具有靶向特性的去氢骆驼蓬碱衍生物的抗肿瘤前药转让专利
申请号 : CN201210521152.7
文献号 : CN102977096B
文献日 : 2014-12-17
发明人 : 顾月清 , 王阿琴 , 陈玉祺
申请人 : 中国药科大学
摘要 :
本发明涉及肿瘤靶向治疗领域，具体涉及具有靶向特性的去氢骆驼蓬碱衍生物的抗肿瘤前药，公开了一类为构建具有肿瘤靶向的2-脱氧-D-脱氧葡萄糖(II)和去氢骆驼蓬碱衍生物抗肿瘤药物连接物。药效学试验证明本发明的复合物(II)具有肿瘤靶向、提高抗肿瘤药物的水溶性以增强了抗肿瘤的效果，并能降低神经毒性。
权利要求 :
1.一种结构式(I)去氢骆驼蓬碱衍生物：
2.一种结构式(II)的抗肿瘤前药，其结构式为：
3.一种药物组合物，其中含有权利要求1的去氢骆驼蓬碱衍生物及药学上可接受的载体。
4.一种药物组合物，其中含有权利要求2的抗肿瘤前药及药学上可接受的载体。
5.权利要求1的去氢骆驼蓬碱衍生物用于制备抗肿瘤药物的用途。
6.权利要求2的抗肿瘤前药用于制备抗肿瘤药物的用途。
说明书 :
具有靶向特性的去氢骆驼蓬碱衍生物的抗肿瘤前药
技术领域
[0001] 本发明涉及肿瘤靶向治疗领域。具体为构建具有肿瘤靶向的2-脱氧-D-脱氧葡萄糖(2DG)和去氢骆驼蓬碱衍生物(harmine derivatives)抗肿瘤药物连接物。制备多种肿瘤靶向的2DG-去氢骆驼蓬碱衍生物抗肿瘤复合药物。
背景技术
[0002] 恶性肿瘤引起的死亡率仅次于心血管疾病，是人类第二号杀手，正严重危害着人类的健康和生存。其发病率一直高居不下，且目前已呈现明显的年轻化趋势，我国每年新增肿瘤患者约220万人。因此，提高癌症的治愈率是提高全人类健康及生存质量的重要手段。
[0003] 化学治疗是恶性肿瘤治疗中最主要、使用最普遍且有效的治疗手段，化学药物的来源广泛，其中从天然植物中提取的有效抗肿瘤成分已成为研究的热点。
[0004] 骆驼蓬为蒺藜科骆驼蓬属多年生草本植物，主要分布在地中海东部、中亚、北非和中东等荒漠、沙质、干旱草地等地带。我国主要分布于西北部的新疆、甘肃、青海、宁夏、内蒙古及陕西等地区。骆驼蓬是维吾尔族、蒙古族民间沿用已久的药材，已被列入卫生部药品标准维吾尔药分册。骆驼蓬植物的主要化学成分为生物碱，含量高达4％-6％，包括去氢骆驼蓬碱(harmine)、骆驼蓬碱(harmaline)、去甲骆驼蓬碱(harmalol)、哈尔满碱(harmane)其中harmine的抗肿瘤活性最强。但天然产物中提取的抗肿瘤化合物存在具有毒副作用大，靶向性差，药效低，水溶性差，生物利用度低等缺陷。增强抗肿瘤活性，提高抗肿瘤药物的特异性是目前化疗中亟待解决问题中的重中之重。
[0005] 众所周知，大多数肿瘤细胞的代谢都比正常细胞旺盛，对葡萄糖的摄取会明显增加以维持其代谢的需求。2-脱氧-D-葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose，2DG)为葡萄糖的2位脱氧衍生物，作为肿瘤造影剂已被临床广泛应用于肿瘤早期诊断中，如18F-FDG作为PET的造影剂，可以实现对多种肿瘤如肝癌、肺癌、胰腺癌等代谢旺盛恶性肿瘤的早期诊断，其诊断的准确性已得到公认并已被医患人员认为是最高级别的诊断技术。其主要原理是18F-FDG能被葡萄糖代谢旺盛的肿瘤细胞特异性摄取，在己糖激酶的作用下磷酸化成为
6-磷酸-18F-FDG，但由于其2位被取代，不能进一步糖酵解而积聚于细胞中，因而达到肿瘤靶向效果。另一方面，脱氧葡萄糖(2DG)竞争葡萄糖的转运，抑制肿瘤细胞的葡萄糖吸收及代谢，并降低ATP产生，通过干预糖酵解导致肿瘤细胞ATP衰竭而死亡。因此，2DG作为广谱的恶性肿瘤靶向配体，不仅能使其复合物靶向到肿瘤细胞，还能在一定程度上抑制肿瘤细胞的生长，是理想的无免疫源性的小分子广谱肿瘤靶向配体。
6-磷酸-18F-FDG，但由于其2位被取代，不能进一步糖酵解而积聚于细胞中，因而达到肿瘤靶向效果。另一方面，脱氧葡萄糖(2DG)竞争葡萄糖的转运，抑制肿瘤细胞的葡萄糖吸收及代谢，并降低ATP产生，通过干预糖酵解导致肿瘤细胞ATP衰竭而死亡。因此，2DG作为广谱的恶性肿瘤靶向配体，不仅能使其复合物靶向到肿瘤细胞，还能在一定程度上抑制肿瘤细胞的生长，是理想的无免疫源性的小分子广谱肿瘤靶向配体。
[0006] 目前肿瘤靶向给药已经成为肿瘤治疗中的一个重要方面。去氢骆驼蓬碱抗肿瘤药物的靶向治疗还未见报道。
发明内容
[0007] 本发明对去氢骆驼蓬碱进行结构改造，制备了系列去氢骆驼蓬碱衍生物(I)：
[0008]
[0009] 其中X代表苯基、苄基、C1-6烷基或C1-6取代烷基，所述取代基是羟基或氨基；Y代表C1-15烷氧羰基。Y优选代表甲氧羰基、乙氧羰基或卞氧羰基。
[0010] 药效试验证明，本发明的去氢骆驼蓬碱衍生物(I)抗肿瘤作用良好，特别是当去氢骆驼蓬碱衍生物与2DG通过共价键连接后，形成如下复合物(II)：
[0011]
[0012] 其中X的定义同前。药效学试验证明本发明的复合物(II)起到肿瘤靶向、提高抗肿瘤药物的水溶性以增强抗肿瘤效果，并降低神经毒性。
[0013] 制备本发明的2DG-去氢骆驼蓬碱衍生物复合物(II)的方法如下：
[0014] 去氢骆驼蓬碱衍生物(I)在NaOH的醇溶液中加热回流水解后，用1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)在N，N-二甲基甲酰胺溶剂中活化过夜，活化后，将D-(+)-氨基葡萄糖盐酸盐溶于水中并缓慢加入活化液中室温搅拌，GF254薄层硅胶板跟踪检测(展开剂：甲醇/二氯甲烷＝1∶4)，反应完毕后将N，N-二甲基甲酰胺溶剂蒸去，过硅胶柱纯化即得2DG-去氢骆驼蓬碱衍生物复合物(II)。
[0015] 以X代表-C9H11、Y代表-CH2COOC2H5为例，本发明去氢骆驼蓬碱衍生物(I)的制备方法如下，X、Y代表其它基团的制备方法可参考该方法进行：
[0016]
[0017] 本发明的部分优选的化合物和复合物如下：
[0018]
[0019]化合物代号 X Y
I-1 C9H11 CH2COOC2H5
I-2 C2H5 CH2COOC2H5
I-3 n-C4H9 CH2COOC2H5
I-4 i-C4H9 CH2COOC2H5
I-5 C2H4OH CH2COOC2H5
I-6 C4H8OH CH2COOC2H5
I-7 CH2CONH2 CH2COOC2H5
I-8 C7H7 CH2COOC2H5
II-1 C9H11 -
II-2 C2H5 -
II-3 n-C4H9 -
II-4 i-C4H9 -
II-5 C2H4OH -
II-6 C4H8OH -
II-7 CH2CONH2 -
II-8 C7H7 -
I-1 C9H11 CH2COOC2H5
I-2 C2H5 CH2COOC2H5
I-3 n-C4H9 CH2COOC2H5
I-4 i-C4H9 CH2COOC2H5
I-5 C2H4OH CH2COOC2H5
I-6 C4H8OH CH2COOC2H5
I-7 CH2CONH2 CH2COOC2H5
I-8 C7H7 CH2COOC2H5
II-1 C9H11 -
II-2 C2H5 -
II-3 n-C4H9 -
II-4 i-C4H9 -
II-5 C2H4OH -
II-6 C4H8OH -
II-7 CH2CONH2 -
II-8 C7H7 -
[0020] 下面是本发明的去氢骆驼蓬碱衍生物(I)和2DG-去氢骆驼蓬碱衍生物复合物(II)的部分药效学试验及结果：
[0021] 一、药物对正常细胞、肝癌细胞和乳腺癌细胞毒性考察
[0022] 正常肝细胞(L02)、肝癌细胞(Bel-7402、HepG2)乳腺癌细胞(MDA-MB-231)分别4
以5×10/ml接种于96孔培养板，每孔100μl，在37°，5％CO2条件下培养24h，待细胞完全贴壁后，换成含药物处理培养液，每个处理5个重复孔，设调零孔、对照孔和加药孔。加药孔分别加入去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物I-1～I-8、去氢骆驼蓬碱衍生物复合物II-1～II-8、5-氟尿嘧啶溶液(每孔加入体积10μl)，每种药物均设5个浓度梯度，以未处理的空白细胞为对照孔，于37℃，5％CO2培养箱孵育。24h后加入20μlMTT(5mg/ml水溶液)，继续孵育4h，弃去培养液，用少量PBS清洗，每孔加入150μl二甲基亚矾(DMSO)，恒温振荡20min，用酶联检测仪测定490nm处的吸光度，计算细胞抑制率。各个组的细胞抑制率可通过如下公式进行计算得到：抑制率(％)＝(OD对照-OD受试药物/OD对照)×100％。其中OD受试药物表示加入一定浓度的实验组样品吸光值，而OD对照表示对照组的吸光值。结果统计学处理：所有数值以 表示，应用SPSS软件进行方差分析。
以5×10/ml接种于96孔培养板，每孔100μl，在37°，5％CO2条件下培养24h，待细胞完全贴壁后，换成含药物处理培养液，每个处理5个重复孔，设调零孔、对照孔和加药孔。加药孔分别加入去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物I-1～I-8、去氢骆驼蓬碱衍生物复合物II-1～II-8、5-氟尿嘧啶溶液(每孔加入体积10μl)，每种药物均设5个浓度梯度，以未处理的空白细胞为对照孔，于37℃，5％CO2培养箱孵育。24h后加入20μlMTT(5mg/ml水溶液)，继续孵育4h，弃去培养液，用少量PBS清洗，每孔加入150μl二甲基亚矾(DMSO)，恒温振荡20min，用酶联检测仪测定490nm处的吸光度，计算细胞抑制率。各个组的细胞抑制率可通过如下公式进行计算得到：抑制率(％)＝(OD对照-OD受试药物/OD对照)×100％。其中OD受试药物表示加入一定浓度的实验组样品吸光值，而OD对照表示对照组的吸光值。结果统计学处理：所有数值以 表示，应用SPSS软件进行方差分析。
[0023] 其结果见表1。II-1～II-8和I-1～I-8化合物对正常肝癌细胞的毒性小，并且这一系列化合物的毒性均小于去氢骆驼蓬碱及阳性药物5-氟尿嘧啶；II-1～II-8为对应I-1～I-8修饰了2-DG后的化合物，表1数据显示，II-1～II-8药效均明显强于I-1～I-8，说明的2-DG的靶向作用明显；另外，系列化合物对肝癌肿瘤细胞的抑制作用强于对乳腺癌，肝癌细胞中对HepG2的药效优于Bel-7402。
[0024] 表1各去氢骆驼蓬碱衍生物及复合物对肿瘤/正常细胞的IC50(UM)
[0025]
[0026]
[0027] 二、药物的小鼠急性毒性研究
[0028] 将去氢骆驼蓬碱衍生物-2DG前体药物进行预实验，根据预实验结果，把样品设计五档剂量，剂量间距0.8倍。另设一组生理盐水对照组。取昆明种小鼠(体重18-20g，雌雄各半)，按性别随机分组，每10只小鼠一组，各组按剂量设置分别尾静脉给药，观察小鼠给药后的即时反应，小鼠是否表现出显著的神经毒性症状，包括震颤、扭曲、跳跃等。死亡动物进行解剖观察，存活动物继续观察两周，并记录两周内动物死亡情况和体重变化情况，两周后将存活动物进行解剖，观察实质性脏器的病变，并做病理切片检查。根据各组动物的死亡数，以Bliss方法计算药物的半数致死剂量(LD50值)。
[0029] 实验结果显示，小鼠给药后未见明显震颤、扭曲、跳跃等神经毒性症状，解剖后病理切片检查，大体观察未见明显的脏器异常。体重正常变化。受试药物急性毒性较小，其LD50值均大于100mg/kg。
[0030] 三、药物体内抗肿瘤活性研究
[0031] 取雌性昆明种小鼠30只(体重18-20g)饲养于SPF级无菌饲养室。采用体内抗7
肿瘤腋下接种模型：无菌条件下取生长旺盛的S180瘤源，以匀浆法制备成约1×10/ml的细胞悬液，于相应宿主腋下接种0.2ml/鼠，次日按以下实验方案给药，三周左右处死各组动物，剖取肿瘤称重，按公式计算抑瘤率：抑瘤率％＝[(阴性对照组平均瘤重一给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]x100％。
肿瘤腋下接种模型：无菌条件下取生长旺盛的S180瘤源，以匀浆法制备成约1×10/ml的细胞悬液，于相应宿主腋下接种0.2ml/鼠，次日按以下实验方案给药，三周左右处死各组动物，剖取肿瘤称重，按公式计算抑瘤率：抑瘤率％＝[(阴性对照组平均瘤重一给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]x100％。
[0032] 实验方案：将荷S180肿瘤鼠平均随机分为3组(每组10只小鼠，尾静脉给药，次日开始给药，每天一次，连续10天)，A组：阳性对照药为5-氟尿嘧啶，剂量为10mg/kg，B组：受试药物，剂量为10mg/kg，C组：生理盐水组。
[0033] 实验结果见表2显示，受试药物对肉瘤S180的荷瘤小鼠抑瘤效果较佳。
[0034] 表2去氢骆驼蓬碱衍生物复合物II-1～II-8对S180荷瘤小鼠抑制作用的影响( n＝10)
[0035]化合物 瘤重 肿瘤生长抑制率(％)
去氢骆驼蓬碱 3.45±0.01 0.5
5-氟尿嘧啶 2.11±0.03 38.84
II-1 0.91±0.07 73.91
II-2 1.91±0.01 44.64
II-3 1.20±0.03 65.22
II-4 1.62±0.04 53.04
II-5 1.73±0.01 49.85
II-6 1.38±0.02 60.00
II-7 1.44±0.03 58.26
II-8 1.01±0.05 70.72
去氢骆驼蓬碱 3.45±0.01 0.5
5-氟尿嘧啶 2.11±0.03 38.84
II-1 0.91±0.07 73.91
II-2 1.91±0.01 44.64
II-3 1.20±0.03 65.22
II-4 1.62±0.04 53.04
II-5 1.73±0.01 49.85
II-6 1.38±0.02 60.00
II-7 1.44±0.03 58.26
II-8 1.01±0.05 70.72
具体实施方式
[0036] 实施例1
[0037] I-1的制备：
[0038] 步骤A：去氢骆驼蓬碱(1.06g，5mmol)、N，N-二甲基甲酰胺(25ml)、钠氢(0.192g，8mmol)混合，室温搅拌10min，加入3-苯丙基溴(10mmol)，搅拌0.5-3h，TLC跟踪检测(石油醚/丙酮＝1∶1)反应完毕，将反应混合溶液倒入50ml冰水中，搅拌30min，过滤，大量水洗。将固体溶于无水乙醇，用盐酸调pH至3-4，减压浓缩至干，无水乙醇带水数次，得油状物，丙酮重结晶，得白色晶体，为产物的盐酸盐。
[0039] ESI-MS m/e(M+1)331.2
[0040] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；
2.70-2.73(2H，m)
2.70-2.73(2H，m)
[0041] 步骤B：盐酸盐产物5mmol、冰醋酸35m、40％氢溴酸35mL混合，加热回流反应12小时。TLC跟踪监测(石油醚∶丙酮＝1∶1)反应完毕，将反应混合物倒入150ml冰水中，搅拌下先用10M氢氧化钠调pH到6，然后用碳酸氢钠调节pH到8，过滤、大量水洗，随后将固体溶解于无水乙醇，活性炭脱色，过滤、减压浓缩，无水乙醇重结晶，得白色颗粒状晶体。
[0042] ESI-MS m/e(M+1)317.4
[0043] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.72(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；
2.70-2.73(2H，m)
6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；
2.70-2.73(2H，m)
[0044] 步骤C：上步产物、碳酸铯、溴乙酸乙酯(摩尔投料比1∶2∶1.5)溶于N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌24h。反应完毕后，用TLC检测(石油醚∶丙酮＝1∶1)，将反应混合物二氯甲烷萃取，水洗一次，饱和食盐水洗三次，有机层用无水硫酸钠干燥，旋蒸去溶剂得粗产物，进一步用硅胶柱纯化得最终产物。
[0045] ESI-MS m/e(M+1)403.4
[0046] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；2.70-2.73(2H，m)；
4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0047] 实施例2
[0048] I-2的制备：
[0049] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用溴乙烷作为烷基化试剂。
[0050] ESI-MS m/e(M+1)241.3
[0051] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.29-1.34(3H，m)
[0052] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0053] ESI-MS m/e(M+1)227.2
[0054] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.70(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.29-1.34(3H，m)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.29-1.34(3H，m)
[0055] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0056] ESI-MS m/e(M+1)313.3
[0057] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.43-1.47(3H，m)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0058] 实施例3
[0059] I-3的制备：
[0060] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用溴丁烷作为烷基化试剂。
[0061] ESI-MS m/e(M+1)269.3
[0062] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.32-1.34(2H，m)；0.95-0.97(3H，m)
[0063] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0064] ESI-MS m/e(M+1)255.7
[0065] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.74(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.32-1.34(2H，m)；
0.95-0.97(3H，m)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.32-1.34(2H，m)；
0.95-0.97(3H，m)
[0066] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0067] ESI-MS m/e(M+1)341.3
[0068] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.83-3.85(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.31-1.32(2H，m)；0.93-0.96(3H，m)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0069] 实施例4
[0070] I-4的制备：
[0071] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用1-溴-2甲基丙烷作为烷基化试剂。
[0072] ESI-MS m/e(M+1)269.3
[0073] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；3.81-3.82(2H，d)；2.11-2.15(1H，m)；0.99-1.01(6H，s)[0074] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0075] ESI-MS m/e(M+1)255.5
[0076] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.74(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.82(2H，d)；2.11-2.15(1H，m)；0.99-1.01(6H，s)[0077] 步骤C：制备方法同实施例1。
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.82(2H，d)；2.11-2.15(1H，m)；0.99-1.01(6H，s)[0077] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0078] ESI-MS m/e(M+1)341.3
[0079] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.85-3.88(2H，d，J ＝ 7.1Hz)；2.51-2.54(1H，m)；0.99-1.01(6H，m)；4.71(2H，s)；
4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0080] 实施例5
[0081] I-5的制备：
[0082] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用溴乙醇作为烷基化试剂。
[0083] ESI-MS m/e(M+1)257.3
[0084] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；4.01-4.02(2H，m)；4.31-4.34(2H，m)
[0085] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0086] ESI-MS m/e(M+1)243.6
[0087] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.71(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.01-4.02(2H，m)；4.31-4.34(2H，m)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.01-4.02(2H，m)；4.31-4.34(2H，m)
[0088] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0089] ESI-MS m/e(M+1)329.3
[0090] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；4.02-4.03(2H，m)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0091] 实施例6
[0092] I-6的制备：
[0093] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用1溴-4-羟基丁烷作为烷基化试剂。
[0094] ESI-MS m/e(M+1)285.8
[0095] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；3.52-3.54(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.47-1.49(2H，m)
[0096] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0097] ESI-MS m/e(M+1)271.1
[0098] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.71(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；3.52-3.54(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；
1.47-1.49(2H，m)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.84-3.86(2H，m)；3.52-3.54(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；
1.47-1.49(2H，m)
[0099] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0100] ESI-MS m/e(M+1)357.2
[0101] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.83(2H，m)；1.66-1.68(2H，m)；1.34-1.32(2H，m)；3.54-3.55(2H，m)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0102] 实施例7
[0103] I-7的制备：
[0104] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用溴乙酰胺作为烷基化试剂。
[0105] ESI-MS m/e(M+1)270.3
[0106] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；4.74(2H，s)
[0107] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0108] ESI-MS m/e(M+1)255.7
[0109] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.76(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.74(2H，s)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.74(2H，s)
[0110] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0111] ESI-MS m/e(M+1)342.3
[0112] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.63(2H，s)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；1.32-1.35(3H，m)
[0113] 实施例8
[0114] I-8的制备：
[0115] 步骤A：制备方法同实施例1，在步骤中使用溴苄作为烷基化试剂。
[0116] ESI-MS m/e(M+1)303.7
[0117] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.90(3H，s)；3.15(3H，s)；7.06-7.14(5H，m)；5.10-5.11(2H，s)
[0118] 步骤B：制备方法同实施例1。
[0119] ESI-MS m/e(M+1)289.3
[0120] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ9.78(1H，s，OH)；8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；7.06-7.14(5H，m)5.10-5.11(2H，s)
6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；7.06-7.14(5H，m)5.10-5.11(2H，s)
[0121] 步骤C：制备方法同实施例1。
[0122] ESI-MS m/e(M+1)375.1
[0123] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；5.11-5.13(2H，m)；4.71(2H，s)；4.30-4.34(2H，m)；
1.32-1.35(3H，m)
1.32-1.35(3H，m)
[0124] 实施例9
[0125] II-1制备：
[0126] 步骤A：I-1、氢氧化钠水溶液(产物与氢氧化钠摩尔投料比1∶4)溶于乙醇溶剂中，回流2h，反应完毕后，TLC检测(二氯甲烷∶甲醇＝27∶1)，反应完毕，将乙醇蒸出，用盐酸调pH至5，沉淀析出，水洗3次，真空干燥得产物。
[0127] ESI-MS m/e(M+1)375.4
[0128] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；2.70-2.73(2H，m)；
4.71(2H，s)
4.71(2H，s)
[0129] 步骤B：上步产物、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺(摩尔投料比1∶1.5∶1.5)溶于适量N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌12h。
[0130] ESI-MS m/e(M+1)472.5
[0131] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；2.70-2.73(2H，m)；
4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)
4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)
[0132] 步骤C：将D-(+)-氨基葡萄糖盐酸盐溶于水中并缓慢加入上步得到的活化产物中，室温搅拌24小时，GF254薄层硅胶板跟踪检测(展开剂：甲醇/二氯甲烷＝1∶4)，反应完毕后将N，N-二甲基甲酰胺溶剂蒸去，过硅胶柱纯化得2DG-去氢骆驼蓬碱衍生物复合物。
[0133] ESI-MS m/e(M+1)536.5
[0134] 1H-NMR(500MHz，DMSO)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝ 5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝ 8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；7.11-7.30(5H，m)；3.15(3H，s)；2.01-2.03(2H，m)；4.52-4.55(2H，m)；2.70-2.73(2H，m)；
4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
[0135] 实施例10
[0136] II-2制备：
[0137] 步骤A：制备方法同实施例9
[0138] ESI-MS m/e(M+1)285.3
[0139] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.43-1.47(3H，m)；4.71(2H，s)
[0140] 步骤B：制备方法同实施例9
[0141] ESI-MS m/e(M+1)382.7
[0142] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.43-1.47(3H，m)；4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)[0143] 步骤C：制备方法同实施例9
[0144] ESI-MS m/e(M+1)446.3
[0145] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；1.43-1.47(3H，m)；4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)[0146] 实施例11
[0147] II-3制备：
[0148] 步骤A：制备方法同实施例9
[0149] ESI-MS m/e(M+1)313.5
[0150] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.83-3.85(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.31-1.32(2H，m)；0.93-0.96(3H，m)；4.71(2H，s)
[0151] 步骤B：制备方法同实施例9
[0152] ESI-MS m/e(M+1)410.3
[0153] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.83-3.85(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.31-1.32(2H，m)；0.93-0.96(3H，m)；4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)
[0154] 步骤C：制备方法同实施例9
[0155] ESI-MS m/e(M+1)474.2
[0156] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.83-3.85(2H，m)；1.76-1.78(2H，m)；1.31-1.32(2H，m)；0.93-0.96(3H，m)；4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
[0157] 实施例12
[0158] II-4制备：
[0159] 步骤A：制备方法同实施例9
[0160] ESI-MS m/e(M+1)313.6
[0161] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.85-3.88(2H，d，J＝7.1Hz)；2.51-2.54(1H，m)；0.99-1.01(6H，m)；4.71(2H，s)[0162] 步骤B：制备方法同实施例9
[0163] ESI-MS m/e(M+1)410.3
[0164] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.85-3.88(2H，d，J ＝ 7.1Hz)；2.51-2.54(1H，m)；0.99-1.01(6H，m)；4.71(2H，s)；
2.72-2.73(4H，m)
2.72-2.73(4H，m)
[0165] 步骤C：制备方法同实施例9
[0166] ESI-MS m/e(M+1)474.4
[0167] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.85-3.88(2H，d，J ＝ 7.1Hz)；2.51-2.54(1H，m)；0.99-1.01(6H，m)；4.71(2H，s)；
2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
[0168] 实施例13
[0169] II-5制备：
[0170] 步骤A：制备方法同实施例9
[0171] ESI-MS m/e(M+1)301.1
[0172] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；4.02-4.03(2H，m)；4.71(2H，s)步骤B：制备方法同实施例9[0173] ESI-MS m/e(M+1)398.3
[0174] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；4.02-4.03(2H，m)；4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)[0175] 步骤C：制备方法同实施例9
[0176] ESI-MS m/e(M+1)462.4
[0177] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.46-4.53(2H，m)；4.02-4.03(2H，m)；4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)[0178] 实施例14
[0179] II-6制备：
[0180] 步骤A：制备方法同实施例9
[0181] ESI-MS m/e(M+1)329.2
[0182] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.83(2H，m)；1.66-1.68(2H，m)；1.34-1.32(2H，m)；3.54-3.55(2H，m)；4.71(2H，s)
[0183] 步骤B：制备方法同实施例9
[0184] ESI-MS m/e(M+1)426.4
[0185] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.83(2H，m)；1.66-1.68(2H，m)；1.34-1.32(2H，m)；3.54-3.55(2H，m)；4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)
[0186] 步骤C：制备方法同实施例9
[0187] ESI-MS m/e(M+1)490.1
[0188] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；3.81-3.83(2H，m)；1.66-1.68(2H，m)；1.34-1.32(2H，m)；3.54-3.55(2H，m)；4.71(2H，s)；2.50-3.05(7H，m，ringGlu-H)
[0189] 实施例15
[0190] II-7制备：
[0191] 步骤A：制备方法同实施例9
[0192] ESI-MS m/e(M+1)314.3
[0193] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.63(2H，s)；4.71(2H，s)
[0194] 步骤B：制备方法同实施例9
[0195] ESI-MS m/e(M+1)411.3
[0196] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝5.13Hz)；8.10-8.08(1H，d，J ＝8.6Hz)；7.11-7.12(1H，m)；6.86-6.88(1H，m)；3.15(3H，s)；4.63(2H，s)；4.71(2H，s)；2.72-2.73(4H，m)
[0197] 步骤C：制备方法同实施例9
[0198] ESI-MS m/e(M+1)475.2
[0199] 1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.23-8.24(1H，d，J ＝ 5.1Hz)；7.81-7.82(1H，d，J ＝