一种制备特拉匹韦及其中间体的方法及所述中间体

摘要

本发明涉及一种新的制备特拉匹韦的方法，其包括以下步骤：1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：-氨基酸Fmoc-P-OH：-Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，-Fmoc-L-叔亮氨酸，-Fmoc-2-环己基甘氨酸，和-2-甲酸吡嗪；2）裂解肽树脂，得到脱保护肽；3）脱保护肽在液相条件下与环丙胺反应，得到特拉匹韦；其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。本发明制备特拉匹韦的方法操作简单、成本低且收率高。

权利要求

1.一种制备特拉匹韦的方法，该方法包括以下步骤：

1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：-氨基酸Fmoc-P-OH：

-Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，-Fmoc-L-叔亮氨酸，

-Fmoc-2-环己基甘氨酸，和

-2-甲酸吡嗪；

2）裂解肽树脂，得到脱保护肽；

3）脱保护肽在液相条件下与环丙胺反应，得到特拉匹韦；

其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。

2.权利要求1的方法，还包括纯化特拉匹韦的步骤，纯化通过重结晶方法而进行。

3.权利要求1的方法，其中所述偶联在固相反应柱中进行；且其中各步骤均在室温和常压下进行。

4.权利要求1的方法，其中所述树脂载体为2-CTC树脂或王树脂，树脂替代度为

0.2-1.1mmol/g。

5.权利要求1的方法，其中所述树脂载体为2-CTC树脂或王树脂，树脂替代度为

0.5-1.0mmol/g。

6.权利要求4或5的方法，其中所述树脂载体为2-CTC树脂时，裂解试剂为20%的TFE/DCM；所述树脂载体为王树脂时，裂解试剂为TFA、PhSMe、PhOMe、EDT和H2O的混合物，它们的体积比顺序地为80-90：0-2：0-3：0-5：0-5。

7.权利要求1的方法，其中步骤1）中的每种物质进行偶联反应的时间为2-6小时。

8.权利要求1的方法，其中步骤1）中的每种物质进行偶联反应的时间为3-5小时。

9.权利要求7或8的方法，其中在偶联之前，将步骤1）中的每种物质中的羧基进行活化，活化在冰水浴中进行，活化剂为DIPEA或DIPCDI。

10.权利要求1的方法，其中所述偶联在偶联剂的存在下进行，所述偶联剂为DIPCDI、A、或其结合，或者为DIPEA、A、B或其结合，其中A为HOBt或者为选自HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU和TBTU中的一种。

11.权利要求2的方法，其中特拉匹韦粗品的重结晶通过用良性溶剂溶解特拉匹韦粗品，然后加入不良溶剂析出特拉匹韦的晶体而实现，其中所述良性溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，或其任意结合，不良溶剂为正己烷、水、醚，或其任意结合。

12.权利要求2的方法，其中特拉匹韦粗品的重结晶通过用良性溶剂溶解特拉匹韦粗品，然后加入不良溶剂析出特拉匹韦的晶体而实现，其中所述良性溶剂为甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯的单一溶剂，不良溶剂为正己烷、水或醚的单一溶剂。

13.一种制备下式的特拉匹韦中间体的方法，该方法包括以下步骤：

1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：-氨基酸Fmoc-P-OH：

-Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，-Fmoc-L-叔亮氨酸，

-Fmoc-2-环己基甘氨酸，和

-2-甲酸吡嗪；

2）裂解肽树脂；

其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。

14.一种特拉匹韦中间体，其结构如下：

说明书

一种制备特拉匹韦及其中间体的方法及所述中间体

技术领域

[0001] 本发明涉及一种新的制备特拉匹韦及其中间体的方法及所述特拉匹韦中间体。 背景技术

[0002] 特拉匹韦是一种可逆性蛋白酶抑制剂，可有效抑制HVC病毒的复制，用于丙型肝炎的治疗，其结构如下所示：

[0003]

[0004] 该药安全性高，且用药时间短，能减少长期用药给患者带来的不良反应。 [0005] 目 前，特 拉 匹 韦 主 要 通 过 液 相 方 法 合 成（参 见 Drugs ofthe Future2007,32(9):788-798）。液相合成收率低；且合成中需要昂贵的催化剂和高压设备，使得成本高、操作复杂。

发明内容

[0006] 本发明提供一种制备特拉匹韦的方法，包括以下步骤：

[0007] 1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：

[0008] -氨基酸Fmoc-P-OH：

[0009]

[0010] -Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，

[0011] -Fmoc-L-叔亮氨酸，

[0012] -Fmoc-2-环己基甘氨酸，和

[0013] -2-甲酸吡嗪；

[0014] 2）裂解肽树脂，得到脱保护肽；

[0015] 3）脱保护肽在液相条件下与环丙胺反应，得到特拉匹韦；

[0016] 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。 [0017] 优选地，本发明方法还包括纯化特拉匹韦的步骤。

[0018] 本发明制备特拉匹韦的方法操作简单、成本低且收率高。

[0019] 此外，本发明还提供了一种制备特拉匹韦中间体的方法，该方法包括以下步骤： [0020] 1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：

[0021] -氨基酸Fmoc-P-OH：

[0022]

[0023] -Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，

[0024] -Fmoc-L-叔亮氨酸，

[0025] -Fmoc-2-环己基甘氨酸，和

[0026] -2-甲酸吡嗪；

[0027] 2）裂解肽树脂，得到特拉匹韦中间体；

[0028] 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。 [0029] 此外，本发明还提供了一种通过上述方法制备的特拉匹韦中间体，其结构如下： [0030]

具体实施方式

[0031] 对本发明中所用缩写及其含义说明如下：

[0032]

[0033] 本发明提供一种制备特拉匹韦的方法，该方法包括以下步骤：

[0034] 1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：

[0035] -氨基酸Fmoc-P-OH：

[0036]

[0037] -Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸

[0038] （Fmoc-octahydrocyclopenta[c]pyrrole-1-carboxylic acid）， [0039] -Fmoc-L-叔亮氨酸（Fmoc-L-tert-leucine），

[0040] -Fmoc-2-环己基甘氨酸（Fmoc-2-Cyclohexylglycine），和

[0041] -2-甲酸吡嗪（Pyrazinoic acid）；

[0042] 2）裂解肽树脂，得到脱保护肽；

[0043] 3）脱保护肽在液相条件下与环丙胺反应，得到特拉匹韦；

[0044] 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。 [0045] 步骤1）

[0046] 本发明中“肽”是指类似地通过多肽合成中的Fmoc固相合成方法得到的上述5种物质的偶联产物。

[0047] 第一种物质氨基酸Fmoc-P-OH可按如下方法制备：

[0048] （1）将1-硝基丁烷与乙醛酸在一种溶剂与三乙胺的存在下在惰性气体（优选氮气）气氛中进行反应，得到中间产物1；

[0049] （2）将中间产物1在Pd/C存在下用还原剂还原，并将还原的产物与Fmoc-OSu反应得到中间产物2；

[0050] （3）将中间产物2与IBX反应，得到Fmoc-P-OH。

[0051] 其中所用还原剂可为H2或甲酸铵；溶剂可按本领域技术人员已知的常规方法进行选择，例如甲醇。

[0052] 上述制备过程可用以下反应式表示：

[0053]

[0054] 对于步骤1）中的其他四种物质，均可商购得到或按文献已知的方法制备。 [0055] 对所述树脂载体无特别限定，只要其具有可与上述5种物质中的羧基进行反应的活性位点且不与所述5种物质中的其他基团反应即可。所述树脂载体优选为2-CTC树脂或王树脂两类，树脂替代度为0.2-1.1mmol/g，优选为0.5-1.0mmol/g。

[0056] 本发明所用王树脂类的结构如下：

[0057]

[0058] 所用2-CTC树脂类的结构如下：

[0059]

[0060] 其中 代表树脂结构的其余部分且该部分不参与反应。

[0061] 上述两种树脂均可商购得到（天津南开和成科技有限公司）或按文献已知的方法制备。

[0062] 偶联优选在偶联剂的存在下进行，所述偶联剂优选为DIPCDI、A、或其结合，或者为DIPEA、A、B或其结合，其中A为HOBt或者为选自HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU和TBTU中的一种。

[0063] 所述偶联在固相反应柱中进行。对固相反应柱无特别限制，可为可实现此目的的任意固相反应柱。

[0064] 此外，每种物质进行偶联反应的时间通常为2-6小时，优选3-5小时；压力优选为常压，也可在适当提高或降低的压力（例如0.01-1.5 大气压）下进行；温度优选为室温（指20±5℃），也可在适当提高或降低的温度下（例如0-50℃）进行。

[0065] 优选地，偶联之前，将步骤1）中的每种物质中的羧基进行活化，活化优选在冰水浴中进行。活化剂优选为DIPEA或DIPCDI。

[0066] 偶联上述5种物质来制备肽树脂可采用多肽合成领域中技术人员已知的Fmoc固相合成方法来实现，例如可以参见文献Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach,W.C.Chan,Peter D.White著，March 2,2000（ISBN-10:0199637245）,英国Oxford University Press。

[0067] 在一个具体实施方案中，5种物质的偶联过程为：

[0068] （1）将所选树脂载体加入到一个固相反应柱中，洗涤，并使树脂溶胀；之后，将第一个待偶联的物质氨基酸Fmoc-P-OH溶解并活化后，加入上述柱中进行反应；反应完成后，得到一次偶联的肽树脂；

[0069] （2）将（1）中所得肽树脂，进行洗涤，并脱除Fmoc，接着再次洗涤树脂，直至用检测剂（例如茚三酮）检测到树脂显色为止；随后将合适量（针对（1）中所得肽树脂上氨基酸的量而言）的第二个待偶联的物质Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸和偶联剂溶解并活化后，一起加入柱中，进行反应，待检测到树脂无色透明时，反应终止；

[0070] （3）按与（2）相同的操作依次偶联Fmoc-L-叔亮氨酸、Fmoc-2-环己基甘氨酸和2-甲酸吡嗪，最终得到肽树脂。

[0071] 其中在步骤（1）中，在氨基酸Fmoc-P-OH偶联至树脂载体上之后，还包括向其中加入一种封闭液除去树脂中过量的未反应基团的步骤，以避免其在下一步偶联反应中与另外的待偶联物质反应形成副产物，以及除去所加入的封闭液的步骤。当所述树脂载体为2-CTC树脂时，所加入的封闭液优选为无水甲醇；当所述树脂载体为王树脂时，所加入的封闭液优选为摩尔比为1:1的醋酐和吡啶。

[0072] 偶联中对树脂的洗涤和溶胀可采用实现该目的的任何试剂进行，优选DMF。 [0073] 在偶联过程中（氨基酸Fmoc-P-OH的偶联除外），所用检测剂可为可判定所述反应终点的任何试剂，优选茚三酮。

[0074] 脱除Fmoc的试剂可为可实现该目的的任何试剂，优选20%的哌 啶/DMF溶液，即哌啶：DMF（体积比）为1:4的混合试剂。

[0075] 采用固相合成法偶联制备肽树脂的过程可用反应式表示如下（反应条件略）： [0076]

[0077] 其中， 代表2-CTC树脂或王树脂。

[0078] 步骤2）

[0079] 所得肽树脂中的树脂可通过裂解除去，得到所述的脱保护肽，如下所示： [0080]

[0081] 所述裂解优选在室温和常压下进行，也可在适当提高或降低的温度和压力下进行。

[0082] 如果采用2-CTC树脂，裂解试剂优选20%的TFE/DCM，其中TFE：DCM的体积比为1:4；

[0083] 如果采用王树脂，裂解试剂优选为TFA、PhSMe、PhOMe、EDT和H2O的混合物，它们的体积比顺序地为80-90：0-2：0-3：0-5：0-5。

[0084] 所述的裂解制备脱保护肽的具体过程如下：

[0085] 使上步所得肽树脂与预先配制好的裂解试剂在室温下反应；反应完成后，过滤树脂，收集滤液；然后洗涤树脂，将洗涤液与滤液合并，进行减压浓缩；向浓缩液中加入合适的试剂（例如冰乙醚）中沉淀出脱保护肽，将其离心分离，洗涤，并减压干燥。 [0086] 步骤3）

[0087] 表述“在液相条件下”是指脱保护肽在与环丙胺反应之前为溶液形式，这通过将上步所得脱保护肽加入一种溶剂中而实现，所用溶剂为非质子性溶剂，优选THF、DCM、DMF、或其结合。

[0088] 脱保护肽在液相条件下与环丙胺的反应在EDC（1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺）盐酸盐和NMM（N-甲基吗啉）的存在下进行，反应式如下：

[0089]

[0090] 上述反应优选在常温常压下进行，也可在适当提高或降低的温度或压力下进行。 [0091] 将所得产物进行萃取和干燥，过滤，蒸发除去溶剂，得到特拉匹韦。 [0092] 萃取可通过能实现此目的的所有常规萃取剂进行，优选饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液；干燥可通过能实现此目的的所有常规干燥剂进行，优选无水硫酸钠。 [0093] 优选地，制备特拉匹韦的方法还包括纯化特拉匹韦的步骤。纯化可采用快速薄层色谱法等常规用于纯化特拉匹韦的方法进行。

[0094] 本发明中，优选地，纯化通过重结晶方法而进行，即通过用溶剂溶解特拉匹韦，然后析出特拉匹韦的晶体而实现。

[0095] 在一个具体实施方案中，纯化特拉匹韦的步骤通过用良性溶剂溶解特拉匹韦，然后加入不良溶剂析出特拉匹韦的晶体而实现。此处“良性溶剂”是指在室温和常压下对特拉匹韦的溶解度大于90重量%、优选大于95重量%、更优选大于99重量%的溶剂；“不良溶剂”是指在室温和常压下对特拉匹韦的溶解度小于10重量%、优选小于5%，更优选小于1%的溶剂。良性溶剂优选为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，或其任意结合，但不限于此，更优选为甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯的单一溶剂。不良溶剂优选为正己烷、水、醚，或其任意结合，但不限于此，更优选为正己烷、水或醚的单一溶剂。

[0096] 重结晶优选在室温和常压下进行，也可在适当提高或降低的压力下进行。重结晶可使用常规用于此目的所有设备而实现。

[0097] 此外，本发明提供一种制备特拉匹韦中间体的方法，该方法包括以下步骤： [0098] 1）以一种树脂作为载体，按照Fmoc固相合成方法顺序地偶联以下5种物质得到肽树脂：

[0099] -氨基酸Fmoc-P-OH：

[0100]

[0101] -Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸，

[0102] -Fmoc-L-叔亮氨酸，

[0103] -Fmoc-2-环己基甘氨酸，和

[0104] -2-甲酸吡嗪；

[0105] 2）裂解肽树脂；

[0106] 其中Fmoc为9-芴甲氧羰基，与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氨原子相连。 [0107] 在本发明中，对于制备特拉匹韦方法的步骤1）和2）中的所有说明相应地适用于此处制备特拉匹韦中间体的方法。

[0108] 此外，本发明还提供了一种由上述方法制备的特拉匹韦中间体，其结构如下： [0109]

[0110] 本发明主要采用了多肽合成中的Fmoc固相合成方法来制备特拉匹韦及其中间体，且制备中各步骤均可在室温和常压下进行，使得该方法易于操作、成本低，且所制备的特拉匹韦收率高。

[0111] 以下参照实施例详细描述本发明，应理解，下述实施例意在说明，不对本发明构成限制。

[0112] 1.（1）Fmoc-P-OH氨基酸的制备例

[0113] 称取10.3克1-硝基丁烷装入一个250ml玻璃烧瓶中，加入100ml甲醇，并在氮气保护下加入1.2当量乙醛酸（glyoxylic acid）8.88克，慢慢加入三乙胺0.8ml，室温反应3小时，薄层色谱检测原料反应完全，减压旋转蒸发掉甲醇，采用乙酸乙酯-石油醚（体积比
1:1）重结晶得到中间体。

[0114] 向得到的中间体中加入50ml甲醇、0.5克钯碳和6.3克甲酸铵，室 温反应2小时，薄层色谱检测原料反应完全，过滤，减压旋转蒸发掉甲醇，得到油状物，将其用
200mlTHF-水（THF：H2O=1:1，体积比）的混合溶液溶解，加入10.6克碳酸钠，然后慢慢滴加含有37.1克Fmoc-OSu的100mlTHF溶液，20分钟滴加完毕，室温反应，薄层色谱监测反应直到原料反应完全。减压旋转蒸发掉THF，水相用100ml乙酸乙酯萃取3次，弃去有机相；向水相中加入200ml乙酸乙酯，混合液用1N盐酸调节至pH=1，分液萃取，有机相用100ml饱和氯化钠水溶液洗涤2次，无水硫酸钠干燥2小时，减压旋转蒸发掉乙酸乙酯，得到油状物，将油状物用乙酸乙酯-石油醚重结晶，得到白色固体31.28克。

[0115] 将所得白色固体溶解到200ml溶剂（THF：DMSO=4:1，体积比）中，加入2-碘酰基苯甲酸28.2克，反应2小时，反应结束后，减压旋转蒸发掉THF，向其中加入100ml水和200ml二氯甲烷，萃取，有机用相无水硫酸钠干燥2小时，过滤，减压旋转蒸发掉二氯甲烷，得到油状物，油状物用300ml乙酸乙酯-石油醚（乙酸乙酯：石油醚=1:4，体积比）重结晶，得到白色固体30.4克，计算得到收率82.8%。

[0116] （2）其余四种物质均购自Bachem（瑞士，Bubendorf）。

[0117] 2.Fmoc-P-CTC树脂的制备实施例（1）至（3）（氨基酸Fmoc-P-OH偶联至2-CTC树脂）

[0118] （1）称取替代度为0.3mmol/g的2-CTC树脂（购自天津南开和成科技有限公司，下同）20g，加入到固相反应柱（250ml，购自四川蜀牛）中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取6.6gFmoc-P-OH氨基酸用（25ml）DMF溶解，冰水浴下加入4.78mL DIPEA活化3分钟，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入8mL无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，将甲醇收缩抽干，得到Fmoc-P-CTC树脂，检测得替代度为0.26mmol/g。

[0119] （2）称取替代度为0.7mmol/g的2-CTC树脂20g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取15.4gFmoc-P-OH氨基酸用DMF溶解，冰水浴下加入14.6mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入20mL无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用20mL无水 甲醇封闭30分钟，将甲醇收缩抽干，得到Fmoc-P-CTC树脂，检测得替代度为0.56mmol/g。

[0120] （3）称取替代度为1.1mmol/g的2-CTC树脂9.1g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取11.0gFmoc-P-OH氨基酸用DMF溶解，冰水浴下加入10.5mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入15mL无水甲醇封闭1小时。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用15mL无水甲醇封闭30分钟，将甲醇收缩抽干，得到Fmoc-P-CTC树脂，检测得替代度为0.92mmol/g。

[0121] 3.Fmoc-P-王树脂的制备实施例（1）-（2）（氨基酸Fmoc-P-OH偶联至王树脂） [0122] （1）称取替代度为1.1mmol/g的王树脂（购自天津南开和成科技有限公司，下同）9.1g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取11.0g Fmoc-P-OH氨基酸和4.86克HOBt用DMF溶解，冰水浴下加入5.6mL DIPCDI活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，2分钟后加入120毫克DMAP，反应2小时后。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用醋酐和吡啶（摩尔比1:1）的混合溶液25ml封闭过夜，抽滤掉反应液，用DMF洗涤3次，将甲醇收缩抽干，得到Fmoc-P-王树脂，检测替代度为0.83mmol/g。 [0123] （2）称取替代度为0.2mmol/g的王树脂25g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取5.51gFmoc-P-OH氨基酸和0.74克HOBt用DMF溶解，冰水浴下加入0.86mL DIPCDI活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，2分钟后加入42毫克DMAP，反应2小时后。用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，用醋酐和吡啶（摩尔比1:1）的混合溶液25ml封闭过夜，抽滤掉反应液，DMF洗涤3次，将甲醇收缩抽干，得到Fmoc-P-王树脂，检测替代度为0.175mmol/g。

[0124] 4.肽树脂的制备实施例（1）至（3）（其他4种物质顺序偶联至 Fmoc-P-CTC树脂） [0125] （1）称取替代度为0.56mmol/g的Fmoc-P-CTC树脂17.86克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂，有颜色。称取11.3克Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸和4.45克HOBt，用25mlDMF溶解，冰水浴下加入5.2ml DIPCDI活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。

[0126] 反应结束后，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取10.59克Fmoc-L-叔亮氨酸和4.45克HOBt，用25mlDMF溶解，冰水浴下加入5.2ml DIPCDI活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，显色，延长反应1小时，再以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。 [0127] 按照同样的方法依次偶联Fmoc-2-环己基甘氨酸和2-甲酸吡嗪，偶联结束后，对树脂收缩抽干，得到肽树脂18.7克，树脂增重率84.8%。

[0128] （2）称取替代度为0.56mmol/g的Fmoc-P-CTC树脂17.86克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取11.3克Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。 [0129] 反应结束后，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取10.59克Fmoc-L-叔亮氨酸、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液 加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。

[0130] 按照同样的方法依次偶联Fmoc-2-环己基甘氨酸和2-甲酸吡嗪，偶联结束后，树脂收缩抽干，得到肽树脂20.9克，树脂增重率94.8%。

[0131] （3）称取替代度为0.92mmol/g的Fmoc-P-CTC树脂10.87克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂，有颜色。称取Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸11.3克、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。 [0132] 反应结束后，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取10.59克Fmoc-L-叔亮氨酸、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点，树脂有颜色，延长反应1小时，再以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。

[0133] 按照同样的方法依次偶联Fmoc-2-环己基甘氨酸和2-甲酸吡嗪，偶联结束后，将树脂收缩抽干，得到肽树脂12.03克，树脂增重率80.2%。

[0134] 5.肽树脂的制备实施例（其他4种物质顺序偶联至Fmoc-P-王树脂） [0135] 称取替代度为0.45mmol/g的Fmoc-P-王树脂22.22克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-八氢环戊烯并[C]吡咯-1-羧酸11.3克、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5mlDIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。

[0136] 反应结束后，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF溶液，反应5分钟，抽掉反应液，再加入20%哌啶/DMF溶液，反应10分钟，反应结束。之后用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取10.59克Fmoc-L-叔亮氨酸、4.45克HOBt和15.6克PyBOP，用25mlDCM溶解，冰水浴下加入10.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测树脂，有颜色，延长反应1小时，再以茚三酮检测树脂，呈无色透明，终止反应。

[0137] 按照同样的方法依次偶联Fmoc-2-环己基甘氨酸和2-甲酸吡嗪，偶联结束后，将树脂收缩抽干，得到肽树脂23.85克，树脂增重率90.4%。

[0138] 6.脱保护肽的制备实施例（1）至（2）（脱除树脂载体，得到特拉匹韦中间体） [0139] （1）将实施例4.（2）得到的肽树脂20.9克加入到一个500ml单口瓶中，加入预先配制好的TFE：DCM=1:4（V:V）220ml，室温反应3小时，过滤树脂，收集滤液，用DCM洗涤树脂，合并洗涤液与滤液，然后将其减压浓缩到40ml，将浓缩液缓慢加入400ml冰乙醚中沉淀。将沉淀离心脱水，用冰乙醚洗涤，洗涤5次，减压干燥得到固体6.12克，用HPLC检测得纯度92.3%，计算得收率95.6%。

[0140] ESI，m/z，([M+Na]+)662.4。

[0141] （2）将实施例5得到的肽树脂23.85克加入到一个500ml单口瓶中，加入预先配制好的TFA：PhSMe：PhOMe：EDT=90:5:3:2（V:V）250ml，室温反应2.5小时，过滤树脂，收集滤液。用TFA洗涤树脂，合并洗涤液与滤液，然后将其缓慢加入2500ml冰乙醚中沉淀。将沉淀离心脱水，用冰乙醚洗涤，洗涤5次，减压干燥得到固体5.58克，用HPLC检测得纯度91.6%，计算得收率87.2%。

[0142] ESI，m/z，([M+Na]+)662.4。

[0143] 7.特拉匹韦的制备实施例（1）至（2）

[0144] （1）将实施例6.（1）得到的固体6.12克加入到一个250ml单口瓶中，加入80ml DCM，再加入EDC·HCl 2.07克、环丙胺0.5克，室温反应，薄层色谱监测反应终点，4小时后反应结束。用饱和碳酸氢钠水溶液萃取2次，每次100ml，用饱和氯化钠水溶液萃取3次，每次 100ml，有机相用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，旋转蒸发掉DCM。得到6.28克产+ +品，HPLC检测得纯度95.2%，计算得收率92.48%，ESI，m/z，C36H53N7O6Na([M+Na])计算值为
702.3950，实测值为702.3929。

[0145] （2）将实施例6.（2）得到的固体5.58克加入到250ml单口瓶中，加入60ml DCM，再加入EDC·HCl1.89克，环丙胺0.46克，室温反应4小时，薄层色谱监测反应终点。用饱和碳酸氢钠水溶液萃取2次，每次100ml，饱和氯化钠水溶液萃取3次，每次100ml。有机相用无水硫酸钠干燥2小时，过滤，旋转蒸发掉DCM。得到6.14克产品，HPLC检测得纯度95.2%，计算得收率90.42%。

[0146] ESI，m/z，([M+Na]+)702.3924（计算值为702.3950）。

[0147] 8.特拉匹韦的纯化实施例（1）至（5）

[0148] （1）将实施例7.（1）得到的特拉匹韦6.28克加入到一个250ml单口瓶中，加入60ml甲醇，慢慢加热直到溶解，滴加20ml去离子水，放置到室温，慢慢析出白色固体。将沉淀过滤，用去离子水洗涤，真空干燥，得到特拉匹韦5.56克，用HPLC检测得纯度99.5%，计算得总收率81.9%。

[0149] 13CNMR：(200MHz,CDCl3)：δ=197.6(C),172.7(C),171.1(C),171.0(C),160.8(C),159.9(C),147.1(CH),145.0(C),144.7(CH),142.9(CH),62.6(CH),58.6(CH),53.7(CH),53.4(CH),42.9(CH2),39.4(CH),37.8(CH),36.7(C)，31.8(CH),24.5(CH),32.0(CH2),28.3(CH
2),27.5(CH2),25.1(CH2),23.7(CH3),17.2(CH2),7.2(CH2)。

[0150] （2）将实施例7.（1）得到的特拉匹韦6.28克加入到一个250ml单口瓶中，加入60ml丙酮，慢慢加热直到溶解，滴加25ml去离子水，放置到室温，慢慢析出白色固体。将该固体过滤，用去离子水洗涤，真空干燥，得到特拉匹韦5.48克，用HPLC检测得纯度99.46%，总收率80.7%。

[0151] 13CNMR：(200MHz,CDCl3)：δ=197.5(C),172.7(C),171.0(C),171.0(C),160.7(C),159.9(C),147.1(CH),145.0(C),144.7(CH),142.9(CH),62.6(CH),58.6(CH),53.7(CH),53.4(CH),42.9(CH2),39.4(CH),37.8(CH),36.7(C)，31.8(CH),24.5(CH),32.0(CH2),28.3(CH
2),27.5(CH2),25.1(CH2),23.7(CH3),17.1(CH2),7.2(CH2)。

[0152] （3）将实施例7.（1）得到的特拉匹韦6.28克加入到一个250ml单口瓶中，加入60ml乙酸乙酯，慢慢加热直到溶解，加入60ml正己烷，放置到室温，慢慢析出白色固体。将该固体过滤，用正己烷洗涤，真空干燥，得到特拉匹韦5.60克，用HPLC检测得纯度99.18%，总收率82.47%。

[0153] 13CNMR：(200MHz,CDCl3)：δ=197.6(C),172.6(C),171.1(C),171.0(C),160.8(C),159.8(C),147.1(CH),145.0(C),144.7(CH),142.9(CH),62.7(CH),58.6(CH),53.7(CH),53.4(CH),42.8(CH2),39.4(CH),37.8(CH),36.7(C)，31.8(CH),24.5(CH),32.0(CH2),28.3(CH
2),27.5(CH2),25.1(CH2),23.7(CH3),17.3(CH2),7.2(CH2)。

[0154] （4）将实施例7.（1）得到的特拉匹韦6.28克加入到一个250ml单口瓶中，加入60ml丙酮，慢慢加热直到溶解，加入60ml正己烷，放置到室温，慢慢析出白色固体。将该固