本发明公开了一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法以及采用该方法制备的酪酸梭菌饲料添加剂。所述的酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法其特征在于，采用酪酸梭菌（该酪酸梭菌保藏在中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC20036），具体步骤为：将胰蛋白胨，牛肉浸膏，酵母膏，葡萄糖，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙，硫酸亚铁，半胱氨酸盐酸盐等配制成液体种子专用培养基；将菌种接入培养基，进行种子活化；将氮源、碳源等配制成固态厌氧发酵培养基；将种子液接入固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵，烘干，过筛。本发明利用低廉的碳氮源基质，提供一种新型的酪酸梭菌大规模工业化生产方法，有效降低成本，增加工厂效益。
1.一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，采用酪酸梭菌（菌种保藏在中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC20036，种名butyricum，属名Clostridium，历史来源于四川省食品发酵工业研究设计院（1.265）），具体步骤如下：第一步：将胰蛋白胨 2-2.5g，牛肉浸膏 1-1.5g，酵母膏0.6-1.0g，葡萄糖0.4-0.5g，磷酸氢二钾 0.2-0.3g，磷酸二氢钾 0.1-0.3g，硫酸镁 0.04-0.06g，氯化钙 0.02-0.05g，硫酸亚铁 0.01-0.05g，半胱氨酸盐酸盐 0.05-0.1g，蒸馏水 100ml，配制成液体种子专用培养基，将PH值调节至7.2-7.4；将冻藏的酪酸梭菌菌种接入培养基，37-40℃静置厌氧培养18-25h，进行种子活化；
第二步：将以质量百分比计的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸钙0.05-0.1%、硫酸镁
0.05-0.1%、氯化钙0.1-0.2%及剩余的水配制成固态厌氧发酵培养基；
第三步：将第一步得到的种子液接入第二步得到的固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵；
第四步：将第三步得到的产品进行低温烘干，粉碎，过筛，计量，包装，制得成品；
所述的第四步中的低温烘干的温度为38-42℃，烘干至水分的质量百分比低于8%，所述过筛的孔目为1.0目筛网。
2.如权利要求1所述的一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的第二步中的氮源为菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一种或两种以上的混合物。
3. 如权利要求2所述的一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的第二步中的氮源，在作为固态发酵培养基前，先灭菌，并用中性蛋白酶进行前处理；氮源与水重量比为1:1.5-2，中性蛋白酶以1000-1500μg/g加入到氮源与水的混合物中，酶解处理
4. 如权利要求1所述的一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的第二步中的碳源为麸皮、米糠及玉米粉中的任意一种或两种以上的混合物与质量百分比为
5. 如权利要求1所述的一种酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述的第三步中的种子液的接种量的质量百分比为5-15%，培养温度为36-40℃，静置固态厌氧发酵时间为45-55h。
一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂，属于微生物发酵领域。
背景技术
[0002] 酪酸梭菌又名丁酸梭菌，是一种革兰氏阳性厌氧内生芽胞杆菌。芽抱巨大，生成芽袍后或一端膨大成鼓锤状，或中部膨胀成纺锤状或梭状。对禽畜无毒害作用;通过动物消化道中的生物竞争排斥作用，可抑制肠道有害菌，促进有益菌生长;能减少肠内氨、胺含量，减少肝脏负担;产生多种维生素和微量元素;产生多种酶类，提高饲料利用率，促进动物生长。作为微生态制剂功效显著，并能与抗生素配伍使用。酪酸梭菌现主要利用液体深层静置培养技术，此方法产品率高但生产成本高昂，对设备环境的要求高，其固态发酵培养方法稀见报道。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于克服现有技术成本高昂，生产条件苛刻的劣势，提供一种工业化生产低廉、对生产条件不苛刻，且具有促生长功能的酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂。
[0004] 为了达到上述目的，本发明提供了一种酪酸梭菌及酪酸梭菌饲料添加剂的制备方法，其特征在于，采用酪酸梭菌（菌种保藏在中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC20036，种名butyricum，属名Clostridium，历史来源于四川省食品发酵工业研究设计院（1.265）），具体步骤如下：
[0005] 第一步：将胰蛋白胨 2-2.5g，牛肉浸膏 1-1.5g，酵母膏0.6-1.0g，葡萄糖0.4-0.5g，磷酸氢二钾 0.2-0.3g，磷酸二氢钾 0.1-0.3g，硫酸镁 0.04-0.06g，氯化钙
0.02-0.05g，硫酸亚铁 0.01-0.05g，半胱氨酸盐酸盐 0.05-0.1g，蒸馏水 100ml，配制成液体种子专用培养基，将PH值调节至7.2-7.4；将冻藏的酪酸梭菌菌种接入培养基，37-40℃静置厌氧培养18-25h，进行种子活化；
[0006] 第二步：将以质量百分比计的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸钙0.05-0.1%、硫酸镁0.05-0.1%、氯化钙0.1-0.2%及剩余的水配制成固态厌氧发酵培养基；
[0007] 第三步：将第一步得到的种子液接入第二步得到的固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵；
[0008] 第四步：将第三步得到的产品进行低温烘干，粉碎，过筛，计量，包装，制得成品。
[0009] 优选地，所述的第二步中的氮源为菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一种或两种以上的混合物。
[0010] 进一步地，所述的第二步中的氮源，在作为固态发酵培养基前，先灭菌，并用中性蛋白酶进行前处理；氮源与水重量比为1:1.5-2，中性蛋白酶以1000-1500μg/g加入到氮源与水的混合物中，酶解处理3-5h。
[0011] 优选地，所述的第二步中的碳源为麸皮、米糠及玉米粉中的任意一种或两种以上的混合物与质量百分比为10%的糖蜜的混合物。
[0012] 优选地，所述的第三步中的种子液的接种量的质量百分比为5-15%，培养温度为36-40℃，静置固态厌氧发酵时间为45-55h。
[0013] 优选地，所述的第四步中的低温烘干的温度为38-42℃，烘干至水分的质量百分比低于8%，所述过筛的孔目为1.0目筛网。
[0014] 本发明利用低廉的碳氮源基质，提供一种新型的酪酸梭菌大规模工业化生产方法，有效降低成本，增加工厂效益。
附图说明
[0015] 图1为本发明固体厌氧发酵接种量对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图；
[0016] 图2为本发明固体厌氧发酵时间对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图；
[0017] 图3为本发明固体厌氧发酵温度对酪酸梭菌活菌数及芽孢浓度的影响的数据图。
具体实施方式
[0018] 下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。
[0019] 实施例1
[0020] 选用豆粕作为氮源；90wt%麸皮与10wt%糖蜜的混合物作为碳源。
[0021] 步骤一，发酵菌体种子制备及种子活化：
[0022] 1、配制液体种子专用培养基，其中胰蛋白胨 2.5g，牛肉浸膏 1.5g，酵母膏0.6g，葡萄糖0.4g，磷酸氢二钾 0.2g，磷酸二氢钾 0.1g，硫酸镁 0.04g，氯化钙 0.02g，硫酸亚铁0.01g，半胱氨酸盐酸盐 0.05g，蒸馏水 100ml，调节pH 7.2。
[0023] 2、将冻藏的酪酸梭菌菌种接入培养基，37℃静置厌氧培养18h。
[0024] 步骤二，固态厌氧发酵培养基制备：
[0025] 3、先将氮源灭菌，利用中性蛋白酶进行前处理；氮源加水重量比为1:2，中性蛋白酶以1000μg/g加入氮源与水的混合物中，酶解处理3h。
[0026] 4、配置固态厌氧发酵培养基，其中质量百分比的配比为，氮源25%、碳源15%、碳酸钙0.05%、硫酸镁0.05%、氯化钙0.1%、加水至100%。
[0027] 步骤三，固态厌氧发酵：
[0028] 5、将步骤一中已活化完毕的种子液接入步骤二固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵。种子液接种量为10%，培养温度为37℃，静置固态厌氧发酵时间为50h。
[0029] 步骤四，成品加工：
[0030] 6、将发酵产品在40℃低温烘至水分低于8wt%，然后粉碎，用筛孔目为1.0目的筛网过筛，计量，包装制得成品。
[0031] 实施例2
[0032] 选用豆粕和花生粕重量比为1:1的混合物作为氮源；90wt%麸皮/米糠重量比为1:1的混合物与10wt%糖蜜的混合物作为碳源。
[0033] 步骤一，发酵菌体种子制备及种子活化：
[0034] 1、配制液体种子专用培养基，其中胰蛋白胨 2.0g，牛肉浸膏 1.0g，酵母膏1.0g，葡萄糖0.5g，磷酸氢二钾 0.2g，磷酸二氢钾 0.1g，硫酸镁 0.04g，氯化钙 0.02g，硫酸亚铁0.02g，半胱氨酸盐酸盐 0.05g，蒸馏水 100ml，调节pH 7.4。
[0035] 2、将冻藏菌种接入培养基，38℃静置厌氧培养19h。
[0036] 步骤二，固态厌氧发酵培养基制备：
[0037] 3、先将氮源灭菌，利用中性蛋白酶进行前处理；氮源加水重量比为1:2，中性蛋白酶以1200μg/g加入氮源与水的混合物中，酶解处理3.5h。
[0038] 4、配置固态厌氧发酵培养基，其中质量百分比的配比为氮源30%、碳源15%、碳酸钙0.1%、硫酸镁0.1%、氯化钙0.1%、加水至100%。
[0039] 步骤三，固态厌氧发酵：
[0040] 5、将步骤一中已活化完毕的种子液接入步骤二固态厌氧发酵培养基中进行固态发酵。种子液接种量为15%，培养温度为37℃，静置固态厌氧发酵时间为55h。
[0041] 步骤四，成品加工：
[0042] 6、将发酵产品在40℃低温烘至水分低于8wt%，然后粉碎，用筛孔目为1.0目的筛网过筛，计量，包装制得成品。
[0043] 实施例3
[0044] 选用70日龄左右、体重30kg左右的长大二元杂交公猪60头，随机分为2组进行对比实验。对照组公猪不添加本添加剂，试验组以重量百分比为5%的比例添加入普通日粮中。使用时本添加剂与普通全价饲料充分搅拌，均匀后即可饲喂。本品需存放于密封干燥处，避免与农药、强刺激物品等混合堆放。试验结果记录如下：
[0045]比对项目 对照组 试验组
始重（kg） 30.57±0.26 30.52±0.23
终重（kg） 77.33±8.35 81.10±8.22
增重（kg） 47.07±1.09 51.22±2.01
日均采食量（kg） 2.59 3.18
料肉比 2.99 2.51
饲养成本（元/头） 250.20 232．51
