002] 背景资料
[0003] 我国是畜牧业大国，畜牧业的健康发展关系到千家万户的生活质量。目前，随着食品安全意识的不断提高，人们对畜禽制品的安全性提出了越来越高的要求，而大型养殖业存在的抗生素过度使用，已经引起了大家的关注，国家相关部门也意识到这一潜在问题的严重性，正积极出台相应措施，减少抗生素在饲料中的添加量，鼓励替代技术的研究与应用。
[0004] 益生素是一种功能性的活菌饲料添加剂，它通过在体外大量培养动物的肠道益生菌，被动物食入后，起到补充动物由于服用抗生素或疾病原因导致肠道益生菌数量减少的作用，改善动物代谢功能紊乱、抗病能力下降的状态。它具有无毒、无抗药性、无副作用的特点，是一种安全、高效、可部分替代抗生素的产品。益生素已经成为未来饲料添加剂的一个发展方向。
[0005] 益生元是一类被证明能够刺激肠道有益菌的生长，抑制有害菌生长的功能性寡糖，它能对肠道有益菌群的形成和构建起到间接的促进作用，与益生素配合使用，效果非常明显。
[0006] 玉米本身是重要的饲料用粮，而玉米加工业在我国也具有相当大的规模，玉米在加工成淀粉的过程中，除产生主产品玉米淀粉外，还产生大量的副产物，包括玉米皮、玉米蛋白粉、玉米浆及玉米胚芽油等。目前这些副产物要么直接作为饲料出售、要么做为工业微生物发酵的原料，因此，它们在饲料添加剂中的应用，不会存在安全性的问题。
发明内容
[0007] 本发明针对现有技术的不足，提供一种含有复合益生素的饲料添加剂及其制备方法。
[0008] 本发明技术方案如下：
[0009] 一种含有复合益生素的饲料添加剂，原料组分如下，均为重量份：
[0010] 熟化玉米皮80～100份，玉米浆10～20份，低聚异麦芽糖0.5～5份，低聚甘露糖0.5～4份，低聚半乳糖2～4份；以及，
[0011] 菌体浓度为1.5×109cfu/ml～2.5×109cfu/ml的布拉酵母(Saccharomyces8 8
boulardii)菌液5～15份，菌体浓度为5.0×10cfu/ml～8.5×10cfu/ml的地衣芽孢杆
9 9
菌(Bacillus Licheniformis)3～10份，菌体浓度为1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的乳酸杆菌(lactobacillus)5～15份；
[0012] 所述低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖均以纯品计。
[0013] 优选的，原料组分如下，均为重量份：
[0014] 熟化玉米皮85～100份，玉米浆10～12份，低聚异麦芽糖3～5份，低聚甘露糖0.8～1份，低聚半乳糖2.5～3份；以及，
[0015] 菌体浓度为1.5×109cfu/ml～2.5×109cfu/ml的布拉酵母菌液8～10份，8 8
菌体浓度为5.0×10cfu/ml～8.5×10cfu/ml的地衣芽孢杆菌4～6份，菌体浓度为
9 9
1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的乳酸杆菌10～12份。
[0016] 上述熟化玉米皮是将玉米皮在0.08MPa～0.12MPa压力下，115℃～121℃，pH4.0～5.8的条件下进行蒸气加热30～50min。熟化玉米皮的腊质表面已被破坏，熟化玉米皮较玉米皮吸附性增加，玉米皮中的大分子多糖类成分更易降解，可以提高益生素的益生菌数量。
[0017] 所述玉米浆为浆浓15～30wt％的玉米浆。
[0018] 上述 布 拉 酵 母(Saccharomyces boulardii)、地衣 芽 孢 杆菌 (Bacillus Licheniformis)、乳酸杆菌(lactobacillus)均为普通市售菌株。
[0019] 上述含有复合益生素的饲料添加剂的制备方法，步骤如下：
[0020] (1)取布拉酵母，经28℃～32℃活化培养30h～38h，然后经28℃～32℃、160r/9 9
min～180r/min摇床扩大培养30h～36h，获得菌体浓度1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的布拉酵母菌液；
[0021] (2)取地衣芽孢杆菌，经35℃～38℃活化培养10h～16h，然后经34℃～36℃、8
160r/min～200r/min摇床扩大培养10h～15h，获得菌体浓度5.0×10cfu/ml～
8
8.5×10cfu/ml的地衣芽孢杆菌菌液；
[0022] (3)取乳酸杆菌，经32℃～38℃活化培养20h～30h，然后经30℃～36℃扩大培9 9
养18h～24h，获得菌体浓度1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的乳酸杆菌菌液；
[0023] (4)按比例，将步骤(1)制得的布拉酵母菌液、步骤(2)制得的地衣芽孢杆菌菌液、步骤(3)制得的乳酸杆菌菌液和熟化玉米皮、玉米浆、低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖混合均匀，即得。
[0024] 所述步骤(1)中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0025] 葡萄糖4％～6％，蛋白胨0.8％～1.2％，琼脂1.5％～2％，余量水。
[0026] 所述步骤(2)中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0027] 蛋白胨0.8％～1.2％，NaCl 1％～1.2％，酵母膏0.5％～0.8％，琼脂1.5％～2％，余量水，pH7.0～7.5。
[0028] 所述步骤(3)中的活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0029] 葡萄糖2％～4％，蛋白胨0.8％～1.2％，牛肉膏1％～1.2％，酵母提取物0.5％～0.6％，柠檬酸二胺0.1％～0.2％，磷酸氢二钾0.15％～0.2％，MgSO4·7H2O
0.05％～0.06％，MnSO4·H2O0.02％～0.03％，吐温80 0.1％～0.12％，乙酸钠0.2％～
0.5％，琼脂1.5％～2％，余量水，pH6.5～7.0。
[0030] 所述步骤(1)中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0031] 葡萄糖2％～4％，玉米浆8％～10％，CaCO3 0.2％～0.3％，余量水，pH 4.0～5.0。
[0032] 所述步骤(2)中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0033] 蛋白胨0.8％～1.2％，NaCl0.8％～1％，玉米浆8％～10％，余量水，pH 7.0～7.5。
[0034] 所述步骤(3)中的扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0035] 葡萄糖2％～4％4％，蛋白胨0.8％～1.2％，牛肉膏1％～1.2％，酵母提取物0.3％～0.5％，柠檬酸二胺0.1％～0.2％，磷酸氢二钾0.1％～0.2％，MgSO4·7H2O0.05％～0.06％，MnSO4·H2O 0.02％～0.03％，吐温80 0.1％～0.12％，乙酸钠0.2％～
0.5％，琼脂1.5％～2％，余量水，pH 6.8。
[0036] 上述培养基均采用121℃灭菌20min的条件进行灭菌处理。
[0037] 所述低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖均为普通市售食品添加剂。
[0038] 有益效果
[0039] 本发明所述的饲料添加剂不但含有三种重要的益生菌，还添加玉米加工副产物熟化玉米皮、玉米浆作为益生素的填充材料，同时添加了多种功能性益生元，强化益生素的作用效果，不仅克服了现有饲料添加剂原料单一的缺陷，而且产品中益生菌的存活菌量高；此外该饲料添加剂还具有安全、环境可降解及成本低的特点，可显著改善抗生素过度使用对养殖业的影响，提高畜禽产品的安全性和实用性。
附图说明
[0040] 图1是地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)发酵培养生长曲线；
[0041] 图2是乳酸杆菌(lactobacillus)发酵培养生长曲线；
[0042] 图3是布拉酵母(Saccharomyces boulardii)发酵培养生长曲线；
具体实施方式
[0043] 下面结合实施例对本发明做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
[0044] 实施例中的地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)购自济南瑞丰生物工程有限公司；乳酸杆菌(lactobacillus)购自济南瑞丰生物工程有限公司；布拉酵母(Saccharomyces boulardii)购自济南瑞丰生物工程有限公司；玉米皮购自德州福源生物淀粉有限公司，玉米浆购自德州福源生物淀粉有限公司，低聚异麦芽糖购自山东济南中润生物工程有限公司，低聚甘露糖购自成都禾日生物科技有限公司，低聚半乳糖购自山东济南中润生物工程有限公司。
[0045] 实施例1
[0046] 一种含有复合益生素的饲料添加剂，原料组分如下：
[0047] 熟化玉米皮200g，浆浓20wt％的玉米浆30g，低聚异麦芽糖7g，低聚甘露糖1.5g，9 8
低聚半乳糖2g；以及，1.75×10cfu/ml菌体浓度的布拉酵母菌液20g，8.5×10cfu/ml菌体
9
浓度的地衣芽孢杆菌10g，2.5×10cfu/ml菌体浓度的乳酸杆菌20g；
[0048] 上述熟化玉米皮是将玉米皮在0.1MPa压力下，120℃，pH4.0～5.8的条件下进行蒸气加热50min，制得。
[0049] 上述含有复合益生素的饲料添加剂的制备方法，步骤如下：(1)取布拉酵母(Saccharomyces boulardii)，经30℃活化培养36h，直到菌膜覆盖整个培养基表面为止，然后取2环菌种，接种至活化培养基，经30℃、180r/min摇床扩大培养36h，获得菌体浓度9 9
1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的菌液；
[0050] 所述活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0051] 4％葡萄糖，1％蛋白胨，2％琼脂，余量水。
[0052] 所述扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0053] 葡萄糖2％，玉米浆10％，CaCO3 0.2％，余量水，pH 4.5。
[0054] (2)取地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)，经37℃活化培养12h，直到菌膜覆盖整个培养基表面为止，然后取3环菌种，接种至活化培养基，经37℃、180r/min摇床扩8 8
大培养12h，获得菌体浓度5.0×10cfu/ml～8.5×10cfu/ml的菌液；
[0055] 所述活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0056] 1％蛋白胨，1％NaCl，0.5％酵母膏，2％琼脂，余量水，pH7.5。
[0057] 所述扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0058] 1％蛋白胨，1％NaCl，10％玉米浆，余量水，pH 7.5。
[0059] (3)取乳酸杆菌(lactobacillus)，经37℃活化培养24h，然后取3环菌种，接种至9 9
活化培养基，经37℃恒温扩大培养24h，获得菌体浓度1.5×10cfu/ml～2.5×10cfu/ml的菌液；
[0060] 所述活化培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0061] 葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母提取物0.5％，柠檬酸二胺0.2％，磷酸氢二钾0.2％，MgSO4·7H2O 0.058％，MnSO4·H2O 0.025％，吐温80 0.1％，乙酸钠0.5％，2％琼脂，余量水，pH 6.8。
[0062] 所述扩大培养，培养基组分如下，均为重量百分比：
[0063] 葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母提取物0.5％，柠檬酸二胺0.2％，磷酸氢二钾0.2％，MgSO4·7H2O 0.058％，MnSO4·H2O 0.025％，吐温80 0.1％，乙酸钠0.5％，2％琼脂，余量水，pH 6.8。
[0064] (4)按比例，将步骤(1)制得的布拉酵母菌液、步骤(2)制得的地衣芽孢杆菌菌液、步骤(3)制得的乳酸杆菌菌液和熟化玉米皮、玉米浆、低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖混合均匀，装入塑料袋中，抽真空，制得含有复合益生素的饲料添加剂。
[0065] 上述培养基均采用121℃灭菌20min的条件进行灭菌处理。
[0066] 活菌的检测方法采用定期取保存的益生素样品，稀释后涂布平板，培养48小时左右，计数菌落数量，根据稀释倍数计算活菌的数量，益生素活菌的存活率的检测结果见表1：
[0067] 表1
[0068]
[0069] 保存条件：真空包装，于4℃冰箱保存。
[0070] 实施例2：
[0071] 一种含有复合益生素的饲料添加剂，原料组分如下：
[0072] 熟化玉米皮200g，浆浓20wt％的玉米浆20g，低聚异麦芽糖8g，低聚甘露糖6g，低9 8
聚半乳糖4g；以及，1.75×10cfu/ml菌体浓度的布拉酵母菌液20g，8.5×10cfu/ml菌体浓
9
度的地衣芽孢杆菌10g，2.5×10cfu/ml菌体浓度的乳酸杆菌20g；
[0073] 熟化玉米皮的制备同实施例1。
[0074] 含有复合益生素的饲料添加剂的制备方法同实施例1。
[0075] 活菌的检测方法同实例1，益生素活菌的存活率的检测结果见表2：
[0076] 表2
[0077]
[0078] 保存条件：真空包装，于4℃冰箱保存。
[0079] 实施例3：
[0080] 一种含有复合益生素的饲料添加剂，原料组分如下：
[0081] 熟化玉米皮200g，浆浓20wt％的玉米浆10g，低聚异麦芽糖8g，低聚甘露糖6g，低9 8
聚半乳糖4g；以及，1.75×10cfu/ml菌体浓度的布拉酵母菌液20g，8.5×10cfu/ml菌体浓
9
度的地衣芽孢杆菌10g，2.5×10cfu/ml菌体浓度的乳酸杆菌20g；
[0082] 熟化玉米皮的制备同实施例1。
[0083] 含有复合益生素的饲料添加剂的制备方法同实施例1。
[0084] 活菌的检测方法同实例1，益生素活菌的存活率的检测结果见表3：
[0085] 表3
[0086]
[0087] 保存条件：真空包装，于4℃冰箱保存。
