本发明公开了一种中药检测方法，具体涉及一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法。本发明采用电泳上样缓冲液直接提取分析，每个样品的用量仅需几毫克，该方法为人工麝香的鉴别建立了一种简便可行的辅助手段。
1.一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
称取人工麝香样品0.003～0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取15～25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.03～0.08体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取15～
25min，在4500rpm，10℃条件下离心15～25min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴3～
B、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法(1)电泳溶液准备：
(a)去离子水溶解100～150重量份Tris，用HCl调pH值至7～9，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
(b)去离子水溶解50～70重量份Tris，80～100重量份Tricine，3～8重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
(c)去离子水溶解150～200重量份Tris，1～2重量份SDS，用HCl调pH值至7～9，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
(d)40～60％丙烯酰胺，1～2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
(e)40～60％丙烯酰胺，1～5％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
(f)0.2～1体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份
10％SDS，0.6～1体积份β–巯基乙醇，0.5～1.5体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
(g)0.2～1体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份
10％SDS，0.6～1体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.2～0.6重量份甘油，
0.5～1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；
夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)0.5～1.5体积份，0.5～0.8体积份
3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；
浓缩胶2体积份：0.4～0.6体积份凝胶缓冲液(3×)，0.1～0.2体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和
(3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
固定液：量取甲醇30-60体积份，冰醋酸5-20体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
染色液：称取0.5～1.0重量份AgNO3溶于3～5体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入
0.36％NaOH15～30体积份，再加入氨水1～2体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
显色液：0.3～0.8体积份1﹪柠檬酸，0.03～0.08体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
(a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定0.5～1.5h，每10～30min换一次液；
(b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次5～15min；
(c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色10～20分钟；
(e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
在人工麝香电泳图谱中，出现分子量为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
2.如权利要求1所述的一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A、称取人工麝香样品0.003重量份，加入1体积份乙醚，超声提取20min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取20min，在4500rpm，10℃条件下离心20min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴5min，即得电泳样品；
B、Tricine-SDS-PAE凝胶电泳分析方法(1)电泳溶液准备：
(a)去离子水溶解100重量份Tris，用HCl调pH值至7.5，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
(b)去离子水溶解55重量份Tris，90重量份Tricine，8重量份SDS,定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
(c)去离子水溶解160重量份Tris，1.5重量份SDS,用HCl调pH值至7.8,定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
(d)56％丙烯酰胺，1.2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
(e)52％丙烯酰胺，2.0％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
(f)0.8体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，3体积份10％SDS，0.7体积份β–巯基乙醇，1.5体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
(g)0.4体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，2.5体积份10％SDS，1体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.6重量份甘油，1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.5体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份的TEMED；
浓缩胶2体积份：取上述制得的0.6体积份凝胶缓冲液(3×)，0.2体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
(3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
固定液：量取甲醇50体积份，冰醋酸5体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
染色液：称取0.5重量份AgNO3溶于3体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH18体积份，再加入氨水1.5体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
显色液：0.8体积份1﹪柠檬酸，0.06体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
(a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1h，每10min换一次液；
(b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次10min；
(c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色20min；
(e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
在人工麝香电泳图谱中，出现分子量为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
3.如权利要求1所述的一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
称取人工麝香样品0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取18min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取22min，在4500rpm，10℃条件下离心22min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴4min，即得电泳样品；
B、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法(1)电泳溶液准备：
(a)去离子水溶解150重量份Tris，用HCl调pH值至9，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
(b)去离子水溶解70重量份Tris，95重量份Tricine，3重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
(c)去离子水溶解180重量份Tris，1重量份SDS，用HCl调pH值至8.5，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
(d)45％丙烯酰胺，2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
(e)55％丙烯酰胺，4％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
(f)0.4体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，3.5体积份甘油，1.5体积份10％SDS，
0.8体积份β–巯基乙醇，0.7体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
(g)0.8体积份1mol/L，pH为6.8的Tris-HCl，2.5体积份甘油，1.8体积份10％SDS，
0.8体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.3重量份甘油，1.2体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.009体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0015体积份TEMED；
夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1.2体积份，0.55体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.008体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
浓缩胶2体积份：0.45体积份凝胶缓冲液(3×)，0.18体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.008体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0008体积份TEMED；
(3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
固定液：量取甲醇30体积份，冰醋酸20体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
染色液：称取0.6重量份AgNO3溶于3.5体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH25体积份，再加入氨水1.8体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
显色液：0.7体积份1﹪柠檬酸，0.04体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
(a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1.2h，每15min换一次液；
(b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次15min；
(c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色15min；
(e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
在人工麝香电泳图谱中，出现分子量为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
人工麝香的多肽电泳图谱检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种中药检测方法，具体涉及一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法。
背景技术
[0002] 麝香具有一定的抗炎镇痛药理活性，现有研究显示麝香的抗炎活性与麝香中特有的糖肽有关，不同文献报道其抗炎糖肽分子量各不相同，不同来源的麝香其多肽成分有显著性差异。常规的电泳分析体系Tris-甘氨酸-SDS-PAGE电泳分析分辨大分子物质的相对分子质量范围在10～200kDa，对于相对分子质量小于10kDa的多肽分辨率低。利用含有SDS的凝胶中加入高浓度脲时可利用SDS-PAGE对小分子多肽进行分析的分离效果不甚理想，且重现性较差，且小分子多肽在固定染色的过程中容易丢失。故采用Tricine-SDS-PAGE电泳，建立麝香多肽电泳方法。
发明内容
[0003] 本发明提供了一种人工麝香的多肽电泳图谱检测方法。
[0004] 本发明目的是通过如下技术方案实现的：
[0005] 1、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
[0006] 称取人工麝香样品0.003～0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取15～25min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.03～0.08体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取15～25min，在4500rpm，10℃条件下离心15～25min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴
3～8min，即得电泳样品；
[0007] 2、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法
[0008] (1)电泳溶液准备：
[0009] (a)去离子水溶解100～150重量份Tris，用HCl调PH值至7～9，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
[0010] (b)去离子水溶解50～70重量份Tris，80～100重量份Tricine，3～8重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
[0011] (c)去离子水溶解150～200重量份Tris，1～2重量份SDS，用HCl调PH值至7～9，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
[0012] (d)40～60％丙烯酰胺，1～2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
[0013] (e)40～60％丙烯酰胺，1～5％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
[0014] (f)0.2～1体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份10％SDS，0.6～1体积份β–巯基乙醇，0.5～1.5体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
[0015] (g)0.2～1体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2～4体积份甘油，1～3体积份10％SDS，0.6～1体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
[0016] (2)凝胶制备：
[0017] 分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.2～0.6重量份甘油，0.5～1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；
[0018] 夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)0.5～1.5体积份，0.5～0.8体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；
[0019] 浓缩胶2体积份：0.4～0.6体积份凝胶缓冲液(3×)，0.1～0.2体积份3C储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.005～0.02体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0005～0.002体积份TEMED；
[0020] (3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
[0021] (4)染色方法
[0022] 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：
[0023] 固定液：量取甲醇30-60体积份，冰醋酸5-20体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0024] 染色液：称取0.5～1.0重量份AgNO3溶于3～5体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH15～30体积份，再加入氨水1～2体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
[0025] 显色液：0.3～0.8体积份1﹪柠檬酸，0.03～0.08体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
[0026] 终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0027] 3、具体染色步骤：
[0028] (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定0.5～1.5h，每10～30min换一次液；
[0029] (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次5～15min；
[0030] (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色10～20分钟；
[0031] (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗2～4min；
[0032] (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
[0033] (f)将胶转移至终止液终止染色；
[0034] (g)在蒸馏水中漂洗凝胶0.5～1.5h；
[0035] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存；
[0036] 在人工麝香电泳图谱中，出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
[0037] 本发明人工麝香的多肽电泳图谱检测方法优选如下步骤：
[0038] 1、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
[0039] 称取人工麝香样品0.003重量份，加入1体积份乙醚，超声提取20min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取20min，在4500rpm，10℃条件下离心20min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴5min，即得电泳样品；
[0040] 2、Tricine-SDS-PA重量份E凝胶电泳分析方法
[0041] (1)电泳溶液准备：
[0042] (a)去离子水溶解100重量份Tris，用HCl调PH值至7.5，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
[0043] (b)去离子水溶解55重量份Tris，90重量份Tricine，8重量份SDS,定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
[0044] (c)去离子水溶解160重量份Tris，1.5重量份SDS,用HCl调PH值至7.8,定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
[0045] (d)56％丙烯酰胺，1.2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
[0046] (e)52％丙烯酰胺，2.0％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
[0047] (f)0.8体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，3体积份10％SDS，0.7体积份β–巯基乙醇，1.5体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
[0048] (g)0.4体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2体积份甘油，2.5体积份10％SDS，1体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
[0049] (2)凝胶制备：
[0050] 分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.6重量份甘油，1.5体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
[0051] 夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.5体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份的TEMED；
[0052] 浓缩胶2体积份：取上述制得的0.6体积份凝胶缓冲液(3×)，0.2体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.005体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
[0053] (3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
[0054] (4)染色方法
[0055] 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：
[0056] 固定液：量取甲醇50体积份，冰醋酸5体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0057] 染色液：称取0.5重量份AgNO3溶于3体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH18体积份，再加入氨水1.5体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
[0058] 显色液：0.8体积份1﹪柠檬酸，0.06体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
[0059] 终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0060] 3、具体染色步骤：
[0061] (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1h，每10min换一次液；
[0062] (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次10min；
[0063] (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色20min；
[0064] (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗3min；
[0065] (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
[0066] (f)将胶转移至终止液终止染色；
[0067] (g)在蒸馏水中漂洗凝胶1h；
[0068] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存；
[0069] 在人工麝香电泳图谱中，出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
[0070] 本发明人工麝香的多肽电泳图谱检测方法还可以优选如下步骤：
[0071] 1、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
[0072] 称取人工麝香样品0.008重量份，加入1体积份乙醚，超声提取18min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05体积份电泳上样缓冲液(1X)，超声提取22min，在4500rpm，10℃条件下离心22min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴4min，即得电泳样品；
[0073] 2、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法
[0074] (1)电泳溶液准备：
[0075] (a)去离子水溶解150重量份Tris，用HCl调PH值至9，定容至500体积份，制得正极缓冲液(10×)；
[0076] (b)去离子水溶解70重量份Tris，95重量份Tricine，3重量份SDS，定容至500体积份，制得负极缓冲液(10×)；
[0077] (c)去离子水溶解180重量份Tris，1重量份SDS，用HCl调PH值至8.5，定容至500体积份，制得凝胶缓冲液(3×)；
[0078] (d)45％丙烯酰胺，2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
[0079] (e)55％丙烯酰胺，4％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
[0080] (f)0.4体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，3.5体积份甘油，1.5体积份10％SDS，0.8体积份β–巯基乙醇，0.7体积份1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10体积份，制得上样缓冲液(6×)；
[0081] (g)0.8体积份1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2.5体积份甘油，1.8体积份10％SDS，0.8体积份β–巯基乙醇，加蒸馏水补足60体积份，制得上样缓冲液(1×)；
[0082] (2)凝胶制备：
[0083] 分离胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1体积份，0.3重量份甘油，1.2体积份6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4体积份，临用时加入0.009体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0015体积份TEMED；
[0084] 夹层胶3体积份：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1.2体积份，0.55体积份3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5体积份,临用时加入0.008体积份的10％过硫酸铵溶液和0.001体积份TEMED；
[0085] 浓缩胶2体积份：0.45体积份凝胶缓冲液(3×)，0.18体积份3C储液，去离子水稀释至2体积份，临用时加入0.008体积份的10％过硫酸铵溶液和0.0008体积份TEMED；
[0086] (3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
[0087] (4)染色方法
[0088] 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：
[0089] 固定液：量取甲醇30体积份，冰醋酸20体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0090] 染色液：称取0.6重量份AgNO3溶于3.5体积份双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH25体积份，再加入氨水1.8体积份混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100体积份；
[0091] 显色液：0.7体积份1﹪柠檬酸，0.04体积份甲醛，加双蒸水至100体积份；
[0092] 终止液：量取冰醋酸1体积份，加双蒸水稀释至100体积份；
[0093] 3、具体染色步骤：
[0094] (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1.2h，每15min换一次液；
[0095] (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次15min；
[0096] (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色15min；
[0097] (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗2min；
[0098] (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
[0099] (f)将胶转移至终止液终止染色；
[0100] (g)在蒸馏水中漂洗凝胶0.5h；
[0101] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存；
[0102] 在人工麝香电泳图谱中，出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
[0103] 本发明所述重量份与体积份的关系为g/ml的关系。
[0104] 本发明方法采用电泳上样缓冲液直接提取分析，每个样品的用量只需要几毫克左右，该方法为人工麝香的鉴别建立了一种简便可行的辅助手段。附图说明：
[0105] 附图1：人工麝香多肽电泳图谱：A:Marker+胰岛素；B、C:人工麝香(北京联馨药业)，批号依次为1和2
[0106] 下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0107] 实验例一：人工麝香多肽电泳指纹图谱分析
[0108] 取人工麝香，为北京联馨药业有限公司2个批次产品。按照实施例一的方法，检测人工麝香的多肽电泳图谱，结果显示，在研究的2个批次的人工麝香电泳图谱中，均出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。结果见附图1(其中A为Marker+胰岛素；B和C为北京联馨药业生产的人工麝香。)
[0109] 结论：电泳图谱中组要出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带为人工麝香样品。
[0110] 下述实施例均能实现上述实验例的效果。
[0111] 实施例1：
[0112] 1、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
[0113] 称取人工麝香样品0.003g，加入1ml乙醚，超声提取20min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05ml电泳上样缓冲液(1X)，超声提取20min，在4500rpm，10℃条件下离心20min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴5min，即得电泳样品；
[0114] 2、Tricine-SDS-PAgE凝胶电泳分析方法
[0115] (1)电泳溶液准备：
[0116] (a)去离子水溶解100g Tris，用HCl调PH值至7.5，定容至500ml，制得正极缓冲液(10×)；
[0117] (b)去离子水溶解55g Tris，90g Tricine，8g SDS,定容至500ml，制得负极缓冲液(10×)；
[0118] (c)去离子水溶解160g Tris，1.5g SDS,用HCl调PH值至7.8,定容至500ml，制得凝胶缓冲液(3×)；
[0119] (d)56％丙烯酰胺，1.2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
[0120] (e)52％丙烯酰胺，2.0％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
[0121] (f)0.8ml1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2ml甘油，3ml10％SDS，0.7mlβ–巯基乙醇，1.5ml1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10ml，制得上样缓冲液(6×)；
[0122] (g)0.4ml1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2ml甘油，2.5ml10％SDS，1mlβ–巯基乙醇，加蒸馏水补足60ml，制得上样缓冲液(1×)；
[0123] (2)凝胶制备：
[0124] 分离胶3ml：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1ml，0.6g甘油，1.5ml6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4ml，临用时加入0.005ml的10％过硫酸铵溶液和0.001ml TEMED；
[0125] 夹层胶3ml：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1ml，0.5ml3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5ml,临用时加入0.005ml的10％过硫酸铵溶液和0.001ml的TEMED；
[0126] 浓缩胶2ml：取上述制得的0.6ml凝胶缓冲液(3×)，0.2ml3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至2ml，临用时加入0.005ml的10％过硫酸铵溶液和0.001ml TEMED；
[0127] (3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
[0128] (4)染色方法
[0129] 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：
[0130] 固定液：量取甲醇50ml，冰醋酸5ml，加双蒸水稀释至100ml；
[0131] 染色液：称取0.5g AgNO3溶于3ml双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH18ml，再加入氨水1.5ml混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100ml；
[0132] 显色液：0.8ml1﹪柠檬酸，0.06ml甲醛，加双蒸水至100ml；
[0133] 终止液：量取冰醋酸1ml，加双蒸水稀释至100ml；
[0134] 3、具体染色步骤：
[0135] (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1h，每10min换一次液；
[0136] (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次10min；
[0137] (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色20分钟；
[0138] (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗3min；
[0139] (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
[0140] (f)将胶转移至终止液终止染色；
[0141] (g)在蒸馏水中漂洗凝胶1h；
[0142] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存。
[0143] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存。
[0144] 人工麝香电泳图谱中，均出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
[0145] 实施例2：
[0146] 1、人工麝香凝胶电泳分析样品的制备
[0147] 称取人工麝香样品0.008g，加入1ml乙醚，超声提取20min，离心去上清，挥干乙醚，不溶物加0.05ml电泳上样缓冲液(1X)，超声提取22min，在4500rpm，10℃条件下离心22min，取上清，加0.02％溴酚蓝，沸水浴4min，即得电泳样品；
[0148] 2、Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析方法
[0149] (1)电泳溶液准备：
[0150] (a)去离子水溶解150g Tris，用HCl调PH值至9，定容至500ml，制得正极缓冲液(10×)；
[0151] (b)去离子水溶解70g Tris，95gTricine，3g SDS，定容至500ml，制得负极缓冲液(10×)；
[0152] (c)去离子水溶解180g Tris，1g SDS，用HCl调PH值至8.5，定容至500ml，制得凝胶缓冲液(3×)；
[0153] (d)45％丙烯酰胺，2％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得3C丙烯酰胺储液；
[0154] (e)55％丙烯酰胺，4％甲叉丙烯酰胺，加入去离子水溶解，制得6C丙烯酰胺储液；
[0155] (f)0.4ml1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，3.5ml甘油，1.5ml10％SDS，0.8mlβ–巯基乙醇，0.7ml1％溴酚蓝，加蒸馏水补足10ml，制得上样缓冲液(6×)；
[0156] (g)0.8ml1mol/L，PH为6.8的Tris-HCl，2.5ml甘油，2.5ml10％SDS，0.8mlβ–巯基乙醇，加蒸馏水补足60ml，制得上样缓冲液(1×)；
[0157] (2)凝胶制备：
[0158] 分离胶3ml：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1ml，0.3g甘油，1.2ml6C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至4ml，临用时加入0.009ml的10％过硫酸铵溶液和0.0015mlTEMED；
[0159] 夹层胶3ml：取上述制得的凝胶缓冲液(3×)1.2ml，0.55ml3C丙烯酰胺储液，去离子水稀释至3.5ml,临用时加入0.008ml的10％过硫酸铵溶液和0.001ml TEMED；
[0160] 浓缩胶2ml：0.45ml凝胶缓冲液(3×)，0.18ml3C储液，去离子水稀释至2ml，临用时加入0.008ml的10％过硫酸铵溶液和0.0008ml TEMED；
[0161] (3)电泳条件：120V恒压电泳至溴酚蓝距凝胶底部1cm处；
[0162] (4)染色方法
[0163] 采用灵敏度高的银染，以下溶液临用前配制：
[0164] 固定液：量取甲醇30ml，冰醋酸20ml，加双蒸水稀释至100ml；
[0165] 染色液：称取0.6gAgNO3溶于3.5ml双蒸水中；取洁净烧杯，加入0.36％NaOH25ml，再加入氨水1.8ml混匀，将制备好的AgNO3溶液逐滴加入，边加边搅拌，全部加入后，加双蒸水至100ml；
[0166] 显色液：0.7ml1﹪柠檬酸，0.04ml甲醛，加双蒸水至100ml；
[0167] 终止液：量取冰醋酸1ml，加双蒸水稀释至100ml；
[0168] 3、具体染色步骤：
[0169] (a)电泳结束后，将凝胶转移至固定液中固定1.2h，每15min换一次液；
[0170] (b)弃去固定液，凝胶以双蒸水中漂洗3次，每次15min；
[0171] (c)将胶移入一个干净的容器内，染色液中轻摇染色15min；
[0172] (d)弃去染色液，加双蒸水震荡漂洗2min；
[0173] (e)将胶移至显色液中轻摇显色，至色带清晰，弃去显色液；
[0174] (f)将胶转移至终止液终止染色；
[0175] (g)在蒸馏水中漂洗凝胶0.5h；
[0176] (h)进行凝胶扫描或将凝胶进行干胶保存。
[0177] 人工麝香电泳图谱中，均出现分子量约为91kDa、74kDa、55kDa、36kDa、11.3kDa的染色条带。
