一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法

摘要

本发明公开了一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法，其步骤包括首先对待检测的梨果肉的冷冻处理、然后进行匀浆粉碎、过筛，清洗以去除可溶性杂质，之后用酸化乙酰溴消化水解梨果肉细胞溶解木质素，再将消化水解后的溶液中加入氢氧化钠和盐酸羟胺终止反应，再将溶液离心处理以消除杂质和沉淀对吸光度测定的影响，最后用紫外分光光度计在280nm处测定吸光度值，代入公式计算木质素含量。本发明为梨果实果肉中含量相对较低的木质素提供了一种分析结果正确、分析速度快、操作简单、灵敏度高、重现性好的分析方法。

权利要求

1.一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法，其特征在于包括以下步骤（1）将待检测的梨果肉在-20℃下进行冷冻处理；冷冻时间不少于12小时；

（2）取步骤（1）中梨中层果肉2g，高速匀浆机在18000-20000r/min的转速下匀浆

2-3min，60℃下烘干至恒重，粉碎后过40目筛，得梨果肉干粉；

（3）称取步骤（2）梨果肉干粉0.02g，用体积浓度95%乙醇清洗3次，再用酒精：正己烷=1：2（V/V）溶液冲洗3次，常温下自然风吹干有机溶剂；

（4）向经过步骤（3）处理的梨果肉干粉放入试管中，并加入20%-30%溴乙酰-冰乙酸溶液（w/w）1-2mL和体积浓度70%的高氯酸0.05-0.07mL，密封，放置于60-80℃恒温水浴

30-40min，每隔10min振荡一次；

（5）待水浴反应结束后，向试管中依次加入3-5mL浓度为2mol/L的NaOH和2-3mL浓度为4mol/L的盐酸羟铵终止反应；

（6）将步骤（5）反应液转入10mL离心管中，在6000r/min的转速下离心10min，离心完成后将上清液转移至100mL容量瓶中并用冰乙酸定容至100mL，待测；

（7）用紫外分光光度计在280nm下对待测溶液进行吸光度测定，根据如下木质素含量；

以吸光率的平均值作为标准吸光率，计算木质素含量，木质素含量计算公式如下：所述Wsample为样品干样质量，单位为g，Abs为样品溶液木质素吸光度，Liters为样品定容体积，单位为L，Astandard为木质素标准吸光率，数值可直接从文献中查阅或是通过标准品测定得出。

2.根据权利要求1所述的一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法，其特征在于，所述步骤（1）冷冻时间为12-24小时。

说明书

一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法

技术领域

[0001] 本发明涉及了一种梨果肉中木质素含量的检测分析方法。

背景技术

[0002] 木质素在梨果实薄壁细胞的细胞壁上沉积引起细胞壁发生次生加厚形成石细胞。梨果实果肉中石细胞的大小、数目和密度都对梨果实品质产生影响，是梨果实品质的一项重要指标。因此，需要有一种正确、适合的方法来检测梨果实果肉中的木质素含量。

[0003] 目前梨果实果肉木质素含量的分析方法主要是采用用于木本或草本植物茎、叶等材料分析的经典方法，由于梨果实果肉中木质素含量相对较低，该方法应用于梨果实果肉木质素含量分析时往往造成较大误差，并且实验过程耗时较长，不适合直接用于梨果实果肉木质素含量的分析。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一种适合于梨果实果肉中木质素含量的检测分析方法。有助于梨科研工作者和加工业者快速准确地分析梨果实果肉中木质素的含量。

[0005] 本发明提供的是乙酰溴法，其原理是：在酸性和加热的条件下，溴取代了木质素中α-C的羟基使木质素形成乙酰衍生物溶于酸性溶液中，可实现吸光度的测定分析。

[0006] 本发明检测分析方法，包括以下步骤：

[0007] (1)将待检测的梨果肉在-20℃下进行进行冷冻处理；冷冻时间不少于12小时；

[0008] (2)取步骤(1)中梨中层果肉2g，高速匀浆机在18000-20000r/min的转速下匀浆2-3min，60℃下烘干至恒重，粉碎后过40目筛，得梨果肉干粉；

[0009] (3)称取步骤(2)梨果肉干粉0.02g，用体积浓度95％乙醇清洗3次，再用酒精∶正己烷＝1∶2(V/V)溶液冲洗3次，常温下自然风吹干有机溶剂；

[0010] (4)向经过步骤(3)处理的梨果肉干粉放入试管中，并加入20％-30％溴乙酰-冰乙酸溶液(w/w)1-2mL和体积浓度70％的高氯酸0.05-0.07mL，密封，放置于60-80℃恒温水浴30-40min，每隔10min振荡一次；

[0011] (5)待水浴反应结束后，向试管中依次加入3-5mL浓度为2mol/L的NaOH和2-3mL浓度为4mol/L的盐酸羟铵终止反应；

[0012] (6)将步骤(5)反应液转入10mL离心管中，在6000r/min的转速下离心10min，离心完成后将上清液转移至100mL容量瓶中并用冰乙酸定容至100mL，待测；

[0013] (7)用紫外分光光度计在280nm下对待测溶液进行吸光度测定，根据如下木质素含量；以吸光率的平均值作为标准吸光率，计算木质素含量，木质素含量计算公式如下：

[0014]

[0015] 所述Wsample为样品干样质量(g)，Abs为样品溶液木质素吸光度，Liters为样品定容体积(L)。Astandard为木质素标准吸光率，数值可直接从文献中查阅或是通过标准品测定得出。

[0016] 作为优先，

[0017] 所述步骤(1)冷冻时间为12-24小时。

[0018] 与已有技术相比，本发明有益效果具体体现在：

[0019] 1、本发明在取样分析前需将梨果实进行冷冻处理，因为梨果肉水分含量大，直接取材称量过程中由于挤压等原因可能导致水分流失，称量误差较大；本方法采用冷冻12-24h后的梨果肉，取材时材料中水分处于凝结状态，材料不易因挤压等出水，并且冷冻后的果肉由于薄壁细胞的破裂，减少了石细胞团之间薄壁细胞的连接作用，使后一步的匀浆效果更好。

[0020] 2、本发明在60℃下烘干样品，可以避免糖类的碳化，因为梨果实果肉细胞中糖类含量较高，过高的烘干温度可能引起糖类的碳化。

[0021] 3、本发明梨果肉粉碎后过40目筛，使粉末粉末颗粒更小，有利于溶剂溶解。

[0022] 4、本发明检测梨果肉木质素每次所称取的梨果肉干粉只需0.02g，实验证明取材0.02g既可以准确测定木质素含量又可减少对试剂的使用。

[0023] 5、本发明方法在吸光度测定前进行离心，可以去除混合液中不溶解的成分，避免对吸光度的测定造成干扰。

[0024] 6、本发明为梨果实果肉中含量相对较低的木质素提供了一种分析结果正确、分析速度快、操作简单、灵敏度高、重现性好的分析方法。

具体实施方式

[0025] 下面结合具体实例对本发明作进一步详细的说明。

[0026] 实例1：

[0027] 取冷冻12h的梨中层果肉10g，2g为一组，分为5组，每组均按如下步骤进行：在18000r/min的转速下匀浆2min，60℃下烘干至恒重，粉碎后过40目筛。称取制备好的梨果肉干粉0.02g，用95％乙醇清洗3次，再用酒精∶正己烷＝1∶2(V/V，体积百分比)溶液冲洗3次，吹干。放入10mL试管中，加入20％溴乙酰-冰乙酸溶液(w/w，质量百分比)1mL和体积浓度70％的高氯酸0.05mL，将管口加木塞并密封，于60℃恒温水浴30min，每隔10min振荡试管。反应结束后，向试管中加入3mL浓度为2mol/L的NaOH和2mL浓度为4mol/L的盐酸羟铵终止反应。将反应液转入10mL离心管中，在6000r/min的转速下离心10min，离心完成后将上清液转移至100mL容量瓶中并用冰乙酸定容至100mL，用紫外分光光度计在
280nm下对溶液进行吸光度测定，测定吸光度值分别为0.146、0.131、0.137、0.125、0.147，然后根据公式计算5组木质素含量，见表1。

[0028] 实例2：

[0029] 取冷冻24h的梨中层果肉10g，2g为一组，分为5组，每组均按如下步骤进行：在20000r/min的转速下匀浆2min，60℃下烘干至恒重，粉碎后过40目筛。称取制备好的梨果肉干粉0.02g，用95％乙醇清洗3次，再用酒精∶正己烷＝1∶2(V/V)溶液冲洗3次，吹干。放入10mL试管中，加入25％溴乙酰-冰乙酸溶液(w/w)2mL和体积浓度70％的高氯酸
0.07mL，将管口加木塞并密封，于70℃恒温水浴30min，每隔10min振荡试管。反应结束后，