一种从植物催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，取催吐萝芙木根部粉末，加入含酸的乙醇水溶液，搅拌、过滤得到浸提液；浓缩浸提液，用非极性大孔吸附树脂吸附，洗涤，用40％乙醇和80％乙醇洗脱；分别收集洗脱液，浓缩后用弱酸性阳离子交换树脂吸附，洗涤，用50％乙醇洗脱；分别收集洗脱液，用浓酸调节到pH3，浓缩后用C18反相层析介质吸附，用浓度逐渐增加的乙醇水溶液洗脱；分段收集洗脱液，将洗脱液中单一生物碱纯度较高的部分分别合并，浓缩得到固体，加入有机溶剂结晶，得到育亨宾、阿吗灵、蛇根碱、利血平、利新胺的晶体。本发明从一种植物中一次最多可提取5种生物碱，步骤少，所用有机溶剂量较少，污染小，所需设备简单。
1.一种从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
（1）取催吐萝芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，搅拌、浸提、过滤，得到浸提液，照此程序重复2-3次；
（2）将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液用非极性大孔吸附树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用40%乙醇洗脱，收集洗脱液A1，再用80%乙醇洗脱，收集洗脱液B1；所述的40%乙醇，其中含有体积百分比为59%的水及体积百分比为1%的盐酸；所述的80%乙醇，其中含有体积百分比为19%的水及体积百分比为1%的盐酸；
（3）将上述收集的两部分洗脱液A1和B1分别减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A1和B1分别用弱酸性阳离子交换树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用50%乙醇洗脱，收集洗脱液A2、B2；所述的50%乙醇，其中含有体积百分比为45%的水及体积百分比为5%的氨水；
（4）将上述收集的两部分洗脱液A2和B2分别用浓酸调节到pH3左右，减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A2和B2分别用C18反相层析介质吸附，然后用含有体积百分比为0.01%的三氟乙酸的乙醇水溶液洗脱，分段收集洗脱液A3、B3；
（5）将上述分段收集的洗脱液A3和B3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，将洗脱液A3中含育亨宾或阿吗灵并且纯度较高的部分分别合并；将洗脱液B3中含蛇根碱或利血平或利新胺并且纯度较高的部分分别合并；分别减压加热浓缩，至液体蒸干，加入有机溶剂结晶，得到育亨宾、阿吗灵、蛇根碱、利血平、利新胺的晶体。
2.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（1）中所述的含酸的乙醇水溶液，含有体积百分比为10%-60%的水及0.02-0.2mol/L的酸。
3.根据权利要求2所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，所述的酸是硫酸、盐酸或乙酸。
4.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（1）中，每次浸提时所用的含酸的乙醇水溶液体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的3-10倍。
5.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（2）中，将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液在常温下用非极性大孔吸附树脂吸附，非极性大孔吸附树脂的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的40%-50%，然后用水洗涤树脂，水的体积为非极性大孔吸附树脂体积的1-5倍，随后用40%乙醇洗脱，40%乙醇的体积为非极性大孔吸附树脂体积的2-5倍，收集洗脱液A1，再用80%乙醇洗脱，80%乙醇的体积为非极性大孔吸附树脂体积的2-5倍，收集洗脱液B1。
6.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（3）中，将收集的两部分洗脱液A1和B1分别减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A1和B1分别在常温下用弱酸性阳离子交换树脂吸附，吸附每一部分洗脱液所用的弱酸性阳离子交换树脂的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的20%-30%，然后用水洗涤树脂，水的体积为弱酸性阳离子交换树脂体积的1-5倍，随后用50%乙醇洗脱，50%乙醇的体积为弱酸性阳离子交换树脂体积的3-5倍，收集洗脱液A2和B2。
7.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（4）中，将收集的洗脱液A2和B2分别用浓酸调节到pH3，减压加热浓缩；浓缩后的洗脱液A2在常温下用C18反相层析介质吸附，C18反相层析介质的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的10%-20%，然后依次用5%、10%、15%、20%、95%乙醇水溶液洗脱，乙醇水溶液的体积总和为C18反相层析介质体积的10-30倍，分段收集10-20份洗脱液A3；浓缩后的洗脱液B2在常温下用C18反相层析介质吸附，C18反相层析介质的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的
10%-20%，然后依次用15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95%乙醇水溶液洗脱，乙醇水溶液的体积总和为C18反相层析介质体积的10-30倍，分段收集10-20份洗脱液B3。
8.根据权利要求7所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（4）中所述的5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95%乙醇水溶液，其中分别含有体积百分比为95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、45%、5%的水，并含有体积百分比为0.01%的三氟乙酸。
9.根据权利要求1或7所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（4）中所述的浓酸为浓硫酸或浓盐酸。
10.根据权利要求1或7所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（4）中所述的分段收集洗脱液，是将洗脱时间或洗脱体积分为若干段，每一段洗脱时间或洗脱体积内的洗脱液收集为1份。
11.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（5）中所述的加入有机溶剂结晶，具体操作为：对于育亨宾、阿吗灵或蛇根碱，加入甲醇，搅拌使固体溶解，甲醇加入量能使固体全部溶解，再加入乙醚，加入体积为甲醇体积的2-5倍，搅拌，于0-5℃放置，析出结晶，去除母液，得到结晶；对于利血平或利新胺，加入乙酸乙酯，搅拌使固体溶解，乙酸乙酯加入量能使固体全部溶解，再加入甲醇，加入体积为乙酸乙酯体积的2-5倍，搅拌，于0-5℃放置，析出结晶，去除母液，得到结晶；所得晶体放入
12.根据权利要求1或11所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，步骤（5）中，分段收集的洗脱液A3和B3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，如果某种生物碱的纯度不够高，需要再次提纯，可将洗脱液A3或B3中含有欲再次提纯的生物碱的洗脱液合并，作为A2或B2，按照步骤（4）再操作一次。
13.根据权利要求1所述的从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征是，所述减压加热浓缩是在温度45-65℃、真空度0.08-0.10M Pa的条件下进行。
14.一种从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征于，具体包括如下步骤：
（1）取催吐萝芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，搅拌、浸提、过滤，得到浸提液，照此程序重复2-3次；
（2）将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液用非极性大孔吸附树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用40%乙醇洗脱，收集洗脱液A1；所述的40%乙醇，其中含有体积百分比为59%的水及体积百分比为1%的盐酸；
（3）将上述收集的洗脱液A1减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A1用弱酸性阳离子交换树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用50%乙醇洗脱，收集洗脱液A2；所述的50%乙醇，其中含有体积百分比为45%的水及体积百分比为5%的氨水；
（4）将上述收集的洗脱液A2用浓酸调节到pH3左右，减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A2用C18反相层析介质吸附，然后用含有体积百分比为0.01%的三氟乙酸的乙醇水溶液洗脱，分段收集洗脱液A3；
（5）将上述分段收集的洗脱液A3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，将洗脱液A3中含育亨宾或阿吗灵并且纯度较高的部分分别合并；减压加热浓缩，至液体蒸干，加入有机溶剂结晶，得到育亨宾、阿吗灵的晶体。
15.一种从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，其特征于，具体包括如下步骤：
（1）取催吐萝芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，搅拌、浸提、过滤，得到浸提液，照此程序重复2-3次；
（2）将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液用非极性大孔吸附树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用40%乙醇洗脱，收集洗脱液A1，再用80%乙醇洗脱，收集洗脱液B1；所述的40%乙醇，其中含有体积百分比为59%的水及体积百分比为1%的盐酸；所述的80%乙醇，其中含有体积百分比为19%的水及体积百分比为1%的盐酸；
（3）将上述收集的洗脱液B1减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液B1用弱酸性阳离子交换树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用50%乙醇洗脱，收集洗脱液B2；所述的50%乙醇，其中含有体积百分比为45%的水及体积百分比为5%的氨水；
（4）将上述收集的洗脱液B2用浓酸调节到pH3左右，减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液B2用C18反相层析介质吸附，然后用含有体积百分比为0.01%的三氟乙酸的乙醇水溶液洗脱，分段收集洗脱液B3；
（5）将上述分段收集的洗脱液B3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，将洗脱液B3中含蛇根碱或利血平或利新胺并且纯度较高的部分分别合并；减压加热浓缩，至液体蒸干，加入有机溶剂结晶，得到蛇根碱、利血平、利新胺的晶体。
从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及的是一种医药技术领域的药物分离方法，具体是从植物催吐萝芙木(Rauwolfia vomitoria Afz.)中提取育亨宾(yohimbine)、阿吗灵(ajmaline)、蛇根碱(serpentine)、利血平(reserpine)、利新胺(rescinnamine)等5种生物碱的方法。
背景技术
[0002] 萝芙木是夹竹桃科萝芙木属植物，含有多种药效成分。催吐萝芙木是萝芙木的一种，从非洲引进，其中含有利血平、阿吗灵、育亨宾、蛇根碱等多种生物碱，这些生物碱可作为药物，临床上具有对多种疾病的治疗作用。
[0003] 经对现有技术文献检索发现，从萝芙木(包括催吐萝芙木)中提取药效成分，报道较多的是提取利血平，早期采用苯萃取，以后用大孔树脂提取。从催吐萝芙木中同时提取几种组分的报道，有提取利血平和育亨宾的研究，但提取出的育亨宾纯度较低(刘宇、冯蕾、赵凤生，药物生物技术，2008，15(5)：393-397)。还有从催吐萝芙木中同时提取利血平、利血匹林、萝芙木新碱的报道，但提取步骤较多，花费时间长(周雪晴、冯玉红、张冲、陈四利、林强，海南大学学报自然科学版，2008，26(2)：145-148)。
发明内容
[0004] 本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种从催吐萝芙木中一次最多可以提取5种生物碱的方法，用酸性乙醇浸提、大孔树脂吸附、弱酸性阳离子交换树脂提取、反相层析分离等技术相结合，提取出的生物碱均有较高的纯度。
[0005] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0006] 本发明提供一种从催吐萝芙木中提取多种生物碱的方法，即同时提取育亨宾、阿吗灵、蛇根碱、利血平、利新胺；具体包括如下步骤：
[0007] (1)取催吐萝芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，搅拌、浸提、过滤，得到浸提液，照此程序重复2-3次；
[0008] (2)将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液用非极性大孔吸附树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用40％乙醇洗脱，收集洗脱液(记为A1)，再用80％乙醇洗脱，收集洗脱液(记为B1)；
[0009] (3)将上述收集的两部分洗脱液A1和B1分别减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A1用弱酸性阳离子交换树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用50％乙醇洗脱，收集洗脱液(记为A2)；浓缩后的洗脱液B1用弱酸性阳离子交换树脂吸附，然后用水洗涤树脂，随后用50％乙醇洗脱，收集洗脱液(记为B2)；
[0010] (4)将上述收集的两部分洗脱液A2和B2分别用浓酸调节到pH 3左右，减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A2用C18反相层析介质吸附，然后用乙醇水溶液洗脱，分段收集洗脱液(记为A3)；浓缩后的洗脱液B2用C18反相层析介质吸附，然后用乙醇水溶液洗脱，分段收集洗脱液(记为B3)；
[0011] (5)将上述分段收集的洗脱液A3和B3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，将洗脱液A3中含育亨宾或阿吗灵并且纯度较高的部分分别合并；将洗脱液B3中含蛇根碱或利血平或利新胺并且纯度较高的部分分别合并；分别减压加热浓缩，至液体蒸干，加入有机溶剂结晶，得到育亨宾、阿吗灵、蛇根碱、利血平、利新胺的晶体。
[0012] 步骤(1)中所述的含酸的乙醇水溶液，含有10％-60％的水(体积百分比)，同时含有酸，酸的浓度为0.02-0.2mol/L，酸可以是硫酸、盐酸或乙酸；
[0013] 所述的浸提，每次加入的含酸的乙醇水溶液的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的3-10倍。
[0014] 步骤(2)中，将所得的浸提液合并，减压加热浓缩，浓缩后的浸提液在常温下用非极性大孔吸附树脂吸附，非极性大孔吸附树脂的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的40％-50％，然后用水洗涤树脂，水的体积为非极性大孔吸附树脂体积的1-5倍，随后用40％乙醇洗脱，40％乙醇的体积为非极性大孔吸附树脂体积的2-5倍，收集洗脱液A1，再用
80％乙醇洗脱，80％乙醇的体积为非极性大孔吸附树脂体积的2-5倍，收集洗脱液B1；
[0015] 所述的用水洗涤树脂，是用去离子水或纯净水从柱的进口通入柱内，再从柱的出口流出，洗涤时间为0.5-3h；
[0016] 所述的40％乙醇，其中含有体积百分比为59％的水及体积百分比为1％的盐酸；
[0017] 所述的80％乙醇，其中含有体积百分比为19％的水及体积百分比为1％的盐酸。
[0018] 步骤(3)中，将收集的两部分洗脱液A1和B1分别减压加热浓缩，浓缩后的洗脱液A1和B1分别在常温下用弱酸性阳离子交换树脂吸附，吸附每一部分洗脱液所用的弱酸性阳离子交换树脂的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的20％-30％，然后用水洗涤树脂，水的体积为弱酸性阳离子交换树脂体积的1-5倍，随后用50％乙醇洗脱，50％乙醇的体积为弱酸性阳离子交换树脂体积的3-5倍，收集洗脱液A2和B2；
[0019] 所述的用水洗涤树脂，是用去离子水或纯净水从柱的进口通入柱内，再从柱的出口流出，洗涤时间为0.5-2h；
[0020] 所述的50％乙醇，其中含有体积百分比为45％的水及体积百分比为5％的氨水。
[0021] 步骤(4)中，将收集的洗脱液A2和B2分别用浓酸调节到pH 3左右，减压加热浓缩；浓缩后的洗脱液A2在常温下用C18反相层析介质吸附，C18反相层析介质的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的10％-20％，然后依次用5％、10％、15％、20％、95％乙醇水溶液洗脱，乙醇水溶液的体积总和为C18反相层析介质体积的10-30倍，分段收集10-20份洗脱液A3；浓缩后的洗脱液B2在常温下用C18反相层析介质吸附，C18反相层析介质的体积mL为催吐萝芙木根部粉末干重g的10％-20％，然后依次用15％、20％、25％、30％、35％、40％、55％、95％乙醇水溶液洗脱，乙醇水溶液的体积总和为C18反相层析介质体积的10-30倍，分段收集10-20份洗脱液B3；
[0022] 所述的浓酸为浓硫酸或浓盐酸；
[0023] 所述的分段收集洗脱液，是将洗脱时间或洗脱体积分为若干段，每一段洗脱时间或洗脱体积内的洗脱液收集为1份。
[0024] 步骤(5)中所述的加入有机溶剂结晶，对于洗脱液A3中的育亨宾、阿吗灵或洗脱液B3中的蛇根碱，加入甲醇，搅拌使固体溶解，甲醇加入量能使固体全部溶解，但不宜过量，再加入乙醚，加入体积为甲醇体积的2-5倍，搅拌1-3h，于0-5℃放置10-20h，析出结晶，过滤或离心去除母液，得到结晶；对于洗脱液B3中的利血平或利新胺，加入乙酸乙酯，搅拌使固体溶解，乙酸乙酯加入量能使固体全部溶解，但不宜过量，再加入甲醇，加入体积为乙酸乙酯体积的2-5倍，搅拌1-3h，于0-5℃放置10-20h，析出结晶，过滤或离心去除母液，得到结晶；按以上步骤所得晶体放入40-50℃烘箱中烘5-10h，至恒重为止；
[0025] 步骤(5)中，分段收集的洗脱液A3和B3用高效液相色谱仪测定其中各种生物碱的含量，如果某种生物碱的纯度不够高，需要再次提纯，可以将洗脱液A3或B3中含有欲再次提纯的生物碱的洗脱液合并，作为A2或B2，按照步骤(4)再操作一次。
[0026] 以上所述的减压加热浓缩都是在温度45-65℃、真空度0.08-0.10M Pa的条件下进行，除特别说明的以外，一般将液体浓缩至原来体积的一半左右。
[0027] 本发明上述方法中，可以只取40％乙醇洗脱液A1进行所述步骤(3)、(4)、(5)中对应操作，依次得到A2、A3，以及最终的生物碱育亨宾、阿吗灵；也可以只取80％乙醇洗脱液B1进行所述步骤(3)、(4)、(5)中对应操作，依次得到B2、B3，以及最终的生物碱蛇根碱、利血平、利新胺。
[0028] 与现有技术相比，本发明将酸性乙醇浸提、大孔树脂吸附、弱酸性阳离子交换树脂提取、反相层析分离等技术相结合，同时提取育亨宾、阿吗灵、蛇根碱、利血平、利新胺5种生物碱，提取出的生物碱均有较高的纯度。
具体实施方式
[0029] 下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。以下实施例中没有详细说明的操作，可以采用现有技术中的常规操作。
[0030] 实施例1
[0031] 取干燥的催吐萝芙木根部粉末2500g，加入含0.025mol/L硫酸的50％乙醇溶液浸提，共浸提2次，两次浸提加入的液体体积分别为25000mL、12500mL，每次浸提时间均为2h，浸提时间歇搅拌，每次浸提后过滤。
[0032] 将2份浸提液合并，体积为31000mL，减压加热浓缩为16000mL，过滤。滤液通入装在柱内的1200mL HZ-818非极性大孔吸附树脂(华东理工大学华震科技有限公司制)进行吸附，共吸附20h。然后用1500mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用2400mL 40％乙醇溶液(含1％盐酸)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间4h。
[0033] 收集洗脱液，减压加热浓缩至840mL。浓缩液通入装在柱内的700mL D152弱酸性阳离子交换树脂(南开大学化工厂制)进行吸附，共吸附4h。然后用800mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用2100mL 50％乙醇溶液(含5％氨水)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间4h。
[0034] 收集洗脱液，用10mol/L硫酸调节pH为3，减压加热浓缩至1100mL。浓缩液通入装在柱内的500mL C18反相层析介质(日本YMC公司制)进行吸附，共吸附2h。然后依次用2000mL 5％乙醇溶液、4000mL 10％乙醇溶液、1000mL 15％乙醇溶液、1000mL 20％乙醇溶液、500mL 95％乙醇溶液(均含0.01％三氟乙酸)通入柱中进行洗脱，洗脱时间15h。洗脱液分为13份收集。
[0035] 分段收集的洗脱液经高效液相色谱仪测定，其中5％乙醇溶液洗脱的2份洗脱液中育亨宾含量较高，合并，体积1000mL。减压加热浓缩至干，加入10mL甲醇溶解固体，再加入40mL乙醚，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到育亨宾沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得育亨宾14mg，纯度52％。
[0036] 10％乙醇溶液洗脱的3份洗脱液中阿吗灵含量较高，合并，体积2700mL。减压加热浓缩至干，加入15mL甲醇溶解固体，再加入50mL乙醚，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到阿吗灵沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得阿吗灵406mg，纯度63％。
[0037] 实施例2
[0038] 催吐萝芙木浸提、非极性大孔树脂吸附与洗脱、弱酸性阳离子交换树脂吸附与洗脱、结晶与干燥的实施步骤与实施例1相同，不同之处在于：
[0039] C18反相层析收集的洗脱液中育亨宾含量较高的部分合并后，体积1000mL，减压加热浓缩至700mL，再通入装在柱内的500mL C18反相层析介质进行吸附，共吸附2h。然后依次用2000mL 5％乙醇溶液、2000mL 10％乙醇溶液、500mL 15％乙醇溶液、500mL 20％乙醇溶液、500mL 95％乙醇溶液(均含0.01％三氟乙酸)通入柱中进行洗脱，洗脱时间10h。洗脱液分为10份收集。
[0040] 经高效液相色谱仪测定，其中5％乙醇溶液洗脱的2份洗脱液中育亨宾含量较高，合并，体积800mL。结晶，得育亨宾6mg，纯度87％。
[0041] C18反相层析收集的洗脱液中阿吗灵含量较高的部分合并后，体积2700mL，减压加热浓缩至1500mL，再通入装在柱内的500mL C18反相层析介质进行吸附，共吸附2.5h。然后依次用2000mL 5％乙醇溶液、2000mL 10％乙醇溶液、500mL 15％乙醇溶液、500mL 20％乙醇溶液、500mL 95％乙醇溶液(均含0.01％三氟乙酸)通入柱中进行洗脱，洗脱时间10h。洗脱液分为10份收集。
[0042] 经高效液相色谱仪测定，其中10％乙醇溶液洗脱的2份洗脱液中阿吗灵含量较高，合并，体积700mL。结晶，得阿吗灵230mg，纯度90％。
[0043] 实施例3
[0044] 取干燥的催吐萝芙木根部粉末2500g，加入含0.025mol/L硫酸的50％乙醇溶液浸提，共浸提2次，两次浸提加入的液体体积分别为25000mL、12500mL，每次浸提时间均为2h，浸提时间歇搅拌，每次浸提后过滤。
[0045] 将2份浸提液合并，体积为30000mL，减压加热浓缩为15000mL，过滤。滤液通入装在柱内的1200mL HZ-818非极性大孔吸附树脂进行吸附，共吸附18h。然后用1500mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用2500mL 40％乙醇溶液(含1％盐酸)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间4h。再用3000mL 80％乙醇溶液(含1％盐酸)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间6h。
[0046] 收集80％乙醇溶液洗脱液，减压加热浓缩至680mL。浓缩液通入装在柱内的600mLD152弱酸性阳离子交换树脂进行吸附，共吸附4h。然后用800mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用3000mL 50％乙醇溶液(含5％氨水)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间
6h。
[0047] 收集洗脱液，用10mol/L硫酸调节pH为3，减压加热浓缩至1200mL。浓缩液通入装在柱内的500mL C18反相层析介质进行吸附，共吸附2h。然后依次用800mL 15％乙醇溶液、800mL 20％乙醇溶液、600mL 25％乙醇溶液、600mL 30％乙醇溶液、600mL35％乙醇溶液、600mL 40％乙醇溶液、600mL 55％乙醇溶液、500mL 95％乙醇溶液(均含有0.01％三氟乙酸)通入柱中进行洗脱，洗脱时间10h。洗脱液分为10份收集。
[0048] 分段收集的洗脱液经高效液相色谱仪测定，其中20％、25％、30％乙醇溶液洗脱的3份洗脱液中蛇根碱含量较高，合并，体积1600mL。减压加热浓缩至干，加入15mL甲醇溶解固体，再加入50mL乙醚，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到蛇根碱沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得蛇根碱780mg，纯度95％。
[0049] 35％乙醇溶液洗脱的1份洗脱液中利血平含量较高，体积600mL。减压加热浓缩至干，加入10mL乙酸乙酯溶解固体，再加入45mL甲醇，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到利血平沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得利血平107mg，纯度98％。
[0050] 40％乙醇溶液洗脱的1份洗脱液中利新胺含量较高，体积300mL。减压加热浓缩至干，加入10mL乙酸乙酯溶解固体，再加入45mL甲醇，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到利新胺沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得利新胺8mg，纯度98％。
[0051] 实施例4
[0052] 取干燥的催吐萝芙木根部粉末5000g，加入含0.05mol/L硫酸的50％乙醇溶液浸提，共浸提2次，两次浸提加入的液体体积分别为50000mL、25000mL，每次浸提时间均为2h，浸提时间歇搅拌，每次浸提后过滤。
[0053] 将2份浸提液合并，体积为60000mL，减压加热浓缩为30000mL，过滤。滤液通入装在柱内的2300mL HZ-818非极性大孔吸附树脂进行吸附，共吸附20h。然后用3000mL去离子水通入树脂柱中洗涤2h。用5000mL 40％乙醇溶液(含1％盐酸)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间5h，收集洗脱液。再用6000mL 80％乙醇溶液(含1％盐酸)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间6h，收集洗脱液。
[0054] 40％乙醇溶液的洗脱液减压加热浓缩至2400mL。浓缩液通入装在柱内的1200mLD152弱酸性阳离子交换树脂进行吸附，共吸附4h。然后用1400mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用4500mL 50％乙醇溶液(含5％氨水)通入树脂柱中进行洗脱，洗脱时间6h。
[0055] 收集洗脱液，用10mol/L硫酸调节pH为3，减压加热浓缩至2000mL。浓缩液通入装在柱内的500mL C18反相层析介质进行吸附，共吸附3.5h。然后依次用6000mL 5％乙醇溶液、3500mL 10％乙醇溶液、500mL 15％乙醇溶液、1000mL 20％乙醇溶液、1000mL 95％乙醇溶液(均含0.01％三氟乙酸)通入柱中进行洗脱，洗脱时间20h。洗脱液分为15份收集。
[0056] 分段收集的洗脱液经高效液相色谱仪测定，其中5％乙醇溶液洗脱的3份洗脱液中育亨宾含量较高，合并，体积3300mL。减压加热浓缩至干，加入20mL甲醇溶解固体，再加入80mL乙醚，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到育亨宾沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得育亨宾26mg，纯度55％。
[0057] 10％乙醇溶液洗脱的3份洗脱液中阿吗灵含量较高，合并，体积3500mL。减压加热浓缩至干，加入30mL甲醇溶解固体，再加入100mL乙醚，搅拌1h，于4℃放置12h。在4000r/min离心10min，得到阿吗灵沉淀，放入40℃烘箱中烘10h，得阿吗灵1027mg，纯度71％。
[0058] HZ-818非极性大孔吸附树脂用80％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液减压加热浓缩至1600mL。浓缩液通入装在柱内的1200mL D152弱酸性阳离子交换树脂进行吸附，共吸附4h。
然后用1500mL去离子水通入树脂柱中洗涤1.5h。用6000mL 50％乙醇溶液(含5％氨水)
