一种鱼腥草快速增殖的方法

摘要

本发明公开了一种鱼腥草快速增殖的方法。包括：外植体的取材与消毒；诱导培养；增殖和生根培养；尤其增殖培养和生根培养能同时进行，培养基配方为：MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+GA34-5mg/L+0.2mg/L NAA，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，缩短了获得种苗的时间，提高了生产效率。本方法能够快速、高效、大规模生产纯正、健康、整齐一致的鱼腥草种苗。

权利要求

1.一种鱼腥草快速增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的取材与消毒：取当年生鱼腥草的地下茎节流水清洗4-6h后，切成带1-2个茎节的茎段，用链霉素和青霉素钠的混合液浸泡12h，混合液中链霉素和青霉素钠的浓度均为0.5g/L；然后用70%酒精浸泡30s；再用0.1%升汞消毒12min；后用无菌水冲洗4-5次；

最后用0.1%升汞消毒灭菌10min，无菌水冲洗5次后备用；

（2）诱导培养：将消毒好的带1-2个茎节的茎段接种在MS+0.5mg/LNAA+2mg/L6-BA培养基上诱导不定芽产生，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到1-3cm高的启动苗；

（3）增殖培养与生根：将启动苗切成单个茎段，接种在培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+GA34-5mg/L+0.2mg/L NAA上，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到高6-8cm带5-6个茎节的生根的鱼腥草苗；

（4）炼苗与移栽：将步骤（3）得到的鱼腥草苗进行炼苗移栽。

说明书

一种鱼腥草快速增殖的方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种鱼腥草的快速增殖方法。

背景技术

[0002] 鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为三白草科蕺菜的嫩茎叶，因其茎叶搓碎后有鱼腥味，故名鱼腥草，又名蕺儿菜、折耳根等。我国从20世纪40年代初开始进行鱼腥草的人工栽培，但并没有形成规模，长期以来主要利用野生资源。鱼腥草素（癸酰乙醛）是鱼腥草挥发油中的主要药用成分，其对金黄色葡萄球菌等有明显抑制作用（熊大胜，鱼腥草提取抑菌作用研究，常德师范学院学报自然科学版,2002,14(4):59-60）。鱼腥草还含有槲皮甙等有效成分，具有抗病毒和利尿作用。临床实践表明：鱼腥草对于上呼吸道感染、支气管炎、肺炎、慢性气管炎等均有较好的疗效，尤其对治疗肺痈有特殊的疗效（陈建武，宋康，鱼腥草治疗肺系疾病概述，浙江中西医结合杂志,2010,20(11):713-714；可馨，治疗肺痈的良药，求医问药,2011,07:43-44）。另外，鱼腥草还能增强机体免疫功能，抗肿瘤、消炎（曹俊双,秦荣和，鱼腥草的药理作用及临床应用，现代中西医结合杂志,2001,10:572）等方面的作用。被国家卫生部正式确定为“既是药品，又是食品”的资源之一（国家药典委员会，中华人民共和国药典(一部)，北京:化学工业出版社,2001:606-607）。

[0003] 鱼腥草的繁殖技术主要包括扦插繁殖(余启高等,鱼腥草优质高产栽培技术,安徽农学通报,2007,05:175)分株繁殖（王班琼，浅析鱼腥草的发展及栽培技术，农技服务,2007,24(4):102；刘国庆，鱼腥草栽培技术，现代园艺，2009,4:40-41；徐如意等，鱼腥草人工栽培技术，科技宝典，种植,2008,05:87-880）、根茎繁殖（黄吉美等,鱼腥草无公害丰产栽培技术，云南农业科技,2004,5:15-16；陈洪德等,鱼腥草的栽培管理与综合开发，福建茶叶,2001,01:23-24）、组织培养繁殖。近年来，生产中开始出现病害严重，种根使用混杂，鱼腥草的种根产量和质量难以保证等问题（高静等，鱼腥草的现代研究进展，湖南中医学院学报，2005，12（6）：60-62）。因此通过鱼腥草组织或器官的离体培养和形态发生（袁艺等，鱼腥草组织培养的研究，激光生物报，2004,13(6):214-21；龚伟等，鱼腥草组织培养，亚热带植物科学，2005,34(1):60-62），实现种苗的快速繁殖，解决因病害或有性繁殖系数低而影响产量和质量的问题，具有十分重要的生产意义。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种鱼腥草快速增殖的方法，采用鱼腥草增殖与生根同步的方法，以便快速、高效、大规模地生产纯正、健康、整齐一致的鱼腥草种苗。

[0005] 本发明的目的是通过以下方式实现的。

[0006] 一种鱼腥草快速增殖方法，包括以下步骤：

[0007] （1）外植体的取材与消毒：取当年生鱼腥草的地下茎节流水清洗4-6h后，切成带1-2个茎节的茎段，用链霉素和青霉素钠的混合液浸泡12h，混合液中链霉素和青霉素钠的浓度均为0.5g/L；然后用70%酒精浸泡30s；再用0.1%升汞消毒12min；后用无菌水冲洗
4-5次；最后用0.1%升汞消毒灭菌10min，无菌水冲洗5次后备用；

[0008] （2）诱导培养：将消毒好的带1-2个茎节的茎段接种在MS+0.5mg/LNAA+2mg/L6-BA培养基上诱导不定芽产生，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到1-3cm高的启动苗；

[0009] （3）增殖培养与生根：将启动苗切成单个茎段，接种在培养基MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+GA34-5mg/L+0.2mg/L NAA上，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到高6-8cm带5-6个茎节的生根的鱼腥草苗；

[0010] （4）炼苗与移栽：将步骤（3）得到的鱼腥草苗进行炼苗移栽。

[0011] 该发明具有以下优点：（1）采用二步灭菌法比一步灭菌法的灭菌效果更好，对鱼腥草内生细菌的有较好的抑制作用。(2)利用地下茎节做外植体,能灭菌得比较彻底且能保证较高的存活率。采用地上茎节做外植体，如果剥落全部叶片，则容易导致幼嫩芽点被伤害和脱落，存活率不高；如果保留部分叶片，其托叶与叶柄合生成的鞘内部消毒不能彻底，灭菌过程中污染率特别高。（3）增殖和生根培养通过添加合适量的GA3，能促进鱼腥草不定芽的伸长，繁殖系数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。（4）生根率和移栽成活率高，遗传稳定性好。

[0012] 此方法可以实现快速繁殖鱼腥草种苗大规模的生产，可以一步快速获得完整植株，每4-6继代一次，移栽成活率达99%左右，对鱼腥草品种选育具有积极的作用。

附图说明

[0013] 图1是本发明中由地下茎节茎段获得的各阶段鱼腥草植株，其中：A.茎段的启动培养,B-C.增殖与生根培养,D.生根苗移栽到苗床（30d后）。

具体实施方式

[0014] 以下实施例旨在进一步说明本发明,而不会限制本发明。

[0015] 实施例1：

[0016] （1）外植体的取材与消毒：取当年生鱼腥草的地下茎节流水清洗4-6h后，切成带1-2个茎节的茎段，用链霉素和青霉素钠的混合液浸泡12h，混合液中链霉素和青霉素钠的浓度均为0.5g/L；然后用70%酒精浸泡30s；再用0.1%升汞消毒12min；后用无菌水冲洗
4-5次；最后用0.1%升汞消毒灭菌10min，无菌水冲洗5次后备用；

[0017] （2）诱导培养：将消毒好的带1-2个茎节的茎段接种在MS+0.5mg/LNAA+2mg/L6-BA培养基上诱导不定芽产生，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到1-3cm高的启动苗；（图1，A）

[0018] （3）增殖培养与生根：将启动苗切成单个茎段，接种在培养基MS+GA34-5mg/L+0.2mg/LNAA上，其中MS培养基中的蔗糖添加量为30g/L，琼脂添加量为5g/L，培养条件为25℃±1℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为16h/d，30d后得到高6-8cm带5-6个茎节的生根的鱼腥草苗；增殖系数高达5.63左右，生根率达100%；（图1，B,C）[0019] （4）炼苗与移栽：将生根苗的容器拧开瓶盖，在普通房间放置24h，然后用镊子将生根苗移出，在自来水下冲洗去掉附着在根上的培养基，移栽到温室苗床上，使用的培养基质为培养土（在市场所购）:蛭石=1：1；浇透水；之后进行正常的肥水管理；成活的植株与实生苗无差异，完全保持母本的遗传特征（图1，D）。成活率达到99%左右。