靛玉红在降低机体血中砷含量中的用途

摘要

本发明公开了靛玉红的新用途。靛玉红是青黛中所含的主成份，其化学结构是一个双吲哚类化合物。靛玉红对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；靛玉红还能增强动物的单核巨噬细胞系统的吞噬能力。本发明靛玉红可以降低机体血中砷含量。砷是一种对机体有严重危害的毒性物质。研究表明，与空白对照组比较，服用靛玉红组大鼠血中砷的浓度明显降低。

权利要求

1.靛玉红在制备用于降低血液中重金属砷的含量的药物中的应用。

说明书

靛玉红在降低机体血中砷含量中的用途

技术领域：

[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及靛玉红在降低机体血中砷含量中的作用。背景技术：

[0002] 砷广泛地存在于自然界，在工农业生产中应用颇广，是一种对机体有严重危害的毒性物质。砷为原生质毒物，其易与组织细胞内酶系中巯基结合，从而抑制酶的活性，引起细胞代谢障碍，形成对中枢神经系统、心血管系统、胃肠系统的毒性，导致口腔、食道、胃粘膜糜烂、肿胀出血、中毒性肝炎、亚急性黄色肝萎缩、心脏脂肪浸润、中枢神经系统缺氧、肾小球损伤等。近年来，国内外地方性砷中毒比较严重，在我国畜牧业仍在广泛使用有机砷作为饲料添加剂(促生长剂)，导致常见的食物(动物性和植物性)均可检测出砷，尤其以海产品为最高，作为食物链终端的人类更是不可避免在体内具有一定的砷蓄积。目前，关于砷中毒的治疗方法主要有补硒治疗、用巯基驱砷治疗和利用中药治疗等，但是迄今为止，没有任何药物、任何疗法取得满意的排砷疗效。因此，寻找有效的排砷的药物或疗法是一项迫切的任务。发明内容：

[0003] 靛玉红是青黛中所含的主成份，其化学结构是一个双吲哚类化合物。分子式为C16H10N2O2。靛玉红对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；靛玉红还能增强动物的单核巨噬细胞系统的吞噬能力。但是之前靛玉红在医学研究中仅作为抗癌药物，并在过去文献显示靛玉红对慢性粒白血病疗效显著。

[0004] 本发明中将为靛玉红提供一个新的用途，即单独使用时有明显的降低机体血砷含量作用。

[0005] 附图说明：图1是空白组和靛玉红混悬液灌胃组大鼠平均全血砷浓度-时间曲线图(n＝12)具体实施方式：

[0006] -材料与方法

[0007] 1.1实验动物

[0008] 实验动物采用雄性Sprague-Dawley大鼠，雄性，体重320g～370g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号为SCXK(沪)2007-0005。

[0009] 饲养环境为普通级实验动物房，温度：22℃～23℃，相对湿度40％～70％，使用许可证号为SCXK(沪)2006-0003。

[0010] 1.2药品与试剂

[0011] (1)As标准储备溶液1g·L-1(As standard stock solution，1g·L-1)：Merck公司提供，批号HC 961324；

[0012] (2)硝酸(Nitric acid)：HPLC级，Merck公司，批号K40748356004；

[0013] (3)盐酸(Hydrochloride acid)：HPLC级，Merck公司，批号K39343417841；

[0014] (4)氢氟酸(Hydrofluoric acid)：优级纯，国药集团化学试剂有限公司提供，批号20100520；

[0015] (5)高纯氦气(99.999％)：上海成功气体有限公司提供；

[0016] (6)靛玉红原料：纯度95％，批号MRHGG 100313，陕西森弗生物技术有限公司提供；

[0017] (7)羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium，CMC)：国药集团化学试剂有限公司提供，批号20100520；

[0018] (8)超纯水(purified water)：Millipore A10超纯水仪制备；

[0019] 1.3试剂配制

[0020] (1)砷系列标准溶液的配制

[0021] ICP-AES用砷标准溶液：精密量取As标准储备溶液(1g·L-1)0.25mL，加入50mL-1容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得5mg·L 的砷标准溶液；精密量取As标准储备溶液-1
0.05mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得1mg·L 的砷标准溶液；精密量取-1 -1
5mg·L 的砷标准溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得0.5mg·L 的-1
砷标准溶液；精密量取1mg·L 的砷标准溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻-1 -1
度，即得0.1mg·L (100μg·L )的砷标准溶液。

[0022] 精密量取上述100μg·L-1的砷标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配-1 -1至刻度，即得50μg·L 的砷标准溶液；精密量取50μg·L 的砷标准溶液20mL，加入50mL-1 -1
容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得20μg·L 的砷标准溶液；精密量取20μg·L 的砷-1
标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得10μg·L 的砷标准溶液；
-1
精密量取10μg·L 的砷标准溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去离子水配至刻度，即得-1 -1
5μg·L 的砷标准溶液；精密量取5μg·L 的砷标准溶液10mL，加入50mL容量瓶中，用
-1
去离子水配至刻度，即得1μg·L 的砷标准溶液。

[0023] (2)0.5％羧甲基纤维素钠溶液的配制

[0024] 准确称取5.00g的羧甲基纤维素钠粉术，置800ml烧杯中，加入500ml蒸馏水，60℃磁力搅拌4h，转移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。4℃储存备用。

[0025] (3)药品混悬液的制备

[0026] 靛玉红混悬液：精密称取靛玉红52.6mg，研磨成细粉，缓慢加入少量0.5％CMC溶液，继续研磨至均匀，转移至25mL具塞刻度量筒中，多次转移合并，加至25mL，配制成浓度为2g·L-1的混悬液。临配现用。

[0027] 1.4仪器

[0028] (1)美国Perkin Elmer公司OPTIMA-DV 5300型电感耦和等离子发射光谱仪(ICP-AES)；

[0029] (2)美国Agilent公司7500Ce电感耦和等离子质谱仪(ICP-MS)；

[0030] (3)德国Saturious BT2202S百分之一分析天平(称取血样)；

[0031] (4)上海博迅实验有限公司SSW型电热恒温水槽；

[0032] (5)瑞士Mettler Toledo AL204-IC精密天平(称取原料)；

[0033] (6)瑞士Mettler Toledo XP-205DU十万分之一精密天平(称取对照品)

[0034] 1.5仪器设置

[0035] (1)ICP-AES仪器方法设置

[0036] 仪器工作参数：RF功率1300w，雾化器流量0.8L·min-1，辅助气流量0.2L·min-1，-1 -1等离子气流量15L·min ，蠕动泵流速15mL·min ，积分时间1～20s，分析波长118.979nm。

[0037] (2)ICP-MS仪器方法设置

[0038] 仪器工作参数：射频功率1500w；采样深度8.0mm；载气流量0.7L·min-1；辅助-1 -1气流量0.2L·min ；等离子气流量15L·min ；反应气氦气；S/C温度2℃；样品提升速度
0.5rps；雾化器：Babington高盐型；采样锥类型和直径：镍锥，0.8mm；截取锥类型和直径：
镍锥，0.4mm；采集模式：Spectrum；点数/质量：3；重复次数：3；检测方式：自动；分析波长
118.979nm。

[0039] 1.6试验设计

[0040] 选取12只大鼠，不禁食，体重为(357.8±10.7)g，随机分为2组，每组于给药前和给药后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12、24、32、48、56、72、80、96、104、120、144h大鼠眼眶静脉丛采集抗凝全血0.5mL，-40℃保存直至分析。

[0041] 表1-1不同组别的给药安排

[0042]

[0043] 1.7含砷样品预处理

[0044] 精密称取待测大鼠全血0.5g于全新气相顶空瓶中，加入4mL硝酸、1mL盐酸和0.5mL氢氟酸，加盖密封。放置于50℃水浴中温育过夜。第二天开盖将顶空瓶内样品转移至15mL全新Falcon管中，多次润洗，合并所有液体并加水至15g。4000rpm离心10min，取上清6mL进样ICP-AES或ICP-MS分析。

[0045] 1.8数据处理与统计

[0046] AUC0-t(0-144h血砷-时间曲线下面积)采用统计矩计算。两组间AUC0-t、差异采用SNK检验(q检验)，由SAS 9.1.3实现。

[0047] 二结果

[0048] 1.砷标准曲线

[0049] ICP-AES：标准曲线为过原点曲线，浓度分别为0、0.1、0.5、1、5mg·L-1，回归方程为，线性范围为0～5mg·L-1。

[0050] ICP-MS：标准曲线为过原点曲线，浓度分别为0、1、2、5、10、20、50、100μg·L-1，回归方程为Y＝7.035e-3*X-2.813e-4，线性范围为0～100μg·L-1。

[0051] 2.大鼠体内药代动力学

[0052] 空白组大鼠全血砷浓度见表2-1，灌胃药物混悬液后的全血砷浓度见表2-2，两组AUC0-t值和组间比较结果见表2-3。使用靛玉红可使血砷的AUC0-t显著下降。

[0053] 表2-1空白组大鼠的全血总砷浓度(mg·L-1)

[0054]

[0055] 表2-2大鼠灌胃靛玉红(50mg·kg-1)后的全血总砷浓度(mg·L-1)

[0056]

[0057] 表2-3不同组别的血砷AUC0-t

[0058]

[0059] 注：“*”和空白组比较P＜0.05