棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法

摘要

本发明涉及植物生理学和农药学，具体地，本发明涉及棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法。根据本发明的方法，包括步骤：1)材料处理叶片的选择：选择完好无损无受害现象的功能叶或其邻位叶；2)棉球定位处理：在每株的功能叶正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定作用位置，将大小基本一致的棉球蘸满设定浓度的除草剂工作液，按固定方向依序放置各种浓度药剂浸泡的棉球于叶片表面的相应作用位置；3)观察处理部位反应情况来确定其抗性水平。该方法可大大节省材料，减小实验规模，大大减少人为误差，结果精确可靠，对精确定义材料抗性水平提供了技术保障，也为材料当代单株进行深入的抗性研究提供保证，操作极其简单，容易掌握。

权利要求

1.棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)材料处理叶片的选择：选择完好无损无受害现象的功能叶或其邻位叶；

2)棉球定位处理：在每株的功能叶正面自叶柄处开始顺时针或逆时针方向设定作用位置，将大小基本一致的棉球蘸满设定浓度的除草剂工作液，按固定方向依序放置各种浓度药剂浸泡的棉球于叶片表面的相应作用位置，其中，棉球浸泡的除草剂药量达到放置药液浸泡的棉球在叶片上无药液流动的标准；

3)观察处理部位反应情况来确定其抗性水平。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述材料处理叶片为光合作用最强的叶片。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，处理棉株时在无风、晴朗的上午无露水时进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以棉球处理叶片后的6小时以内无雨，或不见水。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述除草剂是草甘膦或草胺膦。

说明书

棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物生理学和农药学，具体地，本发明涉及棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法。

背景技术

[0002] 目前，棉花除草剂抗性鉴定常常是种子萌发鉴定法、不同时期不同浓度除草剂喷施法、蕾期叶片点涂生长点法、细胞系等培养物除草剂处理法等，但是种子萌发鉴定法要求种子量足够大，而不同时期不同浓度除草剂喷施法则要求各时期苗量较大，也会因喷洒不均、药液飘逸导致实验误差，另外蕾期叶片点涂生长点法中，生长点不可以代表整个棉株的生长水平，且较高浓度处理会引起棉株生长点受控、严重畸形，棉株不能开花结实，并且以上各种方法均可能将材料致死，而且，在同时对大量材料进行鉴定时，要求实验规模较大，不便于实现。

[0003] 同时，在对有限或是珍稀棉花材料进行除草剂抗性鉴定时，由于材料量的限制，按照上述各方法处理极有可能会毁灭材料，也不能确保会找到材料的抗性水平或致死浓度。这时，有效的方法是对棉株进行局部鉴定，这样既可以找到材料的抗性水平，又可以保存材料。本发明的发明人了解到，棉花的功能叶可以代表棉株的生长状况，可以处理棉株功能叶进行棉花对除草剂抗性的鉴定。

发明内容

[0004] 本发明的发明人长期探索棉株除草剂抗性鉴定方法，发现利用不同浓度的除草剂同时处理棉株功能叶，既可快速精准找出棉株的抗性水平，又可以继续保存、繁殖有限或珍稀棉花材料；既适用于大量棉花材料的除草剂抗性鉴定，也适用于有限或珍稀材料的除草剂抗性鉴定，即棉球定位鉴定法。

[0005] 因此，本发明的目的是提供棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法。

[0006] 根据本发明的棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法，包括以下步骤：

[0007] 1)材料处理叶片的选择：选择完好无损无受害现象的功能叶或其邻位叶；

[0008] 2)棉球定位处理：在每株的功能叶正面自叶柄顺时针或逆时针方向设定作用位置，将大小基本一致的棉球蘸满设定浓度的除草剂工作液，按固定方向依序放置各种浓度药剂浸泡的棉球于叶片表面的相应作用位置；

[0009] 3)观察处理部位反应情况来确定其抗性水平。

[0010] 根据本发明的棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法，其包括棉球定位鉴定的步骤，其中，处理为局部处理。根据本发明的要求，除草剂处理的叶片选取功能叶或其邻位叶，一般为倒三或倒四叶，即光合作用最强的叶片，因为过幼嫩组织对外界条件反应敏感，施用较低浓度草甘膦时，极易表现出药害症状，不能代表材料的抗性水平；而过老组织代谢不旺盛，处理后叶片可能不反应，叶片组织的一些自然生理生化变化也容易影响鉴定结果。

[0011] 根据本发明的棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法，对天气状况要求比较高，要保证处理后6小时无雨，且最好在无风晴朗的上午无露水时进行处理，保证精确浓度的药液与叶片充分作用；对棉株的生育期要求不需要太严格，即苗期、蕾期、花铃期都可。

[0012] 根据本发明的棉球定位法对棉花除草剂抗性的鉴定，其中，药棉要按照固定的顺序进行放置，或顺时针，或逆时针；药棉药量要充足，但要保证棉球置于叶片而没有药液流动；棉球药液浓度不可无限制增大，否则可能导致幼苗死亡或生长点畸形，严重受控；药棉大小要合适，切勿出现不同浓度药棉粘连现象；棉球要使用脱脂棉，保证吸水性。

[0013] 根据本发明的具体实施方式，所述棉花叶片棉球定位鉴定除草剂抗性的方法，具体包括：1)材料处理叶片的选择：选择完好无损无受害现象的功能叶，一株一片；2)棉球定位法处理，在每株的功能叶正面自叶柄处开始顺时针方向设定5个位置，用镊子将大小基本一致的棉球(脱脂棉)蘸满设定浓度的除草剂工作液，依序放置于叶片表面相应位置。3)于处理后第四天调查，观察处理部位反应情况来确定其抗性水平。

[0014] 本发明是基础科研事业中一项重要技术发明，在国际和国内为独创，其具有以下优点：

[0015] 1、喷洒法处理会因喷洒不均，五级药害法定义材料抗性水平，会因肉眼观察，估计受害面积或受害严重程度差异不准而造成人为误差，成苗率等定义会因调查时间选择不当造成实验误差；棉球定位法按浓度大小分级，以处理部位是否反应为标准定义材料抗性，大大减少人为误差，结果精确可靠。

[0016] 2、对于有限或珍稀材料，采用棉球定位法鉴定，为材料继续正常生长提供了保障，对精确定义材料抗性水平提供了技术保障，也为材料当代单株进行深入的抗性研究提供保证。

[0017] 3、对于大量材料对除草剂抗性的筛选，采用棉球定位法鉴定可大大节省材料，减小实验规模。

[0018] 4、所述方法较其它方法快速，周期短，一般的方法要在处理后10-15天调查，但棉球定位鉴定法在4天内即出现结果，这大大减少了鉴定周期，有效提高了鉴定效率。

[0019] 5、所述方法在一株棉株上可以同时设置几个不同浓度，一次处理即可确定棉株的反应区间，大大节省材料，缩短鉴定时间，提高鉴定效率，显示了该方法快速，省材、批量的优势。

[0020] 6、采用棉球定位法对大量材料进行除草剂鉴定时，不仅可以知道各材料抗性水平，同时可以在同一水平下比较材料抗性差异。

[0021] 7、用药量少，大幅度的降低实验成本，同时，对环境基本无污染，对环保做巨大贡献。而且，操作极其简单，容易掌握。

附图说明

[0022] 图1棉球定位法处理棉叶，棉叶上1-5除草剂浓度依次增高。

[0023] 图2棉球定位鉴定法观察结果，从a-f为高抗至高感，其中，a.高抗，叶片无反应，1级；b.抗，5反应，1-4不反应，2级；c.耐，4-5有反应，1-3无反应，3级；d.不耐，3-5有反应，1-2无反应，4级；e.感，2-5有反应，1无反应，5级；f.高感，1-5有明显反应，6级。

具体实施方式

[0024] 实施例1棉球定位法鉴定棉花对除草剂草甘膦的抗性

[0025] 1、处理材料叶片选择

[0026] 材料种植、管理等没有具体要求，常规种植管理或自然生长的材料都可。叶片选择从棉株部位上讲没有特殊要求，主茎、营养枝、果枝、二级或三级分枝均可，但要求完好无损无受害现象的功能叶，一株一片；从棉株生育期上讲，没有严格要求，苗期、蕾期、花铃期都可。处理前对叶片进行标记，但标记时间不可提前太长，否则对于除草剂处理来讲，叶片生长太快，叶片会偏老，结果出现误差。

[0027] 2、药液配制

[0028] 药液配制首先将原液按一定比例配制成母液(每10毫升41％草甘膦原液充分溶于400毫升水中配制成母液为1％的草甘膦溶液)，再进一步稀释成工作液(分别将6毫升、30毫升、90毫升、150毫升和200毫升的1％的草甘膦母液充分溶于994毫升、970毫升、910毫升、850毫升和800毫升的水中，分别配制成0.006％、0.03％、0.09％、0.15％和0.2％的草甘膦工作液)。原液、母液最好保存于冰箱，且母液和工作液不可长时间保存，工作液不可在阳光下暴晒，也不可置于风口，最好置于阴凉处。

[0029] 3、棉球定位处理

[0030] 棉球定位处理是在每株的功能叶正面自叶柄处开始顺时针方向设定几个位置，用镊子将蘸满设定浓度草甘膦的棉球(脱脂棉)，依序放置于叶片表面相应位置，见附图1。关键是棉球大小基本一致，药棉药量充足，但不要太多以防在叶片上流动。另外，要使用钝头镊子，以免尖头镊子划伤叶片。

[0031] 4、调查

[0032] 处理后第4天左右调查，反应情况很明显，依反应情况将材料抗性分级评价，见附图2，a.高抗，叶片无反应，1级；b.抗，5反应，1-4不反应，2级；c.耐，4-5有反应，1-3无反应，3级；d.不耐，3-5有反应，1-2无反应，4级；e.感，2-5有反应，1无反应，5级；f.高感，1-5有明显反应，6级。

[0033] 棉球定位鉴定棉花时，每棉株都处理功能叶，具有一致性和代表性，且每功能叶都处理特定位置，具有针对性，每处理部位精确浓度的药量够充足，可以保证每处理位置组织与精确浓度的药液充分作用，而喷洒法常常会出现喷洒不均、每材料各重复喷洒药量大小不等、不同浓度药液飘逸的现象，导致该方法存在随机性、难控制性，误差较大。另外，棉球定位法处理四天时调查每处理位置是否出现反应定义抗性水平，是定性调查，人为主观误差较小，而五级药害法调查则要估计受害面积或受害程度严重性，是定量调查，人为主观误差较大，可能会受肉眼观察的影响，并且喷洒药液均匀度对结果影响很大，成苗率调查法会因处理时较难统一的药量水平差异造成的反应迟缓、严重不同，从而调查时间把握不当造成实验误差。

[0034] 棉球定位鉴定只是给棉株局部施药，且药量很小，尽管除草剂草甘膦和草胺膦有一定的传导性，只要不在棉株上棉球定位过大浓度除草剂，就不至于完全抑制或致死棉株。因此，本方法鉴定处理后的棉株，基本可以正常生长发育。