防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物及制备方法

摘要

本发明公开了一种防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物及制备方法，由以下组分重量百分比组成：桔梗、浙贝母各28.6%，金银花、丹皮各21.4%；制成口服液的方法是：按上述的质量百分比称量取各组分，混合粉碎100%过100目筛，混合粉放置容器中加500ml的水，煮沸后继续45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml，分瓶灌装，每瓶100毫升，灭菌密封；制成胶囊的方法是：按上述的质量百分比称量取各组分，混合粉碎100%过100目筛，3/4的药物煎煮45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml；1/4的再次粉碎过200目筛，与上述药液混合均匀，真空干燥或低温烘干，灭菌，装入胶囊，每粒胶囊0.25g。本发明的中药组合物肺脏免受化疗药物及放射损伤，抗肺纤维化，无毒副作用，无不良反应。

权利要求

1.防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物，其特征是依以下方法制此中药组合物的口服液：取桔梗、浙贝母各28.6g，金银花、丹皮各21.4g，混合粉碎100%过100目筛，混合粉放置容器中加1000ml的水，煮沸后文火继续45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml，分瓶灌装，每瓶100毫升，灭菌密封。

2.防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物，其特征是依以下方法制此中药组合物的胶囊：取桔梗、浙贝母各28.6g，金银花、丹皮各21.4g，混合粉碎100%过100目筛，3/4重的药物煎煮45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml；1/4重的再次粉碎过200目筛，与上述药液混合均匀，真空干燥或低温烘干，灭菌，粉碎，装入胶囊，每粒胶囊0.25g。

说明书

防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物及制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中药，具体涉及一种防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物及其制备方法。

背景技术

[0002] 众所周知，化疗药物和放射治疗引起的肺损伤早期常表现为肺泡炎，肺泡内有大量炎症细胞浸润，随后在炎症细胞的参与下，各种细胞因子和炎性介质大量释放，扩大了组织损伤，引起肺间质增生，导致肺纤维化。由于肺损伤后肺纤维化的发生机制尚不完全明确，一旦发展到肺纤维化往往不可逆转，严重危胁患者生命。因此如何及时合理有效的预防和治疗化疗药物和放射治疗引起的肺损伤，是临床上不可忽视的问题。目前对于肺损伤和肺纤维化的治疗尚无确切有效的治疗方法及药物。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于：提供一种防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物及制备方法，取材广泛，成本低廉，效果显著，无毒副作用。

[0004] 本发明的技术解决方案是：该防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物由以下组分重量百分比组成：桔梗、浙贝母各28.6%，金银花、丹皮各21.4%。

[0005] 该防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物制成口服液的方法是：按上述的质量百分比称量取各组分，混合粉碎100%过100目筛，混合粉放置容器中加1000ml的水，煮沸后继续45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml，分瓶灌装，每瓶100毫升，灭菌密封。

[0006] 该防治肺损伤和肺纤维化的中药组合物制成胶囊的方法是：按上述的质量百分比称量取各组分，混合粉碎100%过100目筛，3/4的药物煎煮45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml；1/4的再次粉碎过200目筛，与上述药液混合均匀，真空干燥或低温烘干，灭菌，粉碎，装入胶囊，每粒胶囊0.25g。

[0007] 服用方法是：口服20ml，每日3次；或胶囊4粒，每日3次。

[0008] 本发明的中药组合物保护肺脏免受化疗药物及放射损伤，抗肺纤维化，无毒副作用，无不良反应。

附图说明

[0009] 图1为实验1假手术组（HE×400）照片。

[0010] 图2为实验1模型组（HE×400）照片。

[0011] 图3为实验1地塞米松组（HE×400）照片。

[0012] 图4实验1贝母合剂组（HE×400）照片。

[0013] 图5实验1为假手术组（Masson×400）照片。

[0014] 图6实验1模型组（Masson×400）照片。

[0015] 图7实验1为地塞米松组（Masson×400）照片。

[0016] 图8实验1贝母合剂组（Masson×400）照片。

具体实施方式

[0017] 实施例1：依以下方法制口服液：取桔梗、浙贝母各28.6g，金银花、丹皮各21.4g，混合粉碎100%过100目筛，混合粉放置容器中加1000ml的水，煮沸后文火继续45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml，分瓶灌装，每瓶100毫升，灭菌密封。

[0018] 实施例2：依以下方法制胶囊：取桔梗、浙贝母各28.6g，金银花、丹皮各21.4g，混合粉碎100%过100目筛，3/4重的药物煎煮45分钟，沉淀，过滤，取滤液，真空浓缩为100ml；1/4重的再次粉碎过200目筛，与上述药液混合均匀，真空干燥或低温烘干，灭菌，粉碎，装入胶囊，每粒胶囊0.25g。

[0019] 实验1：对肺泡炎和肺纤维化的影响

[0020] 1.实验材料

[0021] 1.1实验动物 选用清洁级SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证0037253。

[0022] 1.2实验药品

[0023] 贝母合剂为实施例1的口服液，浓缩为含生药0.315g/ml，由南京中医药大学中医治法实验室制备，中药饮片由南京药业股份有限公司提供。

[0024] 地塞米松片：0.75mg/片，天津天药药业有限公司生产，用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。

[0025] 平阳霉素：8mg/支，天津太河制药有限公司生产。

[0026] 1.3实验仪器

[0027] 石蜡切片机：德国Leica公司生产。

[0028] 光学显微镜：日本Olympus公司生产。

[0029] 全自动图像获取系统OlympusDP71：日本Olympus公司生产。

[0030] 实验方法

[0031] 2.1动物分组

[0032] 大鼠常规适应性饲养3d后，随机分为4组：假手术组、模型组、地塞米松组、贝母合剂组。

[0033] 2.2模型制备

[0034] 按文献方法制备模型，将平阳霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度，10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后，颈部皮肤消毒，剪去颈部鼠毛，行颈正中切口，分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素5mg/kg，立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，然后缝合皮肤；假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水；
各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食，保持自然光照，观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。

[0035] 2.3给药方法：

[0036] 造模术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组给予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液1ml/100g体重；地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d；贝母合剂组给予等容积贝母合剂3.15g/Kg·d；每日灌胃1次，连续给药28天。

[0037] 2.4标本采集

[0038] 造模及给药后饲养28天，以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠，称取体重，颈动脉取血处死大鼠，打开胸腔取出肺脏，摘除气管、肺门淋巴结等组织，用滤纸吸干肺脏表面血液，称取并记录肺重；左肺用冰盐水冲洗3遍，滤纸吸干水分，固定，包埋切片，常规脱蜡，行HE染色和Masson三色染色。

[0039] 统计方法

[0040] 所有数据均以均数±标准差（ ±ｓ）表示， 采用SPSS13.0统计软件分析，多组间采用单因素方差分析。

[0041] 实验结果

[0042] 4.1一般情况观察

[0043] 模型组大鼠造模当天出现尾巴及四肢发凉，尾静脉呈黑紫色，聚群、耸毛现象较为明显，皮毛失去光泽，3天后症状逐步改善，至第7天基本消失；模型组和地塞米松组大鼠均活动减少，食量减少，逐渐消瘦，体重至第18～21天逐步恢复，地塞米松组大鼠体重减轻更为明显；假手术组和贝母合剂组则未见明显的活动减少、食量减少及体重减轻；模型组和地塞米松组大鼠各死亡1只。

[0044] 4.2肺组织病理观察

[0045] 各组大鼠左肺组织用冰盐水冲洗3遍，滤纸吸干水分，10%的中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，以4μm石蜡切片，常规行HE染色和Masson三色染色，做病理形态学观察。

[0046] 4.2.1肉眼观察结果：假手术组肺组织结构正常，双肺呈粉红色，表面光滑，质地柔软，弹性良好；模型组可见肺组织体积缩小，表面有片状凹凸不平的苍白灶，也有个别灰黑色病灶，弹性降低，质地较硬；地塞米松组有不同程度的苍白灶，但较模型组明显减少，弹性较强，质地较柔软，但与假手术组有明显差异；贝母合剂组接近于假手术组，未见明显改变。

[0047] 4.2.2HE染色光镜下观察结果：假手术组肺组织形态学结构无明显改变；模型组肺组织可见明显的肺间质病变，肺泡间隔增宽，间质水肿，炎性细胞浸润增多，肺间质及肺泡腔内可见大量的炎细胞浸润；地塞米松组和贝母合剂组上述病理改变有所减轻，但与假手术组有明显差异，见图1～图4。

[0048] 4.2.3 Masson染色光镜下观察结果：假手术组大鼠肺组织含有少量胶原纤维，为细胞外基质（ECM）的主要组成部分；模型组大鼠胶原纤维明显增多，出现典型的肺间质纤维化；地塞米松组和贝母合剂组大鼠也出现肺间质纤维化改变，程度较模型组明显为轻，但与假手术组有明显差异，见图5～图8。

[0049] 4.2.4肺泡炎和肺纤维化的程度评分比较

[0050] 在光镜下观察大鼠肺组织HE染色及Masson染色病理切片，参照Szapiel等[2,3]方法确定肺泡炎和肺纤维化程度，其分级和评分标准如下：

[0051] (1)肺泡炎分4级：无肺泡炎，评1分；轻度肺泡炎，表现为单核细胞浸润使肺泡隔增宽，仅限于局部和近胸膜部，受累面积小于全肺的20%，肺泡结构正常，评2分；中度肺泡炎，受累面积为20%～50%，近胸膜部较重，评3分；重度肺泡炎，受累面积大于50%，偶见肺泡腔内有单核细胞及出血造成实变，评4分；结果见表1。

[0052] (2)肺纤维化分4级：无纤维化，评1分；轻度纤维化，受累面积小于全肺的20%，纤维化累及胸膜及胸膜下的肺间质，肺泡结构紊乱，评2分；中度纤维化，受累面积为20%～50%，纤维化区域从胸膜延伸，仍属局部性，评3分；重度纤维化，受累面积大于50%，并有融合，可见大小不等的囊气腔，评4分；结果见表2。

[0053] 表1贝母合剂对肺损伤大鼠肺泡炎评分的影响（ ±s）

[0054]

[0055] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0056] 表2贝母合剂对肺损伤大鼠肺间质炎症评分的影响（ ±s）

[0057]

[0058] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0059] 大鼠肺泡炎和肺纤维化评分比较表明，模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化评分明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；地塞米松组和贝母合剂组大鼠肺泡炎和肺纤维化评分明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)。

[0060] 实验2：对肺损伤大鼠肺指数的影响

[0061] 1.实验材料

[0062] 1.1实验动物 选用清洁级SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证0037253。

[0063] 1.2实验药品

[0064] 贝母合剂为实施例1的口服液，含生药0.315g/ml，由南京中医药大学中医治法实验室制备，中药饮片由南京药业股份有限公司提供。

[0065] 地塞米松片：0.75mg/片，天津天药药业有限公司生产，用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。

[0066] 平阳霉素：8mg/支， 天津太河制药有限公司生产。

[0067] 实验方法

[0068] 2.1动物分组

[0069] 大鼠常规适应性饲养3d后，随机分为4组：假手术组、模型组、地塞米松组、贝母合剂组。

[0070] 2.2模型制备

[0071] 按文献方法制备模型，将平阳霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度，10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后，颈部皮肤消毒，剪去颈部鼠毛，行颈正中切口，分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素5mg/kg，立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，然后缝合皮肤；假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水；
各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食，保持自然光照，观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。

[0072] 2.3给药方法：

[0073] 造模术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组给予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液1ml/100g体重；地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d；贝母合剂组给予等容积贝母合剂3.15g/Kg·d；每日灌胃1次，连续给药28天。

[0074] 2.4标本采集

[0075] 造模及给药后饲养28天，以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠，称取体重，颈动脉取血处死大鼠，打开胸腔取出肺脏，摘除气管、肺门淋巴结等组织，用滤纸吸干肺脏表面血液，称取并记录肺重。

[0076] 2.5 统计学处理

[0077] 所有数据均以均数±标准差（ ±ｓ）表示，采用SPSS16.0 统计软件分析，多组间采用单因素方差分析。

[0078] 结果

[0079] 根据肺重和体重计算出肺指数。

[0080] 肺指数=肺重（g）/体重（g）×100%。

[0081] 实验结果表明，贝母合剂能明显降低平阳霉素致大鼠肺损伤后肺的重量和肺指数，与模型组比较具有显著性差异（P<0.01），见表3。

[0082] 表3贝母合剂对肺损伤大鼠肺指数的影响（ ±s）

[0083]

[0084] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0085] 实验3：对肺损伤大鼠血清炎性介质的影响

[0086] 1.实验材料

[0087] 1.1实验动物 选用清洁级SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证0037253。

[0088] 1.2实验药品

[0089] 贝母合剂为实施例1的口服液，含生药0.315g/ml，由南京中医药大学中医治法实验室制备，中药饮片由南京药业股份有限公司提供。

[0090] 地塞米松片：0.75mg/片，天津天药药业有限公司生产，用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。

[0091] 平阳霉素：8mg/支， 天津太河制药有限公司生产。

[0092] 1.3实验仪器

[0093] γ-911全自动放免计数仪，中国科技大学实业总公司生产。

[0094] 酶免仪器：SATAT FAX2100全自动酶标仪，Awareness Technology.inc.USA。

[0095] 1.4实验试剂：

[0096] IL-4、TNF-α试剂盒由北京华英生物技术研究所提供。

[0097] γ-IFN试剂盒由北京华英生物技术研究所购自Adlitteram Diagnostic laboratories inc USA。

[0098] 实验方法

[0099] 2.1动物分组

[0100] 大鼠常规适应性饲养3d后，随机分为4组：假手术组、模型组、地塞米松组、贝母合剂组。

[0101] 2.2模型制备

[0102] 按文献方法制备模型，将平阳霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度，10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后，颈部皮肤消毒，剪去颈部鼠毛，行颈正中切口，分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素5mg/kg，立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，然后缝合皮肤；假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水；
各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食，保持自然光照，观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。

[0103] 2.3给药方法：

[0104] 造模术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组给予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液1ml/100g体重；地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d；贝母合剂组给予等容积贝母合剂3.15g/Kg·d；每日灌胃1次，连续给药28天。

[0105] 2.4标本采集

[0106] 造模及给药后饲养28天，以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠，称取体重，颈动脉取血并处死大鼠；颈动脉取血后3000转/分离心10min后取血清冷冻保存备检。

[0107] 统计学处理

[0108] 所有数据均以均数±标准差（ ±ｓ）表示，采用SPSS16.0 统计软件分析，多组间采用单因素方差分析。

[0109] 结果

[0110] 4.1贝母合剂对肺损伤大鼠血IL-4的影响

[0111] 实验结果表明，假手术组大鼠血IL-4水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组大鼠血IL-4水平与模型组比较无统计学意义(P﹥0.05)，见表4。

[0112] 表4贝母合剂对肺损伤大鼠血IL-4的影响（ ±s）

[0113]

[0114] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0115] 4.2贝母合剂对肺损伤大鼠血TNF-α的影响

[0116] 实验结果表明，假手术组大鼠血TNF-α水平与模型组比较，无统计学意义(P﹥0.05)；贝母合剂组大鼠血TNF-α水平与模型组比较无统计学意义(P﹥0.05)，见表5。

[0117] 表5贝母合剂对肺损伤大鼠血TNF-α的影响（ ±s）

[0118]

[0119] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0120] 4.3贝母合剂对肺损伤大鼠血IFN-γ的影响

[0121] 实验结果表明，假手术组大鼠血IFN-γ水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.05)。贝母合剂组大鼠血IFN-γ水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表6。

[0122] 表6贝母合剂对肺损伤大鼠血IFN-γ的影响（ ±s）

[0123]

[0124] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0125] 贝母合剂对肺损伤大鼠血炎症介质的实验结果表明，贝母合剂组与模型组大鼠在肺损伤28天时血TNF-α、IL-4水平未见明显差异，无统计学意义(P﹥0.05)。假手术组大鼠血IFN-γ水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.05)；贝母合剂组大鼠血IFN-γ水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)。

[0126] 实验4：对肺损伤大鼠肺组织细胞信号转导通路的影响

[0127] 1.实验材料

[0128] 1.1实验动物 选用清洁级SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证0037253。

[0129] 1.2实验药品

[0130] 贝母合剂为实施例2的胶囊，由南京中医药大学中医治法实验室制备，中药饮片由南京药业股份有限公司提供。

[0131] 地塞米松片：0.75mg/片，天津天药药业有限公司生产，用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。

[0132] 平阳霉素：8mg/支，天津太河制药有限公司生产。

[0133] 1.3实验仪器

[0134] 石蜡切片机：德国Leica公司生产。

[0135] 光学显微镜：日本Olympus公司生产。

[0136] 全自动图像获取系统OlympusDP71：日本Olympus公司生产。

[0137] 1.4实验试剂：

[0138] 兔抗大鼠ERK1/2、NF-κB、CTGF、TGF-β、Fas/Fasl多克隆抗体，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

[0139] 2 实验方法

[0140] 2.1动物分组

[0141] 大鼠常规适应性饲养3d后，随机分为4组：假手术组、模型组、地塞米松组、贝母合剂组。

[0142] 2.2模型制备

[0143] 按文献方法制备模型，将平阳霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度，10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后，颈部皮肤消毒，剪去颈部鼠毛，行颈正中切口，分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素5mg/kg，立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，然后缝合皮肤；假手术组大鼠在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水；
各组大鼠在相同条件下自由饮水、摄食，保持自然光照，观察并记录大鼠的活动、进食、体重等一般情况。

[0144] 2.3给药方法：

[0145] 造模术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组给予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液1ml/100g体重；地塞米松组给予等容积地塞米松蒸馏水溶液0.000405g/Kg·d；贝母合剂组给予等容积贝母合剂3.15g/Kg·d；每日灌胃1次，连续给药28天。

[0146] 2.4标本采集

[0147] 造模及给药后饲养28天，以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠，称取体重，颈动脉取血处死大鼠，打开胸腔取出肺脏，摘除气管、肺门淋巴结等组织，用滤纸吸干肺脏表面血液；左肺用冰盐水冲洗3遍，滤纸吸干水分，固定，包埋切片，常规脱蜡，行HE染色和Masson染色，免疫组化SABC法检测肺组织ERK1/2、NF-κB、CTGF、TGF-β、Fas/Fasl的表达。采用光学显微镜和全自动图像获取系统Olympus DP71在高倍镜视野(×400)下随机选取5个区域(视场)，测量并记录每个视野阳性染色的平均光密度 (IOD)值，作为该片的代表值，再计算该组的平均光密度，进行统计学比较。

[0148] 统计方法

[0149] 所有数据均以均数±标准差（ ±ｓ）表示， 采用SPSS13.0统计软件分析，多组间采用单因素方差分析。

[0150] 结果

[0151] 4.1贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织ERK1/2水平的影响。

[0152] 模型组大鼠肺组织ERK1/2的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织ERK1/2的水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表7。

[0153] 表7贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织ERK1/2的影响（ ±s）

[0154]

[0155] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0156] 4.2贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织NF-κB水平的影响

[0157] 模型组大鼠肺组织NF-κB水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织NF-κB水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表8。

[0158] 表8贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织NF-κB水平的影响（ ±s）

[0159]

[0160] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0161] 4.3贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织CTGF水平的影响

[0162] 模型组大鼠肺组织CTGF的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织CTGF的水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表9。

[0163] 表9贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织CTGF水平的影响（ ±s）

[0164]

[0165] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0166] 4.4贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织TGF-β水平的影响

[0167] 模型组大鼠肺组织TGF-β的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织TGF-β的水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)。见表10。

[0168] 表10贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织TGF-β水平的影响（ ±s）

[0169]

[0170] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0171] 4.5贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织Fas/FasL水平的影响

[0172] 模型组大鼠肺组织Fas的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.05)；贝母合剂组肺组织Fas的水平与模型组比较，无统计学意义(P﹥0.05)；模型组大鼠肺组织FasL的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织FasL的水平显著低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表11。

[0173] 表11贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织Fas/FasL水平的影响（ ±s）

[0174]

[0175] 注：与模型组比较 * P<0.05 ** P<0.01

[0176] 贝母合剂对肺损伤大鼠肺组织细胞信号转导通路的影响实验表明，模型组大鼠肺组织ERK1/2、NF-κB、CTGF、TGF-β、Fas/Fasl的水平明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织ERK1/2、NF-κB、CTGF、TGF-β、Fasl的水平明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)。

[0177] 实验5：对肺损伤大鼠肺组织血管新生的影响

[0178] 1.实验材料

[0179] 1.1实验动物

[0180] 选用清洁级SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，购自上海斯莱克实验动物有限公司，实验动物合格证0037253。

[0181] 1.2实验药品

[0182] 贝母合剂为实施例2的胶囊，由南京中医药大学中医治法实验室制备，中药饮片由南京药业股份有限公司提供。

[0183] 地塞米松片：0.75mg/片，天津天药药业有限公司生产，用蒸馏水配制成0.0000405g/ml的溶液。

[0184] 平阳霉素：8mg/支，天津太河制药有限公司生产。

[0185] 1.3实验仪器

[0186] 石蜡切片机：德国Leica公司生产。

[0187] 光学显微镜：日本Olympus公司生产。

[0188] 全自动图像获取系统Olympus DP71：日本Olympus公司生产。

[0189] 1.4实验试剂

[0190] 兔抗大鼠VEGF和CD34多克隆抗体，购自福建迈新生物技术有限公司。

[0191] 实验方法

[0192] 2.1动物分组

[0193] 大鼠常规适应性饲养3d后，随机分为4组：假手术组、模型组、地塞米松组和贝母合剂组。

[0194] 2.2造模及给药

[0195] 按文献方法制备肺损伤大鼠模型。将平阳霉素用生理盐水配制成5mg/ml浓度，用10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后，颈部皮肤消毒，剪去颈部鼠毛，行颈正中切口，分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素5mg/kg，立即将动物直立并旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，然后缝合皮肤。假手术组动物在同样麻醉条件下气管内注入等量生理盐水；术后第2天开始每天灌胃给药，假手术组和模型组予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液1ml/100g体重；地塞米松组予等容积地塞米松蒸馏水溶液；贝母合剂予等容积贝母合剂。

[0196] 2.3标本采集

[0197] 术后28天，以10%水合氯醛0.3ml/100g麻醉大鼠后处死，剖取两肺，剪除气管、主支气管，将左肺组织用冰盐水冲洗3遍，滤纸吸干水分，10%的中性甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，常规脱蜡，用免疫组化SP法检测肺组织VEGF和CD34的表达；采用光学显微镜和全自动图像获取系统Olympus DP71在高倍镜视野(×400)下随机选取5个区域(视场)，测量并记录每个视野阳性染色的平均光密度(IOD)值和CD34数目，作为该片的代表值。

[0198] 2.4 统计学处理

[0199] 所有数据均以均数±标准差（ ±ｓ）表示，采用SPSS16.0 统计软件分析，多组间采用单因素方差分析。

[0200] 结果

[0201] 3.1贝母合剂对平阳霉素致肺损伤大鼠VEGF表达的影响

[0202] 模型组大鼠肺组织VEGF的表达明显高于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织VEGF的表达明显低于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表12。

[0203] 表12贝母合剂对平阳霉素致肺损伤大鼠VEGF的影响（ ±s）

[0204]

[0205] 注：与对照组比较 *P<0.05 **P<0.01

[0206] 3.2贝母合剂方对平阳霉素致肺损伤大鼠微血管密度的影响

[0207] 模型组大鼠肺组织微血管密度明显低于假手术组，具有统计学意义(P<0.01)；贝母合剂组肺组织微血管密度明显高于模型组，具有统计学意义(P<0.01)，见表13。

[0208] 表13贝母合剂对平阳霉素致大鼠肺损伤微血管密度的影响（ ±s）[0209]

[0210] 注：与对照组比较 *P<0.05 **P<0.01

[0211] 结论：

[0212] 贝母合剂可显著减轻平阳霉素诱发肺损伤大鼠肺泡炎症和肺间质炎症的程度，在肺损伤28天时对炎症因子TNF-α、IL-4无明显影响，但可显著降低血IFN-γ水平。贝母合剂可明显降低肺损伤大鼠肺组织ERK1/2、NF-κB、CTGF、TGF-β、Fasl的水平；贝母合剂可降低平阳霉素诱发肺损伤大鼠肺组织VEGF水平和增高肺组织微血管密度，从而减轻肺损伤程度，防治肺纤维化。说明本中药混合物具有良好的防治肺损伤和肺纤维化的作用。

[0213] 以上所述仅是本发明的优选实施方法，应当指出，对于技术领域的普通人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。