一种白灵片的制备方法及应用

摘要

本发明提供一种白灵片的制备方法，由当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得阿魏酸含量有很大提高，本发明还提供了白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用。

权利要求

1.一种白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于白灵片由当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取当归、红花、桃仁、苍术，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。

2.根据权利要求1所述一种白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于白灵片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。

3.根据权利要求1所述一种白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于白灵片的制备方法中所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。

4.根据权利要求1所述一种白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用，其特征在于白灵片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度

40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。

说明书

一种白灵片的制备方法及应用

技术领域

[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种白灵片的制备方法及应用。 背景技术

[0002] 白灵片记载于卫生部标准WS3-B-0914-91，由当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194g作为原料药制成，能活血化瘀，增加光敏作用。用于白癜风。

[0003] 现有技术中，尚未有白灵片在提取制备方面采用超临界和微波技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种白灵片的制备方法。 [0005] 本发明的另一个目的在于提供一种白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用。

[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：

[0007] 一种白灵片的制备方法，由当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取当归、红花、桃仁、苍术，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。 [0008] 上述一种白灵片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。

[0009] 上述一种白灵片的制备方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。 [0010] 上述一种白灵片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃， CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。

[0011] 上述白灵片在制备抑制人组织细胞淋巴瘤U937细胞增殖药物中的应用。 [0012] 现有技术中，白灵片每片0.5g，每次4片，一日3次，采用本发明制备成的白灵片每片0.5g，每次仅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。

[0013] 试验一、不同方法制备的白灵片中阿魏酸含量的比较

[0014] 1、仪器及试药 本发明白灵片：按实施例3方法制备，使用1639g原料药，经提取制成1000片，每片重0.5g。原白灵片，按部颁标准方法制备，使用1639g原料药，经提取制成1000片，每片重0.5g。Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)。

[0015] 2、方法

[0016] 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（40：60：0.2）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按阿魏酸峰计算，应不低于3000。 [0017] 对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4小时的阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含18μg的溶液，即得。

[0018] 供试品溶液的制备：取本发明白灵片和原白灵片，研细，混匀，取1g，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超声处理10分钟，离心，取上清液，即得。

[0019] 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0020] 3、结果

[0021] 结果表明，本发明白灵片中阿魏酸的含量为1.53mg/片；而原白灵片中阿魏酸的含量为0.28mg/片，在服用量减少的情况下，阿魏酸含量有很大提高。

[0022] 上述研究表明，采用本发明制备的白灵片，有效成分含量高于部颁标准法制备的白灵片。

具体实施方式

[0023] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

[0024] 实施例1

[0025] 取当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194，将当归、红花、桃仁、苍术，加入到CO2 超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次
4分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。 [0026] 经检测，成品中阿魏酸的含量为1.64mg/片。

[0027] 实施例2

[0028] 取当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194，将当归、红花、桃仁、苍术，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3ml/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。

[0029] 经检测，成品中阿魏酸的含量为1.61mg/片。

[0030] 实施例3

[0031] 取当归194g、三七42g、红花83g、牡丹皮167g、桃仁83g、防风167g、苍术167g、白芷42g、马齿苋417g、赤芍83g、黄芪194，将当归、红花、桃仁、苍术，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。

[0032] 经检测，成品中阿魏酸的含量为1.53mg/片。

[0033] 实施例4：白灵片抑制U937细胞增殖的实验研究资料

[0034] 1实验材料

[0035] 1.1实验用细胞株

[0036] 人组织细胞淋巴瘤U937细胞，南京正宽医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10% FBS常规培养。

[0037] 1.2 实验药物

[0038] 研究药物：本发明白灵片：按实施例3方法制备。

[0039] 药液储液：称取100mg白灵片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。

[0040] 1.3实验试剂

[0041] DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033 Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司 批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司 批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公 司 批 号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司 批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182）；
MTT(Biosharp 批号：0793);PBS（实验室自配）；

[0042] 1.4 实验器材

[0043] 莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司 型号：SPECTRA MAX 190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造 型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司 型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司 型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司 型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司 型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司 型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司 型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂 型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。 [0044] 2 实验方法