一种明日叶快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种以明日叶的叶片为外植体，在培养基上直接诱导产生丛生芽的快繁方法。该方法利用明日叶的叶片作为外植体，在离体条件下不经愈伤组织阶段直接诱导培养产生丛生芽，之后再利用丛生芽诱导生根长成完整植株。本发明避免了先产生愈伤组织这一过程，节约了诱导时间，减少了诱导突变率，为明日叶药用价值的开发提供了原料基础，具有很好的应用前景。

权利要求

1.一种明日叶快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取材：在明日叶成株上取新鲜叶片；

（2）灭菌：用流水冲洗叶片3～5min，然后用70%的酒精浸泡30～60s，再用0.1%的HgCl2浸泡灭菌5～7 min，不停晃动减少外植体上的气泡，使叶片完全浸在升汞中充分消毒，最后用无菌水冲洗6～8次；

（3）接种和诱导：将灭菌后的明日叶的叶片切成0.5～1.0cm的正方形碎片，接种在诱导丛生芽的MS培养基上，培养20d产生绿色的芽点，继续培养10～15d分化长成丛生芽，诱导丛生芽的MS培养基组成为：在MS培养基中加入1 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L 6-BA；

-2 -1

培养条件为：光照强度为40 μmol·m ·s ，光照时间16h，温度为25℃±2℃；

（4）生根：待丛生芽长至2～3cm，剪下，插入含有NAA 0.5mg/L的MS生根培养基中进行-2 -1生根培养，培养条件为：光照强度为40 μmol·m ·s ，光照时间16h，温度为25℃±2℃。

说明书

一种明日叶快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种明日叶快速繁殖方法，具体涉及一种以明日叶的叶片为外植体，在培养基上诱导直接产生丛生芽的方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

[0002] 明日叶（Angelica Keiskei Miq.Koidz), 别名明日草、八丈草，原产于日本的八丈岛和伊豆诸岛。经常食用明日叶的当地人，长寿者很多，而且到了高龄仍很健康，能与年轻人一样地劳动，所以又叫做长寿菜。近年来，明日叶中的许多成分逐渐地被了解，也因此受到瞩目，其中含有非常丰富的各种维生素、矿物质和微量元素，并且这些营养成分十分均衡。明日叶中含有的珍贵活性成分查尔酮有抗肿瘤、抗氧化以及清除自由基、抗胃溃疡、抗菌和抗炎等功效，所以明日叶的高食用价值和药用价值日益受到人们的重视。

[0003] 明日叶为多年生草本，株高50-100cm；叶互生，三出复叶，叶缘具细锯齿；花白色，伞形花序顶生，发芽率低，这也就使组织培养技术在明日叶的繁殖起到很大作用。

[0004] 中国专利（CN1930952）报道了一种明日叶的组织培养和快速繁殖方法，该方法包括：(1)采用明日叶的带芽茎段作为外植体，经消毒后进行接种培养，获得愈伤组织，诱导出丛生状芽；(2)通过丛生芽在培养基里的增殖，将其增殖约3倍；(3)将增殖所得的丛生芽切割，移接到生根培养基中促其生根，获得完整的再生植株；(4)将再生植株移栽到营养土中，得到明日叶的移栽苗。

[0005] 发明人通过大量实验发现，诱导明日叶的叶片直接产生丛生芽的方法减少了诱导愈伤组织环节，节约诱导时间，减少诱导突变率，具有很好的应用前景。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种简单、快捷并能减少诱导突变率的诱导明日叶高频产生丛生芽的方法，以克服现有技术的主要不足。

[0007] 本发明实现过程如下：

[0008] 一种明日叶快速繁殖方法，其利用明日叶的叶片作为外植体，在离体条件下不经愈伤组织阶段直接诱导培养产生丛生芽，之后再利用丛生芽诱导生根长成完整植株。

[0009] 上述明日叶快速繁殖方法具体包括以下步骤：

[0010] （1）取材：在明日叶成株上取新鲜叶片；

[0011] （2）灭菌：叶片用HgCl2浸泡灭菌；

[0012] （3）接种和诱导：将灭菌后的明日叶的叶片切成0.5～1.0cm的正方形碎片，接种在诱导丛生芽的MS培养基上，培养20d产生绿色的芽点，继续培养10～15d分化长成丛生芽；

[0013] （4）生根：待丛生芽长至2～3cm，剪下，插入含有NAA 0.5mg/L的MS生根培养基中进行生根培养。

[0014] 上述步骤（2）中，用流水冲洗叶片3～5min，然后用70%的酒精浸泡30～60s，再用0.1%的HgCl2浸泡灭菌5～7 min，不停晃动减少外植体上的气泡，使叶片完全浸在升汞中充分消毒，最后用无菌水冲洗6～8次。

[0015] 上述步骤（3）中，所述诱导丛生芽的MS培养基组成为：在MS培养基中加入1 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L 6-BA。

[0016] 上述步骤（3）和（4）过程中培养条件为：光照强度为40 μmol·m-2·s-1，光照时间16h，温度为25℃±2℃。

[0017] 本发明的优点与积极效果：本发明直接诱导明日叶的叶片产生丛生芽，避免了先产生愈伤组织这一过程，节约了诱导时间，减少了诱导突变率，为明日叶药用价值的开发提供了原料基础，具有很好的应用前景。

附图说明

[0018] 图1为实体显微镜下观察的芽点图片（20d）；

[0019] 图2为实体显微镜下观察的丛生芽图片（30d）；

[0020] 图3为在不同叶片外植体边缘直接长出丛生芽的图片。

具体实施方式

[0021] 实施例1

[0022] （1）取材：在生长良好的明日叶成株上取较为新鲜的完整叶片作为外植体。

[0023] （2）消毒：用流水冲洗叶片4 min，然后在超净工作台上用70%的酒精浸泡25 s，再用0.1%的HgCl2浸泡灭菌6分钟，不停晃动，目的在于减少外植体上的气泡，使叶片完全浸在升汞中，消毒充分，最后用无菌水冲洗7次。

[0024] （3）接种和诱导：将消毒好的明日叶的叶片切成0.5～1.0厘米的正方形碎片，接种在含有1 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L6-BA的MS诱导培养基上，20 d产生大量绿色芽点（图1），继续培养，芽点直接长成丛生芽（图2）。经过数据采集统计，明日叶外植体直接出芽率达-2 -1
到了90%以上（图3）。丛生芽诱导的培养条件为：光照强度40 μmol·m ·s ,光照时间
16h，温度为25℃±2℃。

[0025] （5）生根：待不定芽长至2-3cm，将诱导得到的不定芽剪下，插入MS+ NAA 1mg/L的-2 -1诱导生根培养基中进行培养，温度为25℃±2℃、光强为40 μmol·m ·s 、光照时间16h条件，生根率为100%。培养2-3周后即可获得大量组培苗。