AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法

摘要

本发明提供了一种AV/BV联合检测试剂盒的五项质控品及其制备方法，属于女性妇科临床检测时，对所用试剂盒质量控制的质控品。该质控品包括阴道分泌物五项阳性质控品和阴道分泌物五项阴性质控品，且两种质控品以干粉状态保存。用于阴道炎检测试剂盒的质量检测，可对过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和凝固酶共五项生化指标进行质量控制。由于质控品有效成分为生物酶类，采用冻干技术制成干粉质控品，避免了液体质控品在运输过程、保存过程中失活。该质控品不含人类阴道分泌物，对环境和操作者不会造成感染。

权利要求

1.一种AV/BV联合检测试剂盒的质控品，其特征在于，包括阴性质控品和阳性质控品；

阴性质控品的成分为：模拟阴道分泌物成分的基质I、过氧化氢2～5μmol/L、唾液酸苷酶0～5U/L、白细胞酯酶0～6U/L、β-葡萄糖醛酸苷酶0～10U/L和蛋白酶0～12U/L，pH3.0～4.0；

阳性质控品的成分为：模拟阴道分泌物成分的基质II、过氧化氢0～1.5μmol/L、唾液酸苷酶7～12U/L、白细胞酯酶9～15U/L、β-葡萄糖醛酸苷酶15～24U/L和蛋白酶20～

30U/L，pH5.0～6.0；

其中，阴性质控品和阳性质控品经冷冻干燥后呈干粉状；

模拟阴道分泌物成分的基质I配方为：

模拟阴道分泌物成分的基质II配方为：

2.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，模拟阴道分泌物成分的基质I配方为：

3.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，模拟阴道分泌物成分的基质II配方为：

4.根据权利要求1-3任一项所述的质控品，其特征在于，所述AV/BV联合检测试剂盒，其包括：

1）反应装置

所述反应装置具有过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄糖醛酸苷酶反应孔和凝固酶反应孔；

2）一种或多种显色剂；

3）样品稀释液；

其中，所述反应装置的过氧化氢反应孔包被有辣根过氧化物酶和二乙氨基对苯二胺；

所述反应装置的唾液酸苷酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐，其对应的显色剂A为固紫B或固红TR；

所述反应装置的白细胞酯酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸盐；

所述反应装置的β-葡萄糖醛酸苷酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐；

所述反应装置的凝固酶反应孔包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其对应的显色剂B为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR；

所述样品稀释液中含有Triton×100和树胶。

5.权利要求1-4任一项所述质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）质控品溶液的配制：按照权利要求1-6任一项所述质控品的成分配方，分别配制阴性质控品溶液和阳性质控品溶液；

2）真空干燥：将上述质控品溶液分装后置于-40℃2h，然后抽真空，调温至-10℃维持

10h，升温至0℃维持5h，升温至25℃维持10h，即得。

说明书

AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物制品技术领域，具体地说，涉及AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法。

背景技术

[0002] 近年来研究发现，女性细菌性阴道感染可分为两种，一种是由厌氧菌和兼性厌氧菌引起的，其主要预成酶为唾液酸苷酶；另一种是由需氧菌引起的，主要预成酶为β-葡萄糖醛酸苷酶和凝固酶，同时临床上用白细胞酯酶来评价女性阴道是否存在炎症，根据过氧化氢浓度来判定阴道微生态环境。应用相关试剂盒（如ZL200910244266.X）可以诊断女性是否感染需氧菌阴道炎和细菌性阴道炎，该项技术被广泛应用于妇科诊断中。

[0003] 试剂盒的质量检测关系到病人的明确诊断和病情监测，在有关女性阴道炎的筛查中，由于阴道分泌物成分特殊，个体差异较大，很难用其检测后的标本作为制备质控品的基质，且白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶稳定性极差，非常容易失活，液体质控品在-20℃能保存较长时间，而4℃只能保存3天。

[0004] 目前，市场上有关女性阴道炎检测的试剂盒种类繁多，但是未见其提供配套试剂盒的质控品，由于阴道分泌物成分特殊，个体差异较大，混合正常分泌物来源之一是医学检验日常工作中剩余的标本，由于每个剩余标本量仅几百微升甚至更少，不适合商品化生产要求数千毫升以上的用量，同时对每个标本进行致病病原体的检测成本很高。因此，亟待开发出安全、有效的用于女性阴道炎检测试剂盒质量检测的质控品。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法。

[0006] 为了实现本发明目的，本发明的一种AV/BV联合检测试剂盒的质控品,包括阴性质控品和阳性质控品；

[0007] 阴性质控品的成分为：模拟阴道分泌物成分的基质I+过氧化氢2～5μmol/L+唾液酸苷酶0～5U/L+白细胞酯酶0～6U/L+β-葡萄糖醛酸苷酶0～10U/L+蛋白酶（催化作用相当于凝固酶）0～12U/L，pH3.0～4.0；

[0008] 阳性质控品的成分为：模拟阴道分泌物成分的基质II+过氧化氢0～1.5μmol/L+唾液酸苷酶7～12U/L+白细胞酯酶9～15U/L+β-葡萄糖醛酸苷酶15～24U/L+蛋白酶（催化作用相当于凝固酶）20～30U/L，pH5.0～6.0；

[0009] 其中，阴性质控品和阳性质控品经冷冻干燥后呈干粉状；且可以做成试剂盒的形式。

[0010] 模拟阴道分泌物成分的基质I配方为：

[0011]

[0012] 优选地，模拟阴道分泌物成分的基质I配方为：

[0013]

[0014] 模拟阴道分泌物成分的基质II配方为：

[0015]

[0016] 优选地，模拟阴道分泌物成分的基质II配方为：

[0017]

[0018] 前述的AV/BV联合检测试剂盒，其包括：

[0019] 1）反应装置

[0020] 所述反应装置具有过氧化氢反应孔、唾液酸苷酶反应孔、白细胞酯酶反应孔、β-葡萄糖醛酸苷酶反应孔和凝固酶反应孔；

[0021] 2）一种或多种显色剂；

[0022] 3）样品稀释液；

[0023] 其中，所述反应装置的过氧化氢反应孔包被有辣根过氧化物酶和二乙氨基对苯二胺；

[0024] 所述反应装置的唾液酸苷酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸盐，其对应的显色剂A为固紫B或固红TR；

[0025] 所述反应装置的白细胞酯酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸盐；

[0026] 所述反应装置的β-葡萄糖醛酸苷酶反应孔包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖醛酸盐；

[0027] 所述反应装置的凝固酶反应孔包被有甘氨酰精氨酸β萘胺，其对应的显色剂B为固蓝B、固红B、固蓝BB或固蓝RR；

[0028] 所述样品稀释液中含有Triton×100和树胶。

[0029] 本发明还提供前述AV/BV联合检测试剂盒的质控品的制备方法，包括以下步骤：

[0030] 1）质控品溶液的配制：按照上述各成分配方，分别配制阴性质控品溶液和阳性质控品溶液；采用常规的化学配制方法，在常温下溶解配制，配制得到的阴性质控品溶液应为澄清透明液体，阳性质控品溶液应为乳白色浑浊液体。

[0031] 2）真空干燥：将上述质控品溶液分装后置于-40℃2h，然后抽真空，调温至-10℃维持10h，升温至0℃维持5h，升温至25℃维持10h，即得。

[0032] 本发明提供一种模拟阴道分泌物成分的基质，同时含有过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和蛋白酶（催化作用相当于凝固酶）以及冻干赋形剂，对AV/BV联合检测试剂盒进行质量控制，质控品能够在常温下运输，使用者只需将其复溶便可进行操作，增强了检测结果的互认性和可靠性。

[0033] 可将本发明制备的质控品保存在冻干西林瓶中，并进行密封处理，只需将质控品按照要求进行复溶，并按照试剂盒的操作程序进行测试。用于阴道炎检测试剂盒的质量检测，可以对过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和凝固酶共五项生化指标进行质量控制。由于质控品有效成分为生物酶类，采用冻干技术制成干粉质控品，避免了液体质控品在运输过程、保存过程中失活。该质控品不含人类阴道分泌物，对环境和操作者不会造成感染。

[0034] 本发明的优点在于：质控品的制备方法简单、易操作、瓶间差异小、冻干品复溶后稳定性好、质控检测项目齐全、生产成本低，有效期长，使用方便、安全、稳定，可满足医疗诊断的需求。

附图说明

[0035] 图1为本发明实施例1~3中涉及的AV/BV联合检测试剂盒的反应装置示意图，其中1代表反应基板，2为过氧化氢反应孔，3为唾液酸苷酶反应孔，4为白细胞酯酶反应孔，5为β-葡萄糖醛酸酶反应孔，6为凝固酶反应孔。

具体实施方式

[0036] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

[0037] 实施例1AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法

[0038] AV/BV联合检测试剂盒五项质控品制备包括阴性、阳性质控品的配制、分装和冻干的步骤。

[0039] 1、阴性质控品中主要成分：

[0040]

[0041] 2、阳性质控品中主要成分：

[0042]

[0043] 阴性质控液：按上述阴性质控品主要成分配方，采用常规的化学配制方法，在常温下溶解配制，应得到澄清透明液体；

[0044] 阳性质控液：按上述阳性质控品主要成分配方，采用常规的化学配制方法，在常温下溶解配制，应得到乳白色浑浊液体；

[0045] 将上述制备的阳性和阴性质控液分别注入灌装器中，分装于西林瓶中，200μL/瓶，-20℃保存；

[0046] 将上述制得的阴性、阳性质控液进行冻干，制得干粉质控品，冻干步骤为：启动真空冷冻干燥机，设置冻干曲线为：-40℃维持2h后，抽2h后启动真空调温至-10℃维持10h，升温至0℃维持5h，升温至25℃维持10h，最后压塞取出。

[0047] 采用北京中生金域诊断技术有限公司生产的需氧菌阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒（即AV/BV联合检测试剂盒）进行检测，检测结果如表1和表2所示。

[0048] 表1瓶间差试验

[0049]

[0050] 注：SNa、LE、β-D和GA分别表示唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和蛋白酶（下同）

[0051] 表2配套试剂盒检测符合率

[0052]

[0053] 每天取出56℃阴、阳性干粉质控品与4℃阴、阳性干粉质控品对比其外观颜色，同时用“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”，对比显色变化，连续测定7天，检测结果如表3和表4所示。

[0054] 表3阳性质控品检测结果

[0055]

[0056] 注：1、2和3表示重复三次

[0057] 表4阴性质控品检测结果

[0058]

[0059] 通过56℃考察，阴、阳性质控品放置在56℃7天后，在“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”上依然能反应，通过计算，其效期为12个月。

[0060] 实施例2AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法

[0061] AV/BV联合检测试剂盒五项质控品的制备方法同实施例1。

[0062] 其中，阴性质控品的成分同实施例1中的描述。

[0063] 阳性质控品中主要成分为：

[0064]

[0065]

[0066] 阳性质控液：按上述阳性质控品主要成分配方，采用常规的化学配制方法，在常温下溶解配制，应得到乳白色浑浊液体；

[0067] 将上述制备的阳性和阴性质控液分别注入灌装器中，分装于西林瓶中，200μL/瓶，-20℃保存。

[0068] 将上述制得的阴性、阳性质控液进行冻干，制得干粉质控品，冻干步骤为：启动真空冷冻干燥机，设置冻干曲线为：-40℃维持2h后，抽2h后启动真空调温至-10℃维持15h，升温至0℃维持8h，升温至25℃维持15h，最后压塞取出。

[0069] 采用北京中生金域诊断技术有限公司生产的需氧菌阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒（即AV/BV联合检测试剂盒）进行检测，检测结果如表5和表6所示。

[0070] 表5瓶间差试验

[0071]

[0072]

[0073] 表6配套试剂盒检测符合率

[0074]

[0075] 每天取出56℃阴、阳性干粉质控品与4℃阴、阳性干粉质控品对比其外观颜色，同时用“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”，对比显色变化，连续测定7天，检测结果如表7和表8所示。

[0076] 表7阳性质控品检测结果

[0077]

[0078]

[0079] 表8阴性质控品检测结果

[0080]

[0081]

[0082] 通过56℃考察，阴、阳性质控品放置在56℃7天后，在“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”上依然能反应，通过计算，其效期为12个月。

[0083] 实施例3AV/BV联合检测试剂盒的质控品及其制备方法

[0084] AV/BV联合检测试剂盒五项质控品的制备方法同实施例1。

[0085] 其中，阴性质控品的成分同实施例1中的描述。

[0086] 阳性质控品中主要成分为：

[0087]

[0088]

[0089] 阳性质控液：按上述阳性质控品主要成分配方，采用常规的化学配制方法，在常温下溶解配制，应得到乳白色浑浊液体；

[0090] 将上述制备的阳性和阴性质控液分别注入灌装器中，分装于西林瓶瓶中，200μL/瓶，-20℃保存。

[0091] 将上述制得的阴性、阳性质控液进行冻干，制得干粉质控品，冻干步骤为：启动真空冷冻干燥机，设置冻干曲线为：-40℃维持2h后，抽2h后启动真空调温至-10℃维持20h，升温至0℃维持10h，升温至25℃维持20h，最后压塞取出。

[0092] 采用北京中生金域诊断技术有限公司生产的需氧菌阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒（即AV/BV联合检测试剂盒）进行检测，检测结果如表9和表10所示。

[0093] 表9瓶间差试验

[0094]

[0095] 表10配套试剂盒检测符合率

[0096]

[0097] 每天取出56℃阴、阳性干粉质控品与4℃阴、阳性干粉质控品对比其外观颜色，同时用“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”，对比显色变化，连续测定7天，检测结果如表11和表12所示。

[0098] 表11阳性质控品检测结果

[0099]

[0100]

[0101] 表12阴性质控品检测结果

[0102]

[0103]

[0104] 通过56℃考察，阴、阳性质控品放置在56℃7天后，在“需氧菌性阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒”上依然能反应，通过计算，其效期为12个月。

[0105] 以上实施例1~3中涉及的需氧菌阴道炎/细菌性阴道病五项联合测定试剂盒（即AV/BV联合检测试剂盒）按照ZL200910244266.X中的描述制备。具体为：

[0106] 1、过氧化氢反应垫的制备：

[0107] 溶液A：二乙氨基对苯二胺 10mg

[0108] α-萘酚 20mg

[0109] 无水乙醇 10ml

[0110] 溶液B：辣根过氧化物酶10000单位

[0111] 失活纯化的牛血清白蛋白 1g

[0112] Tris-HCl 200mmol/L pH7.010ml

[0113] 将溶液A1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥1小时后，在纸垫上滴加溶液B 1μl，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在4℃；

[0114] 2、唾液酸苷酶反应垫的制备：

[0115] 底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-N-乙酰神经氨酸钠盐0.05g

[0116] 乙酸盐溶液200mmol/L pH5.510ml，其中含NaCl0.2mol/L

[0117] 将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在4℃；

[0118] 3、白细胞酯酶反应垫的制备：

[0119] 底物溶液：5-溴-4-氯-3-吲哚-乙酸钠盐0.05g

[0120] 磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.010ml，其中含硫酸钠2wt%

[0121] 将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在4℃;

[0122] 4、β-葡萄糖醛酸酶反应垫的制备：

[0123] 底物溶液：5-溴-4-氯-3吲哚-β-葡萄糖醛酸钠盐0.05g

[0124] 磷酸盐缓冲液200mmol/L pH7.010ml，其中含乙二醇50mmol/L

[0125] 将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在4℃；

[0126] 5、凝固酶反应垫的制备：

[0127] 底物溶液：甘氨酰精氨酸β萘胺0.05g

[0128] Tris-HCl 200mmol/L pH 8.510ml

[0129] 将底物溶液1μl滴加在Φ4mm层析纸垫上，避光条件下，25℃流动空气干燥4小时，密封保存在4℃；

[0130] 6、反应装置的制备：

[0131] 反应装置由ABS工程塑料制成，其上有5个Φ4mm的圆孔，从上至下分别在孔中填入上述过氧化氢反应垫、唾液酸苷酶反应垫、白细胞酯酶反应垫、β-葡萄糖醛酸酶反应垫和凝固酶反应垫，用冲压机压实，在孔上粘贴铝箔保护膜，装入铝箔袋中；

[0132] 7、样品稀释液的制备：

[0133]

[0134] 充分混匀，装入瓶中。

[0135] 8、显色剂A的制备：

[0136]

[0137] 充分混匀，分装在黑色瓶中；

[0138] 9、显色剂B的制备：

[0139]

[0140] 充分混匀，分装在黑色瓶中。

[0141] AV/BV联合检测试剂盒的反应装置示意图见图1。

[0142] 本发明提供一种AV/BV联合检测试剂盒的五项质控品及其制备方法，属于女性妇科临床检测时，对所用试剂盒质量控制的质控品。该质控品包括阴道分泌物五项阳性质控品和阴道分泌物五项阴性质控品，且两种质控品以干粉状态保存。本发明提供了一种模拟阴道分泌物成分的基质，在基质中加入过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、蛋白酶（催化作用相当于凝固酶）以及赋形剂（蔗糖、D-海藻糖）等成分，根据过氧化氢浓度和酶活力不同，区别为阴性和阳性的质控品。本发明还提供了AV/BV联合检测试剂盒的五项质控品的制备方法，采用真空冷冻干燥技术制备的干粉质控品。本发明的AV/BV联合检测试剂盒的五项质控品大大延长了质控品的保存期限，使得到的质控品能够在常温下运输，使用者只需将其复溶便可进行操作，且对环境友好。

[0143] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。