一种肌氨肽苷注射液的制备方法

摘要

本发明提供一种肌氨肽苷注射液制备方法，取家兔肌肉和心肌，加氯化钠溶液，用醋酸调节混合液，离心、过滤，滤液加乙醇，过超滤柱超滤，浓缩得肌氨肽苷提取液；肌氨肽苷提取液中加入活性炭处理，微孔滤膜除菌过滤，灌装，熔封等工艺制成本发明肌氨肽苷注射液。本发明方法简单、常规，肌氨肽苷提取得液收率高，制成的肌氨肽苷注射液的质量稳定。

权利要求

1.一种肌氨肽苷注射液的制备方法，其特征在于该方法由如下步骤组成：

A.取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液，按照1∶5的重量比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液在3000r/min离心18分钟或用5μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液，按照1∶5的重量比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将第二次制成的匀浆在3000r/min离心25分钟或用3μm微孔滤膜过滤，收集第二次提取液；合并两次提取液，滤过，收集滤液；将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的2倍；

在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为80％，静置15小时、滤过，收集滤液；回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.3倍，即得肌氨肽苷提取液；

B.肌氨肽苷注射液的制备：

取总量为25％注射用水，冷却至25℃以下；量取所述肌氨肽苷提取液，含多肽3.5重量份、次黄嘌呤0.5重量份，加入上述注射用水中，再加注射用水至50％，搅拌循环，每体积份溶液中加0.001重量份活性炭，搅拌循环15分钟，用钛棒过滤；加注射用水至2000体积份后,冷却至25℃以下，搅拌均匀,调pH值至7.5、取样化验含量，按照规格要求每2体积份含多肽0.0035重量份，次黄嘌呤0.0005重量份；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的

90.0％～110.0％；半成品化验合格后，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2体积份洁净安瓿灌装,同时充入氮气，熔封；灯检、包装、入库，即得肌氨肽苷注射液；其中所述的重量份和体积份的关系是g/ml。

说明书

一种肌氨肽苷注射液的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种制备方法，特别涉及一种肌氨肽苷注射液的制备方法，属于医药生物技术领域。

背景技术

[0002] 肌氨肽苷注射液用于脑功能紊乱；脑卒中、闹供血不足所致脑功能减退；周围神经疾病等，疗效显著，毒副作用小。目前，现有肌氨肽苷提取工艺对多肽和次黄嘌呤的提取效果不好，收率相对较低。本发明与现有肌氨肽苷注射液制备方法均不同。在申请号分别为03104642.8、200510119095.X、200610150889.7、200910067227.7的专利中所述的肌氨肽苷提取得液收率均较低，质量也不稳定。

发明内容

[0003] 本发明目的在于公开一种肌氨肽苷注射液的制备方法。

[0004] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：

[0005] 本发明肌氨肽苷注射液的制备方法包括如下步骤：

[0006] 1、肌氨肽苷提取液的制备过程：

[0007] (1)取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照0.5-1.5∶4.5-5.5的重量比例混合，用醋酸调pH至4-6，用胶体磨制成匀浆；

[0008] (2)将匀浆液在3000r/min下离心5-30分钟或用1-10μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；

[0009] (3)取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照0.5-1.5∶4.5-5.5的重量比例混合，用醋酸调pH至4-6，用胶体磨制成匀浆；

[0010] (4)将第二次制成的匀浆再以3000r/min离心5-30分钟或用1-10μm微孔滤膜过滤，收集第二次提取液；

[0011] (5)合并两次提取液，滤过，收集滤液；

[0012] (6)将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的1～3倍；

[0013] (7)在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为70-90％，静置8～24小时、滤过，收集滤液；

[0014] (8)回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；

[0015] (9)将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.1～0.5倍，即得肌氨肽苷提取液；

[0016] 2、肌氨肽苷注射液的制备过程：

[0017] (1)取总量为20％～30％注射用水，冷却至25℃以下；

[0018] (2)量取肌氨肽苷提取液，含多肽3.5重量份、次黄嘌呤0.5重量份，加入上述注射用水中，再加注射用水至40％～60％，搅拌循环，每体积份溶液中加0.0005-0.002重量份活性炭，搅拌循环10-20分钟，用钛棒过滤；

[0019] (3)加注射用水至2000体积份后，冷却至25℃以下，搅拌均匀，调pH值至7.0～8.0，取样化验含量，按照规格要求每2体积份含多肽0.003-0.004重量份，次黄嘌呤
0.0002-0.0008重量份；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的90.0％～110.0％；

[0020] (4)半成品化验合格后，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2体积份洁净安瓿灌装，同时充入氮气，熔封；

[0021] (5)灯检、包装、入库，即得本发明肌氨肽苷注射液。

[0022] 本发明肌氨肽苷注射液的制备方法还可以优选为如下步骤：

[0023] 1、肌氨肽苷提取液的制备：

[0024] 取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1∶5的重量比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液离心或过滤，将匀浆液在3000r/min离心18分钟或用5μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1∶5的重量比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将第二次制成的匀浆在3000r/min离心25分钟或用3μm微孔滤膜过滤，收集第二次提取液；合并两次提取液，滤过，收集滤液；将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的2倍；在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为80％，静置15小时、滤过，收集滤液；回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.3倍，即得肌氨肽苷提取液；

[0025] 2、肌氨肽苷注射液的制备：

[0026] 取总量为25％注射用水，冷却至25℃以下；量取肌氨肽苷提取液，含多肽3.5重量份、次黄嘌呤0.5重量份，加入上述注射用水中，再加注射用水至50％，搅拌循环，每体积份溶液中加0.001重量份活性炭，搅拌循环15分钟，用钛棒过滤；加注射用水至2000体积份后，冷却至25℃以下，搅拌均匀，调pH值至7.5，取样化验含量，按照规格要求每2体积份含多肽0.0035重量份，次黄嘌呤0.0005重量份；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的90.0％～110.0％；半成品化验合格后，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2体积份洁净安瓿灌装，同时充入氮气，熔封；灯检、包装、入库，即得本发明肌氨肽苷注射液。

[0027] 本发明肌氨肽苷注射液的制备方法还可以优选为如下步骤：

[0028] 1、肌氨肽苷提取液的制备过程：

[0029] 取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照0.6∶5.2的重量比例混合，用醋酸调pH至4.6，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液在3000r/min下离心20分钟或用2μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1.2∶4.8的重量比例混合，用醋酸调pH至5.5，用胶体磨制成匀浆；将第二次制成的匀浆在3000r/min下离心10分钟或用8μm微孔滤膜过滤，离收集第二次提取液；合并两次提取液，滤过，收集滤液；将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的1.5倍；在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为85％，静置10小时、滤过，收集滤液；回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.4倍，即得肌氨肽苷提取液；

[0030] 2、肌氨肽苷注射液的制备过程：

[0031] 取总量为22％注射用水，冷却至25℃以下；量取肌氨肽苷提取液，含多肽3.5重量份、次黄嘌呤0.5重量份，加入上述注射用水中，再加注射用水至55％，搅拌循环，每体积份溶液中加0.001重量份活性炭，搅拌循环12分钟，用钛棒过滤；加注射用水至2000体积份后，冷却至25℃以下，搅拌均匀，调pH值至7.8、取样化验含量，按照规格要求每2体积份含多肽0.0032重量份，次黄嘌呤0.0007重量份；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的90.0％～110.0％；半成品化验合格后，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2体积份洁净安瓿灌装，同时充入氮气，熔封；灯检、包装、入库，即得本发明肌氨肽苷注射液。

[0032] 本发明肌氨肽苷注射液的制备方法还可以优选为如下步骤：

[0033] 1、肌氨肽苷提取液的制备过程：

[0034] 取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1.3∶4.6的重量比例混合，用醋酸调pH至4.4，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液在3000r/min下离心15分钟或用4μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照0.6∶5.3的重量比例混合，用醋酸调pH至5.8，用胶体磨制成匀浆；将第二次制成的匀浆在3000r/min下离心12分钟或用6μm微孔滤膜过滤，收集第二次提取液合并两次提取液，滤过，收集滤液；将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的2.5倍；在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为75％，静置20小时、滤过，收集滤液；回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.2倍，即得肌氨肽苷提取液；

[0035] 2、肌氨肽苷注射液的制备过程：

[0036] 取总量为28％注射用水，冷却至25℃以下；量取肌氨肽苷提取液，含多肽3.5重量份、次黄嘌呤0.5重量份，加入上述注射用水中，再加注射用水至48％，搅拌循环，每体积份溶液中加0.001重量份活性炭，搅拌循环18分钟，用钛棒过滤；加注射用水至2000体积份后，冷却至25℃以下，搅拌均匀，调pH值至7.4、取样化验含量，按照规格要求每2体积份含多肽0.0038重量份，次黄嘌呤0.0004重量份；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的90.0％～110.0％；半成品化验合格后，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2体积份洁净安瓿灌装，同时充入氮气，熔封；灯检、包装、入库，即得本发明肌氨肽苷注射液。

[0037] 上述发明所述的重量份和体积份的关系是：g/ml。

[0038] 本发明方法简单、常规，肌氨肽苷提取得液收率高，制成的肌氨肽苷注射液的质量稳定。

[0039] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

[0040] 实验例1肌氨肽苷提取收率试验

[0041] 表1肌氨肽苷提取收率试验

[0042]

[0043] 肌氨肽苷提取液制备方法编号注明：

[0044] ①、按照“一种肌氨肽苷粉针剂及其制备方法(03104642.8)”制备肌氨肽苷提取液[0045] a.取家兔肌肉和心肌，在10℃环境下，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎；

[0046] b.将绞碎组织加冷注射用水按照1∶1.5的重量比例混合，在-20℃冻结24小时，再冻融5次；

[0047] c.将冷冻匀浆融化，滤过，滤液加热至82℃并保持6分钟，然后迅速降至室温，离心，上清液用0.22μm微孔滤膜滤过，收集滤液；

[0048] d.将上述滤液过7000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤液即得肌氨肽苷提取液。

[0049] ②、按照“一种肌氨肽苷注射液制备工艺(200510119095.X)”制备肌氨肽苷提取液[0050] a.取家兔肌肉和心肌，除去结缔组织，加注射用水按照0.8∶1的重量比例混合，置高速组织捣碎机中匀浆30分钟；

[0051] b.将绞碎组织在-20℃冻结40小时，再冻融3次；

[0052] c.将冷冻匀浆融化，加热至55℃并保持3小时，调节pH值为7.0，加入按组织液重量2g/升的活性炭，煮沸20分钟，低温离心30分钟(3000转/分钟)；

[0053] d.收集上清液，调节pH值为5.8，于室温中加入按组织液重量1.8g/升的壳聚糖寡糖，然后再调节pH值为7.2，用0.22μm微孔滤膜滤过，收集滤液；

[0054] e.将上述滤液过7000道尔顿的超滤膜超滤，收集滤液即得肌氨肽苷提取液。

[0055] ①、按照“注射用肌氨肽苷粉针剂及其制备方法(200610150889.7)”制备肌氨肽苷提取液

[0056] (1)肌氨肽苷多肽溶液提取：

[0057] a.预处理：取新鲜的兔肌肉除去筋骨、脂肪，用纯化水清洗三遍；

[0058] b.绞碎匀浆：将处理好的兔肌肉用3mm孔板绞肉机绞碎，按原料重量1∶1.5加纯化水，胶体磨匀浆两次，细度5μm，-30℃以下冷冻24小时；

[0059] c.融化：速冻后的匀浆液置40℃水浴箱中融化，反复冷冻融化3次；

[0060] d.变性：匀浆液融化后置夹层锅中，加热至90℃，25min后，冷却降温至40℃，用滤布过滤，得多肽提取液；

[0061] (3)肌氨肽苷核苷溶液提取：

[0062] a.预处理：取新鲜兔心除脂肪、结缔组织，用纯化水清洗三遍；

[0063] b.绞碎匀浆：将处理好的兔心用3mm孔板绞肉机绞碎，加入2倍量0.14mol/L氯化钠溶液搅拌20min，胶体磨匀浆3次，细度5μm，用冰醋酸调PH值至5.0；

[0064] c.离心：匀浆液以3000r/min，离心30min后，收集上清液；

[0065] d.醇沉：取上清液，加入乙醇，使含醇量达到70％，置4℃冷空气中，静止24小时；

[0066] e.离心：虹吸上清液，沉淀物以3000r/min离心20min，反复处理3次，取沉淀物用0.9％氯化钠溶解，再以3000r/min离心20min，取上清液为核苷提取溶液。

[0067] ②、按照“一种肌氨肽苷注射液及注射用肌氨肽苷的制备方法(200910067227.7)”制备肌氨肽苷提取液

[0068] a.从冻库中取出家兔肌肉和心肌，用冷水浸泡解冻，洗净血水，切成小块，再用纯化水冲洗三次；

[0069] b.取上述家兔肌肉和心肌组织，按组织重量加入注射用水1.2倍，置胶体磨中搅碎，并制成匀浆；

[0070] c.将上述匀浆在-20℃冻结24小时，取出，室温解冻；

[0071] d.将上述家兔肌肉和心肌组织的匀浆液加热煮沸20分钟，分离上清液；

[0072] e.上述上清液用氢氧化钠溶液调pH值为10.0，加热煮沸20分钟，冷却，分离上清液；

[0073] f.上述上清液再用盐酸溶液调pH值为3.0，加热煮沸20分钟，冷却，分离上清液；

[0074] g.上述上清液再用氢氧化钠溶液调pH值为7.3；

[0075] h.上述上清液再用氢氧化钠溶液调pH值为10.0；加热煮沸20分钟，冷却，分离上清液；

[0076] i.上述上清液再用盐酸溶液调pH值为7.3，先过10000道尔顿的超滤膜超滤，再过3000道尔顿的超滤膜超滤，得滤液；

[0077] j.上述滤液于121℃热压20分钟，放冷，在于-15℃深冻过夜，在自然解冻，过10000道尔顿的超滤膜超滤，得滤液；

[0078] k.上述溶液调pH值为7.3，过10000道尔顿的超滤膜超滤，得肌氨肽苷提取液。

[0079] ③、按本发明方法制备肌氨肽苷提取液

[0080] 兔肉兔心：5种方法均使用同一批兔肉兔心原料。

[0081] 结论：按本发明方法制备的肌氨肽苷提取液的提取率最高。

[0082] 实验例2分别用实验例一制成的肌氨肽苷提取液制备注射液的稳定性考察试验[0083] 表2肌氨肽苷注射液的稳定性考察试验数据(30℃)

[0084]

[0085]

[0086] 肌氨肽苷提取液制备方法编号说明：

[0087] ①按照专利号为03104642.8，名称为“一种肌氨肽苷粉针剂及其制备方法”制备肌氨肽苷提取液；

[0088] ②按照专利号为200510119095.X，名称为“一种肌氨肽苷注射液制备工艺”制备肌氨肽苷提取液；

[0089] ③按照专利号为200610150889.7，名称为“注射用肌氨肽苷粉针剂及其制备方法”制备肌氨肽苷提取液；

[0090] ④按照专利号位200910067227.7，名称为“一种肌氨肽苷注射液及注射用肌氨肽苷的制备方法”制备肌氨肽苷提取液；

[0091] ⑤按本发明方法制备肌氨肽苷提取液。

[0092] 肌氨肽苷注射液制备方法编号说明：

[0093] ①按本发明方法制备的肌氨肽苷注射液；

[0094] ②按照专利号为200510119095.X，名称为“一种肌氨肽苷注射液制备工艺”制备肌氨肽苷注射液；

[0095] ③按本发明方法制备的肌氨肽苷注射液；

[0096] ④按照专利号位200910067227.7，名称为“一种肌氨肽苷注射液及注射用肌氨肽苷的制备方法”制备肌氨肽苷注射液；

[0097] ⑤按本发明方法制备肌氨肽苷注射液。

[0098] 结论：按照本发明肌氨肽苷提取工艺、注射液制剂工艺制成的肌氨肽苷注射液质量最稳定。

[0099] 下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

[0100] 实施例1：

[0101] 1、肌氨肽苷提取液的制备：

[0102] 取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1∶5g比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液在3000r/min离心18分钟或用5μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取液；取剩余绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照1∶5的重量比例混合，用醋酸调pH至5，用胶体磨制成匀浆；将第二次制成的匀浆在3000r/min离心25分钟或用3μm微孔滤膜过滤，收集第二次提取液；合并两次提取液，滤过，收集滤液；将上述滤液，重量浓缩至绞碎组织的2倍；在上述浓缩液中加乙醇至溶液的含醇量为80％，静置15小时、滤过，收集滤液；回收乙醇至无醇味，过分子量为10000的超滤柱超滤；将超滤液重量浓缩至绞碎组织的0.3倍，即得肌氨肽苷提取液；

[0103] 2、肌氨肽苷注射液的制备：

[0104] 取总量为25％注射用水，冷却至25℃以下；量取肌氨肽苷提取液，含多肽3.5g、次黄嘌呤0.5g，加入上述注射用水中，再加注射用水至50％，搅拌循环，每100ml溶液中加0.1g活性炭，搅拌循环15分钟，用钛棒过滤；加注射用水至2000ml后，冷却至25℃以下，搅拌均匀，调pH值至7.5、取样化验含量，按照规格要求每2ml含多肽0.0035g，次黄嘌呤
0.0005g；控制多肽与次黄嘌呤均应为标示量的90.0％～110.0％；半成品化验合格后，用
0.22μm微孔滤膜除菌过滤，检查可见异物合格后，用2ml洁净安瓿灌装，同时充入氮气，熔封；灯检、包装、入库，即得本发明肌氨肽苷注射液2000ml。

[0105] 实施例2：

[0106] 1、肌氨肽苷提取液的制备过程：

[0107] 取家兔肌肉和心肌，用纯化水将家兔肌肉和心肌清洗干净，置绞肉机中绞碎，将绞碎组织加0.9％氯化钠溶液按照0.6∶5.2的重量比例混合，用醋酸调pH至4.6，用胶体磨制成匀浆；将匀浆液在3000r/min下离心20分钟或用2μm微孔滤膜过滤，收集第一次提取