一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法

摘要

一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，涉及一种破乳方法。是要解决细菌降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的过程中存在严重的乳化现象而不能真实反应细菌对2，2′，4，4′-四溴联苯醚的降解率的问题。方法：挑取可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌接种于LB液体培养基，培养得菌液；离心收集菌体，用无机盐液体培养基稀释得菌悬液；待储备液中甲醇挥发完全后加入菌悬液，得混合液；向混合液中加入甲醇、萃取液，水浴离心进行破乳，萃取，回收萃取液，测定回收率，即完成。本发明的方法破乳效果好，2，2′，4，4′-四溴联苯醚的回收率可达93％以上。用于2，2′，4，4′-四溴联苯醚的降解率测定。

权利要求

1.一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，其特征在于提高2，2′，4，

4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，按以下步骤进行：一、挑取可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌接种于LB液体培养基，于35℃、130r/min震荡培养24h，得菌液；二、将菌液于12000r/min离心10min，收集菌体，用无机盐液体培养基洗涤菌体3次，将洗涤后的菌体用无机盐液体培养基稀释，得菌悬液；三、添加10μL浓度为200mg/L的2，2′，4，4′-四溴联苯醚甲醇储备液于样品瓶中，待储备液中甲醇挥发完全后，向样品瓶中加入菌悬液使

2，2′，4，4′-四溴联苯醚的浓度为100μg/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的体积为混合液体积的50％，然后再加入6～10mL萃取液，于60～80℃水浴20min，再以

3000r/min离心15～20min进行破乳，然后进行液液萃取，回收萃取液，应用GC-MS测定2，

2′，4，4′-四溴联苯醚回收率，即完成；步骤一中可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌为Burkholderia xenovorans LB400，编号为DSMZ NO.17367。

2.根据权利要求1所述的一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步骤二中菌悬液在600nm处吸光值为1。

3.根据权利要求1或2所述的一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步骤四中再加入8mL萃取液。

4.根据权利要求3所述的一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步骤四所述萃取液为正己烷。

5.根据权利要求4所述的一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，其特征在于步骤四中于70℃水浴20min。

说明书

一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种破乳方法。

背景技术

[0002] 2，2′，4，4′-四溴联苯醚是环境中普遍检出且生物毒性较大的一种溴代阻燃剂。自然界中存在着能够利用2，2′，4，4′-四溴联苯醚为能源进行生长的微生物，同时也存在着利用其代谢产物进行生长并进一步脱毒的微生物。在测定微生物对其降解过程中，由于细菌表面的疏水性及其分泌的胞外物导致液液萃取测定回收率过程中出现严重的乳化现象，使得回收率过低，而对2，2′，4，4′-四溴联苯醚的降解率是通过其回收率体现的，乳化现象的存在不能真实反应微生物对2，2′，4，4′-四溴联苯醚的降解率。因此，有效的破乳是提高回收率的前提，是进行微生物降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚实验的先决条件。

发明内容

[0003] 本发明是要解决细菌降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的过程中存在严重的乳化现象而不能真实反应细菌对2，2′，4，4′-四溴联苯醚的降解率的问题，提供一种提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法。

[0004] 本发明提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，按以下步骤进行：一、挑取可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌接种于LB液体培养基，于35℃、130r/min震荡培养24h，得菌液；二、将菌液于12000r/min离心10min，收集菌体，用无机盐液体培养基洗涤菌体3次，将洗涤后的菌体用无机盐液体培养基稀释，得菌悬液；三、添加10μL浓度为200mg/L的2，2′，4，4′-四溴联苯醚甲醇储备液于样品瓶中，待储备液中甲醇挥发完全后，向样品瓶中加入菌悬液使2，2′，4，4′-四溴联苯醚的浓度为100μg/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的体积为混合液体积的50％，然后再加入6～10mL萃取液，于60～80℃水浴20min，再以3000r/min离心15～20min进行破乳，然后进行液液萃取，回收萃取液，应用GC-MS测定2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率，即完成。

[0005] 与现有方法相比，本发明的方法破乳效果好，可提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚的回收率，回收率可达93％以上，进而真实反映细菌降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的能力，提高细菌对2，2′，4，4′-四溴联苯醚降解率的准确性，具有至关重要的应用性和科学性。本发明的操作简单易行，也可用于其它持久性有机污染物微生物降解测定回收率过程中破乳化实验，以期能够最大程度上反映真实降解值。

具体实施方式

[0006] 本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

[0007] 具体实施方式一：本实施方式提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，按以下步骤进行：一、挑取可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌接种于LB液体培养基，于35℃、130r/min震荡培养24h，得菌液；二、将菌液于12000r/min离心10min，收集菌体，用无机盐液体培养基洗涤菌体3次，将洗涤后的菌体用无机盐液体培养基稀释，得菌悬液；三、添加10μL浓度为200mg/L的2，2′，4，4′-四溴联苯醚甲醇储备液于样品瓶中，待储备液中甲醇挥发完全后，向样品瓶中加入菌悬液使2，2′，4，4′-四溴联苯醚的浓度为
100μg/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的体积为混合液体积的50％，然后再加入6～10mL萃取液，于60～80℃水浴20min，再以3000r/min离心15～20min进行破乳，然后进行液液萃取，回收萃取液，应用GC-MS测定2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率，即完成。

[0008] 本实施方式步骤三所述2，2′，4，4′-四溴联苯醚甲醇储备液即为2，2′，4，4′-四溴联苯醚的甲醇溶液。

[0009] 本实施方式步骤一中每升LB液体培养基由10g蛋白胨、5g酵母浸膏、10g NaCl和余量的蒸馏水组成，pH为7.0。步骤二中每升无机盐液体培养基由3.5g Na2HPO4·2H2O、1g KH2PO4、0.5g(NH4)2SO4、0.1g MgCl2·6H2O、0.005g Ca(NO3)2·4H2O和余量的蒸馏水组成，pH为8.0。

[0010] 具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：步骤二中菌悬液在600nm处吸光值为1。其它与具体实施方式一相同。

[0011] 具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤四中再加入8mL萃取液。其它与具体实施方式一或二相同。

[0012] 具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤四所述萃取液为正己烷。其它与具体实施方式一至三之一相同。

[0013] 具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤四中于70℃水浴20min。其它与具体实施方式一至四之一相同。

[0014] 具体实施方式六：本实施方式提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率的破乳方法，按以下步骤进行：一、挑取可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌接种于LB液体培养基，于35℃、130r/min震荡培养24h，得菌液；二、将菌液于12000r/min离心10min，收集菌体，用无机盐液体培养基洗涤菌体3次，将洗涤后的菌体用无机盐液体培养基稀释，得菌悬液；三、添加10μL浓度为200mg/L的2，2′，4，4′-四溴联苯醚甲醇储备液于样品瓶中，待储备液中甲醇挥发完全后，向样品瓶中加入菌悬液使2，2′，4，4′-四溴联苯醚的浓度为
100μg/L，得混合液；四、向混合液中加入甲醇，甲醇的体积为混合液体积的50％，然后再加入10mL正己烷，于60℃水浴20min，再以3000r/min离心20min进行破乳，然后进行液液萃取，回收正己烷，应用GC-MS测定2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率，即完成。

[0015] 本实施方式步骤一中可降解2，2′，4，4′-四溴联苯醚的细菌为Burkholderia xenovorans LB400，购买自百灵威科技有限公司，编号为DSMZ NO.17367。

[0016] 本实施方式2，2′，4，4′-四溴联苯醚的回收率为95.6％。

[0017] 为验证本实施方式对2，2′，4，4′-四溴联苯醚的回收效果，同时使用NaCl法、水浴法和超声法进行破乳并回收2，2′，4，4′-四溴联苯醚。2，2′，4，4′-四溴联苯醚回收率分别为：NaCl法6.9％，水浴法73.1％，超声法68.8％。实验结果表明：本实施方式方法可提高2，2′，4，4′-四溴联苯醚的回收率，进而真实反映细菌降解2，2′，4，4′-四溴联