一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种白药子总生物碱提取物及其制备方法，包括以下步骤：将白药子干品粉碎，加热提取，滤液减压浓缩；加热水稀释，酸化，过滤得滤液；碱化，过滤得滤液，将所得滤液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过；正丁醇萃取，减压浓缩；浓缩液喷雾干燥得干粉提取物；加乙醇超声提取，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，用90～95%的乙醇洗脱，分段收集，经高效薄层色谱法鉴别，合并含有生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品。本发明的白药子总生物碱药物制剂，对于白细胞减少症，尤其是肿瘤病人放、化疗引起的白细胞减少症，以及其他药物所致的白细胞减少症都有辅助治疗的作用。

权利要求

1.一种白药子总生物碱提取物的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）将白药子干品粉碎成粗粉，加浓度为70～100％乙醇加热提取，提取液过100～

200目筛，滤液减压浓缩得浓缩液；

（2）将步骤（1）制备的浓缩液加热水稀释，加盐酸调pH至2～5酸化，搅拌，静置，过滤得滤液；

（3）将步骤（2）制备滤液加氢氧化钠调pH至9～12碱化，搅拌，静置，过滤得滤液，将所得滤液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；

（4）将步骤（3）中的精滤液通过离子交换树脂柱，水洗除去杂质，再用80～95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；或将步骤（3）的精滤液用正丁醇萃取，收集萃取液，减压浓缩；

（5）将步骤（4）的浓缩液喷雾干燥得干粉提取物；

（6）将步骤（5）中的干粉提取物加乙醇超声提取，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，用90～95%的乙醇洗脱，分段收集，经高效薄层色谱法鉴别，合并含有生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；

（7）将步骤（6）的生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱。

2.权利要求1所述的白药子总生物碱提取物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。

说明书

一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用

技术领域

[0001] 本发明主要涉及医药技术领域，尤其涉及一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用。

背景技术

[0002] 白药子系为防己科植物头花千金藤的块根。生长于肥沃湿润的草丛、山坡路旁阴处或灌木林中，亦生于石灰质石山上；夏秋季采收，切片晒干。资源丰富，我国中南部均有分布。具有清热解毒；祛风止痛；凉血止血功效，古代中医用于治疗咽喉肿痛、热毒痈肿、风湿痹痛、腹痛泻痢、吐血衄血、外伤出血等。味苦辛，凉。

[0003] 现代中医常用本品治疗各类感染，临床取得显著效果。因此我们对白药子进行系统成分、药效、毒理等研究，证实本品具有治疗白细胞减少症作用，但现有研究对白药子总生物碱治疗白细胞减少症研究较少，尚无有关文献记载或研究报道。由于汤剂的煎煮比较麻烦，落后，剂量大，且不能起到急救作用，并且药效成分不稳定，不明确，无效杂质太多，不利于白药子治疗白细胞减少症的推广与临床应用，因此，开发高标准，高效，长效，速效，安全的治疗白细胞减少症白药子有效部位药物成为当务之急。

发明内容

[0004] 本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种白药子总生物碱提取物及其制备方法及应用。

[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：

[0006] 一种白药子总生物碱提取物，它含有具有以下化学结构的异喹啉类生物碱：

[0007] （1）头花千金藤碱分子式：C37H38N2O6

[0008] 分子量：606.71

[0009]

[0010] （2）异粉防己碱分子式：C38H42N2O6

[0011] 分子量：622.75

[0012]

[0013] （3）轮环藤宁碱分子式：C38H42N2O6

[0014] 分子量：622.75

[0015]

[0016] （4）小檗胺分子式：C37H40N2O6

[0017] 分子量：608.72

[0018] 。

[0019] 一种白药子总生物碱提取物的制备方法，包括以下步骤：

[0020] （1）将白药子干品粉碎成粗粉，加浓度为70～100％乙醇加热提取，提取液过100～200目筛，滤液减压浓缩得浓缩液；

[0021] （2）将步骤（1）制备的浓缩液加热水稀释，加盐酸调pH至2～5酸化，搅拌，静置，过滤得滤液；

[0022] （3）将步骤（2）制备滤液加氢氧化钠调pH至9～12碱化，搅拌，静置，过滤得滤液，将所得滤液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；

[0023] （4）将步骤（3）中的精滤液通过已处理好的离子交换树脂柱，水洗除去杂质，再用80～95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；或将步骤（3）的精滤液用正丁醇萃取，收集萃取液，减压浓缩；

[0024] （5）将步骤（4）的浓缩液喷雾干燥得干粉提取物；

[0025] （6）将步骤（5）中的干粉提取物加乙醇超声提取，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，用90～95%的乙醇洗脱，分段收集，经高效薄层色谱法鉴别，合并含有生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；

[0026] （7）将步骤（6）的生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱。

[0027] 所述的白药子总生物碱提取物在制备治疗白细胞减少症药物中的应用。

[0028] 本发明的优点是：所述的白药子总生物碱药物制剂，对于白细胞减少症，尤其是肿瘤病人放、化疗引起的白细胞减少症，以及其他药物所致的白细胞减少症都有辅助治疗的作用。

具体实施方式

[0029] 实施例1

[0030] 白药子总生物碱提取方法：

[0031] 取处方量的白药子加乙醇6倍量进行逆流动态加热萃取，每次3小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材5g，用热水溶解，加盐酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱，水洗除去杂质，再用85%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0032] 调pH至2～5为酸化，调pH至9～12为碱化，下同。

[0033] 实施例2

[0034] 白药子总生物碱提取方法：

[0035] 取处方量的白药子加乙醇8倍量进行逆流动态加热萃取，每次2小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材4g，用热水溶解，加盐酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.2μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱，水洗除去杂质，再用90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0036] 实施例3

[0037] 白药子总生物碱提取方法：

[0038] 取处方量的白药子加乙醇5倍量进行逆流动态加热萃取，每次4小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材5g，用热水溶解，加硫酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.2μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱，水洗除去杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0039] 实施例4

[0040] 白药子总生物碱提取方法：

[0041] 取处方量的白药子加乙醇6倍量进行逆流动态加热萃取，每次3小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材5g，用热水溶解，加硫酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，离心滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液用正丁醇萃取，合并萃取液，减压浓缩；
再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱； [0042] 实施例5

[0043] 白药子总生物碱提取方法：

[0044] 取处方量的白药子加乙醇6倍量进行逆流动态加热萃取，每次3小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材5g，用热水溶解，加盐酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液用正丁醇萃取，合并萃取液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0045] 实施例6

[0046] 白药子总生物碱提取方法：

[0047] 取处方量的白药子加85%乙醇8倍量进行逆流动态加热萃取，每次3小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材4g，用热水溶解，加盐酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱，水洗除去杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0048] 实施例7

[0049] 白药子总生物碱提取方法：

[0050] 取处方量的白药子加75%乙醇8倍量进行逆流动态加热萃取，每次4小时，收集提取液，滤过，滤液减压浓缩至（温度70℃，真空数-0.08Npa）每1ml相当于原生药材5g，用热水溶解，加盐酸酸化，搅拌，静置，滤过得滤液，冷藏静置48小时，滤过，加碱碱化，搅拌，静置，滤过得滤液，将所得药液经陶瓷膜过滤器进行分子截留滤过，陶瓷膜滤器孔径为0.1μm～0.3μm，所得滤液即为精滤液；将精滤液通过已处理好的离子型树脂柱，水洗除去杂质，再用95%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩；再喷雾干燥得干粉提取物。干粉提取物加乙醇超声提取二次，合并提取液，提取液通过葡聚糖凝胶柱，收集生物碱部位，低温冷冻，析出生物碱晶体粗品；生物碱晶体粗品加乙醇溶解，静置，冷冻，得到白药子总生物碱纯品，干燥，粉碎，即得白药子总生物碱；

[0051] 对比试验1：

[0052] 昆明种小鼠120只，雌雄各半，分为6组：正常对照组、模型对照组、白药子总生物碱高、中、低剂量组，鲨肝醇组。以上6组动物，除正常对照组动物外，其余5组动物均在给60
药前1天用 Co-γ射线照射一次，剂量为4Gy，24小时后再随即分为5组，除正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水0.4ml/只，其余各组按不同剂量灌胃给药，每日1次，连续7日。末次给药24小时，拔除小鼠眼球取血，检测血中白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血小板数(PLT)，结果见表1。

[0053] 表1 白药子总生物碱对60Co-γ照射损伤小鼠血液学的影响（X±SD）[0054]△△

[0055] 注：模型组与正常对照组比较， P＜0.01

[0056] 药物治疗组与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

[0057] 表1结果显示，白药子总生物碱各剂量与模型对照组比较有极显著行或显著性差60
异，即白药子总生物碱对 Co-γ照射所致外用血白细胞减少有明显保护作用，大、中剂量组疗效明显优于阳性对照药鲨肝醇组。

[0058] 对比试验2：

[0059] 昆明种小鼠120只，雌雄各半，随机分为6组，即正常对照组，环磷酰胺模型对照组（Cy），白药子总生物碱（Cy+）高、中、低剂量组，Cy+鲨肝醇组。除正常对照组外，其余各组小