一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法

摘要

一种丹红注射液质量控制方法，使用高效液相色谱法测定丹红注射液待测品指纹图谱并采用夹角余弦、相关系数、比率定性3种算法计算丹红注射液指纹图谱定性相似度；计算P值、M值得到丹红注射液指纹图谱定量相似度。同时，建立了丹红注射液8种有效成分含量测定方法。最终以HPLC测定丹参素钠、原儿茶醛含量大于350μg/mL，定性相似度大于0.95、定量相似度P在0.80~1.20之间，M在0.90~1.10之间作为质控标准控制丹红注射液的质量。通过指纹图谱定性定量判别与多指标定量分析相结合，进一步确保丹红注射液质量的可靠性和安全性。

权利要求

1.一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法，其特征在于包括如下步骤：（1）丹红注射液HPLC指纹图谱的建立和测定

①丹红注射液对照样品溶液的制备：

精密移取丹红注射液2 mL，置于10 mL量瓶中，用体积比为50:50的乙腈-0.5%甲酸溶液定容至刻度，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得；

②丹红注射液成品指纹图谱的测定：

精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，得到丹红注射液对照指纹图谱，色谱条件：十八烷基硅烷键和硅胶为填料，梯度洗脱，流速0.5~1.5 mL/min；流动相：A为0.5%甲酸水溶液，B为乙腈；采用程序可变波长扫描；柱温20~40 ℃；

（2）丹红注射液HPLC多指标含量测定方法的建立和测定

①丹红注射液对照样品溶液的制备：

精密称取丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量，置于量瓶中，用体积比为50:50的乙腈-0.5%甲酸溶液定容至刻度，摇匀，过滤，即得对照品溶液；

②丹红注射液供试品溶液的制备：

精密移取丹红注射液2 mL，置于10 mL量瓶中，用体积比为50:50的乙腈-0.5%甲酸溶液定容至刻度，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得；

③丹红注射液供试品溶液的测定：

精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，得到丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A含量，色谱条件：十八烷基硅烷键和硅胶为填料，梯度洗脱，流速0.5~1.5 mL/min；流动相：A为0.5%甲酸水溶液，B为乙腈；

采用程序可变波长扫描；柱温20~40 ℃；

（3）将所述的待测产品的指纹图谱与HPLC含量测定结果结合，测定8种有效成分含量采用matlab7.11.0对得到的指纹图谱数据进行处理，计算不同批次样品指纹图谱与对照指纹图谱之间的夹角余弦、相关系数、比率定性相似度以及定量相似度，同时，测定丹红注射液中以丹参素为主的8种有效成分含量；

步 骤（1）、（2）中 所 述 的 色 谱 条 件 为：Agilent Zorbax C18，5 μm，10 mm

4.6 mm；流动相A为0.5%甲酸水溶液，流动相B为乙腈，柱温35 ℃，梯度洗脱程序为：

0-15 min，98%-90% A；15-20 min，90%-83% A；20-45 min，83%-72% A；45-48 min，72%-40% A；程序可变波长扫描条件为：0-18 min，280 nm；19-48 min，326 nm。

2.根据权利要求1所述的一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法，其特征在于：所述的步骤（1）中指纹图谱方法应用于丹红注射液成品定性相似度测定中的19个共有特征峰，其峰面积之和占总峰面积90%以上，其中2号峰丹参素钠为参照峰。

3.根据权利要求1所述的一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法，其特征在于：步骤（3）所述的指纹图谱定性相似度计算采用夹角余弦SF、比率定性相似度及相关系数综合评价，计算P、M值得到定量相似度。

4.根据权利要求3所述的一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法，其特征在于：所述的定量相似度P 值的计算公式为 ，其中SF为夹角余弦值，R 为样品指纹图谱共有指纹峰总积分面积与对照指纹图谱的共有指纹峰总积分面积的比值；定量相似度M值的计算公式为 ，其中n为共有峰数量， 为样品与对照指纹图谱中第i 个特征峰的积分面面积之间的比值。

5.根据权利要求3所述的一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法，其特征在于：所述的指纹图谱相似度计算采用Matlab7.11.0进行数据处理。

说明书

一种丹红注射液中8种有效成分含量测定方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种中药复方制剂丹红注射液质量控制方法，具体地说是用指纹图谱结合高效液相色谱（HPLC）多指标成分含量测定的方法来控制丹红注射液的质量。

背景技术

[0002] 丹红注射液系由丹参、红花两味药材经提取、浓缩、醇沉、水沉、制剂等工艺制成的中药注射剂，主要用于治疗心绞痛、心肌梗塞、动脉粥样硬化等心脑血管疾病。其具有起效快、疗效好等功效，目前已广泛应用于临床。但由于原药材质量不均、工况波动等因素，常导致产品批次间差异，难以实现丹红注射液质量稳定、均一可控的目标。因此，如何建立一种较综合、全面的丹红注射液质量评价方法，从而保证产品质量的进一步升级，显得十分重要。

[0003] 现行《部颁》标准对丹红注射液质量评价除常规制剂检查项目外，含量测定项只要求总黄酮和注射剂中丹参素钠和原儿茶醛等几个指标成分。总黄酮含量测定采用亚硝酸钠——硝酸铝显色法，而注射液中酚酸类化合物，如丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B等均对该显色方法有响应，方法专属性不强，无法真实反映注射液中主要药效群体含量。此外，丹红注射液液相含量测定也只针对其中丹参素钠、原儿茶醛等一两个化学成分进行表征和控制。然而，中药往往是由众多化学组分所组成的复杂物质体系，传统的测定一个或几个化学成分含量的方法无法对中药质量做出整体分析。

[0004] 以指纹图谱作为中药提取物及其制剂的质量控制方法，目前已成为国际共识。美国食品药品管理局（FDA）允许中草药保健品申报资料中提供色谱指纹图谱；世界卫生组织（WHO）在1996年草药评价指导原则中也规定，如果草药的活性成分不明确，可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量一致；欧共体（EU）在草药质量指南中亦称，单靠某种有效成分考察质量的稳定性是不够的，因为草药及其制剂是以整体为活性物质。2001年，国家药品监督管理局颁布《中药注射液及指纹图谱研究的技术要求》（暂行）要求将指纹图谱检测指标及技术要求作为质量标准的单列项目，从而对中药质量控制方法进行了有益补充。中药指纹图谱的建立不仅能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类和数量，进而对药品质量进行整体描述和评价，同时，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。

[0005] 目前，中药指纹图谱研究比较主流的方法是色谱法包括薄层色谱法、液相色谱法、气相色谱法等。薄层色谱由于重现性及精密度差，主要用于中药的鉴别；气相色谱主要用于分析易挥发性化学成分中药；而液相色谱由于其分析效能高、重现性好、灵敏度高等特点在中药指纹图谱中得到最为广泛的应用。特别是近年来，多种技术的联用，更是使指纹图谱的分析手段从单维走向多维。多维的指纹图谱分析技术主要有HPLC/MS/MS和HPLC/DAD，HPLC/MS/MS因价格昂贵，在中药质量控制中推广尚存在一定困难；而HPLC/DAD不仅简单，易于普及，同时能够尽可能多的提供中药色谱和光谱信息，十分适合于指纹图谱分析。

[0006] 在实际应用领域，指纹图谱作为一种综合、全面的质量控制技术已有相关专利，如（CN102323345.2，CN201110073973.4，CN201110072539.4，CN201010108838.4）。目前，指纹图谱定性相似度主要采用夹角余弦算法，该法的原理是将每个样品指纹图谱看做一个向量 计算供试品指纹向量和对照指纹向量 之间的夹角余弦值，但该法不具有定量性质，同时存在着大峰掩盖小峰问题；程翼宇等（程翼宇等，化学学报，2002，60(17)：2018）提出采用相关系数法，其公式为 相
关系数法可以从整体上判断指纹图谱的相似度，但该法经常存在对样品不敏感，计算结果相似度偏高的问题；孙国祥（孙国祥等，药学学报，2007，42(1)：75）在此基础上提出了一种更为优秀的评价方法，即对对照指纹图谱 作 样品 作
计算 与 间夹角余弦值，该方法的优点在于能够消除大峰的影响，对各峰具有等权性。定量相似度方面，孙国祥等也提出了一种计算定量相似度P(P＝SF·R，其中R为样品与对照指纹图谱共有指纹峰总积分面积之间的比值；SF为夹角余弦值)的方法。该法在用于评价指纹图谱定量相似度时，虽然考虑了不同组分的比例，但只在SF较低时影响明显。定量相似度 其中 为样品与对照指纹图谱中第i个特征峰的积分面面积之间的
比值)则将每个共有峰看作相对独立的整体，通过计算样品全部共有峰与对照指纹图谱特征峰接近程度，是一种更为优秀的比较方法。

[0007] 此外，对注射液中多指标活性成分的定量测定，避免了传统的单独测定一个或两个有效成分的局限，能够更大程度地反应样品中其他多种有效成分信息；同时，对多种成分定量，进一步制定其含量限度标准，对质量控制的要求也更进了一步，无疑有助于的产品的进一步质量升级。

[0008] 因此，为保证丹红注射液产品的整体质量，本发明采用定性、定量指纹图谱技术与多指标有效成分含量测定相结合，建立一种丹红注射液全面的质量控制方法，同时建立系统的质控标准和质控参数，达到指纹图谱的可操作、可控、稳定和可量化，使质控更加准确合理，从而实现对丹红注射液成品的质量严格控制。

发明内容

[0009] 本发明的目的是提供一种丹红注射液质量控制方法，通过此测定方法，可以更好地控制丹红注射液的产品质量。

[0010] 本发明是通过下列步骤实现的：

[0011] （1）丹红注射液HPLC指纹图谱的建立和测定

[0012] ①丹红注射液对照样品溶液的制备：

[0013] 取丹红注射液2mL，置于10mL量瓶中，用乙腈-0.5%甲酸溶液（50:50，v/v）定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

[0014] ②丹红注射液对照指纹图谱的测定：

[0015] 精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，得到丹红注射液对照指纹图谱，色谱条件：十八烷基硅烷键和硅胶为填料，梯度洗脱，流速0.5-1.5mL/min；流动相：A为0.5%甲酸水溶液，B为乙腈；采用程序可变波长扫描；柱温20-40℃。

[0016] 优选的指纹图谱色谱条件为：Agilent Zorbax C18（5μm，10mm×4.6mm）；流动相A为0.5%甲酸水溶液；流动相B为乙腈；柱温35℃；梯度洗脱程序为：0-15min，98%-90%A；15-20min，90%-83%A；20-45min，83%-72%A；45-48min，72%-40%A；程序可变波长扫描条件为：0-18min，280nm；19-48min，326nm。

[0017] （2）丹红注射液HPLC多指标含量测定方法的建立和测定

[0018] ①丹红注射液对照样品溶液的制备：

[0019] 称取丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A，置于量瓶中，用乙腈-0.5%甲酸溶液（50:50，v/v）定容至刻度，摇匀，过滤，即配得对照品溶液；

[0020] ②丹红注射液供试品溶液的制备：

[0021] 取丹红注射液2mL，置于10mL量瓶中，用乙腈-0.5%甲酸溶液（50:50，v/v）定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

[0022] ③丹红注射液供试品溶液的测定：

[0023] 精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定，即得到丹红注射液中丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A含量。色谱条件：十八烷基硅烷键和硅胶为填料，梯度洗脱，流速0.5-1.5mL/min；流动相：A为0.5%甲酸水溶液，B为乙腈；采用程序可变波长扫描；柱温20-40℃。

[0024] 优选的指纹图谱色谱条件为：Agilent Zorbax C18（5μm，10mm×4.6mm）；流动相A为0.5%甲酸水溶液；流动相B为乙腈；柱温35℃；梯度洗脱程序为：0-15min，98%-90%A；15-20min，90%-83%A；20-45min，83%-72%A；45-48min，72%-40%A；程序可变波长扫描条件为：0-18min，280nm；19-48min，326nm。

[0025] （3）将所述的待测产品的指纹图谱与HPLC含量测定结果结合，综合评价注射液产品质量。

[0026] 采用matlab7.11.0对得到的指纹图谱数据进行处理。计算不同批次样品指纹图谱与对照指纹图谱之间的夹角余弦、相关系数以及比率定性相似度以及定量相似度，同时测定以丹参素为主的8种有效成分含量，根据结果对注射液质量做出评价。

[0027] 其中，定量相似度计算P值和M值作为评价指标，所述的P值的计算公式为P＝SF·R，其中SF为夹角余弦值，R为样品指纹图谱共有指纹峰总积分面积与对照指纹图谱的共有指纹峰总积分面积的比值；定量相似度M值的计算公式为 其中n为共有峰数量，为样品与对照指纹图谱中第i个特征峰的积分面面积之间的比值。

[0028] 本发明中，指纹图谱最终选取注射液成品中的19个共有特征峰，峰面积占宗峰面积90%以上，其中2号峰（丹参素钠）为参照峰。

[0029] 最终，质量评价的标准以HPLC含量测定丹参素钠、原儿茶醛的含量总和大于0.35mg/mL，夹角余弦、相关系数、比率定性相似度均大于0.95，定量相似度P在0.80～
1.20范围内，则认为所述的丹红注射液待测产品的质量合格。

[0030] HPLC含量测定结果中丹参素钠、原儿茶醛的含量总和大于1.2mg/mL，夹角余弦、相关系数、比率定性相似度均大于0.97，定量相似度P在0.90～1.10之间，M在0.90～1.10之间，认为所述的丹红注射液批次较为稳定，质量最佳。

[0031] HPLC含量测定结果满足（1）丹参素钠、原儿茶醛的含量总和小于0.35mg/mL；（2）定性指纹图谱相似度低于0.95；（3）P值>1.20或<0.80；（4）M值>1.10或<0.90，任一样品符合两条及以上，则判断所述的丹红注射液产品质量不合格。

[0032] 本发明的有益之处：

[0033] （1）采用多维的HPLC-DAD联用技术建立丹红注射液指纹图谱，该发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等特点。

[0034] （2）采用程序可变波长扫描建立丹红注射液指纹图谱，可以在一张图谱中获取更为丰富的有效成分信息。

[0035] （3）采用指纹图谱定性及定量分析方法。定性指纹图谱全面综合考虑了丹红注射液产品整体质量，避免了单纯测定一两个化学指标成分含量所带来的注射液质量的片面性；采用的定量相似度评价能够在一定程度上反映注射液中有效成分的量比关系。质控过程采用定性和定量双重指标判别，对产品的质量提出了更高的要求。

[0036] （4）采用上述相同的分析方法建立丹红注射液中8种有效成分定量分析方法，为丹红注射液的最终质量提供了更为可靠的技术保障。

附图说明

[0037] 图1是丹红注射液中8种有效成分含量测定的HPLC图。

[0038] 图2是丹红注射液指纹图谱中19个共有峰色谱图。

[0039] 图3是15批丹红注射液指纹图谱HPLC图。

[0040] 图4是15批丹红注射液采用夹角余弦计算相似度结果。

[0041] 图5是丹红注射液夹角余弦、相关系数和比率定性相似度评价比较图。

[0042] 图6是丹红注射液夹角余弦值和定量相似度P值和M值评价结果比较图。

[0043] 图7是丹红注射液定量相似度P值和定性相似度（夹角余弦）结果比较图。

具体实施方式

[0044] 本发明结合附图和实施例作进一步的说明。

[0045] 实施例1：丹红注射液指纹图谱制定

[0046] 1.1仪器与试剂

[0047] Agilent1200RRLC（含在线真空脱气机，高压二元梯度泵，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器（DAD），chemstaion色谱工作站）；乙腈及甲酸均为色谱纯；超纯水；15批丹红注射液（山东菏泽步长制药有限公司，批号（10mL）：101149、101150、110931、
110932、110933、110934、110935、110936、101171、101170、101165、101167、101145、101147、
101157）。

[0048] 1.2丹红注射液对照样品溶液的制备

[0049] 精密移取丹红注射液2mL，置于10mL量瓶中，用乙腈-0.5%甲酸溶液（50:50，v/v）定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

[0050] 1.3液相色谱条件

[0051] 色谱条件：Agilent Zorbax C1（8 5μm，10mm×4.6mm），梯度洗脱，流速1mL/min；流动相：A为0.5%甲酸水溶液，B为乙腈；采用程序可变波长扫描；柱温35℃。梯度洗脱程序为：0-15min，98%-90%A；15-20min，90%-83%A；20-45min，83%-72%A；45-48min，72%-40%A；程序可变波长扫描条件为：0-18min，280nm；19-48min，326nm。

[0052] 1.4特征峰的选取

[0053] 选取了19个特征峰，丹参素钠峰(2号峰)在方法学验证中较为稳定，为此选取其做对照峰。选取的19个特征峰按面积归一化法计算占总色谱峰面积90%以上。

[0054] 1.5方法学考察

[0055] 仪器精密度试验：任取一批样品制备供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样5次，以丹参素钠为参比计算保留时间和峰面积比值，得到19个共有峰峰面积比值RSD值在0.04～2.57%，保留时间比值在0.04～0.22%，表明该方法精密度良好。

[0056] 重复性试验：取任一批丹红注射液，按1.2项方法，平行制备5份供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析。以丹参素钠为参比计算各保留时间和峰面积比值，得到19个共有峰峰面积比值RSD在0.17～1.67%，保留时间比值RSD在0.01～0.13%，结果表明该方法重复性良好。结果参见表1。

[0057] 稳定性试验：对同一份丹红注射液供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、8、12h测定一次，以丹参素钠为参比计算保留时间和峰面积比值，得到19个共有峰峰面积比值RSD值在0.15～7.09%，保留时间比值在0.08～1.24%，说明丹红注射液在12h内较为稳定，满足测定需要。结果参见表1。

[0058] 表1

[0059]

[0060]

[0061] 1.6丹红注射液指纹图谱的制定

[0062] 精密吸取供试品溶液5μL注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图。

[0063] 将15批丹红注射液待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算识别两者所具有的共有峰数量，采用夹角余弦算法计算定性相似度，相似度大于0.95，则认为注射剂合格，相似度大于0.97，则认为注射液批次稳定，质量较佳。由图4可以看出丹红注射液成品指纹图谱相似度基本稳定在0.98以上，说明注射液质量较为稳定可靠。结果参见表2。

[0064] 表2

[0065]

[0066]

[0067] 实施例2：

[0068] 按照实施例1的方法，区别之处在于计算相关系数用于评价指纹图谱相似度。

[0069] 将15批丹红注射液待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算识别两者所具有的共有峰数量，相似度大于0.95，则认为注射剂合格，相似度大于0.97，则认为注射液批次稳定，质量较佳。结果发现，对于相似度>0.990以上的，相关系数算法得到的相似度和夹角余弦值十分接近，然而在相似度较低的样品中计算得到的相似度值差异明显。参见表3。

[0070] 表3

[0071]

[0072] 实施例3：

[0073] 按照实施例1的方法，区别之处在于计算比率定性相似度，即对对照指纹图谱 作样品 作 计算 与 间夹角余弦值。相似度大于0.95，则认为注射剂合格，相似度大于0.97，则认为注射液批次稳定，质量较佳。结果参见表4。

[0074] 表4

[0075]

[0076] 实施例4：

[0077] 按照实施例1的方法，区别之处在于计算含量相似度P(P＝SF·R，其中R为样品指纹图谱共有指纹峰总积分面积与对照指纹图谱的共有指纹峰总积分面积的比值；SF为夹角余弦值)。相似度介于0.80～1.20，则认为注射剂合格；相似度介于0.90～1.10，则认为注射液批次稳定，质量较佳；相似度>1.20或<0.80的样品，需同其他指标共同评价质量是否合格，定量相似度评价结果见图5。

[0078] 实施例5：

[0079] 按照实施例1的方法，区别之处在于计算含量相似度 其中 为样品与对照指纹图谱中第i个特征峰的积分面面积之间的比值；n为共有峰数目)。相似度介于0.90～1.10，则认为注射剂合格；相似度>1.10或<0.90的样品，需结合其他指标共同评价是否合格，定量相似度评价结果见图5。

[0080] 实施例5：HPLC-DAD测定丹红注射液8种活性成分含量

[0081] 按照实施例1的方法，区别之处在于对照品溶液的制备和方法学考察。

[0082] 1.1对照品溶液的制备

[0083] 精密称定丹参素钠3.95mg、迷迭香酸5.98mg，置5mL容量瓶中，原儿茶醛5.12mg、丹酚酸B7.20mg、丹酚酸A7.28mg，置10mL容量瓶中，咖啡酸4.08mg、阿魏酸6.87mg、紫草酸5.38mg置50mL容量瓶中，用0.5%甲酸-乙腈（50:50，v/v）定容至刻度，摇匀即得。

[0084] 1.2方法学考察

[0085] 仪器精密度试验：取同一样品制备供试品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6次，以峰面积计算，丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A的RSD分别为0.28%、0.34%、1.78%、0.57%、0.27%、0.23%、0.15%、0.31%，表明该方法精密度良好。

[0086] 重复性试验：取同一批次丹红注射液，按实施例1中2项方法，平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析。以峰面积计算，丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A的RSD分别为0.73%、0.53%、2.84%、0.68%、0.53%、0.56%、0.63%、0.54%，结果表明该方法重复性良好。

[0087] 加样回收率：分别往供试品溶液中加入低、中、高浓度（分别为50%、100%、150%）丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A对照品，每个浓度水平三份样品，并测定其含量，得到8种有效成分的回收率参见表5。

[0088] 表5

[0089]

[0090] 线性范围：精密吸取丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A对照品溶液，分别稀释2、4、8、16、32、64倍，在上述色谱条件下进样分析。以峰面积为纵坐标、对照品浓度为横坐标，得到回归方程参见表6。

[0091] 表6

[0092]

[0093] 稳定性试验：对同一份丹红注射液供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、8、12h测定一次，所得结果RSD分别为0.81%、0.69%、1.34%、0.77%、0.38%、0.62%、0.37%、0.43%说明丹红注射液在12h内较为稳定，满足测定需要。

[0094] 1.3测定结果

[0095] 取15批次丹红注射液，按上述方法测定，所测定8种活性成分含量见表7。其中丹参素钠和原儿茶醛的含量之和不得低于0.35mg/mL。

[0096] 表7

[0097]

[0098]