一种同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法

摘要

本发明公开了一种用反相高效液相色谱同时检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法，实现3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质的同时快速有效地分离。其特征在于：色谱条件为色谱柱：EC 250/4Nuclesoil 100-5C18，流动相A：水溶液（磷酸0.1%，0.2mM EDTANa2）；流动相B：乙腈。流速为1.0mL/min，双波长检测UV270nm和UV315nm，柱温30℃，进样体积为10μL。该发明在酒花异构颗粒和异构浸膏的生产过程，监测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的变化关系，为生产工艺提供理论参考。同时该检测方法也可用于麦汁煮沸过程酒花的α-酸与异α-酸的动力学变化的研究。方法的稳定性和重现性好，操作简单、准确可靠。

权利要求

1.一种同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法，其特征包括以下步骤：

1）样品制备：取磨成粉末状的颗粒酒花样品5.0g，置于250mL具塞锥形瓶中，用

10-30mL甲醇和70-100mL乙醚萃取，于恒温20℃摇床振荡30min，加入0.1mol/L盐酸溶液

30-50mL，再振荡30min，静置30min使其分层；取上层乙醚层5mL，用甲醇定容至50mL，充分均匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样；或取酒花浸膏样品0.1g，置于

50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀；用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样；

2）将步骤1）制备好的样品用反相高效液相色谱分析，分析条件如下：色谱柱：EC250/4Nuclesoil100-5C18；

洗脱条件：流动相：有机相B为乙腈；无机相A为含有磷酸0.1%、0.2mM EDTANa2的水溶液；所述磷酸的浓度为85%；

采用 梯度 洗脱 方法，洗脱 程序 为：0-30min，0%B-60%B；30-32min，60%B-70%B；

32-50min，70%B-75%B；50-55min，75%B-60%B；

进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃；

检测波长：异α-酸的检测波长270nm，α-酸和β-酸的检测波长315nm。

说明书

一种同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法

技术领域

[0001] 本发明采用反相高效液相色谱法同时检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的定量分析方法，实现了对酒花中α-酸、β-酸中六种主要异构体和异α-酸中三种异构体的同时测定。本发明属于化学分析检测领域技术背景

[0002] 酒花是酿造啤酒的重要原料，其α-酸和β-酸既是其主要的风味物质，又是酒花中抑菌、防杂菌污染的主要物质。酒花的质量是影响啤酒质量---口感、风味及稳定性的重要因素之一，而其中最关键问题就是酒花中α-酸、β-酸的含量及其新鲜度的准确测定与辨别。α-酸主要包括葎草酮（humulone）、合葎草酮（cohumulone）、加葎草酮（adhumulone）三种异构体,β-酸主要包括蛇麻酮（lupulone）、合蛇麻酮（colupulone）、加蛇麻酮（adlupulone）三种异构体。α-酸在加热、稀碱或光照下易发生异构化形成异α-酸，异α-酸是啤酒苦味的主要物质，它虽α-酸苦，但苦味更柔和。在麦汁煮沸1.0-1.5h约有40%-60%α-酸转化成异α-酸。异α-酸主要有异合α-酸、异α-酸和异加α-酸。

[0003] 目前对α-酸、β-酸和异α-酸的检测方法是各自独立的，实验操作重复而浪费时间。还没有一种检测方法可以有效地同时分析测定3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质，既节省时间又能有效的分离。从而在酒花异构颗粒和异构浸膏的生产过程，检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的变化关系，为生产工艺提供理论指导。同时该检测方法也可应用于麦汁煮沸过程不同品种酒花的α-酸与异α-酸的动力学变化的研究。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一个用反相高效液相色谱方法同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法。在添加一定量EDTANa2，实现3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质的同时测定。该方法提高液相检测的效率，节省时间，对九种化合物都能获得较好的分离效果。

[0005] 本发明测定酒花和麦汁中α-酸、β-酸和异α-酸的方法包括如下步骤：

[0006] a.酒花样品制备：对于酒花颗粒制品，将其磨成粉末状，称取样品5.0g，置于250mL具塞锥形瓶中，用10-30mL甲醇和70-100mL乙醚萃取，于恒温20℃摇床振荡30min，加入0.1mol/L盐酸溶液30-50mL，再振荡30min，静置30min使其分层。取上层乙醚层
5mL，用甲醇定容至50mL，充分均匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。
对于酒花浸膏样品，准确称取0.1g，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴
10-20min，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀。用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。

[0007] b.标样制备：取0.0200g异α-酸用25mL色谱级甲醇溶于50mL烧杯；0.2000gα-酸和β-酸浸膏标样，用20mL色谱级甲醇充分溶解，定容于50mL棕色容量瓶中。取10mL于50mL容量瓶，再倒入异α-酸标样溶解液，用甲醇定容。充分混匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。

[0008] c.色谱条件如下：

[0009] 色谱柱：EC 250/4Nuclesoil 100-5C18

[0010] 洗脱条件：流动相：有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0.1%、0.2mM EDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为：0-30min，0%B-60%B；30-32min，60%B-70%；32-50min，70%B-75%B；50-55min，75%B-60%B。

[0011] 进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃.

[0012] 检测波长：异α-酸的检测波长270nm，α-酸和β-酸的检测波长315nm。

[0013] 本发明同时可将酒花中α-酸、β-酸6种主要异构体和异α-酸3种主要异构体共9种物质一次性分离，操作简单、准确可靠。

附图说明

[0014] 图1酒花浸膏样品色谱图

[0015] 1.异合葎草酮 2.异葎草酮 3.异加葎草酮 4.合葎草酮 5.葎草酮 6.加葎草酮7.合蛇麻酮 8.蛇麻酮 9.加蛇麻酮

[0016] 图2酒花颗粒样品色谱图

[0017] 1.异合葎草酮 2.异葎草酮 3.异加葎草酮 4.合葎草酮 5.葎草酮 6.加葎草酮7.合蛇麻酮 8.蛇麻酮 9.加蛇麻酮

具体实施方式

[0018] 实施例1

[0019] 准确称取酒花浸膏样品，准确称取0.1g，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀。用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，进样分析。

[0020] 反相液相色谱分析条件：

[0021] 色谱柱：EC 250/4Nuclesoil 100-5C18

[0022] 洗脱条件：流动相：有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0.1%、0.2mM EDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为：0-30min，0%B-60%B；30-32min，60%B-70%；32-50min，70%B-75%B；50-55min，75%B-60%B。

[0023] 进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃.

[0024] 检测波长：异α-酸的检测波长270nm，α-酸和β-酸的检测波长315nm。

[0025] 所得标样色谱图如图1。

[0026] 实施例2

[0027] 称取磨成粉末状的颗粒酒花样品5.0g，置于250mL具塞锥形瓶中，用20mL甲醇和80mL乙醚萃取，于恒温20℃摇床振荡30min，加入0.1mol/L盐酸溶液40mL，再振荡30min，静止分层。取上层乙醚层5mL，用甲醇定容至50mL，充分均匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，进样分析。

[0028] 反相液相色谱分析条件：

[0029] 色谱柱：EC 250/4Nuclesoil 100-5C18

[0030] 洗脱条件：流动相：有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0.1%、0.2mM EDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为：0-30min，0%B-60%B；30-32min，60%B-70%；32-50min，70%B-75%B；50-55min，75%B-60%B。

[0031] 进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃。

[0032] 检测波长：异α-酸的检测波长270nm，α-酸和β-酸的检测波长315nm。

[0033] 所得样品色谱图如图2。

[0034] 取已知目的物含量的酒花样品一份，加入不同质量浓度的标准溶液，制备成高（异α-酸浓度100mg/L，α-酸、β-酸200mg/L）、中（异α-酸浓度50mg/L，α-酸、β-酸100mg/L）、低（异α-酸浓度10mg/L，α-酸、β-酸20mg/L）三个浓度的混合液，按照上述方法和条件各测定6次，RSD值均在5%左右，表明该方法的稳定性和重现性很好。回收率取其平均值，异α-酸的回收率在90%-100%之间，α-酸、β-酸的回收率在100%-110%之间，由此可见方法可以可靠的同时测定酒花样品中α-酸、β-酸和异α-酸。