静注人免疫球蛋白的生产工艺

摘要

本发明涉及一种免疫球蛋白的生产工艺，具体涉及一种静注人免疫球蛋白的生产工艺。从血浆中提取白蛋白的分离提取工艺主要采用基于Cohn6法的低温乙醇法来进行。本发明取组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，溶解沉淀，调节pH值，加入乙醇至浓度13-15%；待沉淀产生完全后，加入珍珠岩和硅藻土，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，加入氯化钠和乙醇；在混合溶液中再加入珍珠岩和硅藻土，压滤分离沉淀，溶解沉淀，继续添加乙醇；深层过滤后调节电导率和pH值，离子交换层析，进行超滤处理，再用纳米膜进行过滤，加入甘氨酸或L-脯氨酸。本发明提高了人免疫球蛋白的总收得率，降低了生产成本，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。

权利要求

1.一种静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于：

由以下步骤实现：

步骤一：取组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，注入10-15倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1～5℃搅拌溶解后，调节pH值至5.2±0.1，加入乙醇至浓度13-15%，并控制溶液温度在-5～-3℃之间；

步骤二：待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，调节pH值至7.1±0.1，按体积加入氯化钠至3.7±0.1g/L，继续添加乙醇至浓度19～21%，控制液体温度在-8～-6℃；

步骤三：待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，压滤分离出体系中产生的沉淀；

步骤四：将步骤三得到的沉淀用5～7倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1～5℃，搅拌1.5～2小时令其溶解；调节pH值至6.8±0.2，继续添加乙醇至浓度

4.5±1%，同时降温至0±1℃，深层过滤；

步骤五：将深层过滤后的滤液，调节电导率至0.14±0.05ms/m，pH值至6.8±0.2，用Q-琼脂糖凝胶FF进行离子交换层析，流出液调节pH值至5.2±0.2，电导率至

0.10±0.05ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理；

步骤六：层析后的液体调节pH值至4.2±0.3，进行超滤处理，用8～10倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50～90g/L之间；

步骤七：浓缩后的液体采用孔径0.1μm的滤芯预过滤，之后再用15-20nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒；

步骤八：纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102±1g/L，调节pH值至4.8±0.3，按体积加入250±40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；

步骤九：将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37℃下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。

2.根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于：所述的pH值调节均采用氢氧化钠。

3.根据权利要求1或2所述的静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于：所述的添加乙醇的质量分数为95%。

说明书

静注人免疫球蛋白的生产工艺

技术领域

[0001] 本发明涉及一种免疫球蛋白的生产工艺，具体涉及一种静注人免疫球蛋白的生产工艺。

背景技术

[0002] 目前，从血浆中提取白蛋白的分离提取工艺主要采用基于Cohn6法的低温乙醇法来进行，该方法是根据血浆蛋白理化性质的差别，加入不同浓度的盐、有机溶剂和酸碱，通过改变影响蛋白质稳定性的条件而分别沉淀提取出不同的蛋白质。

[0003] 在低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素主要有5个，即pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度。通过控制这些参数可以逐级沉淀血浆中的不同蛋白质成份，一般先从血浆中沉淀出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ，然后再分离出组份Ⅱ，最终从组份Ⅱ中获得人免疫球蛋白。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一种直接从低温乙醇法组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中提取静注人免疫球蛋白产品的生产工艺。

[0005] 本发明所采用的技术方案是：

[0006] 一种静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于：

[0007] 由以下步骤实现：

[0008] 步骤一：取组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，注入10-15倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1～5℃搅拌溶解后，调节pH值至5.2±0.1，加入乙醇至浓度13-15%，并控制溶液温度在-5--3℃之间；

[0009] 步骤二：待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，调节pH值至7.1±0.1，按体积加入氯化钠至3.7±0.1g/L，继续添加乙醇至浓度19～21%，控制液体温度在-8～-6℃；

[0010] 步骤三：待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3.0±0.2g/L，硅藻土至3.0±0.2g/L，压滤分离出体系中产生的沉淀；

[0011] 步骤四：将步骤三得到的沉淀用5～7倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1～5℃，搅拌1.5～2小时令其溶解；调节pH值至6.8±0.2，继续添加乙醇至浓度4.5±1%，同时降温至0±1℃，深层过滤；

[0012] 步骤五：将深层过滤后的滤液，调节电导率至0.14±0.05ms/m，pH值至6.8±0.2，用Q-琼脂糖凝胶FF进行离子交换层析，流出液调节pH值至5.2±0.2，电导率至0.10±0.05ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理；

[0013] 步骤六：层析后的液体调节pH值至4.2±0.3，进行超滤处理，用8～10倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50～90g/L之间；

[0014] 步骤七：浓缩后的液体采用孔径0.1μm的滤芯预过滤，之后再用15-20nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒；

[0015] 步骤八：纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102±1g/L，调节pH值至4.8±0.3，按体积加入250±40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；

[0016] 步骤九：将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37℃下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。

[0017] 所述的pH值调节均采用氢氧化钠。

[0018] 所述的添加乙醇的质量分数为95%。

[0019] 本发明具有以下优点：

[0020] 与一般静注人免疫球蛋白产品生产工艺相比，该发明有效提高了人免疫球蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了企业利润；在分离过程中按各组份分步沉淀，并采用离子交换层析进行纯化，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。采用低pH孵放灭活病毒工艺和纳米膜过滤去除病毒的二次病毒灭活工艺，提高了产品的安全性。

具体实施方式

[0021] 下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。

[0022] 本发明采用白蛋白提取过程中产生的组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，通过调节蛋白质溶液的pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度，经分步压滤分离技术分离出不同成份的蛋白质，有效提取组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀中的人免疫球蛋白。

[0023] 本发明所述的静注人免疫球蛋白产品的生产工艺由以下步骤实现：

[0024] 实施例一：

[0025] 步骤一：从冷库中取出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入10倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1℃，搅拌3小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4.3的醋酸缓冲液调节pH值至4.7，再加入pH=5.9的醋酸缓冲液调节pH值至5.1。缓慢加入95%（v/v）的乙醇令溶液中乙醇含量达到13%，并控制溶液温度在-5℃之间。

[0026] 步骤二：待沉淀产生完全后，按体积加入珍珠岩至2.8g/L，硅藻土至2.8g/L，继续搅拌使液体呈浆状。用加压过滤的方法分离出体系中产生的沉淀即FⅠ+Ⅲ沉淀。将滤过液即FⅠ+Ⅲ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至7.0，按体积加入氯化钠至3.6g/L，继续添加乙醇至浓度19%，控制液体温度在-8℃。

[0027] 步骤三：待体系中沉淀产生完全后按体积加入珍珠岩至2.8g/L，硅藻土至2.8g/L，继续搅拌使液体呈浆状。压滤分离出体系中产生的沉淀即FⅡ沉淀，滤液弃做他用。

[0028] 步骤四：将FⅡ沉淀用5倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1℃搅拌1.5小时令其溶解。用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6.6，缓慢添加95%（v/v）的乙醇至浓度4.4%，同时降温至-1℃，深层过滤。

[0029] 步骤五：将深层过滤后的滤液，调节电导率至0.09ms/m，pH值至6.6，用Q-琼脂糖凝胶FF（Q-SFF）进行离子交换层析。流出液调节pH值至5.0，电导率至0.05ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理。

[0030] 步骤六：层析后的液体调节pH值至3.9进行超滤处理，用8倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50g/L之间。

[0031] 步骤七：浓缩后的液体采用孔径0.1μm的滤芯预过滤，之后再用15nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒。

[0032] 步骤八：纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度101g/L，调节pH值至4.5，按体积加入210mmol/L的甘氨酸。

[0033] 步骤九：将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37℃下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。

[0034] 实施例二：

[0035] 步骤一：从冷库中取出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入10倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在3℃，搅拌4小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4.3的醋酸缓冲液调节pH值至4.8，再加入pH=5.9的醋酸缓冲液调节pH值至5.2。缓慢加入95%（v/v）的乙醇令溶液中乙醇含量达到14%，并控制溶液温度在-4℃之间。

[0036] 步骤二：待沉淀产生完全后，按体积加入珍珠岩至3.0g/L，硅藻土至3.0g/L，继续搅拌使液体呈浆状。用加压过滤的方法分离出体系中产生的沉淀即FⅠ+Ⅲ沉淀。将滤过液即FⅠ+Ⅲ上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至7.1，按体积加入氯化钠至3.7g/L，继续添加乙醇至浓度20%，控制液体温度在-7℃。

[0037] 步骤三：待体系中沉淀产生完全后按体积加入珍珠岩至3.0g/L，硅藻土至3.0g/L，继续搅拌使液体呈浆状。压滤分离出体系中产生的沉淀即FⅡ沉淀，滤液弃做他用。

[0038] 步骤四：将FⅡ沉淀用6倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在3℃搅拌1.5小时令其溶解。用0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6.8，缓慢添加95%（v/v）的乙醇至浓度4.5%，同时降温至0℃，深层过滤。

[0039] 步骤五：将深层过滤后的滤液，调节电导率至0.14ms/m，pH值至6.8，用Q-琼脂糖凝胶FF（Q-SFF）进行离子交换层析。流出液调节pH值至5.2，电导率至0.10ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理。

[0040] 步骤六：层析后的液体调节pH值至4.2进行超滤处理，用9倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在70g/L之间。

[0041] 步骤七：浓缩后的液体采用孔径0.1μm的滤芯预过滤，之后再用15nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒。

[0042] 步骤八：纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102g/L，调节pH值至4.8，按体积加入250mmol/L的甘氨酸。

[0043] 步骤九：将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37℃下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。

[0044] 实施例三：

[0045] 步骤一：从冷库中取出组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入15倍体积、5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在5℃，搅拌5小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4.3的醋酸缓冲液调节pH值至4.9，再加入pH=5.9的醋酸缓冲液调节pH值至5.3。缓慢加入95%（v/v）的乙醇令溶液中乙醇含量达到15%，并控制溶液温度在-3℃之间。