一种评价转基因水稻安全性的大型蚤饲养方法

摘要

本发明涉及一种水生生物大型蚤的饲养方法，属昆虫饲养技术领域。本发明克服了传统大型蚤毒理实验技术的缺陷，建立了一套纯稻米饲养大型蚤的方法，包括：营养液配置，米粉溶液配置，幼蚤的饲养和收集。本发明使用纯稻米饲养大型蚤，克服了常规方法中大型蚤选择性摄取绿藻等天然食物而不取食或很少取食稻米的缺陷；且消除了因绿藻营养成分不确定而易影响实验结果的不利因素，为评价转基因水稻安全性提供了可靠的实验保障。

权利要求

1.一种评价转基因水稻安全性的大型蚤饲养方法，其特征在于，步骤如下：

1)大型蚤经长期培养驯化后，选择培养3代以上、遗传背景相同的6～24h的幼蚤作为实验蚤；

-1 -1 -1

2) 培 养 液 配 制：294.0mg·L CaCl2；123.2mg·L MgSO4；64.8mg·L NaHCO3；

-1 -1

6.3mg·L KCl，新配制的培养液pH为7.8±0.2，硬度250±25mg·L ，以CaCO3计；

3)米粉溶液配制：将水稻种子去壳后，用粉碎机充分打碎后过125目筛子，使米粉颗-1 L-粒直径小于100μm，称取过筛后的粉末，用培养液配置成浓度分别为0.8g·L 、1.2g· 1、-1

1.6g·L 的米粉悬浮液，均一后分装至10ml灭菌离心管内，4℃储存备用；

-2 -1

4)实验蚤在温度为22±1℃，光强为60μmol m s ，光暗比为16h∶8h的恒温培养室

50ml烧杯中培养，每杯加40ml培养液；

5)每日添加米粉溶液100μl，培养过程中每天定时清理杂物并将新生实验蚤移出，每

3天更换培养液。

说明书

一种评价转基因水稻安全性的大型蚤饲养方法

1、技术领域：

[0001] 本发明涉及一种水生生物大型蚤的饲养方法，属昆虫饲养技术领域2、背景技术：

[0002] 水稻作为世界重要的粮食作物之一，为地球上近30亿人提供着食物，但是病虫害严重影响水稻的产量和质量。通过转基因技术将抗虫、抗病等外源基因引入到水稻基因组中，培育抗虫、抗病转基因水稻新品种，已成为防控水稻病虫害提高水稻产量的新方法和新途径。随着转基因作物的大规模推广，人们越来越关注于它的安全性问题。由于我国水稻生产和消费在全球的重要地位和影响，我国政府对于转基因水稻的商业化生产持非常谨慎和认真的态度，既考虑到转基因水稻未来商业化将带来的巨大经济利益和社会影响，同时也对转基因水稻大规模环境释放和种植可能带来的潜在生物安全问题进行科学和认真的评价。

[0003] 大型蚤(Daphnia magna)是环境毒理学研究中的标准生物，广泛的用于各种化学品毒性安全评价。大型蚤广泛分布于各种水体中，包括种植水稻的水田，因此以大型蚤为研究对象开展转基因水稻的环境安全评价很有实际意义。目前主要是以绿藻(如斜生栅藻Scenedesmus obliquus)为主要食物进行大型蚤的人工培养和毒理学评价，无法准确地评价转基因稻米这类不溶性固体对大型蚤的真实影响。为了更准确地评价转基因水稻对大型蚤的毒理学效应，迫切需要一种以水稻种子为主要食物成分的大型蚤饲养方法。3、发明内容：

[0004] 本发明克服了传统大型蚤毒理实验技术的缺陷，建立了一套纯稻米饲养大型蚤的方法，为评价转基因水稻安全性提供了可靠的实验保障，方法步骤如下：

[0005] 1.一种评价转基因水稻安全性的大型蚤饲养方法，其特征在于，步骤如下：

[0006] 1)大型蚤经长期培养驯化后，选择培养3代以上、遗传背景相同的6～24h的幼蚤作为实验蚤；

[0007] 2)培 养 液 配 制：294.0mg·L-1CaCl2；123.2mg·L-1MgSO4；64.8mg·L-1NaHCO3；-1 -1
6.3mg·L KCl，新配制的培养液pH为7.8±0.2，硬度250±25mg·L ，以CaCO3计；

[0008] 3)米粉溶液配制：将水稻种子去壳后，用粉碎机充分打碎后过125目筛子，使-1米粉颗粒直径小于100μm，称取过筛后的粉末，用培养液配置成浓度分别为0.8g·L 、-1 -1
1.2g·L 、1.6g·L 的米粉悬浮液，均一后分装至10ml灭菌离心管内，4℃储存备用；

[0009] 4)实验蚤在温度为22±1℃，光强为60μmol m-2s-1，光暗比为16h∶8h的恒温培养室50ml烧杯中培养，每杯加40ml培养液；

[0010] 每日添加米粉溶液100μl，培养过程中每天定时清理杂物并将新生实验蚤移出，每3天更换培养液。

[0011] 本发明有益效果

[0012] (1)本发明使用纯稻米饲养大型蚤，消除了常规方法中大型蚤选择性摄取绿藻等天然食物而不取食或很少取食稻米的现象。

[0013] (2)本发明使用纯稻米喂养大型蚤，克服了常规方法中因绿藻营养成分不确定而易影响实验结果，且需要不断培养绿藻的缺陷。4、附图说明：

[0014] 图1：转基因水稻与亲本在不同浓度稻米喂养下的存活天数比较[0015] 图2不同处理对大型蚤体长的影响

[0016] 图3不同处理对大型蚤存活率的影响5、具体实施方式：

[0017] 以纯稻米喂饲大型蚤评价转基因水稻的生物安全性。试验选用水稻种子为“Bt汕优63”及其亲本种子，插入的外源基因为CrylAb/CrylAc融合型基因。

[0018] 大型蚤(Daphnia magna)经长期培养驯化后，选择培养3代以上遗传背景相同的-2 -16～24h的幼蚤作为实验蚤。实验蚤在温度为22±1℃，光强为60μmol m s ，光暗比为-1 -1
16h∶8h的恒温培养室中培养。实验培养液配方：294.0mg·L CaCl2；123.2mg·L MgSO4；
-1 -1 -1
64.8mg·L NaHCO3；6.3mg·L KCl，新配制的培养液pH为7.8±0.2，硬度250±25mg·L (以-1 -1 -1
CaCO3计)。各处理组每日添加不同浓度的米粉溶液100μ1，(0.8g·L 、1.2g·L 、1.6g·L米粉，干重分别相当于2、3、4mg，此浓度以够水蚤每日所需)培养过程中每天定时清理杂物并将新生实验蚤移出，每3天更换培养用水。

[0019] 饲养过程中，分别测定不同处理组大型蚤的体长、存活率以及存活天数。

[0020] 从实验结果可以看出转基因水稻同其亲本相比对大型蚤的生长没有显著影响，由于该饲养方法营养成分均明确可控，排除了不确定因素对实验的影响，因此结果更加严谨可信。