吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液及其制备方法

摘要

本发明涉及吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液及其制备方法。具体来讲，所述注射液含有吉西他滨或其盐、注射用油、表面活性剂和注射用水，其中吉西他滨或其盐、注射用油、表面活性剂的重量比为1∶10-100∶10-100，乳剂中乳滴的平均粒径为1-100nm。该注射液包封率、稳定性更好，副作用更低。

权利要求

1.一种吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液，其特征在于所述注射液含有盐酸吉西他滨、注射用油、表面活性剂和注射用水，所述注射液为水包油型，其中盐酸吉西他滨、注射用油、表面活性剂的重量比为1:20～50:10～20，乳剂中乳滴的平均粒径为1-50nm，所述注射用油选自大豆油、花生油、芝麻油或中链脂肪酸甘油三脂；所述表面活性剂选自豆磷脂或吐温

80，所述纳米乳剂注射液通过如下步骤制得：

在惰性气体保护下，将注射用油搅拌均匀成油相；

将表面活性剂加入适量的注射用水，搅拌均匀成水相；

高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入盐酸吉西他滨；

调节pH值为4～9，继续加水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化使乳滴平均粒径达到要求的纳米化。

2.根据权利要求1所述的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液，其特征在于，所述乳剂中乳滴的平均粒径为1～20nm。

3.根据权利要求1-2任意一项所述的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液，其特征在于，还包含抗氧化剂或稳定剂中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液，其特征在于，所述抗氧化剂选自水溶性抗氧剂或油溶性抗氧剂，其中水溶性抗氧剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸钠、L-半胱氨酸或其混合物；油溶性抗氧剂选自BHA、BHT、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯或其混合物，其中所述的抗氧剂占注射液的0%～1w/v%。

5.根据权利要求3所述的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液，其特征在于，所述稳定剂选自油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、右旋糖酐-70、去氧胆酸、去氧胆酸钠或其混合物，其中所述稳定剂占注射液的0%～1.5w/v%。

6.一种制备权利要求4所述的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液的方法，包括如下步骤：在惰性气体保护下，将注射用油、油溶性抗氧剂搅拌均匀成油相；

将水溶性抗氧剂稳定剂和表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

向初乳中加入盐酸吉西他滨；

调节pH值4～9继续加水定容至全量，充分搅拌或经高压匀质机匀化至乳滴平均粒径达到要求的纳米化。

说明书

吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种吉西他滨或其盐新型制剂及其制备方法，具体来讲是涉及吉西他滨或其盐的纳米乳剂注射液及其制备方法。

背景技术

[0002] 吉西他滨是一种破坏细胞复制的二氟核苷类抗代谢物抗癌药，是去氧胞苷的水溶性类似物，对核糖核苷酸还原酶是一种抑制性的酶作用物的替代物，这种酶在DNA合成和修复过程中，对所需要的脱氧核苷酸的生成是至关重要的。具有抗瘤谱广、作用机制独特、与其他化疗药物无交叉耐药且毒性反应无叠加等特点。

[0003] 吉西他滨作为一种前药在细胞内是脱氧胸苷激酶磷酸化的良好底物，在酶的作用下转化成下列代谢物：吉西他滨一磷酸盐(dFdCMP)、吉西他滨二磷酸盐(dFdCDP)和吉西他滨三磷酸盐(dFdCTP)其中dFdCDP和dFdCTP为活性产物。dFdCDP抑制核糖核苷酸还原酶，从而减少了DNA合成的修复所需的脱氧核苷酸的量(尤其是dCTP)，低水平的dCTP逆转了脱氧苷激酶正常的负反馈抑制，导致dFdCTP更多的积聚。同时dFdCDP抑制了dCTP诱导的脱氧胞氨酶对dFdCMP的脱氨作用，且dFdCTP直接抑制脱氧胞苷脱酶，从而使更多的dFdCMP转化成活性代谢物dFdCMP的脱氨作用，且dFdCTP直接抑制脱氧胞苷脱氨酶，从而使更多的dFdCMP转化成活性代谢物dFdCDP，dFd-CTP而dFdCTP则与dCTP竞争结合进入DNA链，插入至DNA链中脱氧胞苷的位点，并允许鸟苷与其配对，吉西他滨分子就被此鸟苷“掩蔽”使其免受核糖核酸外切酶的移除修复，然后DNA链合成停止，进而DNA断裂、细胞死亡。

[0004] 现已证实，吉西他滨对多种实体瘤治疗效果显著，尤其是对非小细胞肺癌、胰腺癌和乳腺癌，单一用药或联合其它抗癌药物都取得很高的疗效。吉西他滨在细胞内的半衰期较短(介于32～94min)，必须大剂量(推荐剂量为1000mg/m2)、持续静脉给药来维持其有效的药用浓度和对癌细胞的毒性，但这种毒性同时对正常组织也起作用，这种剂量限制性毒性影响临床疗效。此外，吉西他滨缺乏组织特异性，全身毒副作用大；体内代谢迅速，血浆半衰期短；肿瘤耐药性等缺点。

[0005] 因此，寻找一种能够使药物靶向性更强，毒副作用更小的给药方法是当前研究的重点与难点。含有有效药物的载药纳米粒子是一种新型的缓释系统，可改变常规的给药方式，有极广阔的前景，是近年来医药学领域的研究热点，纳米药在进入体内后，药物在靶区内缓慢释放，以减轻药物的不良反应。

[0006] 黄乐松，王春霞，陈志良等“吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒在小鼠脑内的靶向分布”(中国医院药学杂志，2008，28(16)：1332)，及黄乐松，王春霞，陈志良等“吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对小鼠脑移植胶质瘤的影响研究”(中国药房，2009，20(19)：1457)中介绍了一种吉西他滨的纳米粒及其对动物的影响。黄君勤，孔俐文“盐酸吉西他滨脂质体的制备及含量和包封率的测定学性质”(中国抗生素杂志，2010，35(1)：30)介绍了一种吉西他滨脂质体的制备和含量测定方法。CN101444485B公开了一种吉西他滨脂质体，该脂质体包括吉西他滨、磷脂、胆固醇，但该脂质体的包封率及分散性均表现不佳，对药物的稳定性及生物利用度均有不利影响。CN101926779A公开了一种吉西他滨固体脂质纳米粒及其制备方法，该制剂仍存在药物包封率不高，且稳定性不佳的问题，储藏3个月左右药品即发生部分降解。虽然部分药物的脂质体或纳米药的研究已经获得较大进展甚至在临床中得到了应用。但由于药物理化性质及药理作用的差别，吉西他滨领域应用脂质体或纳米药的技术仍未获得突破。

[0007] 从目前研究的成果中来看，现有方法制备的吉西他滨脂质体或纳米微球存在稳定性差、水溶液中易发生聚集、整体溶蚀或表面降解等问题，无法在临床中得到实际应用。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种可以增强药物靶向性、提高药物的包封率和稳定性、减少吉西他滨或其盐在临床应用中的副作用，且适于临床广泛应用的吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液。

[0009] 本发明的目的在于提供一种吉西他滨或其盐的纳米乳剂注射液，所述注射液含有吉西他滨或其盐、注射用油、表面活性剂和注射用水，其中吉西他滨或其盐、注射用油、表面活性剂的重量比为1∶10～100∶10～100，，乳剂中乳滴的平均粒径为1～100nm。

[0010] 所述纳米乳剂注射液为水包油型，其中吉西他滨或其盐、注射用油、表面活性剂的重量比为1∶20～50∶10～20。

[0011] 所述吉西他滨的盐为盐酸盐。

[0012] 所述注射用油选自矿物油、植物油、动物油或合成油中的一种或几种；所述植物油选自大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、红花油、蓖麻油、棕榈油、棉籽油、椰子油、中链脂肪酸甘油三脂中的一种或多种，优选大豆油、花生油、芝麻油或中链脂肪酸甘油三脂中的一种或多种；所述动物油选自鱼油、鲸蜡油或其混合物。

[0013] 所述表面活性剂选自磷脂、非离子型表面活性剂或其混合物。

[0014] 所述磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物，优选卵磷脂或豆磷脂；所述非离子表面活性剂选自聚氧乙烯类和聚乙二醇类非离子表面活性剂，所述聚氧乙烯类非离子表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆188或其混合物，优选吐温80或泊洛沙姆188，所述聚乙二醇类非离子表面活性剂选自聚乙二醇化聚十六烷氰基丙烯酸酯、聚乙二醇硬脂酸、聚乙二醇维生素E琥珀酸酯或其混合物。

[0015] 所述乳剂中乳滴的平均粒径为1～70nm，优选1～50nm，更优选1～20nm。

[0016] 所述的吉西他滨或其盐的注射液还包含抗氧化剂或稳定剂中的一种或多种。

[0017] 所述抗氧化剂选自水溶性抗氧剂或油溶性抗氧剂，其中水溶性抗氧剂选自亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、抗坏血酸钠、L-半胱氨酸或其混合物；油溶性抗氧剂选自BHA(叔丁基对羟基茴香醚)、BHT(2，6-二叔丁基化羟基甲苯)、维生素E、抗坏血酸棕榈酸酯或其混合物，优选抗坏血酸棕榈酸酯，其中所述的抗氧剂占注射液的0％～1w/v％。

[0018] 所述稳定剂选自油酸、油酸钠、胆酸、胆酸钠、右旋糖酐-70、去氧胆酸、去氧胆酸钠或其混合物，其中所述稳定剂占注射液的0％～1.5w/v％。

[0019] 本发明的目的还在于提供一种制备上述吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液的方法，包括如下步骤：

[0020] 在惰性气体保护下，将注射用油搅拌均匀成油相；

[0021] 将表面活性剂加入适量的注射用水，搅拌均匀成水相；

[0022] 高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

[0023] 向初乳中加入吉西他滨或其盐；

[0024] 调节pH值为4～9，继续加水定容至全量，充分搅拌或经高压均质机匀化使乳滴平均粒径达到要求的纳米化。

[0025] 本发明还提供另外一种制备上述吉西他滨或其盐纳米乳剂注射液的方法，包括如下步骤：

[0026] 在惰性气体保护下，将注射用油、油溶性抗氧剂搅拌均匀成油相；

[0027] 将水溶性抗氧剂稳定剂和表面活性剂加入适量的注射用水中，搅拌均匀成水相；

[0028] 在高速搅拌下，将油相与水相混合均匀，并经高压均质机匀化制成初乳；

[0029] 向初乳中加入吉西他滨或其盐；

[0030] 调节pH值4～9.继续加水定容至全量，充分搅拌或经高压匀质机匀化至乳滴平均粒径达到要求的纳米化。

[0031] 根据发明人的研究表明，pH值在4～7时尤佳。

[0032] 上述制剂开辟了吉西他滨或其盐给药的新途径，通过组合物中各组分含量配比的筛选，以及乳滴粒径纳米级的处理大大提高了药物的包封率和稳定性，降低了药物在使用中的毒副作用，减轻了患者用药痛苦。

具体实施方式

[0033] 为了更具体地描述该发明，下面将结合具体实施例来进一步说明该发明，但本发明的内容并不局限于具体实施例。

[0034] 实施例一

[0035]

[0036] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油200g搅匀成油相，另将大豆磷脂200g加入500ml注射用水中，搅匀成水相，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值为5.0，加水定容至1000ml，转入高压匀质机中充分搅拌，至平均粒径在40nm以下；灌装，充氮气封装。

[0037] 实施例二

[0038]

[0039] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用花生油200g搅匀成油相，另将大豆磷脂200g加入500ml注射用水中，搅匀成水相，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值为5.0，加水定容至1000ml，转入高压匀质机中充分搅拌，至平均粒径在40nm以下；灌装，充氮气封装。

[0040] 实施例三

[0041]

[0042] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用芝麻油200g搅匀成油相，另将大豆磷脂200g加入500ml注射用水中，搅匀成水相，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值为5.0，加水定容至1000ml，转入高压匀质机中充分搅拌，至平均粒径在40nm以下；灌装，充氮气封装。

[0043] 实施例四

[0044]

[0045] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油200g搅匀成油相，另将大豆磷脂200g加入500ml注射用水中，搅匀成水相，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值为5.0，加水定容至1000ml，转入高压匀质机中充分搅拌，至平均粒径在20nm以下；灌装，充氮气封装。

[0046] 实施例五

[0047]

[0048] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油225g搅拌成油相，预热至60℃，将大豆磷脂125g、亚硫酸钠4g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到6.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在20nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0049] 实施例六

[0050]

[0051]

[0052] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油225g和油酸6g混合搅拌成油相，预热至60℃，将大豆磷脂125g、亚硫酸钠4g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到6.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在15nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0053] 实施例七

[0054]

[0055] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油300g和油酸5g混合搅拌成油相，预热至60℃，将大豆磷脂200g、亚硫酸钠5g加入到650ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在15nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0056] 实施例八

[0057]

[0058]

[0059] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油450g和油酸12g混合搅拌成油相，预热至60℃，将大豆磷脂150g、亚硫酸钠8g加入到650ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在15nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0060] 实施例九

[0061]

[0062] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油300g和油酸10g混合搅拌成油相，预热至60℃，将吐温80135g、抗坏血酸钠5g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在20nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0063] 实施例十

[0064]

[0065] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油300g和油酸10g混合搅拌成油相，预热至60℃，将吐温80135g、抗坏血酸钠5g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在50nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0066] 实施例十一

[0067]

[0068] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油300g混合搅拌成油相，预热至60℃，将吐温80135g、抗坏血酸钠5g和油酸钠10g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.7，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在50nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0069] 实施例十二

[0070]

[0071] 制备方法：在惰性气体保护下，将中链脂肪酸甘油三脂250g混合搅拌成油相，预热至70℃，将吐温80150g、抗坏血酸钠7g和油酸钠13g加入到650ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至70℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到6.0，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在20nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0072] 实施例十三

[0073]

[0074] 制备方法：在惰性气体保护下，将注射用大豆油300g和抗坏血酸棕榈酸酯5g混合搅拌成油相，预热至60℃，将吐温80135g和油酸钠10g加入到600ml注射用水中，搅拌均匀成水相，预热至60℃，在高速搅拌下将油相与水相混合均匀，并经高压匀质机匀化制成初乳，加入盐酸吉西他滨10g，调节pH值到5.7，加水定容至1000ml，将其转移到高压匀质机中继续乳化至平均粒径在20nm左右；灌装，充氮气熔封。

[0075] 实验例一包封率测定

[0076] 药物含量测定方法：色谱柱：DiamonsilTM C18(4.6mm*250mm，5μm)；流动相：以0.05mol/L醋酸铵缓冲液(取醋酸铵3.85g，加水800ml溶解，用冰醋酸调pH至5.7，加水至
1000ml)-甲醇(90∶10)；检测波长：268nm；流速：1.0ml/min；柱温40℃，进样量：20μL。

[0077] 包封率测定方法：取样品1支，精密吸取2.0ml置于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，用8010型超滤器(MILLIPORE公司)超滤，弃掉初滤液，取续滤液为供试品溶液。分别吸取供试品溶液、对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算制剂水相中药物含量，记为W；另按含量测定项下方法计算本品的药物总含量，记为W0。按下式计算样品的包封率。

[0078] 包封率En＝(W0-W)/W0*100％

[0079] 按上述方法测定三批样品的包封率后取平均值为E，测定结果如表1所示：

[0080] 表1盐酸吉西他滨注射液包封率测定

[0081]实施例名称 E(％)
实施例一 95.8
实施例二 93.5
实施例三 94.6
实施例四 96.9
实施例五 97.7
实施例六 99.3
实施例七 99.1
实施例八 98.9
实施例九 99.5
实施例十 98.7
实施例十一 99.1
实施例十二 99.6
实施例十三 99.8

[0082] 结论：从上述结果可以看出该发明的注射液药物包封率效果很好，符合国家药品