一种复方丹参制剂的制备方法及其制备抗氧化制剂的用途

摘要

本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方丹参制剂的制备方法及其抗氧化活性。将丹参、淫羊藿加入70％乙醇室温下浸提，再超声30min，温度为30℃，功率为80W，过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；将滤液合并，回收乙醇，得到丹参、淫羊藿提取物；将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，用高速冷冻离心机离心，得上清液，冷冻干燥，得干燥物，将此干燥物与丹参、淫羊藿提取物混合均匀，得复方丹参制剂。本发明产品具有抗氧化作用。

权利要求

1.一种具有抗氧化作用的复方丹参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程：(1)原料药的重量配比为：丹参9g-12g、淫羊藿6g-9g、紫球藻10g-20g；

(2)将丹参和淫羊藿加入其8-10倍重量的70％乙醇室温下浸提8-10h，再密封超声

30min，温度为30℃，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍重量与4倍重量的

70％乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；

(3)将(2)中的滤液合并，回收乙醇，得到丹参、淫羊藿提取物；

(4)将紫球藻用离心机离心10min，转速为5000r/min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用高速冷冻离心机离心15min，转速为10000r/min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；

(5)将(4)中的干燥物与(3)中的丹参、淫羊藿提取物混合均匀，得复方丹参制剂。

2.如权利要求1中所述的一种复方丹参制剂的用途，其特征在于该制剂用于制备抗氧化作用的制剂。

说明书

一种复方丹参制剂的制备方法及其制备抗氧化 制剂的用

途

技术领域

[0001] 本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方丹参制剂的制备方法及其抗氧化活性。

背景技术

[0002] 丹参为双子叶植物唇形科Labiatae鼠尾草属植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。苦，微寒。归心、肝经。活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。主治月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。根主含脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸成分，还含黄酮类，三萜类，甾醇等。现代药理证明丹参具有降血脂、强心、扩张冠脉，增加心肌血流量抗血栓形成、改善微循环、促进组织的修复与再生。

[0003] 淫羊藿为小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)、或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥叶。辛、甘，温。归肝、肾经。补肾阳，强筋骨，祛风湿。用于阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛；更年期高血压。淫羊藿含淫羊藿苷(icariin)、淫羊藿次苷(icarisoside)等，朝鲜淫羊藿含淫羊藿苷、淫羊藿新苷(epimedoside)A、B、C、D、E等.箭叶淫羊藿含淫羊藿苷、脱水淫羊藿苷元-3-O-α-鼠李糖苷，淫羊藿苷元-3-O-α-鼠李糖苷，槲皮素等。现代药理试验证明淫羊藿具有雄性激素样作用、有增加冠脉流量、耐缺氧、保护心肌缺血、降压等作用、可增强网状内皮系统的吞噬能力、促进骨质生长，尚有抗衰老、抗疲劳、抗病毒等作用。

[0004] 紫球藻(Porphyridium cruentum)是属于红藻门的一种单细胞红藻，在生长过程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻胆蛋白和多不饱和脂肪酸等生物活性物质。紫球藻藻红蛋白占藻胆蛋白84％，其中以B-藻红蛋白含量最多。藻红蛋白用途广泛，它既可作为天然色素应用于食品、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂用于临床医学诊断和免疫化学及生物工程等领域，藻红蛋白还是一种具有开发潜力的光敏剂，用于肿瘤的光动力治疗。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、降血脂、调血脂等功能。因此，综合开发紫球藻藻红蛋白、多糖和藻粉系列产品，社会经济效益明显。 [0005] 人体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基，体内过多自由基对生物大分子造成损伤，导致细胞和组织的结构和功能减退，并对机体的衰老过程产生影响，最终导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用。所以评价和筛选具有强抗氧化 活性的天然植物已成为医学、生物学和食品科学研究的新趋势。采用典型的体外抗氧化体系，以抗坏血酸为对照，评价复方丹参制剂的抗氧化活性，为更好的开发利用复方丹参资源为抗氧化活性产品，提供理论依据。

[0006] DPPH法：DPPH为1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2，2-Diphenyl-1-(2，4，6-trinitrophenyl)hydrazyl)DPPH法于1958年被提出，广泛用于测定食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速定量分析。

发明内容

[0007] 1.一种具有抗氧化作用的复方丹参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程： [0008] (1)原料药的重量配比为：丹参9g-12g、淫羊藿6g-9g、紫球藻10g-20g； [0009] (2)将丹参和淫羊藿加入8-10倍量70％乙醇室温下浸提8-10h，再密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；

[0010] (3)将(2)中的滤液合并，回收乙醇，得到丹参、淫羊藿提取物； [0011] (4)将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用10000r/min高速冷冻离心机离心15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；

[0012] (5)将(4)中的干燥物与(3)中的丹参、淫羊藿提取物混合均匀，得复方丹参制剂。 [0013] 2.将复方丹参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用

[0014] 根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。

具体实施方式

[0015] 本发明所述的涉及一种复方丹参制剂的制备方法及其抗氧化活性包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

[0016] 实施例1：

[0017] 1.一种具有抗氧化作用的复方丹参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程： [0018] (1)原料药的重量配比为：丹参9g、淫羊藿6g、紫球藻10g；

[0019] (2)将丹参和淫羊藿加入8倍量70％乙醇室温下浸提8，再密封超声30min，温度为 30℃，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；

[0020] (3)将(2)中的滤液合并，回收乙醇，得到丹参、淫羊藿提取物； [0021] (4)将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用10000r/min高速冷冻离心机离心15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；

[0022] (5)将(4)中的干燥物与(3)中的丹参、淫羊藿提取物混合均匀，得复方丹参制剂。 [0023] 2.将复方丹参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用

[0024] 实施例2：

[0025] 1.一种具有抗氧化作用的复方丹参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程： [0026] (1)原料药的重量配比为：丹参12g、淫羊藿9g、紫球藻20g；

[0027] (2)将丹参和淫羊藿加入10倍量70％乙醇室温下浸提10h，再密封超声30min，温度为30℃，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；

[0028] (3)将(2)中的滤液合并，回收乙醇，得到丹参、淫羊藿提取物； [0029] (4)将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用10000r/min高速冷冻离心机离心15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；

[0030] (5)将(4)中的干燥物与(3)中的丹参、淫羊藿提取物混合均匀，得复方丹参制剂。 [0031] 2.将复方丹参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用

[0032] 一种复方丹参制剂的的抗氧化试验

[0033] 1 复方丹参制剂对DPPH清除率的测定

[0034] 1.1 DPPH溶液的制备

[0035] 精密称定DPPH样品0.01g，加入无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液，浓度为0.04mg/ml。

[0036] 1.2 样品溶液的制备

[0037] 精密称取复方丹参制剂0.4g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，再加入蒸馏水定容至50ml，得到样品母溶液，浓度为8mg/ml，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为0.003125，0.00625，0.0125，0.025，0.05，0.1，0.2，0.4ml的样品母液，用蒸馏水定容于10ml容量瓶中得到浓度为0.0025，0.005，
0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的样品溶液。

[0038] 1.3 样品对DPPH的清除作用

[0039] 准确移取不同浓度的样品溶液分别与DPPH溶液和无水乙醇溶液等体积混合于不同试管中，摇匀，在黑暗中放置30min，在515nm下测定其吸光度值分别为Ai和Aj。另取蒸馏水与DPPH溶液等体积混合于试管中，测得吸光度值为A。其中以蒸馏水和无水乙醇混合为空白对照试验。并按下面公式计算清除率。

[0040] 清除率＝(A-Ai+Aj)/A×100％

[0041] 2 复方丹参制剂对羟自由基清除率的测定

[0042] 2.1 样品溶液的制备

[0043] 精密称取复方丹参制剂0.25g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到样品母溶液，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为5μl，10μl，20μl，40μl，80μl，160μl，320μl，640μl的样品母液，用蒸馏水定容于10ml容量瓶中得到浓度为0.0025，0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的样品溶液。

[0044] 2.2 试剂的制备

[0045] 称取0.2032g甲基紫用去离子水定容于100ml容量瓶中，备用。用盐酸调Tris缓冲溶液PH为5，备用。取30％的H2O2溶液1.0mL，用去离子水定容于100mL容量瓶中，备用。称取0.0695gFeSO4·7H2O用水定容于50mL容量瓶中，备用(现用现配)。

[0046] 2.3 羟自由基·OH的产生及测定

[0047] 取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液1mL，按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟，记为A578。

[0048] 取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液1mL，Fe2+溶液1mL，H2O2溶液1mL按顺序