本发明公开一种盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂的制备方法，本发明方法采用通过阳离子交换树脂或大孔吸附树脂吸附取代传统的毒性较大的苯提取及氯仿提取(萃取)工艺，提取收率高，操作更简便，克服了有机溶剂用量大、毒性大对操作人员健康及环境造成的危害和污染，减少了有机溶剂的处理过程，更有利于环境保护，减少了工厂的环保设施的投入，有利于环境友好生产。本方法提取分离的盐酸青藤碱，作为医药制剂的原料，纯度更高，无溶剂残留，减少了对人体的潜在危害。
1.一种盐酸青藤碱大输液的制备方法，其特征在于该方法包括如下任一方法： 方法一：
A、提取：青风藤粗粉100～1000重量份，用60～1000体积份的0.1～1mol/L HC1润湿0.5～8小时，装渗漉筒，再加入0.1～1mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍6～48小时后，按2～5ml/min的速度开始渗漉，6～24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用； B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型大孔吸附树脂，径高比
1：8-12，上样速度为2-5倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用8-15%氨溶液浸泡树脂12小时，或用3-10%盐酸溶液浸泡152型大孔吸附树脂12小时，再用pH8-11的氨水-乙醇溶液洗脱或152型大孔吸附树脂用3-10%盐酸溶液洗脱，洗脱速度为2-5倍柱体积/小时，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或氨水中和至pH=6-8，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品； C、精制：取盐酸青藤碱粗品5～10重量份，用30～120体积份的10～95%乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3-6%重量倍的活性炭，保温回流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用75-95%的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱； 步骤二、氯化钠大输液的制备 称取盐酸青藤碱0.3-2重量份、氯化钠6-15重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量60%-80%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.05%-0.5%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和
0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射 剂标准，灭菌，即得；
称取盐酸青藤碱0.3-2重量份、葡萄糖40-60重量份、注射用水适量，取上述量的葡萄糖，加配液量60%-80%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.05%-0.5%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份；搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和
0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得。
2.一种盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤： 步骤一、盐酸青藤碱的制备方法
A、提取：青风藤粗粉100～1000重量份，用60～1000体积份的0.1～1mol/L HCl润湿0.5～8小时，装渗漉筒，再加入0.1～1mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍6～48小时后，按2～5ml/min的速度开始渗漉，6～24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用； B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型大孔吸附树脂，径高比
1：8-12，上样速度为2-5倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用8-15%氨溶液浸泡树脂12小时，或用3-10%盐酸溶液浸泡152型大孔吸附树脂12小时，再用pH8-11的氨水-乙醇溶液洗脱或152型大孔吸附树脂用3-10%盐酸溶液洗脱，洗脱速度为2-5倍柱体积/小时，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或氨水中和至pH=6-8，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品； C、精制：取盐酸青藤碱粗品5～10重量份，用30～120体积份的10～95%乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3-6%重量倍的活性炭，保温回 流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用75-95%的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱； 步骤二、 取盐酸青藤碱50-150重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；
加入0.05-0.5%的活性炭，35～45℃保温5-20分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得。
3.如权利要求1所述的盐酸青藤碱大输液的制备方法，其特征在于方法一中步骤二为如下步骤的任意一种：
称取盐酸青藤碱0.5重量份、氯化钠6重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量70%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射剂标准，灭菌，即得； 或称取盐酸青藤碱1重量份、氯化钠10重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量70%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.2%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.15μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射剂标准，灭菌，即得。
4.如权利要求1所述的盐酸青藤碱大输液的制备方法，其特征在于方法二中步骤二为如下步骤的任意一种：
称取盐酸青藤碱0.5重量份、葡萄糖45重量份、注射用水适量，取处方量的葡萄糖，加配液量70%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、 含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得； 或称取盐酸青藤碱1重量份、葡萄糖55重量份、注射用水适量，取处方量的葡萄糖，加配液量60%的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.2%的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.15μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得。
5.如权利要求2所述的盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于步骤二为如下步骤的任意一种：
取盐酸青藤碱100重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.1%的活性炭，35～45℃保温10分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得； 或者取盐酸青藤碱140重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.2%的活性炭，35～45℃保温6分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得。
6.如权利要求1、3、4任一所述的盐酸青藤碱大输液的制备方法，其特征在于该方法中步骤一B步骤中，阳离子交换树脂为001*2.5、001*4型树脂,大孔吸附树脂为152型；树脂径高比为1：10。
7.如权利要求1、3、4任一所述的盐酸青藤碱大输液的制备方法，其特征在于该方法中步骤一C步骤中，加入4%重量倍的活性炭；加热回流时乙醇浓度为40%,55%，60%，75%或
8.如权利要求1、3、4任一所述的盐酸青藤碱大输液剂的制备方法，其特征在于该方法中步骤一B步骤中，上样速度为3倍柱体积/小时；浸泡树脂用10%氨溶液或5%盐酸溶液。
9.如权利要求1、3、4任一所述的盐酸青藤碱大输液的制备方法，其 特征在于该方法中步骤一B步骤中，以pH8-11的氨水-乙醇溶液作为阳离子交换树脂的洗脱溶液，洗脱液用盐酸中和至pH=6～8；5%HCl溶液作为152型大孔吸附树脂的洗脱溶液。
10.如权利要求2、5任一所述的盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该方法中步骤一B步骤中，阳离子交换树脂为001*2.5、001*4型树脂,大孔吸附树脂为152型；
11、如权利要求2、5任一所述的盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该方法中步骤一C步骤中，加入4%重量倍的活性炭；加热回流时乙醇浓度为40%,55%，60%，75%或80%。
12、如权利要求2、5任一所述的盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该方法中步骤一B步骤中，上样速度为3倍柱体积/小时；浸泡树脂用10%氨溶液或5%盐酸溶液。
13、如权利要求2、5任一所述的盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法，其特征在于该方法中步骤一B步骤中，以pH8-11的氨水-乙醇溶液作为阳离子交换树脂的洗脱溶液，洗脱液用盐酸中和至pH=6～8；5%HCl溶液作为152型大孔吸附树脂的洗脱溶液。
一种制备盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂的制备方法，具体涉及一种非有机溶剂提取青风藤中有效成分盐酸青藤碱制成盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂的方法。
背景技术
[0002] 青风藤是传统常用中药，为防己科植物青藤及毛青藤的干燥藤茎，早在《本草纲目》中就有记载，现收载于《中华人民共和国药典》2010年版，具有祛风、通经络、利小便之功效，用于治疗风湿痹痛、关节肿胀、麻痹瘙痒，还有抗心率失常和降压等作用。
[0003] 青风藤中主要成分是生物碱，目前已发现的成分有青藤碱(Sinomenine)，异青藤碱(Igoginomenine)，华青藤碱(SinoAcutine)，短青藤次碱(Acutumidine)，尖青藤碱(Sinaetine)及双青藤碱(Diginomenine)，乙基青藤碱(ethylsinomenine)、四氢表小檗碱(sinactine)、四氢表小檗碱、蝙蝠葛波酚碱、蝙蝠葛宁、四氢巴马亭等。
[0004] 青藤碱(Sinomenine)是青风藤中提取的一种生物碱单体，是青风藤发挥镇痛、抗炎作用的主要有效成分，最早由Ishiwari等从日本青风藤中分离得到。20世纪60年代我国学者朱任宏从国产青风藤中也发现青藤碱。临床上常用其盐酸盐制剂如正清风痛宁片、正清风痛宁缓释片、正清风痛宁注射液，用于治疗风湿性、类风湿性关节炎，治疗强直性脊椎炎、心律失常等，疗效显著。
[0005] 目前工业生产盐酸青藤碱多采用碱化水提取工艺，其为在青风藤中加入水及一定量熟石灰，碱化一段时间，然后加入一定量工业苯，回流提取，最后酸化、静置、析晶。青风藤稀硫酸渗漉液，以石灰水调PH值9，苯在50℃进行逆流萃取，苯提取液以1％盐酸进行反相逆流萃取，活性炭脱色，结晶。在热水中进行重结晶，得纯品。(陈玉昆《中药提取工艺学》，1992)，现行的方法均使用毒性很大的苯或氯仿作为提取溶剂，苯为一级有毒溶剂，制癌率很高，在制药行业已被禁用，而且在溶剂的回收处理方面需通过很繁锁的工艺才能达到环保要求，而氯仿为二级有毒试剂，因而在中药提取中应尽量避免使用苯及氯仿溶剂。
发明内容
[0006] 本发明目的在于提供一种盐酸青藤碱大输液和冻干粉针剂的制备方法。
[0007] 本发明目的是通过如下技术方案实现的，本发明盐酸青藤碱大输液的制备方法包括氯化钠大输液的制备和葡萄糖大输液的制备，具体方法包括如下步骤：
[0008] 方法一：氯化钠大输液的制备
[0009] 步骤一、盐酸青藤碱的制备方法
[0010] A、提取：青风藤粗粉100～1000重量份，用60～1000体积份的0.1～1mol/L HCl润湿0.5～8小时，装渗漉筒，再加入0.1～1mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍6～48小时后，按2～5ml/min的速度开始渗漉，6～24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0011] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶8-12，上样速度为2-5倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用8-15％氨溶液浸泡树脂或152型树脂用3-10％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用pH8-11的氨水-乙醇溶液洗脱或152型大孔吸附树脂用3-10％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为2-5BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或氨水中和至pH＝6-8，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0012] C、精制：取盐酸青藤碱粗品5～10重量份，用30～120体积份的10～95％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3-6％重量倍的活性炭，保温回流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用75-95％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱；
[0013] 步骤二、氯化钠大输液的制备
[0014] 称取盐酸青藤碱0.3-2重量份、氯化钠6-15重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量60％-80％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.05％-0.5％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射剂标准，灭菌，即得。
[0015] 方法二：葡萄糖大输液的制备
[0016] 步骤一、同方法一中步骤一；
[0017] 步骤二、葡萄糖大输液的制备
[0018] 称取盐酸青藤碱0.3-2重量份、葡萄糖40-60重量份、注射用水适量，取上述量的葡萄糖，加配液量60％-80％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.05％-0.5％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份；搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得。
[0019] 本发明盐酸青藤碱冻干粉针剂的制备方法包括如下步骤：
[0020] 步骤一、同上述方法一中步骤一；
[0021] 步骤二、
[0022] 取盐酸青藤碱50-150重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.05-0.5％的活性炭，35～45℃保温5-20分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35-0.55μm和0.1-0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得。
[0023] 本发明盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂制备方法中的参数优选如下：
[0024] B步骤中，强阳离子交换树脂优选001*2.5、001*4型树脂，大孔吸附树脂优选152型；树脂径高比优选1∶10；上样速度优选3倍柱体积/小时；浸泡树脂优选10％氨溶液或5％盐酸溶液；以pH8-11的氨水-乙醇溶液作为阳离子交换树脂的洗脱溶液，洗脱液用盐酸中和至pH＝6～8；5％HCl溶液作为152型大孔吸附树脂的洗脱溶液；
[0025] C步骤，优选加入4％重量倍的活性炭；加热回流时优选40％，55％，60％，75％，80％乙醇。
[0026] 本发明盐酸青藤碱大输液制备方法中方法一中的步骤二可以优选为：
[0027] 称取盐酸青藤碱0.5重量份、氯化钠6重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射剂标准，灭菌，即得；
[0028] 或称取盐酸青藤碱1重量份、氯化钠10重量份、注射用水适量，取上述量的氯化钠，加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.2％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.15μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家注射剂标准，灭菌，即得。
[0029] 本发明盐酸青藤碱大输液制备方法中方法二中的步骤二可以优选为：
[0030] 称取盐酸青藤碱0.5重量份、葡萄糖45重量份、注射用水适量，取处方量的葡萄糖，加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得；
[0031] 或称取盐酸青藤碱1重量份、葡萄糖55重量份、注射用水适量，取处方量的葡萄糖，加配液量60％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.2％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.15μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，灭菌，即得。
[0032] 本发明盐酸青藤碱冻干粉针剂制备方法中方法二中的步骤二可以优选为：
[0033] 取盐酸青藤碱100重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.1％的活性炭，35～45℃保温10分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得；
[0034] 或者取盐酸青藤碱140重量份及适量的注射用水，加入处方量盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.2％的活性炭，35～45℃保温6分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000体积份，搅匀，检验，合格后分别用0.35μm和0.3μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至符合国家标准，分装，冷冻干燥，即得。
[0035] 上述盐酸青藤碱大输液及冻干粉针剂的制备方法中的重量份与体积份的关系为g/ml的关系。
[0036] 本发明方法采用通过阳离子交换树脂或大孔吸附树脂吸附取代传统的毒性较大的苯提取及氯仿提取(萃取)工艺，提取收率高，操作更简便，克服了有机溶剂用量大、毒性大对操作人员健康及环境造成的危害和污染，减少了有机溶剂的处理过程，更有利于环境保护，减少了工厂的环保设施的投入，有利于环境友好生产。本方法提取分离的盐酸青藤碱，作为医药制剂的原料，纯度更高，无溶剂残留，减少了对人体的潜在危害。
[0037] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0038] 实验例一：青风藤非有机溶剂的提取工艺研究
[0039] 1、实验方法
[0040] 1.1材料与仪器
[0041] 青风藤药材粗粉、大孔吸附树脂、盐酸青藤碱对照品、盐酸、氨水、氢氧化钠、乙醇、氯化钠等。
[0042] 玻璃柱(直径3cm，高30～40cm)、HPLC高效液相检测仪、旋转式蒸发仪。
[0043] 1.2方法与结果
[0044] 1.2.1判定方法
[0045] (1)生物碱指示剂选择
[0046] 按中国药典2010年版一部方法配制碘化铋钾稀溶液、碱性铁氰化钾、硅钨酸试液三种生物碱指示剂，分别取1～2滴滴于检查液中，进行沉淀、显色反应，经前期实验对比，表明硅钨酸试液指示最为直观、灵敏。本次实验设计采用硅钨酸试液作为终点判断的指示剂。
[0047] (2)薄层色谱：固定相：硅胶薄层板；展开剂：甲醇∶水∶氨水＝8∶1∶1；显色剂：稀碘化铋钾溶液。
[0048] (3)高效液相色谱法
[0049] 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.78％磷酸二氢钠溶液(12∶88)为流动相；检测波长为265nm。柱温30℃，流速1.0ml/min。
[0050] 1.2.2.树脂的选型
[0051] (1)树脂型号
[0052] D-101型，非极性大孔吸附树脂，生产厂家：天津海光化工；
[0053] LSD001型，极性大孔吸附树脂，生产厂家：西安蓝晓科技有限公司；
[0054] D-312型，大孔吸附树脂，生产厂家：山东鲁抗立科药物化学有限公司；
[0055] DM21型，大孔吸附树脂，生产厂家：山东鲁抗立科药物化学有限公司；
[0056] HPD722型，弱极性大孔吸附树脂，生产厂家：沧州宝恩吸附材料科技有限公司。
[0057] 152型，阳离子交换树脂，生产厂家：山东鲁抗立科药物化学有限公司；
[0058] 732型，钠型阳离子交换树脂，生产厂家：沧州宝恩吸附材料科技有限公司。
[0059] 001×2.5型，H型阳离子交换树脂，生产厂家：山东鲁抗立科药物化学有限公司；
[0060] 001×4型，H型阳离子交换树脂，生产厂家：山东鲁抗立科药物化学有限公司；
[0061] (2)方法
[0062] 选取上述不同厂家、不同型号的大孔树脂或离子交换树脂10g～20g，预处理后上30mm*300mm玻璃交换柱，取1000g药材的渗漉液(将pH调至3)，分成7等份，按一定的速度流过树脂，一般上样速度为2～3BV/h，特殊的按树脂参考速度，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀停止上样，用水洗至洗脱液基本无颜色为止。对比不同树脂的上样量及吸附能力，选定好最佳厂家的树脂型号，选取2～3种树脂作为本产品的吸附材料。
[0063] 表1不同型号树脂上柱的吸附情况
[0064]
[0065] 因以上实验仅从指示剂、薄层及观察现象考察吸附情况，无法准确判断树脂的吸附情况，后期改用液相色谱对相关树脂进行考察。
[0066] 1、盐酸青藤碱原料吸附：配制2％的盐酸青藤碱溶液(2g→100ml)，分别取D101、001*4、DM21三种树脂各2g于锥形瓶中，加入10ml上述配制溶液，在反复式摇摆振荡器上震动12小时，液相检测，结果见下表
[0067] 表2：不同树脂静态吸附盐酸青藤碱原料液的吸附HPLC结果
[0068]
[0069] 2、提取原液吸附，分别取001*2.5、001*4、152型、AB-8型、HPD600型、732型、DM21型、D101型经处理好的树脂2g置100ml锥形瓶中，加入提取的渗漉原液25ml，液相检测，结果见下表：
[0070] 表3：不同树脂静态吸附青风藤提取的渗漉液的吸附HPLC结果
[0071]
[0072] 以上结果表明，上述几种树脂吸附能力比较：001*2.5＞001*4＞152型。AB-8、HPD600型、DM21型、D101型、732型等因在渗漉液中吸附能力太弱。
[0073] 1.2.3解吸或洗脱
[0074] 根据以上实验结果，选定001*2.5、001*4、152三种树脂。每一种树脂按以下设计进行实验。
[0075] (1)阳离子吸附树脂(001*4、001*2.5)
[0076] ①5％氨水液。
[0077] ②10％氨水液。
[0078] ③95％乙醇溶液。
[0079] ④用氨水调PH至8-11的乙醇溶液。
[0080] ⑤盐、稀酸。(NH4Cl的5％HCl溶液)
[0081] ⑥盐、稀醇。(20％NaCl+乙醇溶液)
[0082] 取酸水渗漉液500ml，以2-3BV/h的流速通过树脂柱，用纯化水洗至中性，再分别以不同洗脱液以2-3BV/h的速度洗脱，至无生物碱反应为止。测定各份样品中的盐酸青藤碱含量，计算洗脱率。对比洗脱效果。
[0083] 表4不同洗脱液对盐酸青藤碱洗脱效果的影响
[0084]
[0085] 以上实验结果表明：阳离子树脂吸附后采用pH8-11的氨水-乙醇溶液，能取得较好的洗脱效果。
[0086] (2)大孔吸附树脂(152型)
[0087] ①50％乙醇溶液。
[0088] ②75％乙醇溶液。
[0089] ③95％乙醇溶液。
[0090] ④5％HCl溶液。
[0091] 取酸水渗漉液500ml，以2～3BV/h的流速通过树脂柱，用纯化水洗至中性，再分别以不同洗脱液以2～3BV/h的速度洗脱，至无生物碱反应为止。测定各份样品中的盐酸青藤碱含量，计算洗脱率。对比洗脱效果。
[0092] 表5 152型采用不同洗脱液对盐酸青藤碱洗脱效果的影响
[0093]
[0094] 实验结果表明：采用不同洗脱液对152型树脂的吸附液进行解吸，仅HCl有解吸效果，故本树脂采用5％HCl进行洗脱。
[0095] 1.2.3静态吸附确定解吸条件
[0096] 通过上述实验选定好洗脱液，采用静态吸附的方式，在吸附12小时后，将树脂用纯化水漂洗至水中无生物碱时，加入12ml解吸液，震荡12小时，液相检测。结果如下：
[0097] 表6静态吸附青风藤提取的渗漉液吸附与解吸HPLC结果
[0098]
[0099] 以上结果表明，采用确定的解吸液进行解吸，均能解吸出树脂吸附的盐酸青藤碱。
[0100] 1.3结论
[0101] 采用大孔吸附树脂及阳离子交换树脂，对盐酸青藤碱有较大吸附作用，通过实验，选定001*2.5、001*4二种阳离子交换树脂、152型大孔吸附树脂作为本盐酸青藤碱纯化提取的最佳树脂，采用氨水-乙醇溶液(pH8～11)作为阳离子交换树脂的洗脱溶液，5％HCl作为152型大孔吸附树脂的洗脱溶液。
[0102] 下述实施例均能实现上述实验例的效果。
[0103] 实施例一：一种盐酸青藤碱大输液的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0104] A、提取：青风藤粗粉500kg，用500L的0.5mol/L HCl润湿3小时，装渗漉筒，再加入0.5mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍12小时后，按3ml/min的速度开始渗漉，12小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0105] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为3倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或152型树脂用5％盐酸溶液浸泡树脂12h，再用10％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或152型树脂用5％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为3BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或用氨水中和至pH＝6～8，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0106] C、精制：取盐酸青藤碱粗品8kg，用100L的75％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入5％重量体积倍的活性炭，保温回流20分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用80％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0107] 称取盐酸青藤碱1g、氯化钠9g、注射用水适量，制成1000ml；将氯化钠加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至全量，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物，按100ml/瓶分装入100ml干净输液瓶中，封口，压盖，灭菌，即得；规格为100ml∶100mg。
[0108] 实施例二：一种盐酸青藤碱大输液的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0109] A、提取：青风藤粗粉800kg，用1000L的0.9mol/L HCl润湿5小时，装渗漉筒，再加入0.9mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍20小时后，按5ml/min的速度开始渗漉，24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0110] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂001*4型或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为5倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或152型树脂用8％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用12％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或152型树脂8％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为5BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸中和或用氨水中和至pH＝7，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0111] C、精制：取盐酸青藤碱粗品10kg，用120L的85％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入5％重量体积倍的活性炭，保温回流30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用75％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0112] 称取盐酸青藤碱0.4g、氯化钠12g、注射用水适量，制成1000ml；将氯化钠加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至全量，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物，按250ml/瓶分装入250ml干净输液瓶中，封口，压盖，灭菌，即得；规格为250ml∶100mg，。
[0113] 实施例三：一种盐酸青藤碱冻干粉针的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0114] A、提取：青风藤粗粉800kg，用900L的0.7mol/L HCl润湿6小时，装渗漉筒，再加入0.8mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍24小时后，按3ml/min的速度开始渗漉，24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0115] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为3倍柱体积/h，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或
152型树脂用7％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用12％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或
152型树脂5％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为4BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或用氨水中和至pH＝7，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0116] C、精制：取盐酸青藤碱粗品6kg，用80L的55％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3％重量体积倍的活性炭，保温回流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用80％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0117] 取盐酸青藤碱100g及适量的注射用水，加入盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.1％的活性炭，35～45℃保温10分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000ml，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至国家标准，按100mg/支分装入安瓿或西林瓶中，冷冻干燥，即得。
[0118] 实施例四：
[0119] A、提取：青风藤粗粉800kg，用900L的0.7mol/L HCl润湿6小时，装渗漉筒，再加入0.8mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍24小时后，按3ml/min的速度开始渗漉，24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0120] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为3倍柱体积/h，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或
152型树脂用7％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用12％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或
152型树脂5％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为4BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或用氨水中和至pH＝7，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0121] C、精制：取盐酸青藤碱粗品6kg，用80L的55％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3％重量体积倍的活性炭，保温回流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用80％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0122] 称取盐酸青藤碱1g、葡萄糖50g、注射用水适量，制成1000ml；
[0123] 先加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至全量，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物，按100ml/瓶分装入100ml干净输液瓶中，封口，压盖，灭菌，即得；规格：100ml∶100mg。
[0124] 实施例五：
[0125] A、提取：青风藤粗粉800kg，用1000L的0.9mol/L HCl润湿5小时，装渗漉筒，再加入0.9mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍20小时后，按5ml/min的速度开始渗漉，24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0126] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂001*4型或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为5倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或152型树脂用8％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用12％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或152型树脂8％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为5BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸中和或用氨水中和至pH＝7，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0127] C、精制：取盐酸青藤碱粗品10kg，用120L的85％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入5％重量体积倍的活性炭，保温回流30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用75％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0128] 称取盐酸青藤碱0.4g、葡萄糖60g、注射用水适量，制成1000ml；
[0129] 先加配液量70％的注射用水搅拌溶解使成浓溶液，另称取处方量的盐酸青藤碱加入上述浓溶液中，搅拌使溶解，加入0.1％的针用活性炭，搅拌，35～45℃保温10分钟，滤过除炭；补充注射用水至全量，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物，按250ml/瓶分装入250ml干净输液瓶中，封口，压盖，灭菌，即得；规格：250ml∶100mg。
[0130] 实施例六：
[0131] A、提取：青风藤粗粉500kg，用500L的0.5mol/L HCl润湿3小时，装渗漉筒，再加入0.5mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍12小时后，按3ml/min的速度开始渗漉，12小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0132] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为3倍柱体积/小时，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或152型树脂用5％盐酸溶液浸泡树脂12h，再用10％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或152型树脂用5％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为3BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或用氨水中和至pH＝6～8，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0133] C、精制：取盐酸青藤碱粗品8kg，用100L的75％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入5％重量体积倍的活性炭，保温回流20分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用80％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0134] 取盐酸青藤碱100g及适量的注射用水，加入盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.1％的活性炭，35～45℃保温10分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000ml，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至国家标准，按100mg/支分装入安瓿或西林瓶中，冷冻干燥，即得。
[0135] 实施例七：
[0136] A、提取：青风藤粗粉800kg，用900L的0.7mol/L HCl润湿6小时，装渗漉筒，再加入0.8mol/L HCl使液面盖住药粉2cm，浸渍24小时后，按3ml/min的速度开始渗漉，24小时后停止渗漉，得渗漉液，备用；
[0137] B、上柱洗脱：将渗漉液上已处理好的阳离子交换树脂或152型树脂，径高比1∶10，上样速度为3倍柱体积/h，至流出液用硅钨酸试液检查有沉淀，而薄层色谱检测无生物碱斑点时停止上样，用纯化水洗脱至洗脱液无颜色时停止，用10％氨溶液浸泡树脂或
152型树脂用7％盐酸溶液浸泡树脂12小时，再用12％氨水调PH至9的乙醇溶液洗脱或
152型树脂5％盐酸溶液洗脱，洗脱速度为4BV/h，洗脱液用硅钨酸试液检查有沉淀时接收，接收洗脱液用硅钨酸试液检查无沉淀时停止，合并洗脱液，用盐酸或用氨水中和至pH＝7，除盐，浓缩干燥，得盐酸青藤碱粗品。
[0138] C、精制：取盐酸青藤碱粗品6kg，用80L的55％乙醇或纯化水加热回流至完全溶解，加入3％重量体积倍的活性炭，保温回流10～30分钟，趁热滤过，滤液浓缩，冷却、析晶，过滤，用80％的乙醇清洗滤饼至滤液无色，得盐酸青藤碱。
[0139] 取盐酸青藤碱100g及适量的注射用水，加入盐酸青藤碱搅拌使溶解；加入0.1％的活性炭，35～45℃保温10分钟，过滤除炭；补充注射用水至1000ml，搅匀，检验，合格后分别用0.45μm和0.22μm的滤芯滤过，取样，检验pH值、含量、细菌内毒素、可见异物至国家标准，按100mg/支分装入安瓿或西林瓶中，冷冻干燥，即得。
[0140] 附：
[0141] 1、硅钨酸试液检查方法
