P53基因的新应用

摘要

本发明公开一种P53基因的新应用，更具体的涉及P53基因在制备治疗糖代谢异常性疾病药物中的应用，本发明属于生物制药领域。本发明的实施例中，以db/db鼠为研究对象，证实P53基因具有良好降糖作用。继而，又治疗了6例二型糖尿病病人，同样获得显著疗效。结合近年来对于糖尿病发病机制基因水平的研究结论和P53基因作为体内关键的异常基因的调控基因，相信其通过调控异常糖代谢过程中相关调节因子对应的编码基因的方法，获得对异常糖代谢的纠正。本发明解决了糖代谢异常类疾病的基因治疗问题。公开了P53基因在糖尿病的治疗方面有广泛的应用前景。

权利要求

1.P53基因在制备治疗二型糖尿病药物中的应用，其特征在于：利用增加外源性P53基因或者P53基因所编码的P53蛋白的方式。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的P53基因药物是指重组人P53腺病毒。

3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的药物，其剂型为注射剂型或口服剂型。

说明书

P53基因的新应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物制药领域，涉及P53基因的新应用，更具体的涉及P53基因在制备治疗血糖代谢异常性疾病药物中的应用。

背景技术

[0002] P53基因作为一种重要的肿瘤抑制基因，近三十多年以来，被各国学者广泛研究，据报道，人类癌症中约有一半是由于该基因发生突变失活而导致的。P53基因是因编码一种分子量为53kDa的蛋白质而得名。其表达产物为基因调节蛋白(P53蛋白)，当DNA受到损伤时表达产物急剧增加，可抑制细胞周期进一步运转。一旦P53基因发生突变，则会导致P53蛋白失活，细胞分裂失去节制，机体便发生癌变。因此p53能使癌细胞自杀，防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。P53的其他功能还在被陆续的发现中。

[0003] 2003年，国产的重组人p53腺病毒注射液上市,商品名″今又生″,是世界上第一个获准上市的肿瘤基因治疗药,它是由正常人p53肿瘤抑制基因和改构的5型腺病毒基因重组而成。前者是″今又生″发挥肿瘤治疗作用的主体结构,后者主要起载体作用,携带治疗基因p53进入肿瘤细胞内发挥作用。重组人p53腺病毒(rAd-p53)是一种广谱的抗肿瘤药物,目前已有多篇″今又生″治疗全身各主要系统恶性实体瘤的研究论文在国内外发表。p53已经作为治疗肿瘤的基因药物被广泛应用，充分证明了其具有良好的安全性。

[0004] 糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。目前有研究已经明确表明：糖尿病的发病确与体内有易感基因或有缺陷基因存在有关。

[0005] 糖尿病(Diabetes)分一型糖尿病和二型糖尿病。在糖尿病患者中，二型糖尿病所占的比例约为95%。其中一型糖尿病人，因胰岛素分泌缺乏，依赖外源性胰岛素补充以维持生命。二型糖尿病人，体内产生胰岛素的能力并非完全丧失，有的患者体内胰岛素甚至产生过多，但胰岛素的作用效果差，因此患者体内的胰岛素可能处于一种相对缺乏的状态。可以通过某些口服药物刺激体内胰岛素的分泌。

发明内容

[0006] 发明人在应用重组人p53腺病毒治疗恶性肿瘤过程中，发现其对糖尿病血糖水平的影响。于是进行临床基础研究，经多年的研究发现，P53基因具有调节血糖代谢异常，降低糖尿病病人的血糖水平的作用。此项研究不仅填补了国内外的空白，而且给糖尿病患者带来了治愈的希望。经过对p53基因的进一步研究和试验，本发明所采用的技术方案如下：

[0007] 本发明的一方面在于，公开P53基因的一种新应用：即P53基因或者P53基因所编码的P53蛋白，在制备治疗血糖代谢异常性疾病药物，或者制备有效改善病人因血糖代谢异常而继发的综合征的药物中的应用。

[0008] 本发明中，对于上文所述的血糖代谢异常性疾病主要是指糖尿病，尤其是在治疗二型糖尿病中的应用。

[0009] 对于上文所述的P53基因的应用，最为优选的情况下，所述的P53基因药物是指重组人P53腺病毒。本发明实施例中所应用的重组人P53腺病毒注射液是市售的，由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产的国药准字号商品。本发明实施例的内容中数据证明了：重组人P53腺病毒注射液在治疗二型糖尿病方面的应用，效果显著。

[0010] 除了上文所述的重组人P53腺病毒之外，本领域技术人员也可以通过将P53基因与其他基因载体重组，从而制备出具有有效控制病人血糖代谢异常的药物，或者制备因血糖代谢异常而继发的综合征的药物，即调节病人血糖水平的药物。

[0011] 对于上文所述的药物，其剂型可以为注射剂型或口服剂型。

[0012] 作为产品新应用的开发，本发明中选择了由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产的，国药准字S20040004，重组人P53腺病毒注射液，并且针对二型糖尿病小鼠模型——db/db鼠，研究p53基因降糖作用。同时，在实施例中还提供了6例二型糖尿病病人的应用效果对照数据（治疗前病人签署特殊用药使用同意书）。进而，从多方面证明了所述的P53基因药物的应用效果。本领域技术人员可以依据本发明实施例的数据，对药物的应用剂量和给药间隔，用药疗程等因素，进行合理的改变并通过有限次的试验获得更多的数据。其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都应该包含在本发明的保护范围之内。

[0013] 本发明实施例中，对二型糖尿病病人的治疗方法为：按照0天、2天、4天、6天的时12
间间隔，每人每次的治疗剂量为：重组人P53腺病毒注射液2~4×10 VP，加入至100ml生理盐水中，静脉点滴，效果显著。

[0014] 本发明实施例中，虽然未涉及一型糖尿病以及其他血糖代谢异常性疾病的具体实施例，但依照血糖代谢异常性疾病发病机制中存在基因缺陷的研究结论，申请人合理预期p53基因对于一型糖尿病以及其他血糖代谢异常性疾病也将有良好的治疗作用，都应该包含在本发明的保护范围之内。关于作用机理依赖于相关多领域基因水平进一步研究的进展，从而推动在分子水平上更详尽的探索体内糖代谢过程中的相关酶和调节因子的编码基因与p53基因作用关系，这也是发明人希望看到的学术意义。

[0015] 有益效果：

[0016] 此项研究提出了对于糖尿病治疗的新思路，结合糖尿病发病机制基因水平的研究成果与p53基因所具有的对多组下游基因的调节作用，从而给糖尿病患者带来了治愈的希望。

[0017] P53基因或者P53基因所编码的P53蛋白，属于基因工程、生物技术制药领域的产品，其药物的生产工艺简单，易于扩大规模生产，工艺条件容易控制，生产周期短。

具体实施方式

[0018] 下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

[0019] 实施例1

[0020] 一、材料

[0021] 1、受试物：重组人P53腺病毒注射液，国药准字S20040004，主要成分：重组腺病12
毒-P53基因颗粒；辅料：三羟基氨基甲烷，丙三醇。规格：1×10 VP/支。购自市售的重组人P53腺病毒注射液，由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产，批号：20070901。

[0022] 2、动物：

[0023] db/db鼠：二型糖尿病小鼠模型，购自南京鹏晟生物科技发展有限公司，研究p53基因的降血糖作用。

[0024] db/m小鼠：购自南京鹏晟生物科技发展有限公司，为正常小鼠对照组。

[0025] 二、方法

[0026] 取6周龄db/db鼠50只，体重45.8±3.3g，随机分成五组，每组10只，分别为p53基因低剂量组，p53基因高剂量组，吡格列酮组，腺病毒组，模型组。另取db/m小鼠10只，体重26.55±2.32g，为正常组。

[0027] 具体的分组情况如下：

[0028] ①p53基因低剂量组，腹腔注射重组人p53腺病毒注射液，计量为2.5×1010VP/kg bw；

[0029] ②p53基因高剂量组，腹腔注射重组人p53腺病毒注射液，计量为5×1010VP/kg bw；

[0030] ③腺病毒组：腹腔注射作为p53基因载体的单纯腺病毒(由深圳市赛百诺基因技10
术有限公司无偿提供)，计量为5×10 VP/kg bw；

[0031] ④吡格列酮组，灌胃给药盐酸吡格列酮片（市购，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，国药准字H20040631）计量为4mg/kg bw；

[0032] ⑤模型组和正常组，腹腔注射生理盐水，计量为10ml/kg.bw。

[0033] 各组均按照0天、2天、4天、6天给药。于28天后检测空腹血糖，数据应用SPSS10.0统计软件分析，检验水准为P<0.05时，差异有统计学意义。

[0034] 三、结果

[0035] p53基因对db/db鼠空腹血糖的影响结果见表1，从表中统计的数据可知：与正常组相比，模型组空腹血糖明显升高（P<0.05）。p53基因组和吡格列酮组与模型组比较，空腹血糖明显下降（P<0.05）。

[0036] 表1p53基因对db/db鼠空腹血糖的影响

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[0038] 四、结果分析

[0039] 本发明均以db/db鼠为研究对象，结果分析如下：

[0040] 1、正常组、模型组和腺病毒组中，无论是腹腔注射生理盐水还是单纯腺病毒制剂均无降低空腹血糖作用。

[0041] 2、吡格列酮组给药后具有降低血糖作用，说明本研究对象——db/db鼠对降糖治疗药物具有良好反应性。

[0042] 3、无论是P53基因低剂量组还是高剂量组，腹腔注射P53基因后，db/db鼠空腹血糖均显著下降（P＜0.05），表明P53基因经腹腔注射方法治疗二型糖尿病动物模型是有效的。但最佳的P53基因给药浓度还需要进一步研究。

[0043] 本发明结果结果显示，重组人p53腺病毒注射液中只具有载体作用的腺病毒单独应用并无治疗二型糖尿病作用。但重组人p53腺病毒注射液经腹腔注射具有确切的降低db/db鼠的空腹血糖水平作用。上述结果可以证实，重组人p53腺病毒注射液中P53基因对二型糖尿病具有治疗作用，而且，重组人p53腺病毒注射液中P53基因是治疗的关键因素。本发明为扩大重组人p53腺病毒注射液治疗疾病的适应症，即重组人p53腺病毒注射液具有治疗二型糖尿病作用提供可靠的实验依据。

[0044] 实施例2

[0045] 一、材料

[0046] 1、受试物：重组人P53腺病毒注射液，国药准字S20040004，主要成分：重组腺病12
毒-P53基因颗粒；辅料：三羟基氨基甲烷，丙三醇。规格：1×10 VP/支。购自市售的重组人P53腺病毒注射液，由深圳市赛百诺基因技术有限公司生产，批号：20070901。

[0047] 2、治疗人群

[0048] 二型糖尿病病人6例，均为男性，年龄43～76岁，平均56.7岁。空腹血糖8.9～12.3umol/L，平均10.6umol/L，均使用胰岛素治疗，应用胰岛素时间为1～5年，平均2.6年，胰岛素用量12u～48u，平均每天用量为26u。

[0049] 治疗前病人签署特殊用药使用同意书。

[0050] 治疗方法：重组人P53腺病毒注射液2~4×1012VP，加入100ml生理盐水中，按照0天、2天、4天、6天，静点。治疗中并发热，最高至39.7，经常规支持、对症治疗。1个月后复查空腹血糖，经自身对照，均有不同程度下降，随访3个月，病情稳定，停止应用胰岛素。统计结果见表2：

[0051] 表2二型糖尿病病人的应用效果统计数据

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