多功能聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物及在药物传递中的应用

摘要

本发明涉及一种多功能聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物及在药物传递中应用。所述的两亲性嵌段共聚物以聚乙二醇为亲水端，在赖氨酸的桥连下，与两分子疏水性的维生素E琥珀酸酯结合，得到了AB2型双臂两亲性嵌段共聚物。该聚合物具有潜在抗肿瘤活性和P-gp抑制作用，能协同及有效地克服肿瘤多药耐药而增加化疗疗效。同时嵌段共聚物在水性介质中能自组装形成胶束，可作为难溶性药物，蛋白质和基因药物的储库，该胶束安全，稳定性好，包封率高，可用于静脉注射和口服给药，有较大的市场应用前景。

权利要求

1.一种多功能聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，其特征在于：该聚合物载体由聚乙二醇为亲水端，以赖氨酸为桥连，链接疏水性的维生素E琥珀酸酯，结构式如下所示：。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，其特征在于，所制备的衍生物为AB2型双臂嵌段共聚物，聚乙二醇分子量范围在2000-5000。

3.一种如权利要求1所述聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物的制备方法，其特征在于，采用如下步骤制备： （a）维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，在1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑催化作用下，与苄氧基赖氨酸于30℃ N2保护下反应，得到苄氧基赖氨酸二维生素E琥珀酸酯Ⅰ；

（b） 取步骤（a）中的产物，在钯碳和氢气催化下，得到黄色固体赖氨酸二维生素E琥珀酸酯Ⅱ；

（c） 步骤（b）产物在1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐催化下，与不同链长聚乙二醇反应，然后乙醚重结晶，干燥，得到淡黄色蜡状的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物Ⅲ。

4.权利要求1或2所述的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物在制备抗肿瘤、抑制P-gp药物中的应用。

5.权利要求1或2所述的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物在制备长循环药物中的应用。

6.根据权利要求1或2所述的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，其特征在于，所述的衍生物通过透析法、薄膜分散法、或乳化法，与疏水性药物、蛋白质、基因类药物自组装形成载药聚合物胶束。

7.根据权利要求6所述的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，其特征在于：所述的疏水性药物为紫杉烷类、喜树碱类、蒽醌类抗肿瘤药或二氢吡啶类、非甾体抗炎药中的任一物质或其衍生物。

说明书

多功能聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物及在药物传递

中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于药物制剂新辅料和新剂型领域，涉及一种具有抗肿瘤作用、P-gp抑制和长循环功能的两亲性聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物和该载体的制备，及其作为药物载体在药物传递中的应用。

背景技术

[0002] 对于癌症的临床治疗，化学疗法是治疗癌症的主要手段。然而，由于化疗药物在应用中具有高毒性、肿瘤非专属性以及多药耐药性限制了其临床疗效和应用。因而开发新型的抗肿瘤药物给药系统越来越引起重视。两亲性的聚合物胶束在药物传递系统中尤为引起关注。两亲性嵌段共聚物在水中自组装形成核-壳结构的纳米胶束，而将难溶性药物（如紫杉烷类、蒽醌类药物）包裹于疏水内核中，从而提高了药物的溶解性和稳定性。而对于抗肿瘤药物，载药聚合物胶束还能降低药物毒性，抑制药物外排进而克服肿瘤多药耐药，并且聚合物胶束能够通过肿瘤的渗漏与滞留效应（enhanced permeation and retention, EPR）能通过被动靶向较大程度上将药物传递到肿瘤组织。因而包裹抗肿瘤药物于纳米载体中对于克服多药耐药和增加化疗疗效具有重大的作用。

[0003] 聚乙二醇（PEG）是一种低毒，生物相容性好的亲水性聚合物，经美国FDA批准的极少数能作为体内注射药用的合成聚合物之一。常作为亲水基，能形成空间立体屏障，从而能避免网状内皮系统（RES）的摄取，增加循环时间，而达到长循环作用，进而通过EPR效应而增加抗肿瘤疗效。而维生素E琥珀酸酯具有较强的疏水性，且具有抗肿瘤活性而对正常细胞没有毒性，将其作为聚合物胶束的疏水段将具有协同地抗肿瘤作用。将两者化学结合，使载体具有长循环和肿瘤抑制的功能，从而增加胶束的功能性。

[0004] 目前，为了避免内摄药物的外排，更好地克服肿瘤的多药耐药，很多多药耐药抑制剂和抗癌药物联合应用，但是受限于低效性和高毒性。因此开发一种新的功能性的嵌段共聚物，其本身既可作为胶束的聚合物载体，又具有长循环、协同抗肿瘤以及抑制多药耐药功能，降低毒性而达到联合用药目的。将此种嵌段共聚物作为载体应用于药物传递系统，将具有很大的应用前景。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种具有长循环，抗肿瘤和抑制多药耐药功能的两亲性聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物。

[0006] 本发明第二个目的在于提供上述多功能的两亲性嵌段共聚物的制备方法。

[0007] 本发明的第三个目的是提供多功能两亲性嵌段共聚物在药物制剂中的应用。

[0008] 本发明通过以下技术方案实现上述目的：

[0009] 一种两亲性的共聚物聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，由聚乙二醇（PEG）、赖氨酸和维生素E琥珀酸酯（VES）化学合成得到稳定性好、功能性强、包封率高的药物增溶载体，该聚合物载体由聚乙二醇为亲水端，以赖氨酸为桥连，链接疏水性的维生素E琥珀酸酯。

[0010] 所述的两亲性共聚物聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物的结构式通式如下：

[0011]

[0012] 所述的聚合物载体，其特征在于所用的聚乙二醇的分子量范围2000-5000，可以为单端羟基或氨基的一种或衍生物。

[0013] 一种上述聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物的制备方法，包括如下步骤： [0014] （a）维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，在1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑催化作用下，与苄氧基赖氨酸于30℃ N2保护下反应，得到苄氧基赖氨酸二维生素E琥珀酸酯，结构式如式Ⅰ）。

[0015]

[0016] （b） 取步骤（a）中的产物，在钯碳和氢气催化下，得到黄色固体赖氨酸二维生素E琥珀酸酯，结构式如式Ⅱ。

[0017]

[0018] （c）步骤（b）产物在1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐催化下，与不同链长聚乙二醇反应，然后乙醚重结晶，干燥，得到淡黄色蜡状的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物（结构式见式Ⅲ）。

[0019]

[0020] 步骤（a）中所述的 1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑复合催化剂催化维生素E琥珀酸酯与苄氧基赖氨酸酯的双酰胺化反应。

[0021] 所述的两亲性聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物具有抗肿瘤作用、P-gp抑制作用以及长循环的功能。

[0022] 所述的两亲性的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，可作为难溶性药物增溶载体，其中难溶性药物可为紫杉烷类、喜树碱类、蒽醌类抗肿瘤药或二氢吡啶类、非甾体抗炎药中的任一物质或其衍生物。

[0023] 所述的聚合物胶束可采用透析法，薄膜分散法，乳化法制备方法，其特征在于采用下述步骤：

[0024] 透析法是将两亲性的聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物及水难溶性药物溶于有机溶剂，于蒸馏水中透析，0.22微米滤膜过滤，得到自组装的载药聚合物胶束。

[0025] 乳化法是将上述的聚合物溶于水中，在搅拌下缓慢加入药物的二氯甲烷或氯仿溶液，室温搅拌过夜除去有机溶剂，离心，0.22微米滤膜过滤，即得。

[0026] 薄膜分散法是将上述的聚合物和药物同时溶解于有机溶剂（如甲醇、二氯甲烷等），旋转蒸发除有机溶剂，得到药物和载体的薄膜，加入水搅拌2-5 h，离心，0.22微米滤膜过滤，得到载药胶束。

[0027] 本发明具有以下有益效果：制备一种新型的多功能的两亲性嵌段共聚物聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物，载体制备过程温和，易操作。所制备的载药聚合物胶束，制备简便，粒径较小且均一，包封率高，临界胶束浓度低，稳定性好。可作为难溶性药物、蛋白质或基因药物的储库。体外细胞实验证明本发明的两亲性嵌段共聚物是抗癌促进剂和P-gp抑制剂，因而在其协同作用下，装载抗肿瘤药物能显著地提高化疗疗效。

附图说明

[0028] 图1为本发明实施例1的单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯1
嵌段共聚物结构的 HNMR谱图。

[0029] 图2为本发明实施例6的载药聚合物胶束的动态光散射测定胶束粒径图。

[0030] 图3为本发明实施例6的载药胶束的透视电镜图。

[0031] 图4为实施例1单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯荧光激发光强度比值I335/I333与浓度对数关系图。

[0032] 图5载阿霉素单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯胶束的体外释放曲线。

[0033] 图6为MTT法测定本发明实施例1的嵌段共聚物的对于MCF-7细胞的细胞抑制率曲线图。

[0034] 图7为流式细胞仪测定嵌段共聚物的P-gp抑制作用以及载药胶束的细胞摄取情况。

[0035] 图8为给大鼠静注实施例6制备的单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯阿霉素载药胶束与阿霉素溶液后的药时曲线

具体实施方式

[0036] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将发明限制在所述的实施例范围之中。

[0037] 实施例1单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯嵌段共聚物的制备

[0038] （a）取2.1 g维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，加入1 g的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.6 g的1-羟基苯并三唑，在0℃冰浴下磁力搅拌1 h。1.3 g苄氧基赖氨酸酯盐酸盐磺酸盐与3 mL三乙胺混合，然后加至上述活化溶液中，N2保护下30℃磁力搅拌24 h。反应完毕后，洗涤，干燥。纯化，既得苄氧基赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅰ）。

[0039]

[0040] （b）将步骤（a）产物溶于乙酸乙酯，在钯碳(Pd/C)和H2作用下，在30℃磁力搅拌6 h。过滤，收集滤液，旋蒸，即得赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅱ）。

[0041]

[0042] （c）1.2g 步骤（b）溶解于二氯甲烷中，加入0.44 g 1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.13 g 4-二甲氨基吡啶，0℃下磁力搅拌1 h活化羧基，然后加入2 g单甲氧基聚乙二醇（MW=2000），N2保护下37℃磁力搅拌36 h。过滤，乙醚重结晶，收集白色沉淀。然后于柱层析分离得到终产物单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅲ）。产物为淡黄色蜡状物。

[0043]

[0044] 采用核磁共振测定1HNMR氢谱来确定实施例1中嵌段共聚物的结构，选用的溶剂为CDCl3，结果如图1。5.7 ppm和6.2 ppm分别为两个酰胺键-NH-CO-中的H，3.0ppm以下为维生素E琥珀酸酯中的典型质子H峰，3.7 ppm左右的质子峰为PEG中的H。

[0045] 实施例2聚乙二醇5000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯嵌段共聚物的制备

[0046] （a）取2.1 g维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，加入1 g的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.6 g的1-羟基苯并三唑，在0℃冰浴下磁力搅拌1 h。1.3 g苄氧基赖氨酸酯盐酸盐磺酸盐与3 mL三乙胺混合，然后加至上述活化溶液中，N2保护下30℃磁力搅拌24 h。反应完毕后，洗涤，干燥。纯化，既得苄氧基赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅰ）。

[0047]

[0048] （b）将步骤（a）产物溶于乙酸乙酯，在钯碳和氢气作用下，在30℃磁力搅拌6 h。过滤，收集滤液，旋蒸，即得赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅱ）。

[0049]

[0050] （c）1.2g 步骤（b）溶解于二氯甲烷中，加入0.44 g 1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.13 g 4-二甲氨基吡啶，0℃下磁力搅拌1 h活化羧基，然后加入5 g单甲氧基聚乙二醇（MW=5000），N2保护下37℃磁力搅拌36 h。过滤，乙醚重结晶，收集白色沉淀。然后于柱层析分离得到终产物单甲氧基聚乙二醇5000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅲ）。产物为淡黄色蜡状物。

[0051]

[0052] 实施例1和实施例2中所选用的聚乙二醇为单甲基聚乙二醇（MW=2000、5000），但是并不限于此，本发明的聚乙二醇亦可以为mPEG-NH2，NH2-PEG-NH-Boc，MAL-PEG-NH2及修饰化聚乙二醇羟基，但是并不局限于所列的物质。聚乙二醇的分子量可以为2000-5000范围内。

[0053] 实施例3单甲氧基聚乙二醇酰胺化-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯嵌段共聚物的制备

[0054] （a）取2.1 g维生素E琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，加入1 g的1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）和0.6 g的1-羟基苯并三唑（HOBT），在0℃冰浴下磁力搅拌1 h。1.3 g苄氧基赖氨酸酯盐酸盐磺酸盐与3 mL三乙胺混合，然后加至上述活化溶液中，N2保护下30℃磁力搅拌24 h。反应完毕后，洗涤，干燥。纯化，既得苄氧基赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅰ）。

[0055]

[0056] （b）将步骤（a）产物溶于乙酸乙酯，在钯碳（Pd/C）和H2作用下，在30℃磁力搅拌6 h。过滤，收集滤液，旋蒸，即得赖氨酸二维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅱ）。

[0057]

[0058] （c）1.2 g Lys-di-VES溶解于二氯甲烷中，加入0.4 g EDCI和0.2 g HOBT，0℃下磁力搅拌1h活化羧基，然后加入1.6 g单甲氧基聚乙二醇氨基（mPEG-NH2，MW=2000），N2保护下37℃磁力搅拌36 h。过滤，乙醚重结晶，收集淡黄色沉淀。纯化得到终产物单甲氧基聚乙二醇酰胺-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯（结构式如式Ⅲ）。产物为淡黄色蜡状物，分子量约为3152。

[0059]

[0060] 本发明的两亲性聚乙二醇二维生素E琥珀酸酯衍生物可作为载体应用于的难溶性药物有：紫杉醇、阿霉素、多西他赛、羟基喜树碱、喜树碱、长春新碱、尼莫地平、丝裂霉素等。尤其对阿霉素、多西他赛、紫杉醇、有增溶作用，但是并不局限于所列药物。

[0061] 载药胶束的制备中，选择阿霉素为模型药物，实施例1发明的单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯聚合物为载体。

[0062] 实施例4 透析法制备载阿霉素聚合物胶束

[0063] 称取5 mg 阿霉素盐酸盐，40mg单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯，10 μL三乙胺，溶于4 mL N,N-二甲基甲酰胺中，磁力搅拌30 min使其均匀，将溶液转至透析袋中（MWCO=1,4000），至于1L去离子水中透析，分别于1 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h，24 h更换去离子水。透析后，取出透析袋中的溶液，1,3000 rpm离心20 min，除去未包裹的药物，0.22 μm滤膜过滤，滤液即为载药胶束。载药胶束的包封率为31.4%。

[0064] 实施例5 乳化挥发法制备载阿霉素聚合物胶束

[0065] 称取5 mg 阿霉素盐酸盐，溶于3 mL甲醇至50 mL茄型瓶中，加入10 μL三乙胺，搅拌0.5 h后，37℃旋转蒸发30 min，除去有机溶剂。加入40 mg单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯，溶于5 mL二氯甲烷，磁力搅拌均匀。逐滴加至5 mL的水溶液中，37℃搅拌过夜，除去有机溶剂。1,3000 rpm离心20 min，除去未包裹的药物，0.22 μm滤膜过滤即得。载药胶束的包封率为80.2%以上，但是仍有残留的有机溶剂。

[0066] 实施例6 薄膜分散法制备载阿霉素聚合物胶束

[0067] 称取5 mg 阿霉素盐酸盐，溶于3 mL甲醇至50 mL茄型瓶中，加入10 μL三乙胺，搅拌0.5 h后，加入40 mg聚合物单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯，补加2ml甲醇，振摇均匀，37℃旋转蒸发30 min，除去有机溶剂。氮气流（N2）吹茄型瓶除去残留的有机溶剂，加入5 mL的水溶液，于37℃搅拌2 h水化。1,3000 rpm离心20 min，除去未包裹的药物，0.22 μm滤膜过滤即得。载药胶束的包封率为85.5%以上。

[0068] 将实施例6中制备的载药胶束通过动态光散射和透视电镜测定胶束的粒径大小和形态，结果如图2和图3。动态光散射测定胶束的数量径为11.2 nm，粒径分布较窄；透视电镜图表明载药胶束为粒径均一的球形，粒径范围在10-15nm，与动态光散射测定的结果相符。

[0069] 测试实例7 两亲性单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯临界胶束浓度的测定

[0070] 临界胶束浓度的测定广泛采用芘荧光探针法。芘是一种脂溶性的荧光探针，在极性环境中荧光较弱而在非极性环境中荧光较强。当极性溶剂中有胶团或疏水区域时，芘由极性环境会自发向非极性环境转移，引起荧光加强。通常芘的这一特性由第一激发峰和第三激发峰强度的比值来反应，当这一比值显著增大时，为芘由极性环境向非极性环境迁移，即为胶束或疏水区域产生。

[0071] 将3×10-6 mol/L芘的无水乙醇溶液加入到20 mL的具塞烧瓶中，氮气流吹干除去无水乙醇。精密称定10 mg的实施例1制备的聚合物Mpeg2000-Lys-di-VES溶解于10 mL-3 -4 -5 -6 -7 -8的蒸馏水中，得到1 mg/mL。将聚合物溶液稀释成系列浓度（10 ，10 ，10 ，10 ，10 ，10 ，-9 -7
10 mol/L）10 mL，分别加入到含有芘的烧瓶中，使芘的终浓度为3×10 mol/L，避光超声
4h，避光放置过夜。荧光分光光度计测定荧光强度。发射波长为390 nm，激发波长为I1=333 nm，I2=335 nm。

[0072] 以I335/I333的荧光强度比值和聚合物胶束的浓度对数作图如图4，曲线的拐点即为聚合物的临界胶束浓度（CMC），测定结果为单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯的CMC=1.14。

[0073] 图4结果证明本发明的聚合物载体临界胶束浓度较低，易于自组装形成胶束，且形成的胶束具有较好的稀释稳定性。

[0074] 测试实例8 载药胶束的体外释放

[0075] 采用透析法考察单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯载阿霉素胶束的体外释药特征。移取1 mL1mg/mL载药胶束溶液于透析袋中，透析袋两端夹紧，分别置于含有30 mLpH7.4、6.5、5.5、4.5 PBS缓冲液释放介质的锥形瓶中，在37℃恒温振荡器中以100 r/min进行体外释放度考察。分别在0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24 h取样2 mL，同时补充相应体积的释放介质，稀释后经0.45 μm微孔滤膜过滤，取20 μL进行HPLC测定。结果图5。

[0076] 由图5可知，各载药胶束的释放具有pH敏感特征，而在生理pH下释放较为缓慢，能使胶束在循环过程中保持稳定，达到长循环然后通过EPR效应到达靶细胞。而在低pH环境下，载药胶束快速地释放胶束中包封的药物，证明在靶细胞组织中能快速地发挥疗效。

[0077] 测试实例9 细胞毒性实验

[0078] 将处于对数生长期的人乳腺癌细胞(MCF-7) 以3×104/孔/0.1mL的1640培养液埋于96孔板中，24h后将实施例1制备的聚合物载体以1，5，10，20，50和100 μg/ml浓度分别加入各孔，每孔加入100 μL聚合物载体溶液，每个浓度3个平行孔，置培养箱中孵育96h。96后，取出96孔板，每孔加入50 μL的2mg/mL MTT，培养箱中孵育4h，甩板，将96孔板倒扣于滤纸中充分吸干残留液体，每孔加入200 μL DMSO于振荡器中振荡10min，酶标仪测定各孔570nm出的吸光度。计算抑制率：

[0079] 抑制率（%）=（1- A加药孔/A对照孔）×100%

[0080] MTT法测定聚合物细胞毒性结果如图6，表明嵌段聚合物单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯有较强细胞毒性，能杀死肿瘤细胞。分析其主要是由于维生素E琥珀酸酯的抗肿瘤作用。

[0081] 测试实例10 P-gp抑制实验

[0082] 将处于对数生长期的耐阿霉素的人乳腺癌细胞（MCF-7/Adr）以1×105/孔/2.5 mL的1640培养液埋于6孔板中，24 h后将阿霉素溶液，阿霉素和20 μg/mL P-gp抑制剂环孢菌素A混合液，阿霉素和2 μg/mL实施例1制备的聚合物载体混合液以及实例5制备的载药胶束，以阿霉素的浓度均为6 μg/mL浓度分别加入各孔，置培养箱中孵育2 h。2 h后取出6孔板，吸走培养液，PBS洗涤3次，胰酶消化，离心，收集细胞，加入400 μL PBS混匀，采用流式细胞仪测定样品。

[0083] 流式细胞仪测定结果如图7所示：环孢菌素A是P-gp的抑制剂，能增加P-gp底物阿霉素的摄取。而阿霉素与聚合物载体的混合液，增加了阿霉素的摄取，从而证明本发明的两亲性嵌段共聚物具有一定的P-gp抑制作用。从图中还得出实施例5中制备的载药胶束的阿霉素细胞摄取量明显增加，主要是由于（1）阿霉素包裹于聚合物胶束中，能够避免P-gp的识别，增加了阿霉素摄取，从而克服了多药耐药；（2）协同于实施例1制备的聚合物载体的P-gp抑制作用，能抑制进入细胞后所游离药物的外排，协同地克服多药耐药，增加了P-gp药物的摄取。

[0084] 测试实例11 单甲氧基聚乙二醇2000-赖氨酸-双维生素E琥珀酸酯制备的阿霉素载药胶束在大鼠体内的药代动力学研究

[0085] 取12只健康、雄性大鼠，体重250 g左右，随机分为2组，给药前禁食12 h，自由饮水。一组静脉注射阿霉素溶液(DOX)作为对照，另一组分别静脉注射实施例5制备的载药胶束，剂量为5 mg/kg，给药后采血时间点：0.08、0.17、0.33、0.50、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、12、24、36、48、72、96、120、144、168、192、216、240h，在各采血时间点通过眼眶取血0.5 mL，取血后立即移入经肝素处理的试管中，离心10 min（13000×g），分离血浆，于–80℃冰箱中冷冻，测定。药时曲线见图8。

[0086] 由图8可知，给予阿霉素载药胶束后，与溶液组相比，阿霉素胶束消除半衰期显著延长，具有显著地长循环作用。