利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法及其应用。该方法利用植物薄片培养技术，经过外植体的取材、消毒、不定芽的诱导、薄片的切取、成苗进而获得所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗，繁殖种苗的速度快，繁殖系数高；所用的植物生长调节剂6-BA的浓度较低，投入少，产出高，也避免了由于培养基中细胞分裂素含量过高而导致组培苗可能出现的生长减弱、茎叶细小、玻璃化等现象。采用本发明，经过一年半的循环扩繁，所罗门姜黄和红艳郁金试管苗有效率仍高达95%，所罗门姜黄移栽室外后3.5～4.5个月即可开花。本技术为满足所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗提供的规模化和市场化提供了一条有效的途径。

权利要求

1.一种利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）外植体的消毒和不定芽的诱导：以所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽为外植体，接种于芽诱导培养基A中进行培养，诱导出不定芽；

（2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中进行培养，得到健壮的植株； （3）薄片不定芽的诱导：取步骤（2）得到的植株，从其基部切取薄片，接种在不定芽诱导培养基B中进行培养，得到健壮的不定芽；

（4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上培养，得到健壮的植株；

（5）花卉苗的生产：将土壤装入自封袋中，将步骤（4）中得到的植株移栽到自封袋土壤中，置于阴凉处培养，得到所罗门姜黄或红艳郁金的花卉苗；

-1 -1 -1

所述的芽诱导培养基A为MS培养基 +3 mg·L 6-BA+0.2 mg·L NAA + 30 g·L 蔗-1糖 +7 g·L 琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

-1 -1

所述的芽诱导培养基B为MS培养基 +（1～5）mg·L 6-BA+（0.1～0.2）mg·L -1 -1NAA + 30 g·L 蔗糖 + 7 g·L 琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

-1 -1

所述的成苗培养基为1/2 MS培养基 + 15 g·L 蔗糖 +7 g·L 琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

步骤（3）中所述的薄片的厚度为0.5～0.8mm。

2.根据权利要求1所述的利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法，其特征在于：步骤（1）中：

所述的所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽采用以下方法进行前处理：取所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽，用水冲洗干净后用洗洁精泡25～30分钟，再用水冲洗

25～30分钟后用70～75 wt%酒精进行表面消毒60～90秒，最后用0.1 wt% 升汞消毒

15～20分钟，切取0.5～2.0 cm的芽作为外植体；

-2 -1

所述的培养的条件为于26～28℃、30 µmol·m s 光强、16L/8D光照条件培养20～

30天。

3.根据权利要求1所述的利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的-2 -1方法，其特征在于：步骤（2）中所述的培养的条件为于26～28℃、30 µmol·m s 光强、

16L/8D光照条件培养15～20天。

4.根据权利要求1所述的利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法，其特征在于：步骤（3）中：

-2 -1

所述的培养的条件为于26～28℃、30 µmol·m s 光强、16L/8D光照条件培养20～

25天；

所述的薄片的厚度为0.5～0.8mm。

5.根据权利要求1所述的利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方-2 -1法，其特征在于：步骤（4）中所述的培养的条件为26～28℃、30 µmol·m s 光强、16L/8D光照条件；培养时间为15～20天。

6.根据权利要求1所述的利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法，其特征在于：步骤（5）中所述的植株为长至6～8cm带根的不定芽或者从成苗培养基上获得的植株。

说明书

利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方

法

技术领域

[0001] 本发明属于姜科（Zingiberaceae）姜黄属（Curcuma）所罗门姜黄（Curcumasoloensis Valeton）和红艳郁金（Curcuma rubescence Roxb.）花卉苗生产技术领域，特别涉及一种利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法。通过该方法能够利用薄片培养技术快速获得大量的所罗门姜黄和红艳郁金试管苗，再将试管苗移栽到自封袋中进行装袋培养，从而获得大量所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗。

背景技术

[0002] 所罗门姜黄为姜科姜黄属、多年生根茎状草本花卉植物，原产于所罗门群岛，我国广东已引种栽培，在华南地区种植时表现良好。所罗门姜黄是多年生球根花卉，株高0.4～0.6m，叶片披针形或长圆状披针形，绿色，叶中脉上有紫色条纹，可盆栽或地栽做观叶植物；
花形奇特，花序形如宝塔，色泽艳丽，质地如玉般高雅，具有很高的观赏特性，是极好的鲜切花品种；花序持续时间长，可作花镜、花坛布置。所罗门姜黄通常采用分切根状茎进行繁殖，繁殖系数低，难以满足大规模生产和流通要求。专利申请201010127400.0公开了一种所罗门姜黄的组织培养繁殖方法，该方法通过利用不定芽反复继代方法获得所罗门姜黄离体植株，繁殖系数较低，培养周期长，移栽室外的植物需要6～8个月才能开花。

[0003] 红艳郁金株高1.3～1.8m，其叶片翠绿，叶柄艳红，全株红绿相衬，高雅脱俗，观叶观花俱佳，是上等的切花材料和上佳盆栽材料，还可做庭院栽培，极具开发潜力。通常采用分切根状茎进行繁殖，但自然状态下繁殖系数很低，难以满足大规模生产需求和流通要求。到目前为止，还没有关于红艳郁金快繁技术的研究报道。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法。该方法采用薄片培养技术获得大量的试管苗，将所获得的试管苗用自封袋进行装袋培养，成功实现试管苗的装袋存活，为所罗门姜黄和红艳郁金的快速繁殖提供新的途径，有利于迅速实现所罗门姜黄和红艳郁金大规模产业化生产的要求。

[0005] 本发明的目的通过下述方案实现：一种利用薄片培养技术生产所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的方法，包括如下步骤：

[0006] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：以所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽为外植体，接种于芽诱导培养基A中进行培养，诱导出不定芽；

[0007] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中进行培养，得到健壮的植株；

[0008] （3）薄片不定芽的诱导：取步骤（2）得到的植株，从其基部切取薄片，接种在芽诱导培养基B中进行培养，得到健壮的不定芽；

[0009] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上培养，得到健壮的植株；

[0010] （5）花卉苗的生产：将土壤装入自封袋中，将步骤（4）中得到的植株移栽到自封袋土壤中，置于阴凉处培养，得到所罗门姜黄或红艳郁金的花卉苗；

[0011] 步骤（1）中：

[0012] 所述的所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽优选采用以下方法进行前处理：取所罗门姜黄或红艳郁金的根状茎萌发的芽，用水冲洗干净后用洗洁精泡25～30分钟，再用水冲洗25～30分钟后用70～75wt%酒精进行表面消毒60～90秒，最后用0.1wt%升汞消毒15～20分钟，切取长0.5～2.0cm的芽作为外植体；

[0013] 所述的培养的条件优选为于26～28℃、30μmol·m-2s-1光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件培养20～30天；

[0014] 所述的芽诱导培养基A优选为MS培养基+3mg·L-16-BA+0.2mg·L-1 NAA+30g·L-1-1蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

[0015] 所述的高温高压灭菌的条件优选为在121℃、1.06kg/cm2灭菌15min；

[0016] 步骤（2）中：

[0017] 所述的培养的条件优选为于26～28℃、30μmol·m-2s-1光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件培养15～20天；

[0018] 所述的成苗培养基优选为1/2MS培养基+15g·L-1蔗糖+7g·L-1琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

[0019] 所述的高温高压灭菌的条件优选为在121℃、1.06kg/cm2灭菌15min；

[0020] 步骤（3）中：

[0021] 所述的芽诱导培养基B优选为MS培养基+（1～5）mg·L-16-BA+（0.1～0.2）-1 -1 -1mg·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.6～5.9，高温高压灭菌；

[0022] 所述的高温高压灭菌的条件优选为在121℃、1.06kg/cm2灭菌15min；

[0023] 所述的培养的条件优选为于26～28℃、30μmol·m-2s-1光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件培养20～25天；

[0024] 所述的薄片的厚度优选为0.5～0.8mm；

[0025] 步骤（3）中，从一株植物可切取6～8个薄片；培养20～25天后，有的薄片可获得高达8个不定芽，有的可获得2～3个不定芽，有的只能获得1个不定芽；当芽诱导培养-1基中6-BA浓度为3mg·L 时，从一株植物最多可获得15个不定芽，增殖系数最高达15倍；
不定芽长到1～2cm后即可转移到成苗培养基上进行成苗培养；如果不急需扩繁，也可留苗继续在诱导培养基上培养2～3个月，形成含有大量根系的成熟苗后再直接用于切取薄片；
也可以将步骤（3）中获得的不定芽移栽到自封袋土壤中，置于阴凉处培养，得到所罗门姜黄或红艳郁金的花卉苗；

[0026] 步骤（4）中：

[0027] 所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L-1蔗糖+7g·L-1琼脂，pH5.6～5.9，高温高压灭菌；

[0028] 所述的高温高压灭菌的条件优选为在121℃、1.06kg/cm2灭菌15min；

[0029] 所述的培养的条件优选为26～28℃、30μmol·m-2s-1光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件；培养时间优选为15～20天，如果为留种使用，可在培养基上保留半年以上；

[0030] 步骤（4）中，得到的健壮植株在成苗培养基中又会产生新的不定芽，该不定芽也可直接移栽到自封袋土壤中进行花卉苗的生产；

[0031] 步骤（5）中：

[0032] 所述的土壤优选为富含有机质的土壤，如从花卉市场购买的用于花卉栽培的有机土、靓土；

[0033] 所述的土壤优选采用浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液一次浇透，整个过程不再需要施肥，视土壤的干湿情况可适当补充水分；

[0034] 所述的自封袋优选为15cm×20cm或7cm×15cm的自封袋；

[0035] 自封袋所用土壤量和种植植物数量根据自封袋的大小而确定；

[0036] 所述的自封袋为15cm×20cm的自封袋时，每袋优选种植植物2～4棵，土壤的用量优选为每袋50～100毫升；

[0037] 所述的自封袋为7cm×15cm的自封袋时，每袋优选种植植物1棵，土壤的用量优选为每袋25～40毫升；

[0038] 所述的植株优选为长至6～8cm带根的不定芽或者从成苗培养基上获得的植株；

[0039] 步骤（5）中，将步骤（4）中得到的植株移栽到自封袋土壤后，应适当遮阴，保持自封袋内湿润；在夏季温度高达36℃的环境中驯化，上盆移栽存活率仍然可达99%以上；植株在自封袋中培养7天后可上盆栽培，盆栽植株继续在遮阴、保持土壤湿润的条件下培养一个月，即可转入正常的栽培管理；花卉苗可在自封袋中保存1周到2个月，根据需要进行上盆移栽；

[0040] 需要获得大量的健壮的花卉苗的时候，可根据生产规模的需要，调节步骤（3）和步骤（4）的重复频率，重复步骤（3）和步骤（4）的操作；也可根据需要把多余的芽直接保留在诱导培养基上或者转入成苗培养基中培养获得成熟苗，以成熟苗来保留品种，保留时间可达半年以上；在需要大量苗的时候，直接取成熟苗作为外植体用于切取薄片。

[0041] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

[0042] （1）本发明利用植物组织细胞的全能性和植物薄片培养技术，经过外植体的取材、消毒、不定芽的诱导、薄片的切取、成苗进而获得所罗门姜黄或红艳郁金花卉苗。本发明能快速繁殖种苗，比现有技术的繁殖系数（5～10倍）有了显著的提高（本发明的繁殖系数为10～15倍）；所用的植物生长调节剂6-BA的浓度较低，（现有技术的芽诱导培养基中6-BA-1 -1 -1
的浓度为5～10mg·L ，本发明的6-BA的浓度为1～5mg·L ，最佳浓度为3mg·L ），投入少，产出高；同时也避免了由于培养基中细胞分裂素含量过高而导致组培苗可能出现的生长减弱、茎叶细小、玻璃化等现象。采用本发明，经过一年半的循环扩繁，所罗门姜黄或红艳郁金试管苗有效率仍高达95%以上。

[0043] （2）在通常的植物离体快繁技术中，都是通过以芽繁芽不断增殖获得大量的不定芽，但继代次数过多，容易导致不定芽退化、出现大量无效苗的现象。在本发明中，通过从成熟的植株切取薄片获得不定芽，一方面可在短时间获得大量的试管苗，同时可通过保留成熟植株作为外植体代替不定芽作为外植体，避免用以芽繁芽技术时出现芽退化后需要重新从室外获取材料、经过消毒获得外植体的麻烦。

[0044] （3）本发明采用的薄片厚度只有0.5～0.8mm，可以及时暴露残留在植株中的某些生长迟缓的微生物，避免由于这些污染物持续许多代而引起的组培苗生长减弱或黄化的现象。

[0045] （4）所罗门姜黄和红艳郁金不定芽或试管苗在离体培养过程中都极易生根。当生产上急需大量种苗时，也可直接选取有根的、健壮的不定芽移栽到自封袋中，缩短培养周期。将植株移栽到自封袋中，在高达36℃的环境中植株成活率仍高达99%以上，出苗快、稳定，苗壮，其中所罗门姜黄移栽室外后3.5～4.5个月即可开花，开花率达到99%以上。本技术为满足所罗门姜黄和红艳郁金花卉苗的规模化和市场化提供了一条有效的途径。

附图说明

[0046] 图1为实施例1所罗门姜黄薄片再生体系的建立及所罗门姜黄花卉苗的生产过程。

[0047] 图2为实施例5红艳郁金薄片再生体系的建立及红艳郁金花卉苗的生产过程。

具体实施方式

[0048] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

[0049] 实施例1

[0050] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：取所罗门姜黄（Curcuma soloensis Voel，取自广州市农业技术推广中心。下同。）的根状茎萌发出的新芽，用自来水冲洗干净后用洗洁精泡30分钟，再用自来水流动冲洗30分钟后用70wt%酒精进行表面消毒60秒，最后用0.1wt%升汞消毒19分钟，在超净工作台上切取0.5cm的芽作为外植体，接种到芽诱导培养-2 -1
基A中进行培养，培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条-1
件下，培养15天诱导出不定芽；所述的芽诱导培养基A为MS培养基+3mg·L 6-BA+0.2mg·L-1 -1 -1 2
NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0051] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中，促进苗生根成熟，-2 -1培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养18天获-1 -1
得健壮的植株；所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，
2
121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0052] （3）薄片不定芽的诱导：将步骤（2）获得的植株切取薄片（薄片厚0.5～0.8mm），-2 -1接种在芽诱导培养基B上中进行培养，培养条件是温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养20天获得健壮的不定芽，不定芽在芽诱导培养基B上继续-1
培养，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽诱导培养基B为MS培养基+2mg·L 6-BA+0.1m-1 -1 -1 2
g·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0053] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上，经过18天的培养，获得有大量不定根的健壮的植株；

[0054] （5）花卉苗的生产：将富含有机质的土壤装入15cm×20cm的塑料自封袋中，每袋100毫升，浇透浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液；取步骤（4）中得到的健壮的植株，清洗根部培养基后移栽到自封袋土壤中，每袋4棵，放置在阴凉处培养，得到所罗门姜黄的花卉苗，植株成活率为100%；

[0055] 图1为实施例1所罗门姜黄薄片再生体系的建立及其花卉苗的生产过程，其中：A用于切取薄片用的成熟植株（bar=1cm）；B从一株成熟植株上所切取的部分薄片（bar=5mm）；C从一个薄片上长出的3个芽（bar=1cm）；D从一个薄片上长出的8个芽（bar=1cm）；E将试管苗移栽到自封袋中1周，驯化成活（bar=3cm）；F在自封袋中保留2个月后的成活花卉苗（bar=6cm）；G自封袋中1个月的苗上盆移栽2个月，花卉苗全部成活（bar=20cm）；H自封袋中1个月的苗上盆移栽3个月，花卉苗整齐开花（bar=30cm）。

[0056] 实施例2

[0057] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：取所罗门姜黄的根状茎萌发出的新芽，用自来水冲洗干净后用洗洁精泡30分钟，再用自来水流动冲洗30分钟后用75wt%酒精进行表面消毒75秒，最后用0.1wt%升汞消毒17分钟，在超净工作台上切取1cm的芽作为外植体，-2 -1接种到芽诱导培养基A中进行培养，培养条件为温度27℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养20天诱导出不定芽；所述的芽诱导培养基A为MS培养基+3mg-1 -1 -1 -1 2
·L 6-BA+0.2mg·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.8，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0058] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中，促进苗生根成熟，-2 -1培养条件为温度27℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养17天获-1 -1
得健壮的植株；所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.8，
2
121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0059] （3）薄片不定芽的诱导：将步骤（2）获得的植株切取薄片（薄片厚0.5～0.8mm），-2 -1接种在芽诱导培养基B上中进行培养，培养条件是温度27℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养25天获得健壮的不定芽，不定芽在芽诱导培养基B上继续-1
培养，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽诱导培养基B为MS培养基+3mg·L 6-BA+0.15-1 -1 -1 2
mg·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.8，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0060] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上，经过17天的培养，获得有大量不定根的健壮的植株；

[0061] （5）花卉苗的生产：将富含有机质的土壤装入15cm×20cm的塑料自封袋中，每袋50毫升，浇透浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液；取步骤（4）中得到的健壮的植株，清洗根部培养基后移栽到自封袋土壤中，每袋2棵，放置在阴凉处培养，得到所罗门姜黄的花卉苗，植株成活率为99.5%。

[0062] 实施例3

[0063] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：取所罗门姜黄的根状茎萌发出的新芽，用自来水冲洗干净后用洗洁精泡30分钟，再用自来水流动冲洗30分钟后用72wt%酒精进行表面消毒90秒，最后用0.1wt%升汞消毒15分钟，在超净工作台上切取1.5cm的芽作为外植体，-2 -1接种到芽诱导培养基A中进行培养，培养条件为温度28℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养18天诱导出不定芽；所述的芽诱导培养基A为MS培养基+3mg-1 -1 -1 -1 2
·L 6-BA+0.2mg·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.7，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0064] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中，促进苗生根成熟，-2 -1培养条件为温度28℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养15天-1 -1
获得健壮的植株；所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH5.7，
2
121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0065] （3）薄片不定芽的诱导：将步骤（2）获得的植株切取薄片（薄片厚0.5～0.8mm），-2 -1接种在芽诱导培养基B上中进行培养，培养条件是温度28℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养24天获得健壮的不定芽，不定芽在芽诱导培养基B上继续-1
培养，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽诱导培养基B为MS培养基+1mg·L 6-BA+0.1m-1 -1 -1 2
g·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH5.7，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0066] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上，经过15天的培养，获得有大量不定根的健壮的植株；

[0067] （5）花卉苗的生产：将富含有机质的土壤装入15cm×20cm的塑料自封袋中，每袋70毫升，浇透浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液；取步骤（4）中得到的健壮的植株，清洗根部培养基后移栽到自封袋土壤中，每袋3棵，放置在阴凉处培养，得到所罗门姜黄的花卉苗，植株成活率为99%。

[0068] 实施例4

[0069] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：取所罗门姜黄的根状茎萌发出的新芽，用自来水冲洗干净后用洗洁精泡30分钟，再用自来水流动冲洗30分钟后用70wt%酒精进行表面消毒60秒，用0.1wt%升汞消毒20分钟，在超净工作台上切取2cm的芽作为外植体，接种-2 -1到芽诱导培养基A中进行培养，培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、
16L/8D光照条件下，培养17天诱导出不定芽；所述的芽诱导培养基A为MS培养基+3mg·L-1 -1 -1 -1 2
6-BA+0.2mg·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.6，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0070] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中，促进苗生根成熟，-2 -1培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养20天获-1 -1
得健壮的植株；所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.6，
2
121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0071] （3）薄片不定芽的诱导：将步骤（2）获得的植株切取薄片（薄片厚0.5～0.8mm），-2 -1接种在芽诱导培养基B上中进行培养，培养条件是温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养22天获得健壮的不定芽，不定芽在芽诱导培养基B上继续-1
培养，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽诱导培养基B为MS培养基+5mg·L 6-BA+0.2m-1 -1 -1 2
g·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.6，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0072] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上，经过20天的培养，获得有大量不定根的健壮的植株；

[0073] （5）花卉苗的生产：将富含有机质的土壤装入15cm×20cm的塑料自封袋中，每袋80毫升，浇透浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液；取步骤（4）中得到的健壮的植株，清洗根部培养基后移栽到自封袋土壤中，每袋3棵，放置在阴凉处培养，得到所罗门姜黄的花卉苗，植株成活率为100%。

[0074] 实施例5

[0075] （1）外植体的消毒和不定芽的诱导：取红艳郁金（Curcuma rubescenceRoxburgh，取自广州市农业技术推广中心。）的根状茎萌发出的新芽，用自来水冲洗干净后用洗洁精泡30分钟，再用自来水流动冲洗30分钟后用70wt%酒精进行表面消毒60秒，最后用0.1wt%升汞消毒20分钟，在超净工作台上切取2cm的芽作为外植体，接种到芽诱导培养基A中进-2 -1
行培养，培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培-1 -1
养25天诱导出不定芽；所述的芽诱导培养基A为MS培养基+3mg·L 6-BA+0.2mg·L NAA+3-1 -1 2
0g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0076] （2）不定芽成苗：将步骤（1）诱导的不定芽转入成苗培养基中，促进苗生根成熟，-2 -1培养条件为温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养20天获-1 -1
得健壮的植株；所述的成苗培养基为1/2MS培养基+15g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，
2
121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0077] （3）薄片不定芽的诱导：将步骤（2）获得的植株切取薄片（薄片厚0.5～0.8mm），-2 -1接种在芽诱导培养基B上中进行培养，培养条件是温度26℃、30μmol·m s 光强（白色荧光灯）、16L/8D光照条件下，培养18天获得健壮的不定芽，不定芽在芽诱导培养基B上继续-1
培养，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽诱导培养基B为MS培养基+2mg·L 6-BA+0.1m-1 -1 -1 2
g·L NAA+30g·L 蔗糖+7g·L 琼脂，pH 5.9，121℃、1.06kg/cm 灭菌15min；

[0078] （4）将步骤（3）的不定芽转移到成苗培养基上，经过20天的培养，获得有大量不定根的健壮的植株；

[0079] （5）花卉苗的生产：将富含有机质的土壤装入15cm×20cm的塑料自封袋中，每袋100毫升，浇透浓度为1/20MS培养基的无机盐溶液；取步骤（4）中得到的健壮的植株，清洗根部培养基后移栽到自封袋土壤中，每袋4棵，放置在阴凉处培养，得到红艳郁金的花卉苗，植株成活率为99%。

[0080] 图2为实施例5红艳郁金薄片再生体系的建立及其花卉苗的生产过程，其中：A用于切取薄片用的成熟植株（bar=1cm）；B从一株成熟植株上所切取的部分薄片（bar=5mm）；C从一个薄片上长出的3个芽（左边）和2个芽（右边）（bar=1cm）；D将试管苗移栽到自封袋中2周，驯化成活（bar=3cm）；E花卉苗刚移栽到花盆中（bar=3cm）；G上盆移栽2个月后，花卉苗健壮生长（bar=4cm）；H上盆移栽3个月，花卉苗整齐生长（bar=15cm）。

[0081] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。