治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物

摘要

一种治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物，它是由黄柏35～70份、苦参30～60份、椿皮30～60份、萹蓄20～40份、蛇床子10～35份、冰片1～2.5份重量份配比的中药原料按常规制剂方法制备的药剂。本发明药物经药效试验表明，本发明药物具有明显的体外抗菌作用，在体外能有效的杀灭和抑制生殖道感染常见病原菌；对家兔霉菌性阴道炎治疗效果明显，与模型对照组比较，本发明药物组阴道清洁度和治愈率得到显著的改善，且能明显改善兔霉菌性阴道炎的病理表现；具有明显的抗炎作用，能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓炎症、抑制小鼠肉芽肿的形成以及降低小鼠腹腔毛细血管通透性；具有一定的止痒作用。

权利要求

1.一种治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物，其特征在于它是由下述重量份配比的中药原料按常规制剂方法制备的药剂：黄柏 48份 苦参 44份椿皮 44份 萹蓄 36份蛇床子 20份 冰片 1.6份。

2.按照权利要求1所述的治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物，其特征在于：所说的外用药物是制剂学上所说的栓剂或片剂。

说明书

治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物

技术领域

[0001] 发明属于含有原料或其与不明结构之反应产物的医用配制品技术领域，具体涉及到来源于植物的材料。

背景技术

[0002] 细菌性阴道病是妇女育龄期最常见的阴道感染性疾病之一，除导致阴道炎症外，还可引起其他许多不良结局，如：不孕不育和流产、子宫内膜炎、盆腔炎、妇科手术后感染、绒毛膜羊膜炎、胎膜早破、早产等，其发病率居阴道炎之首，是一种严重威胁女性生殖健康的疾病。霉菌性阴道炎中有80％～90％为白色念珠菌感染，临床表现为白色豆腐渣样白带或水样白带，由于其特殊的瘙痒，灼痛等不适，给患者带来了很大的痛苦。近年来由于抗生素的广泛应用，或长期使用激素，或患有维生素缺乏、严重的传染性疾病、妊娠期阴道上皮细胞糖原含量增加、卵巢功能衰退、某些过敏或感染性疾病和其他消耗性疾病者更易感染，其发病率有上升趋势，是妇科门诊的常见病多发病。由于细菌性阴道病和霉菌性阴道炎发病率高，临床症状较重而严重影响妇女的身心健康、日常工作和生活。

[0003] 目前市场上治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物主要有熏洗坐浴或阴道灌洗的菌净洗剂、阴痒洗剂及中药复方煎剂熏洗坐浴，栓剂如苦参栓、复方苦参栓等。上述药物或因使用不便、或因携带不便、或因疗效不佳、或因价格昂贵等，使临床应用受限。

发明内容

[0004] 本发明所要解决的技术问题在于克服上述药物的缺点，提供一种临床上使用方便、携带方便、疗效确切、价格低廉且副作用小的治疗细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的外用药物。

[0005] 解决上述技术问题所采用的技术方案它是以下述质量份配比的中药原料按常规制剂方法制成的外用药物：

[0006] 黄柏35～70份 苦参30～60份

[0007] 椿皮30～60份 萹蓄20～40份

[0008] 蛇床子10～35份 冰片1～2.5份。

[0009] 制备本发明药物的优选中药原料质量份配比是：

[0010] 黄柏40～55份 苦参35～50份

[0011] 椿皮35～50份 萹蓄35～40份

[0012] 蛇床子20～30份 冰片1～1.8份。

[0013] 制备本发明药物的最佳中药原料质量份配比是：

[0014] 黄柏48份 苦参44份

[0015] 椿皮44份 萹蓄36份

[0016] 蛇床子20份 冰片1.6份。

[0017] 将上述各组分按常规方法制成的外用药物是制剂学上所说的栓剂或片剂或泡腾片剂。

[0018] 本发明配比中的黄柏功擅清热燥湿，解毒疗疮，擅治湿热带下阴痒之病症。苦参，清热燥湿，杀虫，长于治疗湿热所致赤白带下，阴痒阴肿，湿疹湿疮，皮肤瘙痒；椿皮，清热燥湿，收涩止带；萹蓄，杀虫，止痒；蛇床子，燥湿祛风，杀虫止痒；冰片，散热止痛。全方共奏清热燥湿，杀虫止痒之功。

[0019] 本发明药物栓剂的制备方法如下：

[0020] 1.将本发明配比中的黄柏、苦参、萹蓄、椿皮与蛇床子分别加5倍、4倍量85％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，静置24小时，弃去沉渣，减压干燥，粉碎，得干膏粉，备用；

[0021] 2.取栓剂基质混合脂肪酸甘油酯1440g，加热溶化，温度保持在40℃±2℃，加入上述干膏粉；另取冰片，加少量无水乙醇溶解，加入到基质中，混匀。浇模，制栓，即得。

[0022] 3.共制成栓剂1000粒，每粒重2.5g，每克含中药原料3.872g。

[0023] 本发明药物片剂的制备方法如下：

[0024] 1.同栓剂的制备方法1。

[0025] 2.取上述干膏粉，加入冰片80g，羧甲淀粉钠75g，微晶纤维素75g，淀粉290g，混匀，用80％乙醇溶液制软材，20目筛制粒，45～50℃烘干，20目筛整粒，混匀，压片，即得。

[0026] 3.共制成片剂1000片，每片重1.5g，每克含生药6.453g。

[0027] 本发明药泡腾片剂的制备工艺如下：

[0028] 1.同栓剂的制备方法1。

[0029] 2.将上述干膏粉均分为2份，一份加低取代羟丙纤维素60g，无水枸橼酸480g，用5％PVP乙醇溶液(内加吐温-80适量，加入处方量冰片的1/2用量)制软材，20目筛制粒，45～50℃烘干，20目筛整粒，制成酸粒；另一份药粉加低取代羟丙纤维素60g，碳酸氢钠
320g，淀粉20g，用5％PVP乙醇溶液(内加吐温-80适量，加入处方量冰片的1/2用量)制软材，20目筛制粒，45～50℃烘干，20目筛整粒，制成碱粒。酸粒和碱粒混匀，压片，即得。

[0030] 3.共制成泡腾片剂1000片，每片重2.0g，每克含生药4.84g。

[0031] 本发明药物经药效试验，结果表明：①本发明药物体外抗菌试验，测定了本发明药物在体外对阴道加特纳菌、白假丝酵母菌、大肠杆菌、藤黄微球菌等生殖道感染常见病原菌的标准菌株和临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。对9株标准菌株的MIC最小达0.156mg/ml，MBC最大为MIC的二倍。对330株生殖道感染常见病原菌临床分离株的MIC、MBC范围均在0.3125-20mg/ml之间，半数抑菌浓度(MIC50)为1.25-10mg/ml，90％抑菌浓度(MIC90)为5-20mg/ml。实验结果表明本发明药物在体外能有效的杀灭和抑制生殖道感染常见病原菌；②本发明药物对家兔霉菌性阴道炎治疗效果明显，与模型对照组比较，本发明药物组阴道清洁度和治愈率得到显著的改善，且能明显改善兔霉菌性阴道炎的病理表现；③本发明药物具有明显的抗炎作用，能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓炎症、抑制小鼠肉芽肿的形成以及降低小鼠腹腔毛细血管通透性；④本发明药物具有一定的止痒作用。总之，本发明药物具有显著的体外抗细菌、抗真菌作用，对家兔霉菌性阴道炎模型具有较好的疗效，具有明显的抗炎、止痒作用。

具体实施方式

[0032] 下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

[0033] 实施例1

[0034] 以生产本发明药物栓剂产品1000粒为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0035]

[0036] 其制备方法如下：

[0037] 将本发明配比中的黄柏、苦参、萹蓄、椿皮与蛇床子分别加5倍、4倍量85％乙醇回流提取二次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，静置24小时，弃去沉渣，减压干燥，粉碎；取栓剂基质混合脂肪酸甘油酯1440g，加热溶化，温度保持在40℃±2℃，加入上述干膏粉，另取冰片，加少量无水乙醇溶解，加入到基质中，混匀。浇模，制成1000粒，即得。每粒重2.5g，每克含中药原料3.872g。

[0038] 以生产本发明药物片剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0039]

[0040] 其制备工艺按本发明片剂的制备工艺进行。每片重1.5g，每克含中药原料6.453g。

[0041] 以生产本发明药物泡腾片剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0042]

[0043] 其制备工艺按本发明泡腾片剂的制备工艺进行。每片重2.0g，每克含中药原料4.84g。

[0044] 在本实施例的配比中，中药原料各组分的质量份为：

[0045] 黄柏48份 苦参44份

[0046] 椿皮44份 萹蓄36份

[0047] 蛇床子20份 冰片1.6份。

[0048] 实施例2

[0049] 以生产本发明药物栓剂产品1000粒为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0050]

[0051] 其制备工艺与实施例1栓剂的制备工艺相同。每粒重2.5g，每克含中药原料3.872g。

[0052] 以生产本发明药物片剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0053]

[0054] 其制备工艺按本发明片剂的制备工艺进行。每片重1.5g，每克含中药原料6.453g。

[0055] 以生产本发明药物泡腾片剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0056]

[0057] 其制备工艺按本发明泡腾片剂的制备工艺进行。每片重2.0g，每克含中药原料4.84g。

[0058] 在本实施例的配比中，中药原料各组分的质量份为：

[0059] 黄柏35份 苦参30份

[0060] 椿皮30份 萹蓄20份

[0061] 蛇床子10份 冰片1份。

[0062] 实施例3

[0063] 以生产本发明药物栓剂产品1000粒为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0064]

[0065] 其制备工艺与实施例1栓剂的制备工艺相同。每粒重2.5g，每克含中药原料3.872g。

[0066] 以生产本发明药物片剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0067]

[0068] 其制备工艺按本发明片剂的制备工艺进行。每片重1.5g，每克含中药原料6.453g。

[0069] 以生产本发明药物泡腾剂产品1000片为例所用的中药原料和辅料及其配比为：

[0070]

[0071] 其制备工艺按本发明泡腾片剂的制备工艺进行。每片重2.0g，每克含中药原料4.84g。

[0072] 在本实施例的配比中，中药原料各组分的质量份为：

[0073] 黄柏70份 苦参60份

[0074] 椿皮60份 萹蓄40份

[0075] 蛇床子35份 冰片2.5份。

[0076] 为了验证本发明药物对细菌性阴道病和霉菌性阴道炎的治疗效果，申请人采用本发明实施例1配比制备的本发明药物栓剂(试验时名称为立康妇炎栓)，委托西安交通大学医学院进行了药效学试验，各种试验情况如下：

[0077] 实验目的

[0078] 通过考察本发明药物体外抗菌作用、对家兔霉菌性阴道炎的影响、对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响、对小鼠肉芽肿炎症的影响、对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响以及对豚鼠组胺致痒的影响，明确本发明药物的药理药效学作用，为本品的临床研究提供实验依据。

[0079] 实验内容

[0080] 1实验用药品及主要实验设施

[0081] 1.1供试品

[0082] 1.1.1供试品

[0083] 本发明药物，清热燥湿，杀虫止痒。临床用于细菌性阴道病、霉菌性阴道炎湿热证。规格：2.5g/粒(9.68g生药/粒)。性状：棕褐色栓剂。批号：20100401。拟定临床用法与用量：洗净外阴部，将栓剂塞入阴道深部。每晚1粒。配制方法：37℃溶化。贮存方式：冷藏保存。提供单位：西安洲良明康生物医药科技有限公司。

[0084] 1.1.2供试品剂量设置依据

[0085] 以临床拟用剂量阴道给药，作为中剂量，2倍临床拟用剂量作为高剂量，0.5倍临床拟用剂量作为低剂量。

[0086] 1.2对照药品

[0087] 硝酸咪康唑栓，批号：100427335。规格：20mg×7粒/盒。复方吲哚美辛酊，批号：20090903。规格：60ml/瓶。吲哚美辛片(消炎痛片)，批号：A100901。规格：25mg/片。盐酸苯海拉明注射液，批号：1004122。规格：1ml:20mg。阴性对照品，0.9％氯化钠注射液，批号：A100712031。规格：500ml/瓶。

[0088] 1.3实验动物的饲养管理

[0089] 1.3.1实验室条件

[0090] 西安交通大学医学院实验动物中心，实验室温度：18～26℃，相对湿度：40～70％，光照条件：12小时/12小时明暗交替，通风情况：全新风。

[0091] 1.3.2饮水

[0092] 自由饮用生活饮用水。

[0093] 1.3.3饲料

[0094] 兔颗粒饲料以及鼠全价颗粒饲料，均由西安交通大学医学院实验动物中心提供。

[0095] 2本发明药物对阴道常见感染菌的体外抗菌试验

[0096] 2.1实验材料

[0097] 2.1.1实验样本

[0098] 本发明药物(同1.1)。

[0099] 2.2实验菌株

[0100] 2.2.1标准菌株共9株

[0101] 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC25923

[0102] 大肠埃希氏菌(Escherichia coli) ATCC25922

[0103] 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) ATCC27853

[0104] 阴道加特纳菌(Gardnrella vaginallis) ATCC14018

[0105] 白假丝酵母菌(Candida albicans) CMCC85021

[0106] 表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermdis) ATCC26069

[0107] 普通变形杆菌(Proteus vulgaris) CMCC49010

[0108] 粪链球菌(Streptococcus faecalis) CMCC32221

[0109] 藤黄微球菌(Micrococcus luteus) CMCC28006

[0110] 阴道加特纳菌标准菌株购自中国疾病预防中心微生物流行病研究所。其余标准菌株冻干品均购自中国预防医学科学院北京生物制品药品检定所中国医学细菌保藏中心。所有细菌菌株于-80℃冷冻保存，实验前复苏传代培养。

[0111] 2.2.2临床分离菌株 共330株

[0112] 大肠埃希菌 100株，编号：大肠001-大肠100

[0113] 表皮葡萄球菌 80株， 编号：表葡001-表葡080

[0114] 普通变形杆菌 50株， 编号：变形001-变形050

[0115] 阴道加特纳菌 32株， 编号：加001-加032

[0116] 白假丝酵母菌 38株， 编号：白念001-白念038

[0117] 藤黄微球菌 30株， 编号：藤黄001-藤黄030

[0118] 以上临床分离株为2006-2010年期间收集于西安交通大学医学院第一、第二附属医院检验科和陕西省医院检验科，均经Take II全自动数字细菌鉴定仪鉴定。-80℃冻存保藏，实验前复苏。

[0119] 2.3主要试剂及培养基

[0120] 米勒-海顿肉汤(Mueller-Hinton Broth，MHB)，上海中科昆虫生物技术开发有限公司。080707。

[0121] 米勒-海顿琼脂(Mueller-HintonAgar，MHA)，上海中科昆虫生物技术开发有限公司。080707。

[0122] 按说明书配制培养基，进行灭菌处理，4℃冰箱保存备用。

[0123] 2.4主要仪器

[0124] YXQ-LS-50 S II型立式蒸汽灭菌器，上海博讯实业有限公司医疗设备厂。

[0125] BIO1500-II-A2型生物安全柜，上海振梓创空气净化设备有限公司。

[0126] DHP-9162型电热恒温培养箱，上海一恒科学仪器有限公司。

[0127] 10-200μl可调微量移液器，Mettler Toledo公司。

[0128] G6型(孔径0.22μm)石棉超微滤器，Millipore公司。

[0129] 麦氏比浊管(0.5-5 McFarland)，温州康泰生物科技有限公司，201009-JC16。

[0130] TCP010096型96孔细胞培养板，BIOFIL公司。20100513。

[0131] 9cm一次性无菌培养皿，江苏康健医疗用品有限公司。20091005。

[0132] 2.5实验方法

[0133] 参照《卫生部药政局新药临床前研究指导原则》中“抗菌药体外抗菌实验原则”和《微生物学检验技术》，采用连续二倍梯度液体稀释法测定MIC，液体转染法测定MBC。对液体稀释法未测定出MIC的菌株采用琼脂平板稀释法测定MIC和MBC。

[0134] 2.5.1药液的配制

[0135] 称取本发明药物，置无菌三角瓶内，加入无菌蒸馏水，4℃浸泡过夜。置50℃水浴加热搅拌溶解，依次用四层无菌纱布、无菌滤纸滤去未溶解的残渣，用无菌蒸馏水定容，配成40mg/ml的药液。用孔径0.50μm超微滤器将药液过滤除菌。无菌药液分装后置4℃冰箱保存备用。

[0136] 2.5.2菌液配制

[0137] 将菌种用分离划线法传代接种于MHA平板，37℃24小时培养，挑选单个菌落传代于MHA斜面，置37℃24小时培养。挑取纯化的细菌培养物接种HMB，37℃24小时培养。肉汤培养物用麦氏浊度管比浊法进行细菌计数，用MHB调配成106CFU/ml菌液备用。

[0138] 2.5.3MIC、MBC测定

[0139] 将药液用MHB以20mg/ml浓度为起点进行二倍连续梯度稀释，各梯度浓度药液依次加到96孔细胞培养板，0.2ml/孔。加入浓度为106CFU/ml的实验菌液20μl/孔。同时设立细菌以及培养基对照。置37℃48小时培养，观察结果。能保持培养液清亮透明无细菌生长的最小药物浓度为最小抑菌浓度(MIC)。将无细菌生长孔的培养物吸取20μl孔孔对应接种于另一96孔培养板的不含药物的无菌MHB 0.2ml中，置37℃48小时培养。无细菌生长孔所对应的药物最小浓度为最小杀菌浓度(MBC)。

[0140] 2.6实验结果

[0141] 本发明药物对9株标准菌株的抗菌实验结果见表1，对330株临床分离菌的抗菌实验结果见表2。

[0142] 表1本发明药物对9株标准菌株的MIC和MBC(单位：mg/ml)

[0143]

[0144] 表1显示，本发明药物对实验所选的9株标准菌株均有较强的抑菌和杀菌作用，MBC与MIC值相同或为MIC的2倍。

[0145] 表2本发明药物对330株临床分离细菌的MIC、MBC(单位：mg/ml)

[0146]

[0147] 表2显示，本发明药物对330株生殖道常见感染菌临床分离均有明显的抑菌和杀菌作用。

[0148] 3本发明药物对兔霉菌性阴道炎的影响

[0149] 3.1实验材料

[0150] 供试品、对照品同1.1和1.2。实验菌株：白色念株菌，同2.2。

[0151] 3.2实验动物

[0152] 日本大耳白兔，一级，36只，2.0～3.0kg，雌性。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2008-008。全价兔颗粒饲料，自由饮用生活饮用水。

[0153] 3.3实验方法

[0154] 3.3.1分组与剂量设置

[0155] 本发明药物对兔霉菌性阴道炎影响实验分组及剂量设计见表3。

[0156] 表3本发明药物对家兔阴道真菌感染的影响试验分组及剂量设置

[0157]

[0158] 3.3.2造模

[0159] 将白色念珠菌于实验前2天接种于沙氏培养基中，37℃培养24小时后，并用菌落10
计数法测定其浓度，离心后用生理盐水调整浓度为5.0×10 CFU/ml，备用。

[0160] 将空白对照组常规饲养，另30只家兔用5号头皮针硅胶管涂抹无菌石蜡油后，缓10
慢插入阴道内5～8cm，注入浓度为5.0×10 CFU/ml的白色念珠菌悬液0.25ml于阴道内造模，每天一次。造模后第6天，取阴道拭子涂片后染色镜检，阴道洁度分级，进行细菌学检测，确定模型成立。

[0161] 3.3.3给药方法

[0162] 模型成立后，将造模的30只家兔随机分成5小组，每组6只，加空白对照组共6组，如表3。给药组按表3剂量分别给与对应的供试品，空白对照及模型对照组给与等体积栓剂基质，给药方法：将栓剂37℃溶化后用头皮硅胶管注入阴道5-8cm深处，每天一次连续给药7天。观察动物生长、活动和外阴洁净情况，检查阴道清洁度、进行细菌学检测及取阴道组织进行病理学检查。

[0163] 3.3.4判断标准

[0164] 阴道清洁度分级和阴道炎好转、治愈标准，参照《妇产科学》第5版统编教材；造模成功判断标准，参照《药理实验方法学》；治愈率及有效率的计算公式如下：

[0165] 治愈率(％)＝痊愈的动物数/各组总动物数×100

[0166] 有效率(％)＝好转的动物数/各组总动物数×100

[0167] 3.3.5数据处理方法

[0168] 数据进行X2检验。

[0169] 3.4实验结果

[0170] 3.4.1本发明药物对兔霉菌性阴道炎的影响

[0171] 3.4.1.1肉眼观察结果：造模后动物均出现明显的炎症反应：阴道外周充血、水肿、白色分泌物增多；空白对照组动物外阴清洁，无异常分泌物。经用药7天后，供试品组和阳性对照组动物阴道充血、水肿等均有不同程度的缓解，但模型组动物局部炎症反应仍较明显。

[0172] 3.4.1.2治疗后阴道清洁度变化及疗效判定：结果如表4所示。

[0173] 表4本发明药物对兔霉菌性阴道炎治疗前后阴道洁度变化和疗效结果(n＝6)[0174]

[0175] 注：与模型对照组比较，**P＜0.01。

[0176] 结果显示，治疗前除空白对照组外，其余各组阴道清洁度均为III或IV度，使用供试品本发明药物及阳性对照品硝酸咪康唑栓后，与模型对照组比较，阴道清洁度和治愈率得到明显的改善(P＜0.01)。

[0177] 3.4.1.3病理组织学检查结果：模型组家兔阴道上皮增厚，层次增多，上皮表面可见小片状上皮细胞坏死，并可见部分上皮细胞脱落，上皮间质及上皮下固有膜中可见较多的炎细胞浸润或灶状炎细胞浸润。供试品低剂量组家兔仅见阴道上皮表面少数上皮细胞变性，个别坏死、固有膜未见炎症反应。供试品中剂量组仅有一只家兔的阴道上皮粘膜下查见少许炎细胞浸润灶，上皮结构完整，未见上皮细胞脱落或坏死。高剂量组及阳性对照组家兔阴道上皮细胞结构完整，层次清楚，未见有明显炎性细胞浸润。

[0178] 3.4.2实验小结

[0179] 在本实验条件下，按照造模标准家兔白色念珠菌阴道炎模型成立，给药一周后，与模型对照组比较，本发明药物高、中、低剂量组及硝酸咪康唑栓阳性对照组治疗效果显著。

[0180] 4本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响

[0181] 4.1实验材料

[0182] 供试品、对照品同1.1和1.2。

[0183] 4.2主要实验仪器与试剂

[0184] 微量电子分析天平：型号：AL104，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。

[0185] 打孔器、手术剪、镊子。

[0186] 二甲苯，批号：080107，500ml/瓶，西安化学试剂厂。

[0187] 4.3实验动物

[0188] 健康白色昆明种小鼠60只，体重18-22g，雌雄各半。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2007-001。

[0189] 4.4实验方法

[0190] 4.4.1分组与剂量设置

[0191] 动物按性别分别采用完全随机法，分成6组，雌雄各半，参见表5。

[0192] 表5本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓炎症影响实验分组及剂量设计

[0193]

[0194] 4.4.2操作步骤

[0195] 将栓剂37℃溶化后，均匀地涂抹于本发明药物剂各剂量组小鼠双侧耳廓部，每次量约0.25ml，空白对照组和模型对照组分别涂抹等体积生理盐水，阳性对照组涂抹复方吲哚美辛。每日2次，连续给药7天，末次给药后30分钟，在各小鼠右耳均匀涂抹分析纯二甲苯50μl致炎(空白对照组在小鼠右耳均匀涂抹生理盐水50μl)，致炎后1小时脱颈椎处死小鼠，剪下左、右两耳，用直径8mm的打孔器沿左、右耳廓同一部位等面积打孔，冲下两侧耳片分别称重，记录。两耳片重量差值即为肿胀度，结果进行统计分析，并计算肿胀抑制率。

[0196]

[0197] 4.4.3数据处理方法

[0198] SPSS17.0统计分析软件进行t检验或方差分析。

[0199] 4.5实验结果

[0200] 4.5.1本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响

[0201] 结果见表6。

[0202] 表6本发明药物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

[0203]

[0204] 注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

[0205] 由表6结果可见，阳性对照复方吲哚美辛组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，与模型对照组比较，耳廓肿胀度的差异有显著性(P＜0.01)。本发明药物给药组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，与模型对照组比较，本发明药物9.68g/ml剂量组、4.84g/ml剂量组耳廓肿胀度的差异有显著性(P＜0.01或0.05)。

[0206] 4.5.2实验小结

[0207] 小鼠经7天局部给予本发明药物，高、中剂量组能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓炎症，表明本发明药物有一定的抗炎作用。

[0208] 5本发明药物对小鼠肉芽肿炎症的影响

[0209] 5.1实验材料

[0210] 供试品、对照品同1.1和1.2。

[0211] 5.1.1主要实验仪器与试剂

[0212] FA1104型微量电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司。

[0213] 滤纸片(直径约8mm、厚约1.5mm、重约1.9mg)，实验前干燥灭菌30分钟。

[0214] 5.1.2实验动物

[0215] 昆明小鼠，一级，60只，18～22g，雌性。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2007-001。

[0216] 5.2实验方法

[0217] 5.2.1分组与剂量设置

[0218] 由于本发明药物为阴道用栓剂，小鼠耳廓肿胀试验证明其有明显的局部抗炎作用，由于局部给药途径动物血药浓度较低，较难考查其全身抗炎作用，故增加一组动物灌胃给药，给药剂量为临床每日外用剂量。见表7。

[0219] 表7本发明药物对小鼠肉芽肿炎症的影响分组及剂量设计

[0220]

[0221] 5.2.2操作步骤

[0222] 5.2.2.1造模：在0.3％戊巴比妥钠麻醉下，将纸片分别植入60只动物左、右肩部皮下各1片，缝合。

[0223] 5.2.2.2给药方法：所有小鼠造模24小时后按体重随机分为6组。阴道给药方法为：用小鼠尾静脉注射固定器将小鼠固定，将栓剂于37℃溶化，眼科镊撑开小鼠阴道，用小注射器分次滴入溶化的栓剂，并保持倒立体位15分钟，将总给药量每日分3次给予，连续给药7天；灌胃给药每日一次。末次给药后30分钟处死动物，将纸片与肉芽组织一并摘出，于60℃干燥24小时称干重。干重减去纸片重量，即为肉芽净重。

[0224] 5.2.3数据处理方法

[0225] 采用SPSS17.0统计分析软件进行t检验或方差分析。

[0226] 5.3实验结果

[0227] 5.3.1本发明药物对小鼠肉芽肿炎症的影响

[0228] 结果见表8。

[0229] 表8本发明药物对小鼠肉芽肿炎症的影响

[0230]

[0231] 注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

[0232] 由上表结果可见，消炎痛组对小鼠肉芽肿炎症有明显的抑制作用，肉芽净重与模型对照组比较，差异有显著性(P＜0.01)。本发明药物给药组对小鼠肉芽肿有明显的抑制作用，肉芽净重与模型对照组比较，本发明药物高剂量阴道给药组及中剂量灌胃给药组的差异有显著性(P＜0.05)。

[0233] 5.3.2实验小结

[0234] 在本实验条件下，小鼠经7天给予本发明药物，高剂量阴道给药组及中剂量灌胃给药组能显著抑制小鼠肉芽肿的形成，表明本发明药物有一定的抗炎作用。

[0235] 6本发明药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

[0236] 6.1实验材料

[0237] 供试品、对照品同1.1和1.2。

[0238] 6.1.1主要试验仪器与试剂

[0239] Stat Fax 2100型分光光度计：生产厂家：Awareness Technology Inc.，Palm City，FL，USA。

[0240] 伊文思蓝：批号：WC20090209，提供单位：国药集团化学试剂有限公司。

[0241] 醋酸：批号：20100329，提供单位：广东光华化学厂有限公司。

[0242] 6.1.2实验动物

[0243] 健康白色昆明种小鼠60只，体重18～22g，雌性。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2007-001。

[0244] 6.2实验方法

[0245] 6.2.1分组与剂量设置

[0246] 小鼠耳廓肿胀试验证明本品有明显的局部抗炎作用，由于局部给药途径动物血药浓度较低，较难考查其全身抗炎作用，故增加一组动物灌胃给药，给药剂量为临床每日外用剂量。见表9。

[0247] 表9本发明药物对小鼠对腹腔毛细血管通透性的影响分组及剂量设计[0248]

[0249] 6.2.2操作步骤

[0250] 阴道给药方法为：用自制小鼠尾静脉注射固定器将小鼠固定，将栓剂于37℃溶化，眼科镊撑开小鼠阴道，用小注射器分次滴入溶化的栓剂，并保持倒立体位15分钟，将总给药量每日分3次给予，连续给药7天；灌胃给药每日一次，模型对照组给予等体积的生理盐水。末次给药60分钟后，各小鼠尾静脉注射0.5％伊文思蓝溶液10ml/kg，随即每组腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，25分钟后脱颈椎处死动物，打开腹腔，用6ml生理盐水分数次冲洗腹腔，用吸管吸出全部洗液，3000转/分钟离心15分钟，取上清液用分光光度计于590纳米处比色测定吸光度值(OD)，结果进行统计学分析。

[0251] 6.2.3数据处理方法

[0252] SPSS17.0统计分析软件进行t检验或方差分析。

[0253] 6.3实验结果

[0254] 6.3.1本发明药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

[0255] 结果见表10。

[0256] 表10本发明药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

[0257]

[0258] 注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

[0259] 上表结果表明，阳性药物能明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性，与模型对照组比较，差异有显著性(P＜0.01)。本发明药物给药组对小鼠腹腔毛细血管通透性有明显的降低作用，其OD值与模型对照组比较，本发明药物高、中剂量阴道给药组及中剂量灌胃给药组的差异均有显著性(P＜0.01或P＜0.05)。

[0260] 6.3.2实验小结

[0261] 在本实验条件下，对小鼠给予本发明药物7天，高、中剂量阴道给药组、中剂量灌胃给药组均能显著降低腹腔毛细血管通透性，表明本发明药物具有一定的抗炎作用。

[0262] 7本发明药物对豚鼠组胺致痒的影响

[0263] 7.1实验材料

[0264] 供试品、对照品同1.1和1.2。

[0265] 7.2实验动物

[0266] 豚鼠，一级，50只，180-220g，雌、雄各半。由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(陕)2008-008。

[0267] 7.3实验方法

[0268] 7.3.1分组与剂量设置

[0269] 动物按性别分别采用完全随机法，分成5组，每组10只，雌雄各半，各组给药剂量参见表11。

[0270] 表11本发明药物止痒试验分组及剂量设计

[0271]

[0272] 7.3.2操作步骤：

[0273] 实验前1天给各组豚鼠右后足背剃毛，局部按上表设计剂量涂抹药1次，0.15ml/2
足。实验当日，用粗砂纸将豚鼠右后足背剃毛处轻轻擦伤，面积约1cm，局部再涂药1次。末次给药10分钟后，每隔3分钟依次由低浓度到高浓度，向每只豚鼠创面涂抹组胺0.025ml/-4 -4 -4 -4 -4 -4
只，组胺浓度依次为1.0×10 ，2.0×10 ，3.0×10 ，4.0×10 ……13×10 ，14×10 ，-4
15×10 。当豚鼠出现瘙痒反应，即舔右后足创面部位，或至最高浓度仍未出现瘙痒反应为止。累积每只豚鼠舔右后足时所给予的组胺总量(即豚鼠耐受的组胺量)作为豚鼠的致痒阈，结果进行统计学分析。

[0274] 7.3.3数据处理方法

[0275] SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析。

[0276] 7.4实验结果

[0277] 7.4.1本发明药物对豚鼠组胺致痒的影响

[0278] 结果见表12。

[0279] 表12本发明药物对组胺致痒作用的影响

[0280]

[0281] 注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

[0282] 上表结果表明，盐酸苯海拉明注射液对豚鼠组胺致痒有明显的止痒作用，与模型对照组比较，差异有显著性(P＜0.01)。本发明药物给药组对豚鼠组胺致痒有明显的止痒作用，与模型对照组比较，本发明药物高剂量组和中剂量组差异有显著性(P＜0.01)。

[0283] 7.4.2实验小结

[0284] 在本实验条件下，对小鼠给予本发明药物高剂量组和中剂量组对组胺致痒有显著的抑制作用，表明本发明药物具有一定的止痒作用。

[0285] 讨论与实验结论

[0286] 细菌性阴道病、霉菌性阴道炎是妇科临床常见病、多发病，纯天然的中药外用栓剂对其具有确切的疗效，同时以其较低的毒副作用而日益受到广泛关注。本发明药物正是针对上述病症开发而成的一种妇科外用栓剂。

[0287] 通过本次药理试验研究，结果表明：①本发明药物体外抗菌试验，测定了本发明药物在体外对阴道加特纳菌、白假丝酵母菌、大肠杆菌、藤黄微球菌等生殖道感染常见病原菌的标准菌株和临床分离株的MIC和MBC。对9株标准菌株的MIC最小达0.156mg/ml，MBC最大为MIC的二倍。对330株生殖道感染常见病原菌临床分离株的MIC、MBC范围均在0.3125-20mg/ml之间，MIC50为1.25-10mg/ml，MIC90为5-20mg/ml。实验结果表明本发明药物在体外能有效的杀灭和抑制生殖道感染常见病原菌；②本发明药物对家兔霉菌性阴道炎