一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法

摘要

一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，它涉及一种富勒烯衍生物的制备方法。本发明要解决现有的富勒烯衍生物存在水溶解性差、毒性较高及自由基清除效率较低的问题。方法：首先制备N-羟甲基乙酰胺，其次加入还原型谷胱甘肽制成N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽，然后加入富勒烯制成富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物，最后制成富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物。优点：一、用量少，自由基清除效率高、对多种活性氧自由基均有优秀的清除效果；二、毒性小、生物相容性好。本发明主要用于制备富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物。

权利要求

1.一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：

一、制备N-羟甲基乙酰胺：首先将乙酰胺、多聚甲醛和碳酸钾混合均匀，然后在98℃加热至全部融化，融化后继续在98℃下加热反应2h，冷至50℃后即得到反应混合物溶液，然后加入浓度为10mol/L的KOH溶液，并搅拌均匀，然后在温度为2℃下静置18h，最后过滤干燥即得到N-羟甲基乙酰胺固体；二、制备N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽：将还原型谷胱甘肽和步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺完全溶解于去离子水中，然后在冰浴的条件下加入pH为0.5的盐酸溶液，转移至在室温下反应30h，并在温度为70℃下真空干燥至恒重，即得到反应产物，采用无水乙醇将反应产物洗涤2次，然后洗涤后的反应产物完全溶解于甲醇中，并加入无水乙醚至浊点，然后于2℃下静置18h，最后离心分离并干燥，即得到N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽；三、制备富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物：将步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽和NaOH溶解于去离子水中，然后在频率为40kHz的超声波辅助下逐滴加入乙醇，继续在搅拌速度为300转/min的条件下加入富勒烯的甲苯溶液，并在55℃的氮气保护下反应2天，然后加入蒸馏水混合均匀，并分离得到水相混合物，采用甲苯进行萃取除杂，共萃取2次，然后采用凝胶色谱法，以葡聚糖凝胶G-25为填料，用重蒸水进行洗脱，收集15min内的洗脱液，经干燥后即得到富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物；四、制备成品：首先将步骤三制备的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物配置成浓度为1mmol/L的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液，采用HCl溶液将富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液的pH调节至4，然后在搅拌速度为300转/min条件下加入醋酸汞，采用HCl溶液重新将pH调节至4，并在搅拌速度为300转/min的条件下在室温下反应2.5h，得到酸性反应产物，然后向酸性反应产物中通入硫化氢，并在通入硫化氢的条件下反应1h，最后经过滤得到滤液，将滤液浓缩干燥即得到富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物；步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1:2；步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1:24；步骤一中所述加入的浓度为10mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1:300；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1:3；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1:20；步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1:25；步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为

1:3；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1:3；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1:25；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与乙醇溶剂的质量比为1:200；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1:500；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1:75；步骤三中所述的富勒烯的甲苯溶液中富勒烯的摩尔浓度为10mmol/L，其中富勒烯为C60；步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1:(0.6)。

说明书

一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种富勒烯衍生物的制备方法。

背景技术

[0002] 现代自由基生物学和医学研究表明，许多疾病的病理过程都与生物体系中的活性氧自由基(ROS)及其所处的平衡状态有关。在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种自由基。研究表明，这些自由基与机体的许多功能障碍和疾病的发生，如吞噬、解毒、炎症、衰-老、肿瘤、辐射损伤等有着密切关系。在各种活性氧自由基中，超氧阴离子自由基(O2·)、羟基自由基(·OH)是一类重要的自由基，·OH是生物体中反应活性很高的活性氧自由基，-
O2·则是体内其它活性氧的主要来源，它经过一系列反应可以生成其它氧自由基。因此，-
寻找能有效清除·OH、O2·的抗氧化剂具有十分重要的意义。富勒烯及其衍生物由于具有缺电子多烯的结构特点，容易与自由基发生多加成反应，是活性氧自由基的良好捕获剂，也是导致富勒烯衍生物具有良好生物活性(神经细胞保护、抑制凋亡、自由基清除)的直接原因。

[0003] 但是现有的富勒烯衍生物存在水溶解性差、毒性较高及自由基清除效率较低的问题，因而影响了富勒烯衍生物在生物学领域的应用。

发明内容

[0004] 本发明要解决现有的富勒烯衍生物存在水溶解性差、毒性较高及自由基清除效率较低的问题，而提供一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法。

[0005] 一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，具体是按以下步骤进行的：一、制备N-羟甲基乙酰胺：首先将乙酰胺、多聚甲醛和碳酸钾混合均匀，然后在95℃～100℃加热至全部融化，融化后继续在95℃～100℃下加热反应1h～3h，冷至45℃～55℃后即得到反应混合物溶液，然后加入浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液，并搅拌均匀，然后在温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后过滤干燥即得到N-羟甲基乙酰胺固体；二、制备N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽：将还原型谷胱甘肽和步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺完全溶解于去离子水中，然后在冰浴的条件下加入pH为0.5的盐酸溶液，转移至在室温下反应12h～48h，并在温度为60℃～80℃下真空干燥至恒重，即得到反应产物，采用无水乙醇将反应产物洗涤1～3次，然后洗涤后的反应产物完全溶解于甲醇中，并加入无水乙醚至浊点，然后置于温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后离心分离并干燥，即得到N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽；三、制备富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物：将步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽和NaOH溶解于去离子水中，然后在频率为
35kHz～45kHz的超声波辅助下逐滴加入醇溶剂，继续在搅拌速度为100转/min～500转/min下加入富勒烯的甲苯溶液，并在30℃～80℃的氮气保护下反应1～3天，然后加入蒸馏水混合均匀，并分离得到水相混合物，采用甲苯进行萃取除杂，共萃取1～3次，然后采用凝胶色谱法，以葡聚糖凝胶G-25为填料，用重蒸水进行洗脱，收集5min～25min内的洗脱液，经干燥后即得到富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物；四、制备成品：首先将步骤三制备的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物配置成浓度为0.1mmol/L～2mmol/L的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液，采用HCl溶液将富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液的pH调节至3.5～4.5，然后在搅拌速度为100转/min～500转/min加入醋酸汞，采用HCl溶液重新将pH调节至3.5～
4.5，并在搅拌速度为100转/min～500转/min的室温下反应1h～4h，得到酸性反应产物，然后向酸性反应产物中通入硫化氢，并在通入硫化氢的条件下反应0.5h～2h，最后经过滤得到滤液，将滤液浓缩干燥即得到富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物；步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1∶(0.5～6)；步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1∶(6～240)；步骤一中所述加入的浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1∶(30～600)；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1∶(0.6～9)；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1∶(2～100)；步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶(2.5～100)；步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为
1∶(1～5)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1∶(1～5)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1∶(5～50)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与醇溶剂的质量比为1∶(50～500)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1∶(50～1000)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1∶(15～
150)；步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1∶(0.2～1)。

[0006] 本发明的优点是：一、与传统自由基清除剂维他命E、维他命C、甘露醇等相比，本发明制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物具有用量少，自由基清除效率高、对多种活性氧自由基均有优秀的清除效果等优点；二、与传统的水溶性富勒烯衍生物富勒醇、富勒烯丙二酸衍生物等相比，本发明制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物具有毒性小、生物相容性好的优点。

附图说明

[0007] 图1是试验一制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的傅立叶红外光谱图；图2是试验一制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的核磁共振氢谱图；图3是试验一制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的液相色谱-质谱图；图4是试验一制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的结构图；图5是不同浓度的试验一制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物、维他命C-和富勒醇的对O2·的清除效率曲线图，图中的■是不同浓度的试验一制备的C60还原型谷- -
胱甘肽衍生物对O2·的清除效率曲线图，图中的▲是不同浓度的维他命C对O2·的清除效-
率曲线图，图中的●是不同浓度的富勒醇对O2·的清除效率曲线图；图6是不同浓度的试验一制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物、维他命C和富勒醇的对·OH的清除效率曲线图，图中的■是不同浓度的试验一制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对·OH的清除效率曲线图，图中的▲是不同浓度的维他命C对·OH的清除效率曲线图，图中的●是不同浓度的富勒醇对·OH的清除效率曲线图；图7是不同浓度的试验一制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对PC12细胞活力影响的曲线图。

具体实施方式

[0008] 具体实施方式一：本实施方式是一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，具体是按以下步骤进行的：

[0009] 一、制备N-羟甲基乙酰胺：首先将乙酰胺、多聚甲醛和碳酸钾混合均匀，然后在95℃～100℃加热至全部融化，融化后继续在95℃～100℃下加热反应1h～3h，冷至45℃～55℃后即得到反应混合物溶液，然后加入浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液，并搅拌均匀，然后在温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后过滤干燥即得到N-羟甲基乙酰胺固体；二、制备N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽：将还原型谷胱甘肽和步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺完全溶解于去离子水中，然后在冰浴的条件下加入pH为0.5的盐酸溶液，转移至在室温下反应12h～48h，并在温度为60℃～80℃下真空干燥至恒重，即得到反应产物，采用无水乙醇将反应产物洗涤1～3次，然后洗涤后的反应产物完全溶解于甲醇中，并加入无水乙醚至浊点，然后置于温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后离心分离并干燥，即得到N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽；三、制备富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物：将步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽和NaOH溶解于去离子水中，然后在频率为35kHz～45kHz的超声波辅助下逐滴加入醇溶剂，继续在搅拌速度为100转/min～500转/min下加入富勒烯的甲苯溶液，并在30℃～80℃的氮气保护下反应1～3天，然后加入蒸馏水混合均匀，并分离得到水相混合物，采用甲苯进行萃取除杂，共萃取1～3次，然后采用凝胶色谱法，以葡聚糖凝胶G-25为填料，用重蒸水进行洗脱，收集
5min～25min内的洗脱液，经干燥后即得到富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物；四、制备成品：首先将步骤三制备的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物配置成浓度为0.1mmol/L～2mmol/L的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液，采用HCl溶液将富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液的pH调节至3.5～4.5，然后在搅拌速度为100转/min～500转/min加入醋酸汞，采用HCl溶液重新将pH调节至3.5～4.5，并在搅拌速度为100转/min～500转/min的室温下反应1h～
4h，得到酸性反应产物，然后向酸性反应产物中通入硫化氢，并在通入硫化氢的条件下反应
0.5h～2h，最后经过滤得到滤液，将滤液浓缩干燥即得到富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物。

[0010] 本实施方式步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1∶(0.5～6)；本实施方式步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1∶(6～240)；本实施方式步骤一中所述加入的浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1∶(30～600)。

[0011] 本实施方式步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1∶(0.6～9)；本实施方式步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1∶(2～100)；本实施方式步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶(2.5～100)；本实施方式步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为1∶(1～5)。

[0012] 本实施方式步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1∶(1～5)；本实施方式步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1∶(5～50)；本实施方式步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与醇溶剂的质量比为1∶(50～500)；本实施方式步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1∶(50～1000)；本实施方式步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1∶(15～150)。

[0013] 本实施方式步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1∶(0.2～1)。

[0014] 谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，半胱氨酸上的巯基为其活性基团。谷胱甘肽有还原型(G-SH)和氧化型(G-S-S-G)两种形式，在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。谷胱甘肽的主要生理作用是作为体内一种重要的抗氧化剂，它能够清除掉人体内的自由基，清洁和净化人体内环境污染，从而增进人的身心健康。因此采用还原型谷胱甘肽修饰富勒烯能使生成的衍生物具备良好的水溶性、生物相容性及自由基清除活性，使其成为适用于生物医学的优良的自由基清除剂。

[0015] 与传统自由基清除剂维他命E、维他命C、甘露醇等相比，本实施方式制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物具有用量少，自由基清除效率高、对多种活性氧自由基均有优秀的清除效果等优点。

[0016] 与传统的水溶性富勒烯衍生物富勒醇、富勒烯丙二酸衍生物等相比，本实施方式制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物具有毒性小、生物相容性好的优点。

[0017] 采用下述试验验证本发明效果：

[0018] 试验一：一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，具体是按以下步骤进行的：

[0019] 一、制备N-羟甲基乙酰胺：首先将乙酰胺、多聚甲醛和碳酸钾混合均匀，然后在98℃加热至全部融化，融化后继续在98℃下加热反应2h，冷至50℃后即得到反应混合物溶液，然后加入浓度为10mol/L的KOH溶液，并搅拌均匀，然后在温度为2℃下静置18h，最后过滤干燥即得到N-羟甲基乙酰胺固体；二、制备N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽：将还原型谷胱甘肽和步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺完全溶解于去离子水中，然后在冰浴的条件下加入pH为0.5的盐酸溶液，转移至在室温下反应30h，并在温度为70℃下真空干燥至恒重，即得到反应产物，采用无水乙醇将反应产物洗涤2次，然后洗涤后的反应产物完全溶解于甲醇中，并加入无水乙醚至浊点，然后置于温度为2℃下静置18h，最后离心分离并干燥，即得到N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽；三、制备富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物：将步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽和NaOH溶解于去离子水中，然后在频率为40kHz的超声波辅助下逐滴加入乙醇，继续在搅拌速度为300转/min下加入富勒烯的甲苯溶液，并在55℃的氮气保护下反应2天，然后加入蒸馏水混合均匀，并分离得到水相混合物，采用甲苯进行萃取除杂，共萃取2次，然后采用凝胶色谱法，以葡聚糖凝胶G-25为填料，用重蒸水进行洗脱，收集15min内的洗脱液，经干燥后即得到富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物；四、制备成品：首先将步骤三制备的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物配置成浓度为1mmol/L的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液，采用HCl溶液将富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液的pH调节至4，然后在搅拌速度为300转/min加入醋酸汞，采用HCl溶液重新将pH调节至4，并在搅拌速度为300转/min的室温下反应2.5h，得到酸性反应产物，然后向酸性反应产物中通入硫化氢，并在通入硫化氢的条件下反应1h，最后经过滤得到滤液，将滤液浓缩干燥即得到富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物。

[0020] 本试验步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1∶2；本试验步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1∶24；本试验步骤一中所述加入的浓度为10mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1∶300。

[0021] 本试验步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1∶3；本试验步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1∶20；本试验步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶25；本试验步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为1∶3。

[0022] 本试验步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1∶3；本试验步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1∶25；本试验步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与醇溶剂的质量比为1∶200；本试验步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1∶500；本试验步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1∶75。

[0023] 步骤三中所述的富勒烯的甲苯溶液中富勒烯的摩尔浓度为10mmol/L，其中富勒烯为C60。

[0024] 本实施方式步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1∶(0.6)。

[0025] 对本试验制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物分别采用傅立叶红外光谱，核磁共振氢谱及液相色谱-质谱进行表征，结果分别如图1、2和3所示，通过图1、2和3的测试结果可知，富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的化学结构为还原型谷胱甘肽的氨基与C60上碳以单键相连，同时每一分子C60与两分子还原型谷胱甘肽以共价键相连；并且通过图1至图3可知本试验制备的富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物为C60还原型谷胱甘肽衍生物，结构如图4所示。

[0026] 采用邻苯三酚自氧化-化学发光法检测不同浓度的本试验制备的C60还原型谷胱-甘肽衍生物、维他命C和富勒醇的对O2·的清除效率，结果如图5所示，通过图5可知本试验-
制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物在浓度为1mg/mL时对O2·的清除效率为98.4％。同时可-
知本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对O2·的清除效率为50％时其浓度为0.04mg/mL，且通过与维他命C和富勒醇进行对比，可知本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对-
O2·的清除效率远高于维他命C和富勒醇。

[0027] 采用邻菲罗啉化学发光法检测不同浓度的本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物、维他命C和富勒醇的对·OH的清除效率，结果如图6所示，通过图6可知本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物在浓度为1mg/mL时对·OH的清除效率为97.3％，同时可知本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对·OH的清除效率为50％时其浓度为0.06mg/mL，且通过与维他命C和富勒醇进行对比，可知本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对·OH的清除效率远高于维他命C和富勒醇。

[0028] 采用MTT方法检测不同浓度的本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物对PC12细胞活力的影响，结果如图7所示，通过图7可知在本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物浓度为100μg/mL时对细胞活力没有明显的降低作用，证明本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物没有明显的细胞毒性，且生物相容性好；在本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物浓度为20μg/mL时明显的提高了细胞活力，因此证明本试验制备的C60还原型谷胱甘肽衍生物在浓度为10μg/mL～40μg/mL对细胞生长起到了促进作用。

[0029] 具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1∶(1.5～4)，步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1∶(20～100)，步骤一中所述加入的浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1∶(100～300)。其它与具体实施方式一相同。

[0030] 具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1∶(2～5)，步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1∶(4～50)，步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶(5～50)，步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为1∶(2～4)。其它与具体实施方式一或二相同。

[0031] 具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤三中所述的醇溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇。其它与具体实施方式一至三相同。

[0032] 具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤三中所述的富勒烯的甲苯溶液中富勒烯的摩尔浓度为0.2mmol/L～20mmol/L，其中富勒烯为C60或C70。其它与具体实施方式一至四相同。

[0033] 具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1∶(1.5～3)，步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1∶(10～40)，步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与醇溶剂的质量比为1∶(100～400)，步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1∶(200～800)，步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1∶(50～100)。其它与具体实施方式一至五相同。

[0034] 具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1∶(0.5～0.7)。其它与具体实施方式一至六相同。