一种骨钙的制备方法及骨钙素

摘要

本发明公开了一种骨钙的制备方法及由该方法制得的骨钙素。包括如下步骤：三次脱脂、两次离心、两次发酵和蛋白酶二次水解。采用本发明的脱脂工艺制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解获得的钙剂中脂肪含量低于0.1％。产品对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康，但是又未因此而增加经济负担。

权利要求

1.一种骨钙的制备方法，包括如下步骤：

(1)将骨粉碎，浸提去骨油，弃上清液；

(2)将浸提后的骨料浸泡漂洗、离心，弃上清液；

(3)离心后的骨料加水，调PH值，加碱性脂肪酶水解，离心，弃上清液；

(4)将步骤(3)中离心后的骨料加水，加入乳酸菌发酵，高温灭活；

(5)步骤(4)中的发酵液再加入蛋白酶二次水解；

(6)步骤(5)中的水解液中再加入乳酸菌发酵，高温灭活，即得；

步骤(1)骨料颗粒5～40mm加入乙醇，60～80℃，45～75min；

步骤(4)所述的发酵是乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶3～

5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.01～0.04％，35～50℃，发酵12h，

120℃灭菌30min；

步骤(6)所述的发酵是加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为

0.02～0.06％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶20～30，发酵温度为39℃，发酵时间为

12h，加碱中和，120℃灭菌30min，干燥即得。

2.根据权利要求1所述的骨钙制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中将骨料颗粒热水漂洗，然后4000～8000r/min，离心30min。

3.根据权利要求1所述的骨钙制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)中骨料与水重量体积比1∶3～5，调PH值8～10，加入碱性脂肪酶A、B混合的复合脂肪酶。

4.根据权利要求3所述的骨钙制备方法，其特征在于，所述的复合脂肪酶中碱性脂肪酶A、B重量比为1.5～3∶1。

5.根据权利要求3或4所述的骨钙制备方法，其特征在于，所述的复合脂肪酶占骨料重量比0.1～0.4％。

6.根据权利要求1所述的骨钙制备方法，其特征在于，步骤(5)所述的酶解是调PH值

1～3，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，1～2h；调PH值6～7，加入木瓜蛋白酶，40～

60℃，搅拌1～2h。

7.根据权利要求6所述的骨钙制备方法，其特征在于，所述的水解骨料所用的两种蛋白酶各占骨料重量比为0.04～0.08％。

说明书

一种骨钙的制备方法及骨钙素

技术领域

[0001] 本发明涉及骨钙提取工艺，属于食品加工领域。

背景技术

[0002] 随着社会的老龄化，在西方国家，骨质疏松症的患病率居代谢性骨病的第一位。骨质疏松病症带给患者及家庭的痛苦是不言而喻的。据统计，我国目前约有超过1亿的骨质疏松症患者，预计到2050年将增加到2亿1千万人。造成越来越多的人们钙缺乏的因素：生活和工作节奏加快，工作压力大以及生活无规律，不注意饮食结构的合理搭配，每日钙摄入少于600毫克者可认为是钙摄入不足，易造成体内钙的缺乏；一些中年人工作紧张，缺乏自我保健意识，不重视室外活动，使得体内合成的维生素D减少，影响钙的吸收和利用；营养摄入不均衡或缺乏人体所必需的营养元素。

[0003] 目前市场的钙剂多为工业合成的钙。工业合成的钙剂营养成分单一，很难满足骨骼生长代谢过程中多方面的营养需求，补钙效果不理想。动物骨富含钙、磷、铁、镁等多种矿物元素，而且与人骨相似，人体骨骼细胞对相同组织细胞有较强的亲和力，因而利用率更高。

[0004] 中国专利CN1087793A和美国专利US6342252B1公开了一种利用酶解方法从牛骨中提取钙素的工艺。酶解骨钙具有钙磷比例适宜、营养丰富、钙质吸收利用率高等特点。从市场销售情况看，酶解骨钙深受广大消费者的喜爱，服用后改善骨质疏松的效果明显，取得了显著的经济效益。

[0005] 但是，上述工艺制得的骨钙中，脱脂方法主要是以蒸煮方式实施，难以去除骨质中高含量的脂肪，导致最终的产品脂肪含量较高。对于具有心血管疾病的消费者，过高的脂肪摄入量显然会升高发病的危险因素。因此，从动物骨骼中提取钙素的过程中，去除过多的脂肪，减少心血管疾病的发病风险，成为技术人员急需解决的问题。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种新的酶解骨钙的提取工艺，所述的工艺能够较现有技术更好的去除骨质中的脂肪。

[0007] 本发明的另一目的是提供一种更健康的补钙产品生产工艺，所述的工艺制得的补钙产品具有较低的脂肪含量。

[0008] 本发明的另一目的是提供一种具有市场竞争力的补钙产品，所述的产品不因脱脂工艺的设计而增加生产成本，

[0009] 为达到上述目的，本发明采用下列技术方案实现。

[0010] 本发明采用三次蒸煮方式去除骨油，第一次是60～80℃，45～75min；第二次90～100℃，10min；第三次是在酶解后，采用高温的方式去除最终可能残留的脂肪。三次蒸煮除具有除去骨质中的脂肪效果外，同时还具有杀菌的功效。为增强脱脂效果，本发明优选的将骨粉碎至5～40mm颗粒，颗粒过小则增加生产成本，颗粒过大去脂效果较差。发明人经过多次试验及经验，最终确定5～40mm颗粒范围达到去骨脂和成本的最佳性价比。

[0011] 在蒸煮后，本发明还采用冲洗方式去除骨料中存在的脂肪；冲洗后再次以4000～8000r/min，离心30min，这样可以去除骨料中大部分的脂肪。

[0012] 为进一步去除残存的脂肪，本发明的工艺选择在离心后再次加入碱性脂肪酶进行酶解骨料中残存的脂肪。碱性脂肪酶A、B按1.5～3∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.1～0.4％，20～30℃，水解40～60min。在酶解后，二次离心，进一步将残存的微量脂肪去除。

[0013] 本发明采用发酵的方法对发酵前的骨料进行预处理，然后再进行酶解提取钙素，然后再次对提取液进行发酵处理，去除提取物中的异味，改善口感。

[0014] 为增强发酵效果，本发明优选的将骨粉碎至5～40mm颗粒，颗粒过小则增加生产成本，颗粒过大效果较差。发明人经过多次试验及经验，最终确定5～40mm颗粒范围达到钙素提取和成本的最佳性价比。

[0015] 本发明所述的酶解前发酵采用乳酸菌与骨料按一定的重量配比，35～50℃，发酵12h。乳酸菌与骨料的重量配比、乳酸菌在发酵液中的浓度、发酵温度和时间对最终制得的产物中游离钙含量具有重要的影响，而乳酸菌与骨料的重量配比和乳酸菌在发酵液中的浓度对游离钙的影响最大。发明人根据自己多年的工作经验，反复试验后确定乳酸菌占骨料重量比为0.01～0.04％，骨料与水重量体积比1∶3～5的条件下，能够达到投入与产出的最佳性价比。

[0016] 发明人提供大量实验，意外发现多种乳酸菌按照一定的配比组合进行发酵，最终的产物中游离钙含量较单独以某种乳酸菌发酵提高8％以上，而采用乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)三种乳酸菌进行发酵效果较好；采用此三种乳酸菌配比后发酵效果最好，当三种乳酸菌以重量比1∶3∶2进行组合时，酶解液中游离钙含量较单一乳酸菌发酵后提高10％～30％。

[0017] 本发明所述的二次发酵采用乳脂明串珠菌和柠檬酸，而二者之间的配比对最终产物的口味、生产效率都具有重要的影响。发明人最终确定乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶20～30的条件下，发酵的最终产物效果较好。在上述条件下，确定发酵温度为39℃，发酵时间为12h时，可以达到生产效率的最优化。

[0018] 本发明采用高温灭菌的方法达到杀菌消毒的目的，同时也去除酶解液中的乳酸菌。

[0019] 本发明的酶解采用二次酶解方法，经过筛选后，最终发现用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解较其他蛋白酶具有更好的效果。当然，选用其他蛋白酶进行酶解也能够实现本发明的目的。本发明的提取工艺中最佳的酶解方案是PH值1～3，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，1～2h；调PH值6～7，加入木瓜蛋白酶，40～60℃，搅拌1～2h。

[0020] 水解骨料所用的两种蛋白酶各占骨料重量比为0.04～0.08％为佳。

[0021] 碱性脂肪酶A由福建师范大学生物工程学院研制的扩展青霉PF868产生的碱性脂肪酶，由深圳绿微康生物工程有限公司提供；碱性脂肪酶B采用生物技术由真菌发酵精制而产生的碱性脂肪酶，由海宁金潮实业有限公司提供。

[0022] 本发明的组合物与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、胶囊剂、微粒剂。优选剂型为片剂或颗粒剂。

[0023] 采用本发明所述工艺制得的骨粉中，脂肪基本被完全去除，使得酶解获得的钙剂中脂肪含量低于0.1％。产品对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康，但是又未因此而增加经济负担。

[0024] 试验例

[0025] 以下通过一些具体的实验数据进一步说明本发明的有益效果，本发明所有的实施例均能做出与此相近的实验效果，以下数据只是举例说明。

[0026] 1、材料与方法

[0027] 1.1牛骨：购于河北福成五丰食品股份有限公司

[0028] 1.2样品1：依照中国专利CN1087793A使用牛骨获得的样品；样品2：依照美国专利US6342252B1使用牛骨获得的样品；样品3：依照《超微粉碎牦牛骨泥经发酵和酶解后游离钙和氨基酸态氮的变化》(陈丹，张传林等，《中国酿造》2008年第1期总第178期)中“1.5乳酸菌发酵处理牦牛骨泥……牛骨泥用蒸馏水稀释为10％的浓度……发酵36小时”使用牛骨获得的样品；样品4：依照本发明实施例4使用牛骨获得的样品。

[0029] 1.3方法：采用原子吸收分光光度法测定游离钙含量。

[0030] 2、结果

[0031] 2.1样品1的游离 钙含量为170.80mg/100g，样品 2的游离钙含量 为343.13mg/100g，样品3的游离钙含量为1997.01mg/100g，样品4的游离钙含量为
2387.45mg/100g。

[0032] 2.2经数据对比分析，本发明所制得的产品的游离钙含量，与样品1、样品2相比，具有非常显著的提高；与样品3相比，具有显著的提高，提高幅度达到19.55％。

具体实施方式

[0033] 配制培养基：MRS培养基：蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母膏0.5％，葡萄糖2％，磷酸氢二钾0.2％，醋酸钠0.5％，硫酸镁0.02％，硫酸锰0.005％，吐温-80 0.1％，柠檬酸三铵0.2％，PH5.5～6.0，115℃，灭菌30min。

[0034] 实施例1

[0035] 取动物骨骼粉碎至40mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提75min，弃上清液；90℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按1.5∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.4％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值3，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，水解温度40℃，2h；加热去盐酸至PH值7，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，60℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.06％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.01％。

[0036] 实施例2

[0037] 取动物骨骼粉碎至5mm颗粒，加入乙醇，60℃，浸提45min，弃上清液；80℃热水浸泡漂洗30min，将骨料4000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶3，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按3∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.1％，20℃，水解40min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶3，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.01％，35℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值1，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.04％，水解温度35℃，1h；加热去盐酸至PH值6，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为
0.04％，40℃，搅拌1h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.02％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶20，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0038] 实施例3

[0039] 取动物骨骼粉碎至20mm颗粒，加入乙醇，70℃，浸提60min，弃上清液；85℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶4，调PH值9，加入碱性脂肪酶A、B按2∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.3％，25℃，水解50min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶4，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.03％，40℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值2，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.06％，水解温度37℃，1.5h；加热去盐酸至PH值6.5，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为0.06％，50℃，搅拌1.5h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.04％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶25，发酵温度为39℃，发酵时间为
12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0040] 实施例4

[0041] 取动物骨骼粉碎至10mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提75min，弃上清液；90℃热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶3.5，调PH值8.5，加入碱性脂肪酶A、B按2∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.2％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌；骨料与水重量体积比1∶5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值1，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，水解温度37℃，1～2h；加热去盐酸至PH值6～7，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为0.06％，45℃，搅拌1h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.03％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温度为39℃，发酵时间为
12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.03％。

[0042] 实施例5

[0043] 取动物骨骼粉碎至25mm颗粒，加入乙醇，75℃，浸提65min，弃上清液；86℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶4，调PH值9.5，加入碱性脂肪酶A、B按2.8∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.3％，30℃，水解50min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，40℃，发酵12h，120℃灭菌30min；调PH值3，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，水解温度40℃，
2h；加热去盐酸至PH值7，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，60℃，搅拌1h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶25，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。
采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.01％。

[0044] 实施例6

[0045] 取动物骨骼粉碎至35mm颗粒，加入乙醇，78℃，浸提70min，弃上清液；87℃热水浸泡漂洗30min，将骨料7000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按1.8∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.25％，20℃，水解50min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌；骨料与水重量体积比1∶5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，45℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值1，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，1～2h；加热去盐酸至PH值7，加入木瓜蛋白酶，55℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶22，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0046] 实施例7

[0047] 取动物骨骼粉碎至10mm颗粒，加入乙醇，60℃，浸提75min，弃上清液；88℃热水浸泡漂洗30min，将骨料5000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶4，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按3∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.35％，24℃，水解45min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.03％，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值1～3，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，2h，加热去盐酸至PH值7，加入木瓜蛋白酶，40～60℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.04％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0048] 实施例8

[0049] 取动物骨骼粉碎至15mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提75min，弃上清液；89℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值8.5，加入碱性脂肪酶A、B按2.6∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.14％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2，加入总重量的5％的蔗糖，35～50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值1～3，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，1～2h；加热去盐酸至PH值6，加入木瓜蛋白酶，40℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.03％。

[0050] 实施例9

[0051] 取动物骨骼粉碎至30mm颗粒，加入乙醇，75℃，浸提55min，弃上清液；85℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值8，加入碱性脂肪酶A、B按3∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.35％，28℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳酸菌加入到骨料中，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，骨料与水重量体积比1∶3，加入总重量的5％的蔗糖，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值3，加入胃蛋白酶，水解温度35～40℃，2h；加热去盐酸至PH值7，加入木瓜蛋白酶，50℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.03％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶28，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0052] 实施例10

[0053] 取动物骨骼粉碎至20mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提60min，弃上清液；84℃热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B按3∶1混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.3％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2加入骨料中，加入总重量的5％的蔗糖，40℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值2，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.05％，水解温度38℃，2h；加热去盐酸至PH值
6，加入木瓜蛋白酶，占骨料重量比为0.07％，55℃，搅拌1h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶26，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.03％。

[0054] 实施例11

[0055] 将骨骼粉碎至40mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提75min，弃上清液；83℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.1％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳酸菌加入骨料中，骨料与水重量体积比1∶5，加入总重量的5％的蔗糖，42℃，发酵12h，120℃灭菌30min；调PH值，加入蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，水解2h；调PH值，再加入蛋白酶，占骨料重量比为0.06％，55℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.02％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶20，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.02％。

[0056] 实施例12

[0057] 将骨骼粉碎至30mm颗粒，加入乙醇，75℃，浸提60min，弃上清液；81℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶4，调PH值9，加入复合脂肪酶，占骨料重量比0.4％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶3.5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值，加入蛋白酶，占骨料重量比为0.06％，水解温度40℃，2h；调PH值，再次加入蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，60℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温度为
39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.03％。

[0058] 实施例13

[0059] 将骨骼粉碎至10mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提75min，弃上清液；84℃热水浸泡漂洗30min，将骨料8000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶5，调PH值10，加入碱性脂肪酶A、B混合的复合脂肪酶，占骨料重量比0.4％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳双歧杆菌(B.lactis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)，三种乳酸菌重量比1∶3∶2；骨料与水重量体积比1∶5，加入总重量的5％的蔗糖，乳酸菌占骨料重量比为0.04％，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值，加入胃蛋白酶，水解温度37℃，2h；加热去盐酸至PH值
6～7，加入中性蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，50℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.06％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶26，发酵温度为39℃，发酵时间为12h，加碱中和，120℃灭活，干燥即得。采用“GB/T5009.6食品中脂肪的测定”规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定，测得产品脂肪含量为0.01％。

[0060] 实施例14

[0061] 将骨骼粉碎至25mm颗粒，加入乙醇，80℃，浸提65min，弃上清液；84℃热水浸泡漂洗30min，将骨料6000r/min，离心30min，弃上清液；将离心后的骨料加水，骨料与水重量体积比1∶4，调PH值8.5，加入复合脂肪酶，占骨料重量比0.3％，30℃，水解60min，离心，去上清液；离心后骨料加水，取乳酸菌加入骨料中，乳酸菌占骨料重量比为0.02％，骨料与水重量体积比1∶4，加入总重量的5％的蔗糖，50℃，发酵12h，120℃灭菌30min；加盐酸调PH值3，加入胃蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，水解温度40℃，1h；加热去盐酸至PH值7，加入中性蛋白酶，占骨料重量比为0.08％，45℃，搅拌2h，分离液体；加入乳脂明串珠菌和柠檬酸，乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.03％，乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比1∶30，发酵温