一种制备脱细胞骨的方法

摘要

本发明公开了一种制备脱细胞骨的方法，将动物骨通过制备骨片、病毒灭活、脱脂、脱细胞、冻干、裁剪、成型、包装和辐照消毒工艺后得到脱细胞骨。本发明的优点：脱脂时间短、效率高、对骨组织结构的保护作用强，脱细胞彻底，对骨细胞外基质天然结构损害轻的优点。

权利要求

1.一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，其特征在于，包括以下步骤：a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2-0.4㎝片状骨片，清除表面油脂；

b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%~2%的过氧乙酸和质量浓度1%~5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5-1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1:3-5；

c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%~5.0%纯碱、质量浓度3.0%~5.0%烧碱和质量浓度

0.5%~1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0-5.0小时，所述表面活性剂为平平加、曲拉酮中的一种，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:3-5；

d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0-2.0小时，所述激活剂为质量浓度0.1%~0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%~0.5%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:3-5；

e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

说明书

一种制备脱细胞骨的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种制备脱细胞骨的方法。

背景技术

[0002] 骨修复一直是临床上的难题，目前治疗骨缺损的方法仍然以自体和异体骨移植为主。临床上关于异种骨移植存在的抗原性强、排斥反应强的问题尚未有效解决，异种骨的抗原性主要来自于异种骨细胞，目前的工艺制备的异种骨材料存在以下不足：操作较复杂，周期较长，效率较低；脱细胞不彻底，容易造成骨基质的损坏。因此，需要提供一种新的技术方案来解决上述问题。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种周期较短、效率较高、脱细胞彻底、对骨细胞外基质天然结构损害轻的制备脱细胞骨的方法。

[0004] 本发明采用的技术方案是：

[0005] 一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，其特征在于，包括以下步骤：

[0006] a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2-0.4cm片状骨片，清除表面油脂；

[0007] b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%~2%的过氧乙酸和质量浓度1%~5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5-1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1: 3-5；

[0008] c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%~5.0%纯碱、质量浓度3.0%~5.0%烧碱和质量浓度0.5%~1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0-5.0小时，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1: 3-5；

[0009] d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0-2.0小时，所述激活剂为质量浓度0.1%~0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%~0.5%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1: 3-5；

[0010] e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

[0011] f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

[0012] 本发明的有益效果：（1）b步骤采用过氧乙酸和氯化钠溶液组成的病毒灭活液进行病毒灭活，既达到了病毒灭活的效果，又避免了过氧乙酸溶液灭活病毒而产生的骨肿胀的问题；（2）c步骤中的由纯碱、烧碱、表面活性剂组成的混合脱脂剂具有脱脂时间短、效率高、对骨组织天然结构的保护作用强的优点；（3）d步骤中采用酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞，具有脱细胞彻底，对骨细胞外基质天然结构损害轻的优点。

具体实施方式

[0013] 实施例1

[0014] 本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

[0015] a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.2cm片状骨片，清除表面油脂；

[0016] b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度0.1%的过氧乙酸和质量浓度1%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.5小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1:3；

[0017] c、脱脂工艺：采用质量浓度3.0%纯碱、质量浓度3.0%烧碱和质量浓度0.5%平平加组成的混合脱脂剂进行脱脂1.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:3；

[0018] d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.0小时，激活剂为质量浓度0.1%硫酸铵，脱脂剂为质量浓度0.2%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:3；

[0019] e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

[0020] f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

[0021] 实施例2

[0022] 本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

[0023] a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.3cm片状骨片，清除表面油脂；

[0024] b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度1%的过氧乙酸和质量浓度3%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活0.8小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1:4；

[0025] c、脱脂工艺：采用质量浓度4.0%纯碱、质量浓度4.0%烧碱和质量浓度0.8%十二烷基氨基丙酸钠组成的混合脱脂剂进行脱脂3.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:4；

[0026] d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.3%胰酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺1.5小时，激活剂为质量浓度0.2%硫酸铵，脱脂剂为质量浓度0.3%平平加，片状骨片与脱细胞液的质量比为1:4；

[0027] e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的骨片，放入冷冻干燥机冻干后，进一步将脱细胞骨根据临床不同的适应症的需要，分别裁剪、定型；

[0028] f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。

[0029] 实施例3

[0030] 本发明的一种制备脱细胞骨的方法，该脱细胞骨由猪骨、牛骨或羊骨制备而成，包括以下步骤：

[0031] a、制备异种骨工艺：将动物骨切成的0.4cm片状骨片，清除表面油脂；

[0032] b、病毒灭活工艺：将片状骨片用质量浓度2%的过氧乙酸和质量浓度5%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行病毒灭活1.0小时，片状骨片与病毒灭活溶液的质量比为1: 5；

[0033] c、脱脂工艺：采用质量浓度5.0%纯碱、质量浓度5.0%烧碱和质量浓度1.0%脂肪醇聚氧乙烯醚组成的混合脱脂剂进行脱脂5.0小时，片状骨片与混合脱脂剂的质量比为1:5；