新的5-氟尿嘧啶衍生物

摘要

本发明提供了在抗肿瘤作用和毒性之间具有优异平衡的新的抗代谢抗癌剂。具体地，本发明提供了包含通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐作为活性成分的药物：其中，R1表示氢原子或羟基的保护基，R2表示低级烷氧基-低级烷基或四氢呋喃基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示卤原子或氰基。

权利要求

1.5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，所述5-氟尿嘧啶衍生物由下面的通式(I)表示：

1 2

其中，R 表示氢原子、C1-6直链或支链酰基或C3-6环烷基羰基，R 表示C1-6直链或支链烷氧基-C1-6直链或支链烷基，X表示碳原子，以及Y表示卤原子。

2.如权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中在通式(I)中由下式表示的基团为：

由下式表示的基团

1

其中，R 表示氢原子；

或由下式表示的基团

3.如权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子或C1-6直链或支链酰基，R2表示C1-6直链或支链烷氧基甲基，X表示碳原子，以及Y表示氟原子或氯原子。

4.如权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、新戊酰基或环戊烷羰基，R2表示C1-6直链或支链烷氧基甲基，X表示碳原子，以及Y表示氟原子或氯原子。

5.如权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子或乙酰基，R2表示C1-6直链或支链烷氧基甲基，X表示碳原子，以及Y表示氯原子。

6.如权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子或乙酰基，R2表示乙氧基甲基，X表示碳原子以及Y表示氯原子。

7.药物，其包含权利要求1至6中任一权利要求所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐作为活性成分。

8.抗肿瘤剂，其包含权利要求1至6中任一权利要求所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐作为活性成分。

9.权利要求1至6中任一权利要求所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐在制备抗肿瘤剂中的用途。

说明书

新的5-氟尿嘧啶衍生物

技术领域

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请要求于2009年10月27日提交的JP No.2009-246400的优先权，其整体内容通过引用并入本文。

[0003] 本发明涉及新的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐以及其用途。

背景技术

[0004] 5-氟尿嘧啶(下文称为5-FU)以单独或与其它抗癌剂组合的形式广泛用于治疗多种癌症，主要是胃肠癌。然而，5-FU本身仅具有微弱的抗肿瘤作用并且导致多种副作用，例如由于胃肠毒性导致的腹泻、口腔炎及其它副作用以及骨髓抑制。因此，很难说5-FU总是易于对癌症患者使用。为了解决这些问题，发展了多种口服给药的5-FU衍生物，然而，还未获得令人满意的临床效果。其可能的原因如下。通过特别在肝脏和肿瘤组织中包含的二氢嘧啶脱氢酶(下文称为DPD)在体内迅速分解5-FU，因此，其难于获得与其剂量对应的充足的抗肿瘤作用。5-FU不仅被摄入癌细胞，而且还进入诸如骨髓细胞和胃肠粘膜细胞的正常细胞，并且通过乳清酸磷酸核糖转移酶(下文称为OPRT)的作用转化为活性代谢物。这类活性代谢物导致细胞损伤，即，它们具有细胞毒性，因此，它们的抗肿瘤作用和副作用未很好地平衡。

[0005] 已经报道了具有DPD抑制活性和抗肿瘤活性的化合物作为5-FU衍生物的实例(参见专利文献1至3)。其中，PLT2具体地公开了如下所示的化合物(1)，其是通常称为乙嘧替氟(还称为BOF-A2)的化合物。进行临床试验以评价乙嘧替氟，然而，因为其具有强副作用而终止了其的开发。

[0006]

[0007] 如上所述，还未开发出能通过抑制5-FU体内分解而增强抗肿瘤作用并同时降低副作用的5-FU衍生物。因此，必须开发具有增强的抗肿瘤作用和低毒性的新的5-FU衍生物以改善对治疗癌症患者的疗效。

[0008] 如上所述，还没有与在一个化合物中具有除DPD抑制活性和OPRT抑制活性之外的抗肿瘤活性的衍生物有关的报道。因此，需要开发实现在效果和毒性间平衡、即对人类癌症具有强抗肿瘤作用和降低的胃肠损伤，并改善癌症患者的QOL的药物。

[0009] 引用目录

[0010] 专利文献

[0011] PTL 1：第S63-201127号日本未审查专利公开

[0012] PTL 2：第S63-301880号日本未审查专利公开

[0013] PTL 3：WO87/06582

[0014] 发明概述

[0015] 技术问题

[0016] 本发明的目的是提供通过在体内具有DPD抑制活性以及OPRT抑制活性而对肿瘤细胞表现出强抗肿瘤作用且同时降低对胃肠道的损伤，即具有良好平衡效果和毒性的新的抗代谢抗癌剂。

[0017] 问题的解决方案

[0018] 本发明人已经进行了广泛研究以解决上述问题。结果，他们发现由下面通式(1)表示的5-氟尿嘧啶衍生物(下文还称为本发明的化合物(I))或其盐具有(1)DPD抑制活性以及(2)OPRT抑制活性，并且因此(3)实现了强抗肿瘤作用和降低的胃肠损伤的平衡，即，其在效果和毒性间的平衡方面优于已知的5-FU衍生物。

[0019] 基于这些发现而完成本发明。

[0020] 更具体地，本发明提供了下述项：

[0021] 项1.5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，所述5-氟尿嘧啶衍生物由下面的通式(I)表示：

[0022]

[0023] 其中，R1表示氢原子或羟基的保护基，R2表示低级烷氧基-低级烷基或四氢呋喃基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示卤原子或氰基。

[0024] 项2.项1所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中在通式(I)中，由下式表示的基团

[0025]

[0026] 为：

[0027] 由下式表示的基团

[0028]

[0029] 其中，R1表示氢原子、烯丙基，或者取代或未取代的苄基；由下式表示的基团[0030]

[0031] 由下式表示的基团

[0032]

[0033] 其中，R1表示氢原子、烯丙基，或者取代或未取代的苄基；

[0034] 或者

[0035] 由下式表示的基团

[0036]

[0037] 项3.如项1或2所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子、烯丙基、苄基、脂肪族酰基、芳香族酰基或脂环族酰基，R2表示其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基，或四氢呋喃基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示氟原子或氯原子。

[0038] 项4.如项1至3中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子、2
苄基、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、新戊酰基、苯甲酰基、对氯苯甲酰基或环戊烷羰基，R 表示其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示氟原子或氯原子。

[0039] 项5.如项1至4中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子2
或乙酰基，R 表示其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示氯原子。

[0040] 项6.如项1至5中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子2
或乙酰基，R 表示其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基，X表示碳原子以及Y表示氯原子。

[0041] 项7.如项1至6中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中R1表示氢原子2
或乙酰基，R 表示乙氧基甲基，X表示碳原子以及Y表示氯原子。

[0042] 项8.药物，其包含项1至7中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐作为活性成分。

[0043] 项9.抗肿瘤剂，其包含项1至7中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐作为活性成分。

[0044] 项10.如项9所述的抗肿瘤剂，其中所述抗肿瘤剂用于治疗选自头颈癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊和胆管癌、胆道癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、骨与软组织肉瘤、白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑瘤和间皮瘤中的至少一种癌症。

[0045] 项11.治疗癌症的方法，其包括给予癌症患者有效量的项1至7中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐。

[0046] 项12.项1至7中任一项所述的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐在制备抗肿瘤剂中的用途。

[0047] 本发明的有利效果

[0048] 本发明的化合物(I)或其盐表现出优异的抗肿瘤作用并具有降低的诸如胃肠损伤的副作用，因此，其可用作抗肿瘤剂。

[0049] 能通过给予包含本发明化合物的药物而治疗的疾病的实例对于恶性肿瘤而言包括头颈癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊和胆管癌、胆道癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、骨与软组织肉瘤、白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑瘤和间皮瘤。

[0050] 实施方案描述

[0051] 本发明涉及由下面的通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐：

[0052]

[0053] 其中，R1表示氢原子或羟基的保护基，R2表示低级烷氧基-低级烷基或四氢呋喃基，X表示碳原子或氮原子，以及Y表示卤原子或氰基。

[0054] 在本发明中，由上面通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐包括它们的互变异构体。

[0055] 更具体地，本发明包括由通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物或其盐，其中，由下式表示的基团

[0056]

[0057] 为：

[0058] 由下式表示的基团

[0059]

[0060] 其中，R1表示氢原子或羟基的保护基；

[0061] 由下式表示的基团

[0062]

[0063] 下式表示的基团

[0064]

[0065] 其中，R1表示氢原子或羟基的保护基；或

[0066] 下式表示的基团

[0067]

[0068] 由通式(I)表示的基团的具体实例如下。

[0069] 在通式(I)中，R1表示氢原子或羟基的保护基。

[0070] 由R1表示的羟基保护基可为任何保护基，只要其能被诸如氢解、水解、电解和光解1
的化学过程或诸如在人体内进行水解的生物过程裂解。所述R 表示的羟基保护基的具体实例包括：酰基，例如取代或未取代的脂肪族酰基以及取代或未取代的芳香族酰基或脂环族酰基；低级烷氧基羰基；低级烷基氨基甲酰基；取代或未取代的低级烷基；低级烯基；取代或未取代的芳基烷基；甲硅烷基保护剂；以及氨基酸残基。

[0071] 脂肪族酰基的实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基等C1-6直链或支链酰基。芳香族酰基的实例包括苯甲酰基、α-萘酰基和β-萘酰基。这些基团可具有1至3个选自低级烷基、低级烷氧基、卤原子、硝基、羧基等的取代基。

[0072] 脂环族酰基的实例包括环丁烷羰基、环戊烷羰基、环己烷羰基等C3-6环烷基羰基。

[0073] 低级烷氧基羰基的实例包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、正丁氧基羰基、异丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基、己氧基羰基等C2-7直链或支链烷氧基羰基。

[0074] 低级烷基氨基甲酰基的实例包括甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、戊基氨基甲酰基、己基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基等由C1-6低级烷基单取代或二取代的氨基甲酰基。

[0075] 低级烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基等C1-6直链或支链烷基。这些基团可以具有1至3个诸如卤原子和低级烷氧基的取代基。所述低级烷基的具体实例也包括氯甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基等取代的烷基。

[0076] 低级烯基的实例包括乙烯基、烯丙基、丁烯基、丁二烯基、己三烯基等C2-6直链或支链烯基。

[0077] 芳基烷基的实例包括苄基、二苯甲基和三苯甲基。这些基团可以具有1至5个、优选1至3个诸如低级烷基、低级烷氧基、卤原子和硝基的取代基。

[0078] 甲硅烷基保护剂的实例包括三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、甲基二异丙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、四异丙基二硅氧烷基(TIPDS)和二苯基甲基甲硅烷基。

[0079] 氨基酸残基的实例包括通过从氨基酸的羧基中除去羟基而形成的那些。这些氨基酸残基可源自天然或合成氨基酸。可用的氨基酸的具体实例包括甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸；并且能使用第H1-104093号日本未审查专利公开中公开的任何氨基酸残基。

[0080] 可用作本文取代基的低级烷基的实例包括上面列出的那些。

[0081] 低级烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等C1-6直链或支链烷氧基。

[0082] 卤原子的实例包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

[0083] R2表示低级烷氧基-低级烷基或四氢呋喃基。

[0084] 在通式(I)中，由R2表示的“低级烷氧基-低级烷基”中的“低级烷氧基”部分的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等C1-6直链或支链烷氧基。低级烷氧基部分的实例优选包括C1-3烷氧基，更优选包括甲氧基和乙氧基，并且还更优选包括乙氧基。“低级烷氧基-低级烷基”中的“低级烷基”的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基等C1-6直链或支链烷基。低级烷基部分的实例优选包括C1-3烷基，更优选包括甲基和乙基，并且还更优选包括甲基。

[0085] “低级烷氧基-低级烷基”的实例包括前述的具有上述“低级烷氧基部分”的低级烷基。所述“低级烷氧基-低级烷基”的具体实例包括：烷氧基烷基，例如甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、丙氧基乙基、3-甲氧基丙基、4-乙氧基丁基、6-丙氧基己基、5-异丙氧基戊基、1，1-二甲基-2-丁氧基乙基、2-甲基-3-叔丁氧基丙基、2-戊氧基乙基和2-己氧基乙基。低级烷氧基-低级烷基优选为甲氧基甲基、乙氧基甲基或丙氧基甲基，并且更优选为乙氧基甲基。

[0086] 四氢呋喃基的实例包括2-四氢呋喃基和3-四氢呋喃基。其中，2-四氢呋喃基是优选的。

[0087] X表示碳原子或氮原子。

[0088] Y表示卤原子或氰基。在通式(I)中，由Y表示的卤原子的实例包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

[0089] 在特别优选的实施方案中的基团的实例如下所述：

[0090] 优选地，R1为氢原子、烯丙基、苄基、脂肪族酰基、芳香族酰基或脂环族酰基，更优选为氢原子、苄基、乙酰基、丙酰基、异丁酰基、新戊酰基、苯甲酰基、对氯苯甲酰基或环戊烷羰基，并且还更优选为氢原子或乙酰基。

[0091] 优选地，R2为其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基或2-四氢呋喃基，更优选为其中低级烷氧基部分具有1至6个碳原子的低级烷氧基甲基，并且还更优选为乙氧基甲基。

[0092] 优选地，X为碳原子。

[0093] 优选地，Y为氟原子或氯原子，并且更优选为氯原子。

[0094] 可以以任何组合使用R1、R2、X和Y的优选实施方案。

[0095] 本发明的由通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物包括立体异构体、光学异构体、诸如水合物的溶剂化物以及结晶的多晶型。

[0096] 本发明的由通式(I)表示的5-氟尿嘧啶衍生物可以为盐。因此，药物可接受的盐是优选的。药物可接受的盐的实例包括具有无机酸的盐以及具有有机酸的盐。

[0097] 其具体实例包括具有无机酸的盐，所述无机酸包括盐酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸和磷酸。

[0098] 其具体实例包括具有有机酸的盐，所述有机酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、苯磺酸、对甲苯磺酸和甲磺酸。

[0099] 能通过多种方法制备本发明的化合物，并且这类方法的实例由下示方案例示。合成本发明化合物所必须的材料能从商购产品或根据文章中所公开的制备方法等容易地获得。通式(I)中的取代基与上述所定义的那些相同。

[0100]

[0101] 方案1

[0102] 其中R1’表示烯丙基或者取代或未取代的苄基，R2表示低级烷氧基-低级烷基或四氢呋喃基，并且Y表示卤原子或氰基。

[0103] 异烟酸衍生物(2)的合成

[0104] 将烯丙醇、苯甲醇或取代的苯甲醇的钠或钾盐溶解在不影响反应的溶剂中，所述溶剂例如四氢呋喃、甲苯和二甲基甲酰胺，并且优选为二甲基甲酰胺。在室温下，向生成的溶液中添加2，6-二氯异烟酸的钠盐。在60℃至100℃下搅拌生成的混合物2小时至24小时。使混合物反应，优选在80℃下反应4小时。此时，相对于2，6-二氯异烟酸，使用2至10当量，并且优选4当量的醇化物。在反应完成之后，向反应产物中添加水，并且使用乙酸乙酯或类似溶剂分离水层。使用1N-盐酸或乙酸，将水层的pH调节至5至6。使生成物经过使用乙酸乙酯、乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂、甲苯等的萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，然后浓缩以获得烯丙氧基、苄氧基或取代的苄氧基的异烟酸衍生物(2)(在本说明书中，烯丙氧基、苄氧基或取代的苄氧基的异烟酸衍生物(2)可称为异烟酸衍生物(2))。

[0105] 步骤1异烟酸-酰基氯衍生物(3)的合成

[0106] 将上面所得的异烟酸衍生物(2)溶解在不影响反应的溶剂中，所述溶剂例如氯仿、1，2-二氯乙烷和甲苯，并优选为甲苯。此后，在室温下向由此制备的溶液中滴加亚硫酰氯。相对于该溶液，亚硫酰氯的用量为1至10当量，并且优选为5当量。在滴加完成之后，将生成的混合物在回流下搅拌2至8小时，并优选搅拌4小时。在反应完成之后，将混合物浓缩并不经改变将残留物用于下述步骤。

[0107] 吡啶衍生物(4)的合成

[0108] 能通过在第H05-80451号日本未审查专利公开，Heterocycles，Vol.36，No.1，145-148，1993，等中公开的方法来制备吡啶衍生物(4)。

[0109] 这些吡啶衍生物(4)以羟基吡啶结构和2(1H)-吡啶酮结构的互变异构体的形式存在。

[0110] 步骤2酯结合物(5)的合成

[0111] 将上述所得的吡啶衍生物(4)溶解在有机胺盐中，所述有机胺盐例如三乙胺、二异丙基乙胺和二甲基苯胺，优选为三乙胺与不影响反应的诸如二氯甲烷、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺的溶剂的混合物，并且优选为三乙胺与二甲基乙酰胺的混合物。在冰冷下，向生成的物质滴加步骤1中获得的异烟酸-酰基氯衍生物(3)的二甲基乙酰胺溶液。此时，每吡啶衍生物(4)使用1.0至1.2当量的异烟酸-酰基氯衍生物(3)和1.0至1.2当量的有机胺盐。在使混合物在室温下反应1至4小时之后，向混合物添加水，然后使用乙酸乙酯、乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂、甲苯等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，由柱层析纯化，然后供给至下述步骤。

[0112] 异烟酸5-氟尿嘧啶单酰胺(6)的合成

[0113] 异烟酸5-氟尿嘧啶单酰胺(6)能通过第H02-164871号日本未审查专利公开中所公开的方法而制备。

[0114] 步骤3间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺-酰基氯(7)的合成

[0115] 间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺(6)溶解在不影响反应的溶剂中，所述溶剂例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷和甲苯，并优选为二氯甲烷。在室温下，向生成的溶液滴加亚硫酰氯。相对于该溶液，亚硫酰氯的量为1至4当量，并且优选为1.2当量。在滴加完成之后，将生成的混合物在回流下搅拌2至8小时，并优选搅拌4小时。在反应完成之后，将混合物浓缩并不经改变将残留物供给至下述步骤。

[0116] 步骤4本发明化合物(I-a)的合成

[0117] 将在步骤2中得到的酯结合物(5)溶解在诸如三乙胺、二异丙基乙胺和二甲基苯胺、并优选为三乙胺的有机胺盐以及不影响反应的诸如二氯甲烷、乙腈和二甲基甲酰胺的溶剂中。在冰冷下，向由此获得的溶液中滴加步骤3中得到的间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺-酰基氯(7)的二氯甲烷溶液。此时，相对于酯结合物(5)，使用1.0至1.2当量的间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺-酰基氯(7)和1.0至1.2当量的有机胺盐。在使混合物在室温下反应1至4小时之后，向反应产物添加水，然后使用二氯甲烷等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，由柱层析纯化，然后供给至下述步骤。

[0118] 步骤5本发明化合物(I-b)的合成

[0119] 根据Green的“Protective Group in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)”中公开的方法来进行脱保护。

[0120]

[0121] 方案2

[0122] 其中，R1’、R2和Y与上述定义的相同。

[0123] 步骤6间苯二酸单酰胺-单酯(8)的合成

[0124] 将根据Chem.Pharm.Bull.Vol.41，No.9，1498-1506，1993中公开的方法而三甲基甲硅烷化(TMS)的吡啶衍生物(4-TMS)溶解在不影响反应的溶剂中，所述溶剂例如二氯甲烷、乙腈和二甲基甲酰胺，并且优选为乙腈。在冰冷下，向由此获得的溶液中滴加间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺-酰基氯(7)的乙腈溶液。随后，向其滴加诸如氯化锡和四氯化钛的路易斯酸。此时，相对于吡啶衍生物(4-TMS)，使用0.8至1.0当量的间苯二酸5-氟尿嘧啶单酰胺-酰基氯(7)和催化量的路易斯酸。在使混合物在室温下反应1至4小时之后，向反应液体添加水，然后使用二氯甲烷等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，由柱层析纯化，然后供给至下述步骤。

[0125] 步骤7本发明化合物(I-a)的合成

[0126] 将间苯二酸单酰胺-单酯(8)溶解在诸如三乙胺、二异丙基乙胺和二甲基苯胺、并优选为三乙胺的有机胺盐以及不影响反应的诸如二氯甲烷、乙腈和二甲基甲酰胺、并优选为二氯甲烷的溶剂中。向生成的混合物中滴加异烟酸-酰基氯衍生物(3)的二氯甲烷溶液。此时，相对于间苯二酸单酰胺-单酯(8)，使用1.0至1.2当量异烟酸-酰基氯衍生物(3)和1.0至1.2当量的有机胺盐。在使混合物在室温下反应1至4小时之后，向反应液体添加水，然后使用二氯甲烷等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，由柱层析纯化，然后供给至方案1中所示的步骤5。

[0127]

[0128] 方案3

[0129] 其中R2和Y如上所定义。

[0130] 乳清酸-酰基氯(9)的合成

[0131] 在室温下，向乳清酸以及不影响反应诸如氯仿、1，2-二氯乙烷和甲苯的溶剂中滴加亚硫酰氯，或者在没有溶剂的情况下滴加亚硫酰氯。此时，相对于乳清酸，使用1至5当量，优选为4当量的亚硫酰氯。在滴加完成之后，将生成的混合物在回流下搅拌2至8小时，并优选搅拌4小时。在反应完成之后，将混合物浓缩并不经改变将残留物供给至下述步骤。

[0132] 步骤8本发明化合物(I-c)的合成

[0133] 将间苯二酸单酰胺-单酯(8)溶解在有机胺盐与不影响反应的溶剂的混合液体中，所述有机铵盐例如三乙胺、二异丙基乙胺和二甲基苯胺，优选为三乙胺，所述溶剂例如二氯甲烷、乙腈和二甲基甲酰胺，并优选溶解在三乙胺与二氯甲烷的混合液体中。在冰冷下，向生成的溶液中滴加乳清酸-酰基氯(9)的二氯甲烷溶液。此时，相对于间苯二酸单酰胺-单酯(8)，使用1.0至1.2当量的乳清酸-酰基氯衍生物(9)和1.0至1.2当量的有机胺盐。在使混合物在室温下反应1至4小时之后，向反应产物添加水，然后使用二氯甲烷等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，然后由柱层析纯化。

[0134]

[0135] 方案43 2

[0136] 其中，X表示碳原子或氮原子，R 表示羟基的保护基，以及R 和Y与上面所定义的相同。1

[0137] 步骤9其中R 为羟基保护基的本发明化合物(I-e)的合成3

[0138] 将通过方案2和3获得的吡啶衍生物(I-d)和由通式R-Cl表示的酰基氯溶解在不影响反应的溶剂中，所述溶剂例如二甲氧基乙烷、二氯甲烷、乙腈、二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺，并优选为二甲氧基乙烷。在冰冷下，向生成的溶液添加有机胺盐，例如吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺和二甲基苯胺，并优选为吡啶。此时，相对于吡啶衍生物(I-d)，使用2.2至4.0当量的酰基氯和2.2至4.0当量的有机胺盐。在使混合物在冰冷下反应0.5至4小时之后，向反应液体添加水，然后使用乙酸乙酯、乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂、甲苯等萃取。将提取物在硫酸钠、硫酸镁等上干燥，浓缩至重结晶，然后由柱层析等纯化。

[0139] 如上所述，本发明的化合物(I)及其盐表现出优异的抗肿瘤作用并具有降低的诸如胃肠损伤的副作用；因此，其可用作抗肿瘤剂。因此，本发明化合物(I)及其盐在治疗癌症方面是有效的。在本发明中，癌症治疗包括给予本发明的化合物(I)或其盐，从而避免在通过辐射、外科手术等治疗癌症之后的癌症复发。

[0140] 当本发明的化合物(I)或其盐用于治疗包括人在内的哺乳动物的上述疾病时，剂量、给药次数等应随靶疾病的情况和严重性、以及本发明化合物(I)的给药途径的变化而变化。剂量、给药次数等还随患者的年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、伴随药物、反应等的变化而变化。本发明的化合物(I)及其盐通常口服给予或肠胃外给予。剂量通常为用于治疗前述疾病的治疗有效量，即，每天约0.001mg/kg至100mg/kg，并优选为约0.01mg/kg至50mg/kg每千克诸如人的哺乳动物的体重。然而，可以根据情况应用上述范围外的剂量。

[0141] 通过将有效量的本发明的化合物与生理学可接受的载体混合，能以诸如片剂、胶囊剂、颗粒剂和粉末剂的固体制剂；诸如糖浆剂和注射剂的液体制剂；以及诸如软膏剂、洗剂、凝胶剂和乳膏剂的外用制剂的形式口服或肠胃外给予(例如，外用、吸入、皮下注射、动脉和静脉内注射、肌肉内注射、膀胱内灌注、颅内灌注、鼻内注入和滴眼)本发明的化合物。

[0142] 用作制剂材料的多种常规有机或无机载体用作本发明的药理学可接受的载体。其具体实例包括：固体制剂中使用的赋形剂、润滑剂、粘合剂以及崩解剂；液体制剂中使用的溶剂、增溶剂、悬浮剂、张力调节剂、缓冲剂和安抚剂。若需要，可以使用诸如防腐剂、抗氧化剂、着色剂和甜味剂的制剂添加剂。赋形剂的优选实例包括乳糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素和轻质无水硅酸。润滑剂的优选实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石和硅胶。粘合剂的优选实例包括结晶纤维素、白糖、D-甘露醇、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素以及聚乙烯吡咯烷酮。崩解剂的优选实例包括淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠和羧甲基淀粉钠。溶剂的优选实例包括注射用水、醇、丙二醇、聚乙二醇(macrogol)、芝麻油和玉米油。增溶剂的优选实例包括聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠和柠檬酸钠。悬浮剂的优选实例包括：表面活性剂，例如硬脂酰三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、十二烷基氨基丙酸、卵磷脂、苯扎氯铵、苄索氯铵和单硬脂酸甘油酯；以及亲水聚合物，例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素。缓冲剂的优选实例包括磷酸盐、乙酸盐、碳酸盐和柠檬酸盐的缓冲溶液。安抚剂的优选实例包括苯甲醇。防腐剂的优选实例包括对羟基苯甲酸的酯、氯丁醇的酯、苯甲醇的酯、苯乙醇的酯、脱氢乙酸的酯和山梨酸的酯。抗氧化剂的优选实例包括亚硫酸盐和抗坏血酸盐。
实施例

[0143] 在下文，参考比较例、实施例和测试例来具体描述本发明。然而，本发明不限于这些具体实施方案。

[0144] 参照例1

[0145] 2，6-二苄氧基异烟酸(化合物2a)的合成。

[0146] 在氩气氛中，向55％的氢化钠(52.5g)和二甲基甲酰胺(1L)中逐渐添加2，6-二氯异烟酸(57.6g)，同时冷却并搅拌。随后，在相同温度下，向反应产物逐渐滴加苯甲醇(93mL)。当不再产生氢气之后，在80℃下将反应产物搅拌4小时，然后向其中添加水(1L)。通过乙酸乙酯和正己烷(1∶1)的混合溶剂(1L)来分离混合物。使用乙酸(75.5mL)将水层的酸度降低，并向其中再加入水(1.7L)。将析出物过滤并干燥以获得化合物2a。

[0147] 产率：77.17g(77％)

[0148] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0149] 13.60(1H，brs)，7.43-7.29(10H，m)6.81(2H，s)，5.36(4H，s)

[0150] 熔点：145-147℃

[0151] 参照例2

[0152] 2，6-二对甲氧基苄氧基异烟酸(化合物2b)的合成

[0153] 根据参照例1的方法合成化合物2b，除了使用对甲氧基苯甲醇代替苯甲醇。

[0154] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0155] 13.56(1H，brs)，7.39(4H，d，J＝8.4Hz)，6.95(4H，d，J＝8.6Hz)，5.33(4H，s)，3.77(6H，s)

[0156] 参照例3

[0157] 2，6-二烯丙氧基异烟酸(化合物2c)的合成

[0158] 根据参照例1的方法合成化合物2c，除了使用烯丙醇代替苯甲醇。

[0159] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0160] 13.60(1H，brs)，6.77(2H，s)，6.15-5.99(2H，m)，5.38(2H，dd，J＝17.2Hz，J＝1.5Hz)，5.23(2H，d，J＝10.4Hz)，4.82(4H，d，J＝5.4Hz)

[0161] 参照例4

[0162] 4-{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯-2-羟基吡啶(化合物5a)、2-{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯-4-羟基吡啶(化合物5b)和2，4-二{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯吡啶(化合物5c)的合成

[0163] 向在参照例1中获得的2，6-二苄氧基异烟酸(化合物2a)(75.45g)和甲苯(800mL)的溶液中滴加亚硫酰氯(98.5mL)和二甲基甲酰胺(1.7mL)，并且将混合物在80℃下搅拌4.5小时。在冷却之后，将溶剂蒸发。在不纯化的情况下，将残留的酰基氯溶解在二甲基乙酰胺(100mL)中以获得待用于下述反应的酰基氯的二甲基乙酰胺溶液。在冰冷下，向2，4-二羟基-5-氯代吡啶(31.9g)、三乙胺(31.19mL)和二甲基乙酰胺(1.6L)的溶液滴加酰基氯的二甲基乙酰胺溶液。在室温下将生成的混合物搅拌1小时，然后向其添加水(1.7L)。通过乙酸乙酯和正己烷(3∶1)的混合溶剂(1L)来分离混合物。在用硫酸钠干燥溶液之后，将溶剂蒸发。将析出物过滤并干燥以获得化合物5a。

[0164] 产率：44.8g(45％)

[0165] 同时，将滤液浓缩并将生成的残留物通过硅胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶1)洗脱)纯化以获得化合物5b(18.94g)和化合物5c(4.74g)。

[0166] 化合物5a

[0167] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0168] 12.09(1H，brs)，7.91(1H，s)，7.50-7.30(10H，m)，6.99(2H，s)，6.58(1H，s)，5.42(4H，s)

[0169] 熔点：149-150℃

[0170] 化合物5b

[0171] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0172] 12.26(1H，brs)，8.27(1H，s)，7.50-7.30(10H，m)，6.98(2H，s)，6.86(1H，s)，5.42(4H，s)

[0173] 熔点：136-138℃(分解温度)

[0174] 化合物5c

[0175] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0176] 8.75(1H，brs)，7.79(1H，s)，7.50-7.30(20H，m)，7.05(2H，s)，7.02(2H，s)，5.42(8H，s)

[0177] 参照例5

[0178] 2，6-二羟基-3-氟吡啶(化合物4a)的合成

[0179] 将2，6-二氯-5-氟烟酸(15.15g)用作起始化合物，通过与参照例1相同的方法获得2，6-二苄氧基5-氟烟酸(13.30g)。

[0180] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0181] 8.02(1H，d，J＝10.2Hz)，7.49-7.28(10H，m)，5.48(2H，s)，5.45(2H，s)[0182] 接下来，将2，6-二苄氧基5-氟烟酸(5.00g)溶解在二噁烷(50mL)中，然后向其中添加20％的氢氧化钯(50％潮湿的，500mg)，并在氢气氛下反应1小时。通过硅藻土从生成的反应产物中过滤氢氧化钯，并且将溶剂蒸发以获得化合物，即2，6-二羟基-5-氟烟酸(2.58g)。产率：88％

[0183] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0184] 7.44(1H，d，J＝11.4Hz)

[0185] 将2，6-二羟基-5-氟烟酸(2.25g)溶解在二噁烷(25mL)中，并回流15分钟。在1
冷却之后，将溶剂蒸发以获得化合物4a(1.65g)。产率：99％ H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0186] 7.26(1H，dd，J＝7.7Hz，J＝11.0Hz)，5.45(1H，d，J＝6.6Hz)

[0187] 参照例6

[0188] 6-{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-3-氟-2-羟基吡啶(化合物5d)

[0189] 根据参照例4的方法合成化合物5d，除了使用在参照例5中获得的化合物4a代替2，4-二羟基-5-氯吡啶。

[0190] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0191] 7.79(1H，t，J＝9.0Hz)，7.47-7.30(11H，m)，6.98(2H，s)，5.42(4H，s)[0192] 参照例7

[0193] 3-{3-[4-羟基-5-氯-2-吡啶基氧基碳基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物8a)和3-{3-[2-羟基-5-氯-4-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物8b)的合成

[0194] 将1-乙氧基甲基-3-间羟基羰基苯甲酰基-5-氟尿嘧啶(3.46g)溶解在二氯甲烷(50mL)中。然后，向其中添加亚硫酰氯(0.9mL)和二甲基甲酰胺(0.04mL)。将生成的反应产物回流2小时，然后将溶剂蒸发。将残留物溶解在二氯甲烷(12mL)中以获得酰基氯的二氯甲烷溶液。在将2，4-二羟基-5-氯吡啶(1.5g)在六甲基二硅氮烷(15mL)中回流6小时后，将溶剂蒸发，并且将生成的残留物溶解在二氯甲烷(30mL)中。在冰冷下，向其滴加上述酰基氯的二氯甲烷溶液，然后向其添加无水氯化锡(0.15mL)。在室温下，将混合物搅拌15小时。在用三乙胺中和之后，通过硅凝胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶2)洗脱)纯化由蒸发溶剂获得的残留物以获得化合物8a(21.5g；产率：45％)和化合物8b(496mg：
产率：10％)。

[0195] 化合物8a

[0196] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0197] 8.63(1H，t，J ＝ 1.6Hz)，8.49(2H，d，J ＝ 8.2Hz)，8.45(1H，d，J ＝ 6.7Hz)，8.28(1H，s)，7.86(1H，t，J＝7.8Hz)，6.91(1H，s)，5.11(2H，s)，3.58(2H，q，J＝6.9Hz)，
1.11(3H，t，J＝7.0Hz)

[0198] 化合物8b

[0199] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0200] 8.65(1H，t，J＝3.3Hz)，8.51(2H，dt，J＝1.7，7.7Hz)，8.46(1H，d，J＝6.6Hz)，7.93(1H，s)，7.89(1H，t，J＝7.8Hz)，6.63(1H，s)，5.11(2H，s)，3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，
1.12(3H，t，J＝7.1Hz)

[0201] 参照例8

[0202] 3-{3-[4-羟基-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物8a)的可替代的合成

[0203] 将1-乙氧基甲基-3-间羟基羰基苯甲酰基-5-氟尿嘧啶(3.46g)溶解在二氯甲烷(50mL)中。然后，向其添加亚硫酰氯(0.9mL)和二甲基甲酰胺(0.04mL)。将生成的反应产物回流2.5小时，然后将溶剂蒸发。将残留物溶解在二甲基乙酰胺(12mL)中以获得酰基氯的二甲基乙酰胺溶液。在冰冷下，向2，4-二羟基-5-氯吡啶(1.5g)、三乙胺(1.57mL)和二甲基乙酰胺(15mL)的溶液滴加酰基氯的二甲基乙酰胺溶液。在室温下，将生成的反应产物搅拌8小时。向其中添加水，并通过乙酸乙酯和正己烷(1∶1)的混合溶剂来分离混合物。用硫酸钠干燥有机层，然后将溶剂蒸发。残留物通过硅凝胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶1)洗脱)纯化以获得化合物8a(668mg)。产率：14％

[0204] 参照例9

[0205] 2-{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯-4-羟基吡啶(化合物5b)、4-{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯-2-羟基吡啶(化合物5a)和2，4-二{2，6-二苄氧基异烟酰氧基}-5-氯代吡啶(化合物5c)的可替代的合成

[0206] 将参照例1中获得的化合物2a(1g)用作起始化合物，通过与用于参照例8相同的方法来获得酰基氯。此外，在参照例7的情况下，将2，4-二羟基-5-氯吡啶(1.0g)三甲基甲硅烷化，然后使其与酰基氯反应。在用三乙胺中和之后，由硅凝胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶1)洗脱)纯化通过蒸发溶剂获得的残留物以获得化合物5b(1.38g；产率：44％)、化合物5a(675mg；产率21％)和化合物5c(647mg：产率：12％)。

[0207] 实施例1

[0208] 3-{3-[4-(2，6-二苄氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-1)的合成

[0209] 将1-乙氧基甲基-3-间羟基羰基苯甲酰基-5-氟尿嘧啶(17g)溶解在二氯甲烷(200mL)中。然后，向其添加亚硫酰氯(5.5mL)和二甲基甲酰胺(0.4mL)。将生成的反应产物回流2.5小时，然后将溶剂蒸发。将残留物溶解在二氯甲烷(60mL)中以获得酰基氯的二氯甲烷溶液。在冰冷下，将该溶液滴加至参照例4中获得的化合物5a(21.27g)、三乙胺(7.3mL)和二氯甲烷(180mL)的溶液。在室温下，将生成的反应产物搅拌1小时，然后将溶剂蒸发。将生成的残留物通过硅凝胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶1)洗脱)纯化以获得化合物I-1(25.5g)。产率：71％

[0210] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0211] 8.77(1H，s)，8.67(1H，t，J＝1.6Hz)，8.54-8.50(2H，m)，8.45(1H，d，J＝6.6Hz)，7.88(1H，t，J ＝ 7.9Hz)，7.83(1H，s)，7.50-7.30(10H，m)，7.06(2H，s)，5.43(4H，s)，
5.11(2H，s)，3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，1.11(3H，t，J＝7.0Hz)

[0212] 熔点：66-69℃

[0213] 实施例2

[0214] 3-{3-[4-(2，6-二羟基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-2)的合成

[0215] 将实施例1中获得的化合物1-1(25.3g)溶解在二噁烷(800mL)中，然后向其添加20％的氢氧化钯(50％潮湿的，2.53g)，并在氢气氛下反应1小时。通过硅藻土从生成的反应产物中过滤氢氧化钯，并且用丙酮(200mL)洗涤。将滤液(即，二噁烷和丙酮溶液)浓缩，并将生成的残留物从丙酮-正己烷(1∶1)中结晶以获得化合物I-2(13.14g)。产率：
68％

[0216] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0217] 11.57(2H，brs)，8.77(1H，s)，8.67(1H，t，J ＝ 1.6Hz)，8.55-8.49(2H，m)，8.45(1H，d，J＝6.6Hz)，7.89(1H，t，J＝7.9Hz)，7.83(1H，s)，6.47(2H，brs)，5.12(2H，s)，
3.59(2H，q，J＝7.0Hz)，1.12(3H，t，J＝7.0Hz)

[0218] 熔点：125-129℃

[0219] 实施例3

[0220] 3-{3-[2-(2，6-二苄氧基异烟酰氧基)-5-氯-4-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-3)的合成

[0221] 根据实施例1的方法合成化合物I-3，除了使用参照例4中获得的化合物5b代替化合物5a。

[0222] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0223] 8.77(1H，s)，8.71(1H，t，J＝1.6Hz)，8.58-8.53(2H，m)，8.46(1H，d，J＝6.6Hz)，7.91(1H，t，J ＝ 7.9Hz)，7.83(1H，s)，7.50-7.30(10H，m)，7.03(2H，s)，5.43(4H，s)，
5.11(2H，s)，3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，1.12(3H，t，J＝7.0Hz)

[0224] 实施例4

[0225] 3-{3-[2-(2，6-二羟基异烟酰氧基)-5-氯-4-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-4)的合成

[0226] 使用实施例3中获得化合物I-3，根据实施例2的方法合成化合物I-4。

[0227] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0228] 8.77(1H，s)，8.71(1H，brs)，8.57-8.53(2H，m)，8.47(1H，d，J＝6.4Hz)，7.92(1H，t，J＝7.9Hz)，7.83(1H，s)，6.41(2H，brs)，5.12(2H，s)，3.59(2H，q，J＝6.3Hz)，1.12(3H，t，J＝7.1Hz)

[0229] 实施例5

[0230] 3-{3-[6-(2，6-二苄氧基异烟酰氧基)-3-氟-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-5)的合成

[0231] 根据实施例1的方法合成化合物I-5，除了使用参照例6中获得的化合物5d代替化合物5a。

[0232] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0233] 8.71(1H，t，J＝1.5Hz)，8.57-8.53(m，2H)，8.44(1H，d，J＝6.6Hz)，8.33(1H，t，J＝8.6Hz)，7.90(1H，t，J＝7.9Hz)，7.62(1H，dd，J＝2.7Hz，J＝8.7Hz)，7.46-7.32(10H，m)，5.42(4H，s)，5.12(2H，s)，3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，1.12(3H，t，J＝7.0Hz)[0234] 实施例6

[0235] 3-{3-[6-(2，6-羟基异烟酰氧基)-3-氟-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-6)的合成

[0236] 使用实施例5中获得的化合物I-5，根据实施例2的方法合成化合物I-6。

[0237] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0238] 8.71(1H，t，J＝1.6Hz)，8.58-8.53(2H，m)，8.44(1H，d，J＝6.8Hz)，8.32(1H，t，J＝8.6Hz)，7.91(1H，t，J＝7.8Hz)，7.60(1H，dd，J＝2.8Hz，J＝8.6Hz)，6.41(2H，brs)，5.11(2H，s)，3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，1.11(3H，t，J＝7.0Hz)

[0239] 实施例7

[0240] 3-{3-[4-(2，6-二苄氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-1)的合成

[0241] 向在参照例1中获得的化合物2a(217mg)和甲苯(4mL)的溶液中滴加亚硫酰氯(0.23mL)和二甲基甲酰胺(0.01mL)，并且将混合物在80℃下搅拌4.5小时。在将生成的混合物冷却之后，将溶剂蒸发。在不纯化的情况下，将残留的酰基氯溶解在二噁烷(2mL)中以获得待用于下述反应的酰基氯的二噁烷溶液。在冰冷下，将酰基氯的二噁烷溶液滴加至参照例7或参照例8中获得的化合物8a(100mg)、三乙胺(0.01mL)和二噁烷(10mL)的溶液。在室温下，将生成的混合物搅拌8小时，然后将溶剂蒸发。将生成的残留物通过硅凝胶柱层析(用乙酸乙酯/正己烷(1∶1)洗脱)纯化以获得化合物I-1(119mg)。产率：92％[0242] 实施例8

[0243] 3-{3-[2-(乳清酰氧基)-5-氯-4-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(3-{3-[2-(orotinoyloxy)-5-chloro-4-pyridyloxycarbonyl]benzoyl}-1-ethoxymethyl-5-fluorouracil)(化合物I-7)的合成

[0244] 向乳清酸(6g)中添加亚硫酰氯(35mL)和吡啶(0.17mL)，并且将混合物回流20小时。然后，从生成的反应产物中蒸发亚硫酰氯，并且获得的残留物为未纯化的乳清酸酰基氯。将生成的酰基氯(0.59g)和在参照例7中获得的化合物8b(0.78g)溶解在二噁烷(10mL)中。然后向上述溶液中添加三乙胺(0.46mL)和二噁烷(5mL)的溶液，并在室温下搅拌30分钟。通过过滤从生成的反应产物中除去不需要的材料，然后将溶剂蒸发。由乙酸乙酯和纯净水来分离溶液。用硫酸镁干燥生成的残留物，然后将溶剂蒸发。用正己烷和乙酸乙酯(3∶1)的混合溶剂(10mL)洗涤生成的粗晶体以获得化合物I-7(859mg；产率：85％)。

[0245] 1H-NMR(DMSOd6，δPPM)：

[0246] 11.53(1H，s)，11.49(1H，s)，8.78(1H，s)，8.71(1H，s)，8.55(2H，d，J＝7.9Hz)，8.47(1H，d，J＝6.6Hz)，7.92(1H，t，J＝7.9Hz)，7.82(1H，s)，6.35(1H，s)，5.11(2H，s)，
3.58(2H，q，J＝7.0Hz)，1.12(3H，t，J＝7.0Hz)

[0247] 实施例9

[0248] 3-{3-[4-(2，6-二异丁酰氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-8)的合成

[0249] 将在实施例2中获得的化合物I-2(5.0g)溶解在1，2-二甲氧基乙烷(75mL)中。在冰冷下，向其添加异丁酰氯(3.07mL)和吡啶(1.99mL)，并在相同温度下反应30分钟。将溶剂从生成的反应产物中蒸发。然后，向反应产物添加水，并由乙酸乙酯分离混合物。用硫酸钠干燥有机层，然后将溶剂蒸发。将残留物通过硅胶柱层析(用氯仿洗脱)纯化以获得化合物I-8(5.37g；产率：87％)。

[0250] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0251] 8.64(1H，t，J ＝ 1.5Hz)，8.56(1H，s)，8.52(1H，td，J ＝ 7.9Hz，J ＝ 1.5Hz)，8.29(1H，td，J＝8.0Hz，J＝1.5Hz)，7.74(2H，s)，7.73(1H，t，J＝7.7Hz)，7.52(1H，d，J＝5.3Hz)，7.34(1H，s)，5.18(2H，s)，3.64(2H，q，J＝7.1Hz)，2.89(2H，hept，J＝6.9Hz)，
1.36(12H，d，J＝7.1Hz)，1.21(3H，t，J＝6.3Hz)

[0252] 实施例10

[0253] 3-{3-[4-(2，6-二环戊烷羰基氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-9)的合成

[0254] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-9，除了使用环戊烷羰基氯代替异丁酰氯。

[0255] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0256] 8.64(1H，t，J ＝ 1.5Hz)，8.55(1H，s)，8.52(1H，td，J ＝ 1.5Hz，J ＝ 7.8Hz)，8.29(1H，td，J＝1.6Hz，J＝8.4Hz)，7.74(2H，s)，7.73(1H，t，J＝7.8Hz)，7.51(1H，d，J＝5.1Hz)，7.33(1H，s)，5.18(2H，s)，3.65(2H，q，J＝7.1Hz)，3.06(2H，qu，J＝8.1Hz)，
2.20-1.40(16H，m)，1.24(3H，t，J＝7.1Hz)

[0257] 实施例11

[0258] 3-{3-[4-(2，6-二乙酰氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-10)的合成

[0259] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-10，除了使用乙酰氯代替异丁酰氯。

[0260] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0261] 8.64(1H，t，J ＝ 1.5Hz)，8.56(1H，s)，8.52(1H，td，J ＝ 8.0Hz，J ＝ 1.4Hz)，8.29(1H，td，J＝8.0Hz，J＝1.6Hz)，7.78(2H，s)，7.73(1H，t，J＝7.7Hz)，7.51(1H，d，J＝5.3Hz)，7.35(1H，s)，5.18(2H，s)，3.64(2H，q，J＝7.0Hz)，2.38(6H，s)，1.24(3H，t，J＝
7.0Hz)

[0262] 实施例12

[0263] 3-{3-[4-(2，6-二丙酰氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-11)的合成

[0264] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-11，除了使用丙酰氯代替异丁酰氯。

[0265] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0266] 8.63(1H，t，J ＝ 1.8Hz)，8.55(1H，s)，8.52(1H，d，J ＝ 7.9Hz)，8.29(1H，d，J＝7.9Hz)，7.77(2H，s)，7.73(1H，t，J＝7.8Hz)，7.51(1H，d，J＝ 5.3Hz)，7.35(1H，s)，5.18(2H，s)，3.64(2H，q，J＝7.0Hz)，2.69(4H，q，J＝7.5Hz)，1.32-1.21(9H，m)[0267] 实施例13

[0268] 3-{3-[4-(2，6-二新戊酰氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-12)的合成

[0269] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-12，除了使用新戊酰氯代替异丁酰氯。

[0270] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0271] 8.64(1H，t，J＝1.5Hz)，8.56(1H，s)，8.52(1H，dt，J＝1.5Hz，7.7Hz)，8.29(1H，dt，J＝1.6Hz，J＝7.9Hz)，7.73(1H，t，J＝7.9Hz)，7.69(2H，s)，7.51(1H，d，J＝5.3Hz)，7.33(1H，s)，5.19(2H，s)，3.65(2H，q，J＝7.0Hz)，1.41(18H，s)，1.24(3H，t，J＝7.0Hz)[0272] 实施例14

[0273] 3-{3-[4-(2，6-二苯甲酰氧基烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-13)

[0274] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-13，除了使用苯甲酰氯代替异丁酰氯。

[0275] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0276] 8.64(1H，s)，8.56(1H，s)，8.53(1H，d，J ＝ 7.9Hz)，8.30(1H，d，J ＝ 8.2Hz)，8.24(5H，d，J＝6.6Hz)，7.91(2H，s)，7.77-7.65(3H，m)，7.56-7.39(6H，m)，5.18(2H，s)，
3.64(2H，q，J＝7.0Hz)，1.24(3H，t，J＝7.0Hz)

[0277] 实施例15

[0278] 3-{3-[4-(2，6-二-对氯苯甲酰氧基异烟酰氧基)-5-氯-2-吡啶基氧基羰基]苯甲酰基}-1-乙氧基甲基-5-氟尿嘧啶(化合物I-14)的合成

[0279] 以与实施例9使用的相同方法来获得化合物I-14，除了使用对氯苯甲酰氯代替异丁酰氯。

[0280] 1H-NMR(CDCl3，δPPM)：

[0281] 8.64(1H，s)，8.57(1H，s)，8.52(1H，d，J ＝ 7.9Hz)，8.29(1H，d，J ＝ 7.9Hz)，8.18(4H，d，J＝8.6Hz)，8.03(1H，d，J＝8.4Hz)，7.96(2H，s)，7.74(1H，t，J＝7.8Hz)，
7.65-7.50(4H，m)，7.38(1H，s)，5.18(2H，s)，3.64(2H，q，J ＝ 7.0Hz)，1.24(3H，t，J ＝
7.0Hz)

[0282] 测试例1

[0283] 体外DPD抑制作用和OPRT抑制作用

[0284] (a)试验液体制剂(1)：将本发明的化合物I-2溶解于乙腈中直至浓度为10mM。使用10mM的磷酸钾缓冲溶液(pH为6.0)将生成的产物稀释至浓度为1mM、100μM、10μM和1μM，由此获得试验液体1。将获得的试验液体1分别添加至下述的酶反应溶液，从而获得
200μM、20μM、2μM和0.2μM的最终浓度。

[0285] (b)试验液体制剂(2)：将作为DPD抑制剂的5-氯-2，4-二羟基吡啶(CDHP；吉美拉西)溶解在10mM的磷酸钾缓冲溶液(pH为6.0)中直至浓度为10mM。将生成的产物稀释至浓度为1mM、100μM、10μM和1μM，由此获得试验液体2。将获得的试验液体2分别添加至酶反应溶液，从而获得200μM、20μM、2μM和0.2μM的最终浓度。

[0286] (c)试验液体制剂(3)：将作为OPRT抑制剂的柠嗪酸(Citra.A.)溶解在20mM的三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液(pH 8.0)中直至浓度为10mM。此后，使用10mM的磷酸钾缓冲溶液将生成的产物稀释至1mM、100μM和10μM的浓度，由此获得试验液体(3)。将获得的试验液体3分别添加至酶反应溶液以得到200μM、20μM和2μM的最终浓度。

[0287] (d)酶溶液的制备：将8周大的SD大鼠的肝脏用作DPD酶源，将已经移植至裸小鼠并在其中增殖的人肿瘤细胞用作OPRT酶源。具体地，在提取大鼠肝脏或相继移植的人肿瘤细胞之后，立即向其中添加包含0.25M蔗糖、5mM氯化镁和1mM二苏糖醇的50mM三盐酸缓冲溶液(pH 8.0)，直至25％(w/v)的浓度，并均质化。此后，在105,000g下进行超速离心60分钟，将获得的上清液用作DPD酶溶液或OPRT酶溶液。

[0288] (e)酶反应：根据Tatsumi等人(Gann，78：748-755(1987))的方法，使用被氚标记的5-FU作为底物进行DPD酶反应。根据Shirasaka等人(Cancer Res.，53：4004-4009(1993))的方法，使用被氚标记的5-FU作为底物进行OPRT酶反应。然后，测量对照组(不具有试验化合物)和试验化合物组的活性。使用下式计算试验化合物与DPD或OPRT的抑制百分比：[1-(具有试验化合物的酶活性/对照组的酶活性)]×100(％)。表1和表2显示结果。

[0289] 表1

[0290]

[0291] 表2

[0292]

[0293] (f)试验结果：在体外酶反应体系中，本发明的化合物I-2、I-9和I-10抑制了在作为底物的5-FU上诱发的DPD活性和OPRT活性。本发明的化合物的抑制活性几乎等同于作为对照的吉美拉西或柠嗪酸。尽管吉美拉西和柠嗪酸不具有抗肿瘤活性，但它们具有DPD抑制活性或OPRT抑制活性。这证实了本发明的抗肿瘤剂具有高DPD抑制活性和高OPRT抑制活性。

[0294] 测试例2

[0295] 在癌细胞中化合物I-2对5-FU活性(磷酸化作用)的抑制作用

[0296] (a)试验液体制剂(1)：将本发明的化合物I-2或I-10溶解于冷的生理盐水中直至浓度为1mM。使用生理盐水将生成的产物再稀释10倍，生成100μM的溶液。

[0297] (b)试验液体制剂2：将作为抑制5-FU磷酸化的OPRT抑制剂的柠嗪酸(Citra.A.)溶解在冷的生理盐水中，直至浓度为1mM，并且使用生理盐水再稀释10倍，生成100μM的溶液。

[0298] (c)癌细胞悬浮液的制备：将腹水型肉瘤180细胞首先腹膜内移植至ICR小鼠中，并在其中增殖以作为原始(完整的)细胞用于试验。将增殖的细胞分离，然后用生理盐水洗涤。收集细胞颗粒，以1.25×107个细胞/mL悬浮在Hanks培养基中，并且立即用于试验。

[0299] (d)对5-FU细胞内磷酸化的抑制的实验：在冰中，将0.1mL的每一试验液体和0.1mL的10μM 5-FU溶液添加至0.8mL的肉瘤180细胞，并在37℃下孵育30分钟。在反应完成后立即将4mL的冷Hanks溶液添加至反应溶液，并且将细胞洗涤并通过离心分离。在重复该过程两次之后，将2mL的冷5％三氯乙酸(TCA)溶液添加至细胞颗粒以分裂细胞，并提取5-FU及其核苷酸代谢物。然后，将一部分核酸提取物涂覆于硅胶60F254板，并且用包含氯仿-甲醇-乙酸(17∶3∶1)的混合液体来显影以分离核苷酸部分。测量其放射活性，并测量5-FU磷酸化的浓度。在上述条件下，计算本发明试验液体1和2对5-FU磷酸化相对于对照组(不具有试验液体)的抑制百分比。表3示出结果。

[0300] 表3

[0301]

[0302] (e)试验结果：在反应30分钟内，本发明的化合物I-2和I-10以浓度依赖形式抑制了5-FU的细胞内磷酸化；在10μM的浓度下，抑制百分比为约20％至30％，并且在100μM的浓度下，抑制百分比为50％至60％。相反，作为对照的柠嗪酸通过反应30分钟，对5-FU细胞内磷酸化几乎没有表现出抑制；甚至在100μM的浓度下，抑制百分比仅为5％至15％。上述结果证实了本发明的化合物在被细胞摄取之后以剂量依赖的方式抑制了由OPRT诱发的5-FU磷酸化。

[0303] 测试例3

[0304] 在人-肿瘤细胞移植小鼠中的抗肿瘤作用和副作用

[0305] (a)试验液体制剂1：将本发明的化合物I-2以1.5mg/mL、2.25mg/mL或3.0mg/mL的浓度悬浮在0.5％(w/v)的羟丙基甲基纤维素(下文简称为“HPMC”)溶液中，并在室温下用搅拌器搅拌约10分钟。此后，在冰冷下进行超声处理约5分钟，由此获得以15mg/kg/天、22.5mg/kg/天或30mg/kg/天的剂量使用的化合物I-2药液。

[0306] (b)试验液体制剂2：将本发明的化合物I-10以2.57mg/mL、3.42mg/mL或42.8mg/mL的浓度悬浮在0.5％(w/v)的HPMC溶液中，并在室温下用搅拌器搅拌约10分钟。此后，在冰冷下进行超声处理约5分钟，由此获得以25.7mg/kg/天、34.2mg/kg/天或42.8mg/kg/天的剂量使用的化合物I-10药液。

[0307] (c)试验液体制剂3：在本发明的化合物之中，将不包含柠嗪酸部分的试验物(化合物8a)以1.15mg/mL、1.73mg/mL或2.3mg/mL的浓度悬浮在0.5％(w/v)的HPMC溶液中，并在室温下用搅拌器搅拌约10分钟。此后，在冰冷下进行超声处理约5分钟，由此获得以11.5mg/kg/天、17.3mg/kg/天或23mg/kg/天的剂量使用的化合物8a药液。

[0308] (d)试验液体制剂4：将为包含摩尔比为1∶0.4∶1的喃氟啶-吉美拉西-氧嗪酸钾的组合剂的S-1(第2614164号专利)悬浮在0.5％(w/v)的HPMC溶液中，从而喃氟啶的量为0.5mg/mL、0.75mg/mL或1.0mg/mL。在室温下，将生成的产物用搅拌器搅拌约10分钟。此后，在冰冷下进行超声处理约5分钟，由此获得以5.0mg/kg/天、7.5mg/kg/天或10mg/kg/天的剂量使用的S-1药液。

[0309] (e)试验液体制剂5：将试验物BOF-A2以1.4mg/mL、2.1mg/mL或2.8mg/mL的浓度悬浮在0.5％(w/v)的HPMC溶液中，并在室温下用搅拌器搅拌约10分钟。此后，在冰冷下进行超声处理约5分钟，由此获得以14mg/kg/天、21mg/kg/天或28mg/kg/天的剂量使用的BOF-A2药液。

[0310] (f)实验：将人胃癌菌株(SC-2)皮下移植至BALB/cA-nu小鼠的背部，并在其中初步增殖。提取增殖的菌株，用剪刀在生理盐水中切割为约2mm的方片，并且使用移植针皮下接种至5至6周大的相同菌株的小鼠的右腋窝区域。将得到的小鼠进行饲养使其适应至少1至2周，并且将其分为对照组和三种不同剂量的试验药物组(三组对应于化合物I-2；三组对应化于合物I-10；三组对应于化合物8a；三组对应于S-1；以及三组对应于BOF-A3)，以便平均肿瘤体积和平均标准偏差(S.D.)在该组(每组5至6只小鼠)(第0天)间尽可能地相等。然后，从第二天开始药物给予。使用口服给药探测仪口服给予每一试验药物组的小鼠上述(a)至(e)中所示的每一试验液体，剂量为每10g体重0.1ml，每天一次，连续
14天。以与上述相同的方法，仅口服给予对照组中癌症携带小鼠0.5％的HPMC液体，连续
14天。

[0311] 使用下列方程计算治疗开始前、第3天、第5天、第8天(一周后)、第11天和第15天(二周后)，即给药结束之后，的每一组的每一小鼠的肿瘤体积，并且计算与治疗开始时的肿瘤体积相比的各个相对肿瘤体积(RTV)。相对于抗肿瘤作用，使用方程2，与第15天的对照组相比，由第15天(治疗结束之后)的每一治疗组的平均肿瘤体积来计算肿瘤增殖抑制率(IR；％)的平均值。此外，通过15天的治疗期，观察腹泻和死亡的发生。发生次数在表中示出。随之，使用方程3，与给药开始时的小鼠体重相比，由药物给予结束时的小鼠体重来计算体重变化率。表4显示结果。

[0312] 方程1

[0313] 肿瘤体积(mm3)＝(长轴)×(短轴)2×1/2

[0314] 方程2

[0315] 肿瘤增殖抑制率(IR，％)＝[1-(治疗组的平均肿瘤体积)/(对照组的平均肿瘤体积)]×100

[0316] 方程3

[0317] 平均重量变化率(％)＝[(第15天的平均重量)-(第1天的平均重量)]/(第1天的平均重量)×100

[0318] 表4

[0319]