黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法

摘要

黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，属于化学检测技术领域。针对目前没有相应的实验方法对黄瓜中丙醇二酸进行定性定量检测，本发明的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法为：将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液；HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测；用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。本发明前处理简单，成本低，可同时分析多个样品，重复性好，结果精确稳定。

权利要求

1.一种黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述检测方法如下：

(1)黄瓜果实的前处理：将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；

(2)丙醇二酸的提取：将研磨好的黄瓜果实样品离心，离心分离转速为10000～

12000r/min，时间为3～6min，取上清液，将上清液倒至一个空的离心管中，然后用注射器将倒出的上清液吸干，将注射器中的空气推出，从注射器上读出上清液体积；

(3)丙醇二酸的HPLC检测：HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测，所述流动相为硫酸钠溶液，浓度为0.02～0.3mol/L；

流速为0.8～1.0ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为215nm，进样量为10μl；阴离子交换色谱柱为HypersilSAX，规格为：5μm，4.6×250mm；检测时间为8～10min；

(4)丙醇二酸定性定量检测方法的建立：用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量，其中5mg/ml标准溶液的配制方法为：首先称取10mg丙醇二酸标准品，然后加入2ml流动相，将配好的标准溶液置于4℃下保存。

2.根据权利要求1所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(1)中，黄瓜果实为新鲜黄瓜，或是新鲜黄瓜粉碎后装入袋中，置于-20℃下保存。

3.根据权利要求1所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(1)中，将黄瓜研磨至完全没有颗粒的状态。

说明书

黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于化学检测技术领域，涉及一种黄瓜果实中丙醇二酸的检测方法，具体涉及一种利用高效液相色谱技术(HPLC)对黄瓜果实中丙醇二酸进行定性定量的检测方法。

背景技术

[0002] 丙醇二酸(Tartronic acid)是一种小分子有机酸。它可抑制碳水化合物在动物体内转化为脂肪。现代药理学研究表明黄瓜果实中含有丙醇二酸，可以阻止人体内脂肪堆积，有减肥和预防冠心病的功效。黄瓜发涩的口感主要来自黄瓜所含的丙醇二酸，这是其它一般蔬菜不含的成分。丙醇二酸和唾液融合会有点儿发涩的口感。据研究，黄瓜中所含丙醇二酸无毒副作用，是良好的天然减肥食品。

[0003] 丙醇二酸在不同品种的黄瓜果实中含量差异比较大。目前关于黄瓜中含有丙醇二酸的宣传报道有很多，但却没有黄瓜中丙醇二酸的鉴定和含量检测方法，此方面研究国内外尚属空白。

[0004] 鉴于丙醇二酸的减肥和美容功效以及黄瓜在人们餐桌上的重要性，预计此领域的研究将会倍受青睐。

发明内容

[0005] 针对目前各种关于黄瓜中含有丙醇二酸的报道，但却没有相应的实验方法对其进行定性定量检测，本发明提供一种黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法。

[0006] 本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

[0007] (1)黄瓜果实的前处理：将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；

[0008] (2)丙醇二酸的提取：将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液；

[0009] (3)丙醇二酸的HPLC检测：HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测，所述流动相为硫酸钠溶液；流速为0.8～1.0ml/min；r＝215nm，进样量为10μl；

[0010] (4)丙醇二酸定性定量方法的建立：用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。

[0011] 本发明通过建立黄瓜果实中丙醇二酸的检测方法，对发掘黄瓜中丙醇二酸含量高和低的种质资源，从而为黄瓜种质资源创新、高丙醇二酸专用品种选育及其产品开发奠定基础。此方法前处理简单，成本低，可同时分析多个样品，重复性好，结果精确稳定。

附图说明

[0012] 图1为5mg/ml丙醇二酸标准品的HPLC图；

[0013] 图2为丙醇二酸标准曲线。

具体实施方式

[0014] 具体实施方式一：本实施方式按照如下方法检测黄瓜果实中丙醇二酸：

[0015] (1)黄瓜果实的前处理：

[0016] 将黄瓜果实去除两端末梢部分，然后切成段，去除种腔部分(包括种子)，用榨汁机粉碎至糊状，取少量于研钵中研磨。

[0017] (2)丙醇二酸的提取：

[0018] 将研磨好的黄瓜果实样品装入1.5ml离心管中，记录管中样品重量。然后离心，取上清液过0.45μm滤膜，进行HPLC检测。

[0019] (3)丙醇二酸的HPLC-DAD检测：

[0020] HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择测定波长后检测。

[0021] (4)丙醇二酸定性定量方法的建立：

[0022] 用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，在0.5～10mg/ml浓度范围内，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值(0.5mg/ml：415309.3；1mg/ml：1073755；2mg/ml：2310325；5mg/ml：6693463；10mg/ml：14609955)为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线(见
2
图2)，线性方程为：y＝1498.2x-522765，R ＝0.9988，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。

[0023] 本实施方式所述步骤(1)中，黄瓜果实为新鲜黄瓜，或是新鲜黄瓜粉碎后装入袋中，置于-20℃下保存。

[0024] 本实施方式所述步骤(1)中，要将黄瓜研磨至完全没有颗粒的状态，达到细胞破碎的目的。

[0025] 本实施方式所述步骤(2)中，要做两管样品，每管装混合均匀的黄瓜样品1.40g左右，先称出空管的重量，再称出加样品后的总重量。在10000～12000r/min条件下离心3～6min。

[0026] 本实施方式所述步骤(2)中，将上清液倒至一个空的离心管中，然后用5ml注射器将倒出的上清液吸干，将注射器中的空气推出，从注射器上读出上清液体积。

[0027] 本实施方式所述步骤(3)中，在新的色谱柱第一次使用时，要先进一针高浓度的丙醇二酸标准品溶液，如10mg/ml。

[0028] 本实施方式所述步骤(3)中，检测时间为8～10min。

[0029] 本实施方式所述步骤(3)中阴离子交换色谱柱为HypersilSAX，规格为：5μm，4.6×250mm，大连依利特阴离子交换柱；流动相：硫酸钠溶液(0.02～0.3mol/L)；流速：
0.8～1.0ml/min；检测器：紫外检测器，r＝215nm，进样量：10μl。

[0030] 本实施方式所述步骤(4)中，5mg/ml标准溶液的配制方法为：首先称取10mg丙醇二酸标准品，然后加入2ml流动相，将配好的标准溶液置于4℃下保存。其他标准溶液的配制方法同上。

[0031] 具体实施方式二：本实施方式可以按照如下方法检测不同品种黄瓜果实中的丙醇二酸：

[0032] 取不同品种的鲜嫩黄瓜果实，每个品种取鲜嫩黄瓜果实的果肉部分500g，先用榨汁机榨成糊状，再取10g放于研钵中研磨，研磨至无颗粒很细的状态。取1.5ml离心管，记录空管重量。将研磨好的黄瓜装入离心管中(大半管接近管口的位置)，再称量记录管的重量。12000r/min条件下离心3min。将离心管中的上清液倒至一个空的1.5ml离心管中，用5ml注射器将其吸干(弹出注射器上清液中的气泡，将注射器旋转着向上推，直至注射器中不再有空气)，从注射器上记录上清液的体积。拔掉针头，换上0.45μm的水相针头过滤器，慢慢将上清液过滤至Waters上机小瓶中。

[0033] 将上述黄瓜果实样品做HPLC分析，记录色谱图(图1)。其中，色谱柱：HypersilSAX，5μm，4.6×250mm，大连依利特阴离子交换柱；流动相：硫酸钠溶液(0.03mol/L)；流速：1.0ml/min；检测器：紫外检测器，r＝215nm；检测时间：10min。

[0034] 标准曲线：在标准工作液浓度为0.5～10mg/ml范围内，以峰面积(Y)和标准品浓2
度(X)进行线性回归，得回归方程为：y＝1498.2x-522765，R ＝0.9988。

[0035] 按外标法以峰面积计算样品中丙醇二酸的含量(表1)。并计算出供试品种黄瓜果实中丙醇二酸的平均含量为0.489g/100g。

[0036] 表1黄瓜果实丙醇二酸含量表(单位：g/100g)

[0037]