一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物及制备方法和用途

摘要

本发明提供了一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物及制备方法和用途。所述药物组合物主要由原料药黑蚂蚁、盐附子、黄芪、木瓜和三七组成，原料药组成为：黑蚂蚁1 0-70份、黄芪1 0-50份、木瓜5-40份、盐附子5-40份、三七2-20份。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途，经实验证明本发明药物组合物具有补虚培元、祛邪通痹功效，既能够有效的治疗和缓解因风湿、类风湿导致的关节疼痛、晨僵、麻木，曲伸不利，也能防治和缓解风湿导致的肾功能损害，具有治疗关节肿胀、疼痛、屈伸不利等病变，尤其是用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、关节滑膜炎以及风湿性肾损害的作用。

权利要求

1.一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的原料药组成为：黑蚂蚁30g、黄芪20g、木瓜15g、盐附子12g、三七6g。

2.如权利要求1所述药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括：A、按比例取五味原料药，以水或与水相互溶的有机溶剂提取；或，按比例取五味原料药，其中黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子合并以水或与水相互溶的有机溶剂提取得提取物，三七粉碎，将三七粉加入到上述所得提取物中，混合；或按比例取五味原料药直接粉碎、混合；

B、制成临床可接受的剂型。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述与水相互溶的有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮中的任意一种或两种；所述的提取是煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式或其组合。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述五味原料药直接粉碎为超微粉碎，超微粉碎前原料药先粉碎，过24目筛得原料药粗粉，并经过干燥处理使水分含量低于4％。

5.如权利要求1所述的药物组合物在制备治疗和缓解风湿性关节病或风湿性肾损害药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述风湿性关节病为风湿性关节炎、类风湿性关节炎或关节滑膜炎。

说明书

一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物及制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明涉及一种药物组合物，特别是涉及一种由原料药黑蚂蚁、盐附子、黄芪、木瓜和三七组成的药物组合物，属于中药技术领域。

背景技术

[0002] 类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)属于祖国医学中“痹证”范畴，发病率高，发病以25～55岁的青壮年居多，女性发病高于男性，男女之比为1:4，全世界共有上亿病人。据统计，RA国外的患病率为1～2%，个别地区高达5%；我国发病率约为0.74%，现有1500万人左右病人；本病致残率较高，未及时诊治的类风湿性关节炎患者二年致残50%，三年致残率达70%。而已经患类风湿性关节炎的患者，平均寿命缩短10～15年。从病程长短而论，发病一年内的致残率约20%，二年以上可达40%左右，严重破坏劳动能力，对人类健康危害极大，给社会、家庭造成极大负担，也给患者本人身心健康和生活质量有严重的影响，因此有“不死的癌症”之称。

[0003] RA的确切机理不是十分明确，但目前现代研究认为RA是一种大量T细胞浸润为主的慢性滑膜炎为特征的自身免疫性疾病，免疫学异常包括T细胞亚群失调和T细胞的异常+活化，尤其是CD4T细胞参与了RA的激发和延续。RA患者的病理研究结果表明，患者滑膜以滑膜细胞肿瘤样增殖、血管增生和炎性细胞浸润为主要特点，而浸润的炎性细胞中又以T+ +
细胞尤其是CD4T细胞亚群为主，此外，RA患者T细胞亚群中CD4T细胞比例及克隆扩增能+
力均有所改变，提示T淋巴细胞、尤其是CD4T在RA发生和发展中具有极其重要的地位。T细胞在炎症的滑膜中积聚和激活，通过分泌IFN-γ和IL-17以及细胞-细胞的直接接触，在RA炎症反应中发挥了重要作用，此外通过TNF相关括化诱导因子促进了RA骨损害。RA+ + + +
患者由于存在着CD4T细胞数量的增加或CD8T数量的下降，使CD4T/CD8T的相对比上升，Th细胞功能相对亢进和Ts细胞功能相对减弱，从而导致B细胞功能亢进、免疫球蛋白表达失控。过去人们认为RA很少累及肾脏，即使发生肾损害多见肾淀粉样变性、或由金制剂或青霉胺引起的膜性肾病以及与非类固醇类抗炎药(NSAIDs)治疗有关的间质性肾炎。正是由于认识上的不足，以致长期形成了RA本身很少引起肾脏病变的错误观点。近年来随着肾活检技术的广泛应用和免疫学研究的日益深入，人们逐渐认识到RA不仅可以引起肾损害，而且损害是100％；研究发现RA肾损害主要是系膜增生性肾炎(RA-MsPGN)，占RA原发性肾损害的30.1％～75.0％(也有报道为25％-50％)。

[0004] 目前RA尚无特效疗法，临床治疗主要是对症处理。国际抗风湿联盟将现有抗风湿病药分为两大类，即改善症状的抗风湿药和控制疾病的抗风湿病药，前者仍是目前临床常用药，至今无一种真正控制疾病的抗风湿病药，临床常联合用药以期达到控制疾病的目的，但就目前所取得的近期、远期疗效而言，结果都不能令人满意；虽然近年来开展了生物治疗，终因价格昂贵、口服活性差、不能选择性作用于靶组织等缺点而限制了其应用；基因治疗似乎在理论上可以克服生物治疗的部分缺陷，但世界300多个临床研究中，3000多例已接受基因治疗的患者，没有一例明确显示临床改善。现有临床用药如水杨酸类及其它非甾体抗炎药、抗疟药、青霉胺、雷公藤制剂、金制剂、甚至皮质激素，其治疗效果均不理想，而且副作用大。中医在几千年的临床实践中积累了丰富的经验，随着回归自然浪潮的高涨和中药现代化步骤的加快，寻求中医药治疗手段和药物已经成为全球关注的重点和研究的热点，尤其是伴随着对RA靶器官损害的认识加深和重视，开发研究“三小”（剂量小、毒性小、副作用小）三效（高效、速效、长效）五方便（服药、生产、运输、携带、贮藏），既具有良好的抗风湿作用，又对RA损害的主要靶器官（肺、肾、骨等）具有保护作用的治疗药物成为中西医共同关心的热点。

发明内容

[0005] 本发明第一个目的在于提供一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物；

[0006] 本发明第二个目的在于提供该药物组合物的制备方法；

[0007] 本发明第三个目的在于提供该药物组合物在制备治疗和缓解风湿性关节病和风湿性肾损害药物中的应用。

[0008] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

[0009] 一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物，该药物组合物的原料药组成为：

[0010] 黑蚂蚁10-70份、黄芪10-50份、木瓜5-40份、盐附子5-40份、三七2-20份；

[0011] 进一步的，其原料药组成为：

[0012] 黑蚂蚁15-60份、黄芪15-45份、木瓜10-35份、盐附子10-30份、三七3-15份；

[0013] 进一步的，其原料药组成为：

[0014] 黑蚂蚁15-50份、黄芪15-40份、木瓜10-30份、盐附子10-30份、三七3-15份；

[0015] 更进一步的，其原料药组成为：

[0016] 黑蚂蚁20-40份、黄芪18-30份、木瓜12-20份、盐附子10-20份、三七4-10份；

[0017] 更进一步的，其原料药组成为：

[0018] 黑蚂蚁25-40份、黄芪18-30份、木瓜12-20份、盐附子10-20份、三七5-10份；

[0019] 更进一步的，其原料药组成为：

[0020] 黑蚂蚁30份，黄芪20份，木瓜15份，盐附子12份，三七6份；

[0021] 或，黑蚂蚁25份，黄芪30份，木瓜12份，盐附子20份，三七5份；

[0022] 或，黑蚂蚁40份，黄芪18份，木瓜20份，盐附子10份，三七10份。

[0023] 本发明药物组合物可采用如下方法制备：

[0024] 按比例取五味原料药，以水或与水相互溶的有机溶剂提取制备而成；

[0025] 或，按比例取五味原料药，其中黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子合并以水或与水相互溶的有机溶剂提取得提取物；三七粉碎，将三七粉加入到上述所得提取物中，混合均匀而成。

[0026] 进一步的，所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的任意一种；更进一步优选为浓度为30%-80%的乙醇；

[0027] 所用的提取方法包括煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式，或者不同提取方法的组合。

[0028] 更进一步的，上述制备方法中原料药经提取后还可经纯化、精制，如过大孔树脂柱，并进一步按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括颗粒、片剂、胶囊、滴丸、口服液、混悬液、乳浊液、注射剂。

[0029] 本发明药物组合物还可采用：按比例取五味原料药原料药直接粉碎、混合制成临床可接受的剂型；

[0030] 所述粉碎优选为：经超微粉碎后制成粒径100μm以下的超细微粉；进一步优选制备为80μm以下的超细微粉；进一步优选制备为70μm以下的超细微粉；进一步优选制备为60μm以下的超细微粉；进一步优选制备为50μm以下的超细微粉；进一步优选制备为40μm以下的超细微粉；进一步优选制备为30μm以下的超细微粉；进一步优选制备为20μm以下的超细微粉；进一步优选制备为10μm以下的超细微粉；进一步优选制备为8μm以下的超细微粉；

[0031] 进一步的，所述超微粉碎前原料药先粉碎成粗粉（过24目筛），并经过干燥处理使水分含量低于4%。

[0032] 为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学，需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料（范碧亭《中药药剂学》，上海科学出版社1997年12月第1版中各剂型记载的辅料）。

[0033] 本发明所述治疗风湿性关节疾病的药物组合物除了以黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七原药材投料的形式外，还可以采用以黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七提取物（有效部位）投料的形式，因此本发明进一步公开了治疗风湿性关节疾病的药物组合物：

[0034] 一种治疗风湿性关节疾病的药物组合物，该药物组合物的原料组成为：

[0035] 黑蚂蚁提取物10-70份、黄芪提取物10-50份、木瓜提取物5-40份、盐附子提取物5-40份、三七提取物2-20份；

[0036] 进一步的，其原料组成为：

[0037] 黑蚂蚁提取物20-50份、黄芪提取物15-40份、木瓜提取物10-30份、盐附子提取物10-30份、三七提取物3-15份；

[0038] 更进一步的，其原料组成为：

[0039] 黑蚂蚁提取物25-40份、黄芪提取物18-30份、木瓜提取物12-20份、盐附子提取物10-20份、三七提取物5-10份；

[0040] 更进一步的，其原料组成为：

[0041] 黑蚂蚁提取物30份，黄芪提取物20份，木瓜提取物15份，盐附子提取物12份，三七提取物6份；

[0042] 或，黑蚂蚁提取物25份，黄芪提取物30份，木瓜提取物12份，盐附子提取物20份，三七提取物5份；

[0043] 或，黑蚂蚁提取物40份，黄芪提取物18份，木瓜提取物20份，盐附子提取物10份，三七提取物10份。

[0044] 本发明所述黑蚂蚁提取物、黄芪提取物、木瓜提取物、盐附子提取物、三七提取物分别为黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子、三七的水提取物或与水相互溶的有机溶剂提取物；或者为黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子、三七经水或与水互溶的有机溶剂提取后进一步经过精制纯化处理得到的精制物，如过大孔树脂柱。

[0045] 进一步的，所述与水相互溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮中的任意一种；进一步优选为浓度为30%-80%的乙醇；

[0046] 所用的提取方法可以是煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超声提取或渗漉提取中的任意一种方式，或者不同提取方法的组合。

[0047] 本发明药物组合物还可以和其他药物配伍使用，所述其他药物为相关或相似领域的治疗药物，如风湿性、类风湿性关节炎治疗药物、免疫调节药物、止痛药物等。

[0048] 本发明药物组合物可用于治疗和缓解风湿性关节病，所述的风湿性关节病为风湿性关节炎、类风湿性关节炎、关节滑膜炎和风湿性肾损害。

[0049] 本发明所述黑蚂蚁为《广西中药材标准》第二册（1996年）收载，是蚁科动物双齿多刺蚁Polyrhachis dives Smith的干燥体；所述黄芪、盐附子、木瓜、三七为2010版《中国药典》第一部收载的中药或其炮制品。

[0050] 本发明药物组成是在中医气血精动态循环理论指导下组方，经临床多年反复验证和优化的基础形成的。该理论认为气、血、精三者在生理状态下相互资生、相互转化；病理状态下相互影响、共同致病；类风湿性关节炎的发生是由于外界诱因作用下气血精平衡系统被打破并重建的过程，再建平衡过程中气血精产生的多种病理产物相互胶结，相互影响是导致疾病复杂和治疗棘手的主要原因；RA的基本病机是气血精俱虚，气血精动态平衡在低水平上重建，痰瘀水湿胶结停着于关节组织，阻碍气血精的正常循环，造成恶性循环。组方中以蚂蚁、盐附子补气血精，振奋元气，促进气血精循环系统向生理状态转化，辅以它药达到标本兼治，治病求本的效果；黄芪补气行气，达补气生血，气行血动，从而带动气血精平衡向生理水平恢复；三七等药补血养血，从而达到精血通补的目的；蚂蚁为虫药，善行，具有活血通络，祛瘀止痛的作用，辅以三七之活血作用，达到祛瘀生新，促进关节功能恢复的目的，木瓜舒筋活络，针对临床主要症状；此处方中盐附子辛咸平，甘温，归脾肾经，取其散寒除湿，温阳通络之义；咸归肾，咸能软坚，软化RA所致关节纤维素样沉淀，根据现代医学理论，盐附子又能提高机体Na+浓度，改变体内渗透压，通过渗透性脱水达消除炎性渗出物的作用。蚂蚁等药，微温、微咸、酸甘，入肝、脾、肾经，疏风通络，养筋祛瘀，抗炎止痛。酸入肝、肝主筋，酸通骨，故可以通利关节，软化畸变关节，防止或减轻关节畸变，咸入肾，肾主骨生髓，甘入脾，脾为气血生化之源，故可以养筋，生骨补髓。诸药合用，共达补虚培元，祛邪通痹的作用，促进气血精生理平衡的恢复，达到治疗的目的。

[0051] 在本发明一实施例中，给出了不同比例的本发明药物组合物用于抗佐剂性关节炎大鼠模型的实验研究，从而得出本发明原料药组合物较为优选的原料药的配比范围。

[0052] 在本发明其它实施例中，给出了本发明主要原料药较优配比的提取物用于抗二甲苯性小鼠耳肿胀、蛋清性大鼠足肿胀、热刺激疼痛、化学刺激性疼痛、佐剂性关节炎、风湿性肾损害（RA-MsPGN）的药理实验，证明本发明药物组合物可用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎、风湿性系膜增殖性肾炎。

[0053] 以下实验例中，所用的实验动物未明确注明，均为：KM小鼠，体重20±2g，SD大鼠，体重200±20g，均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：川实动管质SCXK(川)2004-16。实验场地为国家中医药管理局成都中医药大学中药药理三级实验室，编号：TCM2032043。动物均在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

[0054] 实验例1不同配伍组合物镇痛抗炎配比比例研究

[0055] 1材料

[0056] 1.1药物与试剂

[0057] 黑蚂蚁、盐附子、三七、黄芪、木瓜购自同仁堂大药房，由成都中医药大学马云桐鉴定。盐酸曲马多由北京四环医药科技股份有限公司生产（批号：0406245）；醋酸地塞米松注射液由西南药业股份有限公司生产（批号：66040099）。

[0058] 1.2实验动物

[0059] KM种小白鼠，清洁级，雌雄兼用，体重（20±2）g；由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2004-16。

[0060] 2方法与结果

[0061] 2.1、实验药物配比比例的设置

[0062] 表1黑蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七配比比例（g）

[0063]实验号 黑蚂蚁 黄芪 木瓜 盐附子 三七
1 10 10 5 5 2
2 20 15 10 8 4
3 30 20 15 12 6
4 40 25 20 15 8
5 50 30 25 20 10

[0064] 按表1分别取处方量的原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪、木瓜和三七粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡30分钟后，加入6倍量水煎三次，每次1小时，滤过，取滤液4℃冰箱保存备用。

[0065] 2.2对疼痛反应的影响——扭体法小鼠70只，雌雄各半，按体重分层后随机分为7组，即空白对照组、阳性对照组（曲马多组）和5个剂量配比组，每组10只，每天1次连续灌胃给药3天。结果见表2。

[0066] 表2不同配伍组方对小鼠扭体反应的影响

[0067]

[0068] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0069] 由表2可以看出，在本发明范围内配伍比例的组方均能使小鼠出现扭体反应的潜伏期延长和扭体次数减少，与空白对照组比较有显著的统计学意义（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），对小鼠扭体次数的抑制率均大于60％，但蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七配比比例为30、20、1 5、12和6g时作用最显著。2.3二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验小鼠70只，全雄，按体重分层后随机分为7组，即空白对照组，阳性对照组（醋酸地塞米松）及和5个剂量配比组，每组1 0只。除阳性对照组于试验当天腹腔注射给药外，其余每组动物连续灌胃给药3天。结果见表3。

[0070] 表3不同配伍组方对小鼠耳廓肿胀的影响

[0071]组别 N（只） 剂量（g/kg） 耳肿差（mg） 抑制率（％）
空白对照组 10 等体积 14.4±1.6
阳性对照组 10 0.005 4.3±1.1*** 70.14
1 10 10.95 7.2±2.7* 50.00
2 10 10.95 8.5±2.7* 40.97
3 10 10.95 6.8±2.2*** 52.78
4 10 10.95 7.3±1.8** 49.31
5 10 10.95 9.3±1.7* 35.42
* ** ***

[0072] 注：与空白对照组比较，P＜0.05；P＜0.01；P＜0.001

[0073] 由表3可以看出，不同配伍比例的组方对二甲苯导致的小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用，与空白对照组比较有明显的统计学意义（P＜0.05）。且蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七配比比例为30、20、15、12和6g时作用最显著。

[0074] 3结论

[0075] 通过抗炎和镇痛研究，结果表明蚂蚁、黄芪、木瓜、盐附子和三七配比比例为30、20、15、12和6g时作用抗炎和镇痛作用均最显著。

[0076] 实验例2本发明药物颗粒镇痛抗炎作用的试验研究

[0077] 1材料

[0078] 1.1药物与试剂

[0079] 蠲痹颗粒（简称颗粒），按实施例1方法制备；盐酸曲马多由北京四环医药科技股份有限公司生产（批号：0406245）；醋酸地塞米松注射液由西南药业股份有限公司生产（批号：66040099）；雷公藤多甙片由湖南协力药业有限公司生产（批号：20040503）；醋酸可的松片由河南省漯河市第二制药厂生产（批号：2004021 3）。所有药物临用前生理盐水新鲜配置，灌胃给药，1次/天。弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma公司产品)。

[0080] 1.2实验动物

[0081] KM种小白鼠，清洁级，雌雄兼用，体重（20±2）g；健康SD大鼠，雄性，清洁级，体重（200±20）ｇ；均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2004-16。

[0082] 2方法与结果

[0083] 2.1镇痛作用

[0084] 2.1.1颗粒对疼痛反应的影响—热板法小鼠50只，全雌，按体重分层后随机分为5组，即空白对照组、阳性对照组和高、中、低3个剂量的颗粒组(32.4、16.2、8.1g原生药/kg)，每组10只，每天1次连续灌胃给药3天。结果见表4。

[0085] 表4颗粒对热板法痛反应潜伏期的影响

[0086]

[0087] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0088] 由表4可以看出，颗粒和盐酸曲马多在给药后2h内均能显著延长小鼠出现痛反应的潜伏期，与空白对照组比较有显著的统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），在给药后4～6h亦有提高痛反应潜伏期的趋势。

[0089] 2.1.2颗粒对疼痛反应的影响——扭体法小鼠50只，雌雄各半，分组及给药同2.1.1，结果见表5。

[0090] 表5颗粒对小鼠扭体反应的影响

[0091]

[0092] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0093] 由表5可以看出，颗粒能使小鼠出现扭体反应的潜伏期延长和扭体次数减少，与空白对照组比较有显著的统计学意义（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001），对小鼠扭体次数的抑制率均大于50％。

[0094] 2.2抗炎作用

[0095] 2.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验小鼠50只，全雄，按体重分层后随机分为5组，即空白对照组，阳性对照组及高、中、低3个剂量的颗粒组(32.4、16.2、8.1g原生药/kg)，每组10只。除阳性对照组于试验当天腹腔注射给药外，其余每组动物连续灌胃给药3天。结果见表6。

[0096] 表6颗粒对小鼠耳廓肿胀的影响

[0097]组别 N（只） 剂量（g/kg） 耳肿差（mg） 抑制率（％）
空白对照组 10 等体积 14.8±1.8
地塞米松组 10 0.005 6.3±1.7*** 57.4
颗粒高剂量组 10 32.4 12.1±2.1* 1 8.2
颗粒中剂量组 10 16.2 8.5±2.7*** 42.6
颗粒低剂量组 10 8.1 1 1.9±2.17* 19.6
* ** ***

[0098] 注：与空白对照组比较，P＜0.05；P＜0.01；P＜0.001

[0099] 由表6可以看出，颗粒对二甲苯导致的小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用，与空白对照组比较有明显的统计学意义（P＜0.05）。

[0100] 2.2.2醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进实验分组及给药同2.2.1，结果见表7。

[0101] 表7蚁颗粒对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

[0102]组别 N（只） 剂量（g/kg） OD值
空白对照组 10 等体积 1.5±.50
地塞米松 10 0.005 0.7±0.6***
颗粒高剂量组 10 32.4 1.0±0.4**
颗粒中剂量组 10 16.2 0.8±0.3***
颗粒低剂量组 10 8.1 0.7±0.4***

[0103] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0104] 由表7可以看出，颗粒对冰醋酸导致的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进具有明显的抑制作用，与空白对照组比较有显著的统计学意义（P＜0.01或P＜0.001）。

[0105] 2.2.3蛋清致大鼠足肿胀的实验取健康雄性SD大鼠50只，体重1 80～220g。随机分为5组，即空白对照组，阳性对照组及高、中、低3个剂量的颗粒组(25.2、12.6、6.3g原生药/kg)，除阳性对照组于试验当天腹腔注射给药外，其余每组动物连续灌胃给药5天。结果见表8[0106] 表8颗粒对大鼠蛋清性足肿胀的影响

[0107]

[0108] 注：与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0109] （）代表足肿胀抑制百分率

[0110] 由表8可以看出，颗粒对蛋清导致的大鼠足肿胀具有明显的抑制作用，与空白对照组比较有显著的统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

[0111] 2.2.4对慢性炎症模型—小鼠棉球肉芽肿的影响

[0112] 取健康雄性小鼠50只，按体重随机分为5组，分组同2.2.1，连续给药7天，阳性组每天腹腔注射给药外，其余均为灌胃，结果见表9。

[0113] 表9颗粒对小鼠棉球肉芽肿的影响

[0114]组别 N（只） 剂量（g/kg） 肉芽干重（mg） 肉芽指数
空白对照组 10 等体积 1 0.6±2.6 4.7±1.1
地塞米松组 10 0.005 4.9±1.3*** 2.3±0.6***
颗粒高剂量组 10 32.4 7.5±0.9*** 3.4±0.5***
颗粒中剂量组 10 16.2 7.7±0.8*** 3.4±0.5***
颗粒低剂量组 10 8.1 7.0±0.8*** 3.1±0.5***
* ** ***

[0115] 注：与空白对照组比较，P＜0.05；P＜0.01；P＜0.001

[0116] 由表9可以看出，颗粒对肉芽的形成有显著的抑制作用，肉芽干重和肉芽指数与空白对照组比较均有极显著的统计学意义（P＜0.001）。

[0117] 2.2.5对佐剂性关节炎的抑制作用

[0118] 取大鼠50只，按体重随机分为5组：（1）对照组；（2）颗粒预防组；（3）颗粒治疗组；（4）可的松预防组；（5）可的松治疗组，每组10只。大鼠在乙醚麻醉下，以FCA0.1ml注射于右后足垫内，注射佐剂当日即开始给药为预防组，第8天开始给药为治疗组，每日给药一次，颗粒12.6g/kg·d，可的松25mg/kg·d，对照组灌服等体积的生理盐水，连续21天，第22天杀剖动物。注射佐剂前及后3小时以及每隔一定日期各测左右足跖容积一次，同侧足跖于给佐剂前后容积之差为肿胀度，并观察鼠耳部红斑、尾部结节等出现情况。

[0119] 颗粒预防性和治疗性给药，均既能明显抑制注射局部的早期炎症反应和12天后的再度肿胀，又能抑制另一后肢迟发性超敏反应引起的足肿胀，作用强度与可的松相似，结果见表10。各给药组大鼠耳部红斑及尾部结节与生理盐水组比较均明显减轻。

[0120] 表10颗粒对佐剂性关节炎大鼠足跖肿胀的影响

[0121]

[0122] 注：与生理盐水组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0123] 由表10可以看出，颗粒预防性和治疗性给药对佐剂性关节炎大鼠原发性和继发性足肿胀均有显著地抑制作用，与空白对照组比较均有显著地统计学意义（P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001）。

[0124] 3.结果

[0125] 本实验通过热板法和醋酸扭体法实验证实颗粒有良好的镇痛作用；通过小鼠二甲苯性耳肿胀、冰醋酸性腹腔毛细血管通透性抗进和大鼠蛋清性足肿胀实验证实颗粒对急性渗出性炎症均有较好的拮抗作用；通过小鼠棉球肉芽肿实验证明颗粒对慢性炎症亦有较好的拮抗作用；通过佐剂性关节炎实验证实颗粒对免疫损伤性炎症有显著的拮抗作用，研究结果提示颗粒具有显著的镇痛和抗炎作用。

[0126] 实验例3本发明药物颗粒对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织病理形态学的影响[0127] 1、材料

[0128] 1.1药物与试剂

[0129] 蠲痹颗粒（简称颗粒），按实施例1方法制备；

[0130] 雷公藤多甙片由湖南协力药业有限公司生产（批号：20040503）；

[0131] 弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma公司产品)；

[0132] 1.2主要仪器

[0133] 显微镜BH-2，Olympus；

[0134] 1.3实验动物

[0135] 健康SD大鼠，SPF级，雄性，体重（200±20）ｇ，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2004-16。

[0136] 2、方法

[0137] 2.1分组方法

[0138] 60只SD大鼠按体重分层后随机分为6组，即正常对照组(空白组)、模型对照组(模型组)、雷公藤阳性对照组(阳性组)、颗粒高剂量组（高剂量组）、颗粒中剂量组（中剂量组）和颗粒低剂量组（低剂量组），每组10只，每天一次灌胃给药。除正常组外的各组大鼠均按造模方法造模。

[0139] 2.2造模方法

[0140] 用弗氏完全佐剂于造模鼠右后足趾皮下进针至踝关节，注射弗氏佐剂0.1ml/只诱导关节炎的发生。

[0141] 2.3给药方法

[0142] 颗粒高、中、低剂量组灌服药液分别为25.2、12.6g和6.3原生药/(kg·d)，；雷公藤组灌服药液5mg/(kg·d)，正常组和模型组灌服等体积的生理盐水，造模第14天开始灌胃给药,直到实验结束。

[0143] 2.4标本的取材及制备

[0144] 实验第32天末次给药后大鼠禁食24小时后处死大鼠，无菌工作台上取下右踝关节，1 0％中性福尔马林关节腔灌注固定6-8小时后，分离滑膜组织，常规制片，HE染色，对[2]炎细胞浸润、滑膜细胞增生和滑膜纤维组织增生进行评分，按大鼠滑膜病理5级评分法(炎细胞浸润，0:无炎性细胞浸润；1：1～5个/HP；2：6～10个/HP；3：11～15个/HP；4：
形成小脓肿。滑膜细胞增生程度：0：无浸润；1：肿胀增生（多）；2：增多相连；3：增多双层；
4：3层以上。滑膜纤维组织增生程度：0：无增生；1：增生占1/3HP；2：增生占1/2HP；3：增生占1HP；4：增生占>1HP)，光镜下观察组织形态学的改变。

[0145] 3结果

[0146] 佐剂性关节炎模型大鼠关节滑膜炎细胞浸润、增生明显，尤其增生显著，颗粒各给药组关节滑膜的病理改变较模型组为轻。结果见表11

[0147] 表11关节滑膜病理评价（HE染色，计分法）

[0148]组别 N(只) 剂量（g/kg） 炎细胞浸润 滑膜细胞增生 滑膜纤维组织增
正常组 1 0 等体积 0.30±48*** 0.20±0.42*** 0.1 0±0.32***
模型组 8 等体积 2.88±0.99 2.25±1.04 2.13±0.99
*** ** **
雷公藤组 9 0.005 0.78±0.67 1.22±0.67 1.22±0.44
高剂量组 9 25.2 1.44±0.88*** 1.44±0.88* 1.33±0.50**
中剂量组 9 12.6 1.11±0.60*** 1.33±0.50** 1.22±0.44**
低剂量组 9 6.3 2.00±1.00* 1.56±0.53* 1.44±0.53*

[0149] 注：与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001

[0150] 实验例4本发明药物颗粒对对佐剂性关节炎大鼠T细胞亚群的影响

[0151] 1材料

[0152] 1.1药物与试剂

[0153] 蠲痹颗粒（简称颗粒），按实施例1方法制备；雷公藤多甙片由湖南协力药业有限公司生产（批号：20040503）；所有药物临用前生理盐水新鲜配置，灌胃给药，1次/ｄ；弗氏完全佐剂(FCA)(Sigma公司产品)；抗大鼠FITC-CD3/PE-CD4双标单克隆抗体，抗大鼠FITC-CD3/PE-CD8双标单克隆抗体，溶血素lysing solution(BD公司产品)。

[0154] 1.2主要仪器

[0155] BECTON DICKINSON FACSCAN流式细胞仪；

[0156] XH-B型旋涡混合器，姜堰市康健医疗器具有限公司；

[0157] CENTRIFVGE MODEU 0412-7离心机，上海手术器械厂；

[0158] 1.3实验动物

[0159] 健康SD大鼠，SPF级，雄性，体重（200±20）ｇ，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2004-16。所有动物均在恒温恒湿的动物室饲养1周后进行实验。

[0160] 2方法

[0161] 2.1分组方法

[0162] 40只SD大鼠按体重分层后随机分为5组，即正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、雷公藤阳性对照组(雷公藤组)、颗粒高剂量组（高剂量组）、颗粒低剂量组（低剂量组），每组8只，给药剂量见表9。除正常组外的各组大鼠均按造模方法造模。

[0163] 2.2造模方法

[0164] 用弗氏完全佐剂于造模鼠右后足趾皮下进针至踝关节，注射弗氏佐剂0.1ml/只诱导关节炎的发生。

[0165] 2.3给药方法

[0166] 颗粒高剂量组灌服药液12.6g原生药/(kg·d)，颗粒低剂量组灌服药液6.3g原生药/(kg·d)；雷公藤组灌服药液5mg/(kg·d)，正常组和模型组灌服等体积的生理盐水，造模第14天开始灌胃给药，直到实验结束。

[0167] 2.4标本的取材及制备

[0168] 实验第32天末次给药后大鼠禁食24小时，股动脉放血处死。以肝素化试管（100μ/ml）收集血液。取抗凝血100μl加入测定管后，加相应抗体10μl，漩涡混匀，室温避光孵育30min，再加入溶血素1ml，混匀，孵育10min，加入PBS洗涤1000rpm/min,每次5min，连续三次，调整细胞数为106/ml，上机，用cellquest软件收集30000个细胞并分析；
阴性对照管除加入的相应抗体分别为FITC-IgG1和PE-IgG2，其余操作测定管。

[0169] 3结果

[0170] 表12各组大鼠外周血中T细胞亚群阳性细胞变化的比较

[0171]

[0172] 注：与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01

[0173] 由表12可知，模型组大鼠CD4＋T细胞与空白组比较无统计学意义（P＞＋ ＋ ＋0.05）,CD8 T细胞呈现显著低下（P＜0.05），CD4 /CD8 比值极显著增高（P＜0.01），雷公藤组、高剂量组和低剂量组对紊乱的T细胞亚群均有显著的调节作用。

[0174] 颗粒对T细胞亚群的紊乱有良好的调节作用，其机制可能为在T细胞在胸腺的阳+ +性选择中，颗粒特异性的提高CD3CD8 双阳性细胞与胸腺皮质上皮细胞表面MHCⅠ类分子结+
合，使CD8 细胞的生成增多，从而使得失调的Th/Ts平衡得以恢复，从而发挥治疗作用，这可能是颗粒发挥治疗作用的途径之一。

[0175] 实验例5本发明药物超细微粉对RA-MsPGN大鼠肾功能的影响

[0176] 1材料

[0177] 1.1实验药物

[0178] 超细微粉（简称微粉），按实施例2方法制备；雷公藤多苷片由湖南协力药业有限公司生产（批号：20040503）。所有药物临用前生理盐水新鲜配置，灌胃给药，1次/天。

[0179] 1.2试剂和仪器

[0180] 弗氏完全佐剂(FCA)、弗氏不完全佐剂（FIA）、LPS(E.Coli O111:B4)和牛血清白蛋白(N-BSA)，均为美国Sigma公司；荷兰威图生化仪。

[0181] 1.3实验动物

[0182] 健康SD大鼠，雄性，SPF级，体重（200±20）ｇ;由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SCXK（川）2004-16。

[0183] 2实验方法

[0184] 2.1改建动物模型[徐世军，沈映君，欧亚龙，等。蚁附超细微粉对RA－MsPGN大鼠模型肾功能的影响。中国中西医结合肾病杂志，2007；8(7):391～393]

[0185] （1）预免疫:除正常对照组以外的其它组大鼠于实验鼠的右足垫皮下注射完全弗氏佐剂0.1ml加3mg牛血清白蛋白(N-BSA)，此后分别于1周末、2周末加强1次，同时背部皮下分点注射不完全弗氏佐剂0.1ml，内含3mgBSA；3周末，腹腔连续4次注射BSA，间隔1ｈ，注射剂量分别为每只0.5mg、1.0mg、1.5mg、3.0mg；次日晨加强1次(2.0mg/只)。

[0186] （2）正式免疫：除正常对照组以外的其它组大鼠N-BSA尾静脉注射与腹腔多点皮下注射隔天交替进行，尾静脉注射剂量从每只0.5mg开始，每次增加0.5mg，至2.5mg为止。腹腔注射量是尾静脉注射量的1倍。免疫2周后尾静脉注射大肠杆菌内毒素200ng/只。正式免疫共7周。

[0187] （3）模型评价：从造模第4周起，每周末随机选取两只模型组大鼠做关节滑膜和肾脏病理检查，以评价模型是否成功。

[0188] 2.2分组及给药：

[0189] 将73只大鼠随机分成6组，即空白对照组（空白组）1 3只，模型对照组（模型组）20只；阳性对照组（雷公藤组）、微粉高、中、低剂量组（高、中、低剂量组），每组各10只，动物自由饮食，同等条件下分笼喂养。造模3周后，每日一次灌胃给药，空白组和模型组给予等体积生理盐水；阳性组给予雷公藤混悬液5mg/kg；高、中、低剂量组分别25.2、12.6和6.3g原生药/kg的药液，至1 0周末。

[0190] 2.3取材和标本制备

[0191] 末次给药后禁食不禁水，采用大鼠代谢笼收集24小时尿液，采用双缩脲法测定尿蛋白定量；股动脉放血处死大鼠，收集血液，分离血清，测定血清尿素氮和肌酐；无菌摘取左肾，10％甲醛固定，石蜡包埋，切2～3um薄片，HE染色，光镜观察。

[0192] 3统计方法

[0193] 计量资料采用单因素方差分析，组间比较采用t检验；等级资料采用Ridit分析。

[0194] 4结果

[0195] 4.1动物模型：

[0196] 动物注射完全弗氏佐剂次日右足明显肿胀，逐日加重达高峰，然后逐渐减轻，第10天后出现第二次肿胀，第12天对侧后肢、前肢继发肿胀，第3周尾部出现“风湿结节”；第4周病理形态学检查关节滑膜见典型佐剂性关节炎改变，同时肾系膜轻微增殖，到第6周肾系膜显著增生，出现典型系膜增值性肾炎的病理改变。该模型造模因素与发病过程基本符合RA系膜增值性肾炎的特点，病理改变亦证明大鼠不仅具有典型关节炎的特点，同时具有系膜增殖性肾炎的特点，说明该模型造模成功，可以用于RA系膜增值性肾炎的研究。

[0197] 4.2微粉对大鼠24小时尿蛋白定量、肌酐（BUN）和尿素氮（Crea）的影响，结果见表13.

[0198] 表13超细微粉对大鼠尿蛋白定量、肌酐和尿素氮的影响

[0199]

[0200] 注：与模型组比较，*p＜0.05；**p＜0.01，***p＜0.001

[0201] 4.3微粉对大鼠肾小球系膜细胞、系膜基质病理变化的影响

[0202] 大鼠肾脏病理变化的观察采用汪氏[汪军，郑佳新，孙瑞涛。肾原胶囊对系膜增殖性肾炎大鼠模型的病理影响。中国中西医结合肾病杂志，2002，3(3)6:346-347.的分级标准。即:(1)+轻度:每个系膜区含3个细胞核；系膜基质轻度增多，毛细血管腔未受挤压呈开放状，增生系膜宽度不超过毛细血管的直径。(2)++中度：每个系膜区含4个细胞核；系膜基质中度增多，少于50%的毛细血管襻受挤压，管腔轻度狭窄，增生的系膜宽度超过毛细血管的直径，毛细血管腔呈现轻重不等的挤压现象。(3)+++重度：每个系膜区含5个或更多的细胞核；系膜基质重度增多，多于50%的毛细血管袢受挤压，管腔重度狭窄或闭塞增生的系膜在弥漫性指状分布的基础上，呈块状聚集，系膜基质明显增多，在团块状增生聚集的部位，毛细血管结构破坏血管消失。具体数据见表14。

[0203] 表14微粉对大鼠肾小球系膜细胞、系膜基质病理变化的影响

[0204]

[0205] 注：病理程度比较，与模型组比较，*p＜0.05；**p＜0.01

[0206] 5.结论

[0207] 研究结果显示，模型组较正常组24小时尿量、尿蛋白定量和血清肌酐均显著升高（p＜0.05或p＜0.001），尿素氮无明显变化（P＞0.05），雷公藤多苷片和蚁附超细微粉各剂量组均能使24小时尿量、尿蛋白定量和血清肌酐其显著降低（p＜0.05或p＜0.01）；蚁附超细微粉各剂量组与雷公藤多苷片组比较无差异（P＞0.05）；与病理学检测结果相吻合，说明超细微粉对RA所致的肾功能损害有较好的保护作用，对肾小球系膜细胞和系膜基质的增生亦有较好的抑制作。

[0208] 实验例6本发明药物微粉对佐剂性关节炎大鼠足肿胀和T细胞亚群的影响[0209] 1.材料于方法：

[0210] 1.1试验药物：超细微粉，按实施例2方法制备。氢化可的松注射液，西南药业股份有限公司产品，批号：66040099。

[0211] 1.2、试验动物：SD大鼠，体重1 80～220g，均为SPF级，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：川实动管质SCXK(川)2004-16。实验在成都中医药大学中药药理实验室(国家中医药管理局三级中药药理实验室，证书编号为TCM-03.043)进行。

[0212] 1.3、试剂与仪器：

[0213] 1.3.1试剂：完全弗氏佐剂，Sigma公司产品；抗大鼠FITC-CD3/PE-CD4双标单克隆抗体，抗大鼠FITC-CD3/PE-CD8双标单克隆抗体，溶血素lysing solution(美国BD公司)。

[0214] 13.2主要仪器：Becton Dickinson Facscan流式细胞仪（美国Block Scientific公司）。

[0215] 1.4、方法：

[0216] 1.4.1、分组与给药：60只SD大鼠按体重随机分为6组，即正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、可的松对照组（可的松组）、超细微粉高剂量组、超细微粉中剂量组、超细微粉低剂量组，每组10只。除正常组外的各组大鼠均按造模方法造模。造模当日开始－1 －1给药，各给药组动物ig相应的药液10ml·kg ，正常组和模型组ig10 ml·kg 的生理盐水，每天1次，连续给药21天，分组及给药剂量见表15。

[0217] 1.4.2、模型制备：用弗氏完全佐剂(FCA)于造模鼠右后足趾皮下进针至踝关节，注射弗氏佐剂0.1ml/只诱导关节炎的发生。

[0218] 1.4.3、实验测定：

[0219] 1）对佐剂性关节炎大鼠足容积的影响：实验前各鼠右后足踝关节处作标记，注射FCA前3h以及注射后每隔一定时间各测左右足跖容积一次，同侧足跖给予佐剂前后容积之差为肿胀度，结果见表12

[0220] 2）对外周血T细胞亚群的影响：末次给药后大鼠禁食24h，股动脉放血处死。每组－1随机选取8只用于检测。以肝素化试管（100U·ml ）收集血液。取抗凝血100μl加入测定管后，加相应抗体10μl，漩涡混匀，室温避光孵育30min，再加入溶血素1ml，混匀，孵育
3 -1 6 -1
10min，加入PBS洗涤1×10rpm·min ，每次5min，连续三次，调整细胞数为10cell·ml ，
4
上机，用Cellquest软件收集3×10 个细胞并分析；阴性对照管除加入的相应抗体分别为FITC-IgG1和PE-IgG2外，其余操作同测定管。结果见表13

[0221] 1.4.4、统计学处理：应用SPSS15.0统计软件，数据以X±S表示，各组数据呈正态分布进行单因素方差分析（one-wayANOVA），非正态分布进行K-W检验。

[0222] 2.结果

[0223] 2.1对佐剂性关节炎大鼠足容积的影响：

[0224] 结果见表1 5。由表可见，与模型组比较，可的松阳性组在造模后1、3h，及3、5、8、12、15、18d的足肿胀值均明显低于模型组(P＜0.01)，超细微粉高、中、低三个剂量组在造模后1、3h，及3、5、8、12、15、18d的足肿胀值与模型组比较均显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，表现出较好的抗炎效果。

[0225] 表15超细微粉对佐剂性关节炎大鼠足跖肿胀的影响

[0226]* **

[0227] 注：与模型对照组比较，P＜0.05；P＜0.01

[0228] 2.2对外周血T细胞亚群的影响：

[0229] 结果见表16.

[0230] 表16超细微粉外周血T细胞亚群影响的比较

[0231]

[0232] 注：与模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

[0233] 由表可见，与模型组比较，超细微粉高、中、低三个剂量组可显著降低CD4＋/CD8＋比＋值(P＜0.05或P＜0.01)；超细微粉高、中剂量组可显著降低CD4 ％值（P＜0.01)，低剂量组表现不明显；超细微粉表现出较好的抗炎效果。

[0234] 3.结论

[0235] 本实验结果表明，超细微粉各剂量均有较好的减轻模型大鼠足肿胀和降低CD4＋T值。

[0236] 实验例7本发明药物颗粒与超细微粉抗炎镇痛作用比较研究

[0237] 1材料

[0238] 1．1试验药物超细微粉(简称微粉)，按实施例2方法制备；蠲痹颗粒(简称颗粒)，按实施例1方法制备。试验中两种剂型的原生药用量为临床相同倍数的剂量(微粉为颗粒剂的1/12)。盐酸曲马多由北京四环医药科技股份有限公司生产(批号：0406245)；醋酸地塞米松注射液由西南药业股份有限公司生产(批号：66040099)；雷公藤多苷片由湖南协力药业有限公司生产(批号：20040503)。所有药物临用前用生理盐水新鲜配置，灌胃给药，1次／天。

[0239] 1．2动物KM种小白鼠，雌雄兼用，体重(20±2)g；SD大鼠，SPF级，雄性，体重(200±20)g；均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物合格证号为：SOCK(川)2004-16。

[0240] 2方法与结果

[0241] 2.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响雄小鼠80只，按体重分层随机分为8组。颗粒组高、中、低3个剂量分别为32.4、16.2、8.1原生药/kg，微粉组高、中、低3个剂量分别为2.7、1.35、0.675g原生药/kg。除地塞米松组于试验当天腹腔注射给药外，其余每组动物灌胃给药，每天1次，连续3天。末次给药后1h，将2Oral二甲苯均匀涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳作为对照，致炎后30min处死动物，用直径8mrn的打孔器取下左右耳片称重。以左右耳片重量差作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率，结果见表17。

[0242] 表17两种剂型对小鼠耳廓肿胀的影响

[0243]组别 鼠数(只) 剂量(g/kg) 耳重差(mg) 抑制率(%)
对照组 10 14.8±1.8
地塞米松 10 0.005 6.32±1.7** 57.4
颗粒高剂量组 10 32.40 12.12±2.1* 1 8.2
颗粒中剂量组 10 16.20 8.47±2.7** 42.6
颗粒低剂量组 10 8.1 0 11.85±2.17* 19.6
微粉高剂量组 10 2.70 1 1.43±3.6** 23.0
微粉中剂量组 10 1.35 9.98±3.3** 32.4
微粉低剂量组 10 0.675 11.52±3.9** 22.3

[0244] 与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01(下同)

[0245] 表17结果显示，3个剂量的颗粒和微粉对二甲苯致小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用，临床相同倍数用量下两种剂型比较无统计学意义。

[0246] 2.2对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响分组及给药同2.1，末次给药后1h，小鼠尾静脉注射1％伊文思蓝0.1M1/10g体重，同时腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml／只。20min后处死小鼠，用5ml蒸馏水冲洗腹腔，收集冲洗液，离心，取上清液于分光光度计590nm比色，以吸光度(OD)值判断小鼠腹腔毛细血管的通透性。结果见表18。

[0247] 表18两种剂型对小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响

[0248]组别 鼠数(只) 剂量(g/kg) OD值
对照组 1 0 1.45±0.50
地塞米松 1 0 0.05 0.66±0.6**
颗粒高剂量组 1 0 32.40 0.96±0.4**
颗粒中剂量组 1 0 16.20 0.83±0.3**
颗粒低剂量组 1 0 8.10 0.74±0.4**
微粉高剂量组 1 0 2.70 0.52±0.1**
微粉中剂量组 1 0 1.35 0.39±0.2**
微粉低剂量组 1 0 0.675 0.54±0.2**

[0249] 表18结果显示，3个剂量的颗粒和超细微粉对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进均有极显著的抑制作用，相同倍数用量下两种剂型比较无统计学意义。

[0250] 2.3对大鼠蛋清性足肿胀的影响大鼠60只，按体重分层随机分为6组。除地塞米松于试验当天腹腔注射给药外。其余每组动物灌胃给药，每天1次，连续5天。实验前在各鼠右后足踝关节处作标记，用足容积测定仪测定各鼠足容积两次。取平均值作为正常足容积。末次给药后30min，每只大鼠右后足跖部皮下进针至踝关节附近皮下注射lO～X，新鲜鸡蛋清溶液0.1ml致炎，分别于致炎后30、60、120、240、360min测定致炎足容积，计算各大鼠致炎前后右后足跖容积变化值，以足肿胀度和足肿抑制百分率表示药物的抗炎效应，结果见表19。

[0251] 表19两种剂型对大鼠蛋清性足肿胀的影响

[0252]

[0253] ()内数据为足肿胀抑制百分

[0254] 表19结果显示，高、低剂量的颗粒和微粉对蛋清所致的大鼠足肿胀均具有极显著的抑制作用．临床相同倍数用量下两种剂型比较无统计学意义。

[0255] 2.4对小鼠棉球肉芽肿的影响分组同2.1。给药当日于小鼠腋窝皮下手术植入灭菌棉球(10mg±0.5mg)，连续灌胃给药7天，地塞米松组腹腔注射给药。7天后处死小鼠。剥离肉芽组织，于60℃烘箱中烘干，称重，计算肉芽肿重及肉芽指数，结果见表20。表20两种剂型对小鼠棉球肉芽肿的影响

[0256]组别 鼠数(只) 剂量(g/kg) 肉芽干重(mg) 肉芽肿指数
对照组 10 10.60±2.6 4.70±1.1
地塞米松 10 0.005 4.92±1.3** 2.26±0.6**
颗粒高剂量组 10 32.40 7.52±0.9** 3.42±0.5**
颗粒中剂量组 10 16.20 7.65±0.8** 3.44±0.5**
颗粒低剂量组 10 8.1 0 6.99±0.8** 3.14±0.5**
微粉高剂量组 10 2.70 8.30±1.3** 3.62±0.5**
** *
微粉中剂量组 10 1.35 9.30±1.5 3.88±0.7
微粉低剂量组 10 0.675 8.80±1.8** 4.03±1.0*

[0257] 表20结果显示，3个剂量的颗粒和微粉对肉芽的形成均有显著的抑制作用，临床相同倍数用量下两种剂型比较无统计学意义。

[0258] 2.5对热板法试验小鼠疼痛反应的影响调节热板测痛仪温度，恒定在55±0.5℃，以雌小鼠放人测痛仪中开始记时至出现舔后足所需时间(5)为痛周值．筛选痛阈值在5～30s之问的小鼠80只，按体重分层随机分为8组，对照组及各给药组均为10只小鼠，分别测定每组每只小鼠痛阔值2次，每次间隔5min，取平均值作为正常痛阈值(即给药前痛阈值)。然后给予受试药或相同体积生理盐水0.1ml/10g。每天1次，连续3天，末次给药后
30、60、120、240、360min测定各组小鼠痛闭值作为给药后痛闾值，痛阈值大于60s者以60s计。结果见表21。

[0259] 表21两种剂型对热板法试验小鼠疼痛反应的影响

[0260]

[0261] 表21结果显示，3个剂量的微粉、颗粒和盐酸曲马多在给药后均能显著提高痛阈值，临床相同用量倍数下两种剂型比较无统计学意义。

[0262] 2.6对醋酸扭体法小鼠疼痛反应的影响小鼠80只雌雄各半，分组及给药同2．1，灌胃给药功相同体积的生理盐水0.1ml/l0g，给药30min后，腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只。观察注射醋酸后1 5min内扭体反应次数，并计算镇痛率，结果见表22。

[0263] 表22两种剂型对醋酸扭体法小鼠疼痛反应的影响

[0264]

[0265] 表22结果显示，3个剂量的微粉和颗粒都能使小鼠出现扭体反应的潜伏期延长和扭体次数减少，临床相同倍数用量下两种剂型比较无统计学意义。

[0266] 3结果

[0267] 研究结果表明，在临床相同倍数剂量下颗粒用量是微粉的12倍，但两种剂型的镇痛抗炎效果基本相似。提示在相同或相似的治疗效果下，微粉的用量仅为颗粒的1/12。

具体实施方式

[0268] 实施例1

[0269] 处方原料药组成：黑蚂蚁3000g、黄芪2000g、木瓜1500g、盐附子1200g、三七600g[0270] 取处方量的原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪和木瓜粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡30分钟后，加入6倍量水煎三次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度1.07（60℃）的清膏，备用；另取处方量的三七，粉碎，过120目筛，得三七极细粉，将三七极细粉与上述提取所得的清膏混合均匀，加入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术，制成颗粒剂。

[0271] 本发明颗粒剂每克相当于6克原料药。

[0272] 实施例2

[0273] 处方原料药组成：黑蚂蚁3000g、黄芪2000g、木瓜1500g、盐附子1200g、三七600g[0274] 取处方量的本发明原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪、三七和木瓜粉碎，过24目筛，得原料粗粉；将原料粗粉置于60℃的烘箱内烘干5h，取出，保证入料水分应低于4%；对烘干后的粗粉进行超微粉碎，粉碎时间为20min，得粒径约为8μm超细微粉。

[0275] 本发明超细微粉每克相当于1克原料药。

[0276] 实施例3

[0277] 处方原料药组成：黑蚂蚁2500g、黄芪3000g、木瓜1200g、盐附子2000、三七500g[0278] 取处方量的本发明原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪、三七和木瓜粉碎，过24目筛，得原料粗粉，加入1 0倍量70%的乙醇回流提取三次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇至无醇味；滤液通过大孔树脂，先用5倍量水洗脱，洗脱液弃取，再用加70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至无醇味；再加入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术制成片剂。

[0279] 实施例4

[0280] 处方原料药组成：黑蚂蚁4000g、黄芪1800g、木瓜2000g、盐附子1200g、三七1000g

[0281] 取处方量的本发明原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪和木瓜浸泡30分钟后，加入6倍量水煎三次，每次1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度1.07（60℃）的清膏，喷雾干燥（进风温度定为：170～1 80℃，出风温度定为：90～1 00℃），收集干浸膏粉末；三七粉碎，过120目筛，得三七极细粉，与上述干浸膏粉末混合均匀，再加入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术制成胶囊剂。

[0282] 实施例5

[0283] 处方原料药组成：黑蚂蚁2000g、黄芪1500g、木瓜1000g、盐附子800g、三七400g；

[0284] 取处方量原料药，黑蚂蚁、盐附子、黄芪、三七和木瓜粉碎，过24目筛，得原料粗粉，加入8倍量甲醇超声提取三次，前两次每次40min，第三次20min，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.1 5（60℃）的清膏，备用；提取所得到的清膏再加入制药上可接受的辅料按照本领域制剂的常规技术制成滴丸剂。

[0285] 实施例6

[0286] 处方原料药组成：黑蚂蚁6000g、黄芪2000g、木瓜3000g、盐附子1000g、三七