一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用

摘要

本发明涉及一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。通过固液分离、吸附、离心、多次酶解等步骤，首次提供了一种大规模制备高纯度血红素的方法，从而提高血红素纯度。具体地，在一定pH值（pH值=1-4）的条件下，分离的血红素可以高效地与CMC-NA（羧甲基纤维素钠）或羧甲基淀粉发生吸附反应；在通过多次特定的酶解，洗涤，制得的血红素具有铁含量高，适口性好，吸收利用率高、生产过程环保无污染,无毒副作用等优点，非常适合用于补铁用途的饲料和食品。

权利要求

1.一种制备血红素的方法，其特征在于，包括步骤：(1)获得血球，将所述血球与水混合和/或搅拌，获得破膜的含血红蛋白的混合液；

(2)过滤步骤(1)所述的含血红蛋白的混合液，去除细胞膜，获得血红蛋白混合液；

(3)将步骤(2)的血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌，获得血红素与珠蛋白分离的混合液；

(4)将步骤(3)的血红素与珠蛋白分离的混合液与羧甲基纤维素钠溶液混合和/或搅拌，获得含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液，其中所述的羧甲基纤维素钠溶液浓度为0.05％-5％；

(5)离心步骤(4)获得的含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液，收集沉淀，即为血红素粗品；

在步骤(5)之后，还包括步骤：对步骤(5)获得的血红素粗品进行酶解处理，获得血红素产品；其中步骤(3)中，血红蛋白混合液与酸混合后的pH值为1-4；

所述酶解处理中，所用的酶选自下组：碱性蛋白酶、血蛋白酶或其组合。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的羧甲基纤维素钠溶液浓度为1％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中血球与水的比例为：血球：水＝1:1～1:8。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，通过离心去除细胞膜。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的酶解处理包括步骤：(i)将步骤(5)获得的血红素粗品与水混合，制为均一的血红素溶液；

(ii)向步骤(i)所述的溶液中加入所述酶，获得含蛋白肽和血红素的溶液；

(iii)将步骤(ii)的去除了蛋白肽的含血红素的溶液再次酶解，将去除再次酶解的蛋白肽的溶液制备为血红素纯品。

说明书

一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。

背景技术

[0002] 日前世界范围内屠宰业规模日渐扩大，屠宰畜禽生产肉食品的同时产生大量的血液等副产物，这些巨大的副产资源如不能合理及时的利用或处理，不仅引起环境污染，还将导致资源的严重浪费。

[0003] 在我国，畜禽副产物血资源年产超过330万吨。动物血液含有人体及其他动物所需的几乎全部的营养物质及元素，包括蛋白质、氨基酸、维生素等营养物质及钠、钾、铁、钙等微量元素。目前及过去相当长的时间内，采集的大部分畜禽动物鲜血用于加工全血粉、血浆粉、血球粉等饲料原料、血豆腐等低附加值产品阶段。

[0004] 血液新功效产品的开发对于提高其附加值、增加收入、减少污染等均有重要的意义。近年来在对食品、医药方面的应用研究表明，来自血液中的血红素铁在治疗缺铁性贫血方面有着显著疗效，在肠道中的吸收率远高于无机铁。目前生产血红素铁的方法主要有：丙酮法、冰醋酸法、表面活性剂法等，其主要的缺点是生产过程中使用有毒化学试剂，产生较大的环境污染，规模化生产难度大。其中，用丙酮法制备血红素工艺不仅对生产人员健康有危害，而且产品中存在丙酮残留。因此，本领域迫切需要开发一种能够大规模、无污染、高效生产血红素的方法。

发明内容

[0005] 本发明的目的就是提供一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。

[0006] 在本发明的第一方面，提供了一种大规模制备血红素的方法，包括步骤：

[0007] (1)获得血球，将所述血球与水混合和/或搅拌，获得破膜的含血红蛋白的混合液；

[0008] (2)过滤步骤(1)所述的含血红蛋白的混合液，去除细胞膜，获得血红蛋白混合液；

[0009] (3)将步骤(2)的血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌，获得血红素与珠蛋白分离的混合液；

[0010] (4)将步骤(3)的血红素与珠蛋白分离的混合液与羧甲基纤维素钠（CMC-NA）或羧甲基淀粉溶液混合和/或搅拌，获得含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液；

[0011] (5)离心步骤(4)获得的含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液，收集沉淀，即为血红素粗品。

[0012] 在另一优选例中，在步骤(5)之后，还包括步骤：对步骤(5)获得的血红素粗品进行酶解处理，获得高纯度的血红素产品。

[0013] 在另一优选例中，所述的酶解处理的次数为1~3次。

[0014] 在另一优选例中，步骤(1)中血球与水的比例为：血球：水=1:1~1:8。

[0015] 在另一优选例中，血球与水的比例为：血球：水=1:3~1:6。

[0016] 在另一优选例中，血球与水的比例为：血球：水=1:4。

[0017] 在另一优选例中，步骤(1)中所述的血球来源于人或非人动物。

[0018] 在另一优选例中，所述的非人动物选自下组：猪、牛、羊、鸡、鸭等。

[0019] 在另一优选例中，所述的血球为新鲜健康的血球。

[0020] 在另一优选例中，步骤(1)中，所述血球与水混合和/或搅拌时间为1-10小时，较佳地为3-6小时。

[0021] 在另一优选例中，所述的水为无菌水或纯水。

[0022] 在另一优选例中，所述的水为反渗透膜过滤后的水。

[0023] 在另一优选例中，步骤(2)中，通过离心去除细胞膜。

[0024] 在另一优选例中，所述的离心为管式离心；更佳地转速为：8000-15000转/分钟。

[0025] 在另一优选例中，步骤(3)中，血红蛋白混合液与酸混合后的pH值为1-4。

[0026] 在另一优选例中，血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌后的pH值为2-3。

[0027] 在另一优选例中，所述的酸选自下组：柠檬酸、盐酸、磷酸；优选盐酸。

[0028] 在另一优选例中，血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌的时间为1-5h。

[0029] 在另一优选例中，步骤(4)中，所述的羧甲基纤维素钠（CMC-NA）溶液浓度为：0.05%-5%（优选1%）。

[0030] 在另一优选例中，所述的酶解处理包括步骤：

[0031] (i)将步骤(5)获得的血红素粗品与水混合，制为均一的血红素溶液；

[0032] (ii)向步骤(i)所述的溶液中加入蛋白酶，获得含蛋白肽和血红素的溶液；

[0033] (iii)将步骤(ii)的去除了蛋白肽的含血红素的溶液再次酶解，将去除再次酶解的蛋白肽的溶液制备为血红素纯品。

[0034] 在另一优选例中，所述的血红素纯品中血红素的纯度≥70%，较佳地≥80%。

[0035] 在另一优选例中，所述的酶选自下组：碱性蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白酶、木瓜蛋白酶、血蛋白酶、或其组合。

[0036] 在另一优选例中，用碱性蛋白酶和血蛋白酶先后进行酶解处理。

[0037] 在另一优选例中，碱性蛋白酶处理时，pH值为10。

[0038] 在另一优选例中，血蛋白酶处理时，pH值为8。

[0039] 在本发明的第二方面，提供了一种高纯度血红素产品，血红素纯度≥70%，较佳地≥80%。

[0040] 在另一优选例中，所述的血红素产品不含丙酮等有毒化学试剂。

[0041] 在另一优选例中，使用的酸最终转变成可被人体吸收的盐类。

[0042] 在另一优选例中，所述的不含丙酮是指：所述产品中丙酮含量≤0.01%，较佳地≤0.005%，更佳地为0。

[0043] 在本发明的第三方面，提供了本发明第二方面所述的血红素产品的用途，所述产品用于制备食品组合物、药品组合物、或饲料组合物。

[0044] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

[0045] 下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本发明范围。

[0046] 图1显示了本发明一个具体实施例的流程图。

具体实施方式

[0047] 本发明人经过广泛而深入的研究，通过固液分离、吸附、离心、多次酶解等步骤，首次提供了一种大规模制备高纯度血红素的方法，从而提高血红素纯度。具体地，在一定pH值（pH值优选1-4）的条件下，分离的血红素可以高效地与CMC-NA（羧甲基纤维素钠）发生吸附反应；在通过多次特定的酶解，洗涤，制得的血红素具有铁含量高，适口性好，吸收利用率高、无毒副作用、生产过程环保无污染等优点，非常适合用于补铁用途的饲料和食品。在此基础上完成了本发明。

[0048] 制备方法

[0049] 本发明方法利用动物加工副产品动物血球为原料，通过吸附、离心、多次酶解及喷雾干燥等技术，能够获得高纯度的血红素产品。

[0050] 在本发明的一个具体实施例中，包括步骤（图1）：

[0051] (a)将获得的血球与一定体积的水混合，搅拌混合液，使血细胞膜涨破，得到破膜的血红蛋白液体，并过滤去除细胞膜，获得血红蛋白液体I；

[0052] (b)将血红蛋白液体I与酸混合，达到一定pH后，与CMC-NA（羧甲基纤维素钠）溶液混合，充分搅拌，静置，获得血红蛋白液体I与CMC的混合液II；

[0053] (c)离心混合液II，收集沉淀，此沉淀即为血红素粗品；

[0054] (d)将血红素粗品溶于水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅲ；向溶液Ⅲ中添加蛋白酶，进行酶解反应，获得酶解液Ⅳ；

[0055] (e)将酶解液Ⅳ离心处理，收集沉淀；

[0056] (f)；将步骤(e)中沉淀溶于水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅴ；向溶液Ⅴ中添加另一种蛋白酶，调节pH和温度，进行酶解反应，获得酶解液Ⅵ；

[0057] (g)将混合液Ⅵ离心处理，收集沉淀，清洗沉淀，得到血红素沉淀；

[0058] (h)将步骤（g）得到的沉淀溶于水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥处理，获得血红素成品，所述的血红素成品纯度大于70%。

[0059] 作为本发明的一种优选实施方式，进一步阐述本发明所述的方法：

[0060] (1)将血球与5倍的水混合，搅拌10小时得到破膜的血红蛋白液体，获得血红蛋白液体I；所述的血球来自畜或禽；所述的血球为新鲜健康血球；所述水为纯水；

[0061] (2)将破膜的血球液进行离心，去除细胞膜；所述离心采用管式离心机，转速12000转/分钟，下端排渣口排出物为细胞膜；

[0062] (3)将血红蛋白液与酸混合，使物料pH在3，搅拌2小时，得到血红素与珠蛋白的混合液；所述酸为盐酸，添加量根据pH而定。

[0063] (4)将酸化的血红蛋白液体与等体积的、浓度为1%CMC-NA混合，搅拌2h,，静置4小时，得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II；

[0064] (5)将混合液II离心，收集沉淀，此沉淀为血红素粗品。

[0065] (6)将血红素粗品溶于2倍血球体积的水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅲ；向溶液Ⅲ中添加酶活为40万IU/g的血蛋白酶，具体酶解条件如下：酶添加量为血红蛋白溶液干重的1%；酶解温度58℃；酶解pH8；酶解时间为16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0066] (7)将步骤(6)所得的混合液Ⅳ离心处理，收集沉淀。

[0067] (8)将沉淀溶于血球体积1倍水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅴ；向溶液Ⅴ中添加酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶，具体酶解条件如下：酶添加量为血红蛋白溶液干重的1%，酶解温度为55℃；酶解pH10；酶解时间为16小时，最终获得酶解液Ⅵ；

[0068] (9)将所得的混合液Ⅵ离心处理，收集沉淀，并将沉淀用水清洗3次，离心，得到血红素沉淀；

[0069] (10)将血红素沉淀溶于血球体积0.5倍水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥，进风温度控制在220～230℃，出风温度75～90℃，喷雾干燥后，进行检测，包装，从而获得纯度大于70%的血红素成品。

[0070] 原料

[0071] 本发明方法使用的血球可以来源于任何体内具有血液的生物，包括人或非人哺乳动物（如猪、牛、羊、兔、狗）或禽类等动物。本领域人员均了解，非人哺乳动物或禽类等动物的血液成分是非常相似的，因此任何具有血液的生物都可以作为原料来源。较佳地，宜采用新鲜健康的血球作为生产高纯度血红素的原料。

[0072] 本领域技术人员可以使用各种常规的熟知技术从血液中分离出血球，本发明对此不作特别的限制。例如：将抗凝全血进行分离，可得到血浆和血球，分离获得其中的血球，作为生产血红素的原料。

[0073] 固液分离

[0074] 在本方发明中，所述的固液分离是指：当血球的细胞膜破后碎，将血球中的成分(其中包括血红蛋白)与沉淀分离。

[0075] 将血球在水中破细胞膜的方法是：将血球与1-8倍体积(较佳地3-6倍体积，更佳地4倍体积)的水混合，搅拌处理1-10小时，得到破膜的血红蛋白液体。加水搅拌处理可使细胞膜溶胀破裂，释放出血红蛋白。按照重量比计算，血球和水的重量比为1：1-8(w/w)；按血球与水混合物的总重量计，血球浓度为3.5-18%(w/v)。

[0076] 本发明的方法采用的水较佳地为纯水；更佳地为经反渗透膜过滤的水。

[0077] 可以通过离心的方式将血球的细胞膜去除。离心后，血球的细胞膜形成沉淀，可方便地与液体通过固液分离的方法进行分离。使用的离心机的种类可以视生产的规模而定；较佳地，采用管式离心机，转速8000-15000转/分钟，细胞膜从下端排渣口排出；更佳地，排渣时间为20-30分钟/次。

[0078] 酸处理

[0079] 将获得的血红蛋白液与酸混合，搅拌1-5h，得到血红素与珠蛋白混合液。酸的主要作用是调节液体的pH值，在pH1-4条件下，有利于血红蛋白中的血红素与珠蛋白分离。

[0080] 所述的酸是指具有安全实用、质优价廉特征的酸，选自（但不限于）：柠檬酸、盐酸、磷酸等。作为一种优选的实施方式，所述的酸是盐酸，所述盐酸的添加量具体需视混合液的PH值而定。

[0081] 作为本发明的优选方式，将去膜的血红蛋白液与无机酸搅拌1-5小时，得到血红素与珠蛋白混合液。加水搅拌处理可使细胞膜溶胀破裂，释放出血红蛋白。

[0082] 吸附

[0083] 获得酸性血红素与珠蛋白混合液后，混合液与CMC-NA（羧甲基纤维素钠）溶液混合、搅拌、静置。CMC溶液可以吸附血红素，而不吸附珠蛋白成分，低pH条件下混合液中的珠蛋白以游离方式存在，而血红素被吸附在CMC上沉淀下来。较佳地，所述的CMC溶液浓度为0.05%-5%之间，添加的体积为所述血红蛋白液体I的0.5~3倍。更加地，所述的CMC为食品级添加剂。

[0084] 作为本发明的优选方式，将酸性的血红蛋白液与CMC-NA混合，静置4h以上，得到血红蛋白与CMC-NA的混合液I。

[0085] 作为本发明的另一优选方式，因羧甲基淀粉对血红素的吸附功能与羧甲基纤维素相似，故此处可用羧甲基淀粉代替羧甲基纤维素。

[0086] 酶解

[0087] 获得混合液Ⅲ后，溶液仍含有较多的蛋白，需要进一步将蛋白组分降低，从而提高血红素纯度。所述的酶组合为优选：血蛋白酶与碱性蛋白酶，两种酶均为生物酶，具有专一性，能有效酶解动物源性的蛋白而不会酶解血红素，从而降解粘附在血红素表面的蛋白。

[0088] 作为本发明的优选方式，采用40万IU/g血蛋白酶在温度58℃、pH8的条件下搅拌酶解16h，得到酶解液Ⅳ。第二次酶解采用的20万IU/g的碱性蛋白酶在温度55℃，pH10的条件下酶解16h。较佳的血蛋白酶及碱性蛋白酶的添加量均为血红蛋白液I干物质的1%[0089] 在另一优选例中，对混合液Ⅲ先采用碱性蛋白酶酶解再用血蛋白酶酶解，调换后酶的添加量有所变动，较佳的是碱性蛋白酶添加量为血红蛋白液I干物质的2%，血蛋白酶添加量为血红蛋白液I干物质的0.5%。

[0090] 干燥

[0091] 最后将反复清洗的沉淀再次溶解于水中，搅拌均匀后进行干燥，所述干燥可采用本领域技术人员常用的干燥方法，优选喷雾干燥，可采用进风温度220℃~230℃，出风温度80℃~85℃。

[0092] 高纯度血红素

[0093] 本发明提供了一种高纯度血红素产品，其中，血红素纯度≥70%，较佳地≥80%；所述的血红素产品不含丙酮等有毒化学试剂，使用的酸最终转变成可被人体吸收的盐类。

[0094] 在另一优选例中，所述的不含丙酮是指：所述产品中丙酮含量≤1%，较佳地≤0.5%，更佳地为0%。

[0095] 本发明提供的高纯度血红素具有适口性好，吸收利用率高，无毒副等特点。

[0096] 用途

[0097] 本发明提供的高纯度血红素，可应用于饲料、药品、和食品等领域。例如将干燥的血红素与谷物、玉米、大豆等饲料原料混合加工，从而获得颗粒状饲料组合物，从而应用于仔猪、母猪及蛋禽的喂养。或添加在食品辅料中，制成补铁剂等。

[0098] 本发明的主要优点在于：

[0099] 1.本发明采用安全无毒的生物方法进行血红素的提取制备，替代丙酮等化学方法，生产的血红素产品具有含铁量高，吸收利用率高，使用的酸也最终转变成可被人体吸收的盐类，无毒害残留等优点；

[0100] 2.本方法采用了高压喷雾干燥技术，保证了血红素产品颗粒均匀，各项指标优良等品质；

[0101] 3.本发明所述方法制备的高纯度血红素各项指标优良，可以获得血红素含量达到70%以上的产品；

[0102] 4.本发明制备的高纯度血红素在仔猪、母猪及蛋禽日粮添加高纯度血红素的饲养试验中，在其日粮中添加无机补铁剂的对比试验中，高纯度血红素的饲喂效果最好，提高了动物的营养代谢和免疫水平。

[0103] 下面结合具体实施，进一步阐述发明。应理解，这些实施例仅用于说明发明而不用于限制本发明的范围。下列实施中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

[0104] 实施例1

[0105] 利用猪血生产高纯度血红素铁

[0106] (1)将3吨来自猪的血球与12吨纯水混合，搅拌8小时，得到破膜的血红蛋白液体（即血红蛋白液体I）；所述的血球为新鲜健康血球；所述水为纯水；

[0107] (2)将破膜的15吨血红蛋白液I采用管式离心，以便去除细胞膜；离心转速为12000转/分钟，下端排渣口排出物为细胞膜；

[0108] (3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v))，缓慢加入到去膜的15吨血红蛋白液中，搅拌3小时，血红素与珠蛋白分离，并得到血红素与珠蛋白混合液；pH约为3；

[0109] (4)将3吨浓度为1%CMC-NA缓慢加入到15吨混合液中，搅拌3h，静置10小时，得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II；

[0110] (5)将混合液II离心，收集沉淀，此沉淀为血红素粗品；

[0111] (6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅲ；向溶液Ⅲ中添加9公斤的酶活为40万IU/g的血蛋白酶，在温度58℃，pH8的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0112] (7)将步骤（6）所得的混合液Ⅳ离心处理，收集沉淀；

[0113] (8)将沉淀溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅴ；向溶液Ⅴ中添加9公斤的酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶，在温度55℃，pH10的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0114] (9)将所得的混合液Ⅵ离心处理，收集沉淀，并将沉淀用水清洗4次，离心，得到血红素沉淀；

[0115] (10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥，得到血红素成品。

[0116] 结果表明：采用以上方法，3吨血球得到约41公斤的高纯度血红素，指标检测结果如表1：

[0117] 表1

[0118]

[0119] 实施例2

[0120] 利用禽血生产血红素铁

[0121] (1)将3吨来自禽的血球与12吨纯水混合，搅拌8小时得到破膜的血红蛋白液体，获得血红蛋白液体I；所述的血球为新鲜健康血球；所述水为纯水；

[0122] (2)将破膜的15吨血红蛋白液采用管式离心，去除细胞膜；离心转速为12000转/分钟，下端排渣口排出物为细胞膜；

[0123] (3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v))，缓慢加入去膜的15吨血红蛋白液重，搅拌3小时，得到血红素与珠蛋白混合液；pH约为3；

[0124] (4)将3吨浓度为1%CMC-NA缓慢加入到15吨混合液中，搅拌3h,，静置10小时，得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II；

[0125] (5)将混合液II离心，收集沉淀，此沉淀为血红素粗品。

[0126] (6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅲ；向溶液Ⅲ中添加18公斤酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶，在温度55℃，pH10的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0127] (7)将步骤（6）所得的混合液Ⅳ离心处理，收集沉淀。

[0128] (8)将沉淀溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅴ；向溶液Ⅴ中添加4.5公斤酶活为40万IU/g的蛋白酶，在温度58℃，pH8的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0129] (9)将所得的混合液Ⅵ离心处理，收集沉淀，并将沉淀用水清洗4次，离心，得到血红素沉淀；

[0130] (10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥，得到血红素成品。

[0131] 结果表明：采用本实施例的方法，3吨血球得到约42公斤的高纯度血红素，具体指标如表2：

[0132] 表2

[0133]

[0134] 实施例3

[0135] 粘度调节实验

[0136] (1)将3吨来自禽的血球与6吨纯水混合，搅拌8小时得到破膜的血红蛋白液体，获得血红蛋白液体I；所述的血球为新鲜健康血球；所述水为纯水；

[0137] (2)将破膜的9吨血红蛋白液采用管式离心，去除细胞膜；离心转速为12000转/分钟，下端排渣口排出物为细胞膜；

[0138] (3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v))，缓慢加入去膜的9吨血红蛋白液重，搅拌3小时，得到血红素与珠蛋白混合液；pH约为3；

[0139] (4)将3吨浓度为5%CMC-NA缓慢加入到9吨混合液中，搅拌3h,，静置10小时，得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II；

[0140] (5)将混合液II离心，收集沉淀，此沉淀为血红素粗品；

[0141] (6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅲ；向溶液Ⅲ中添加18公斤酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶，在温度55℃，pH10的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0142] (7)将步骤（6）所得的混合液Ⅳ离心处理，收集沉淀；

[0143] (8)将沉淀溶于4.5吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液Ⅴ；向溶液Ⅴ中添加4.5公斤酶活为40万IU/g的蛋白酶，在温度58℃，pH8的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ；

[0144] (9)将所得的混合液Ⅵ离心处理，收集沉淀，并将沉淀用水清洗4次，离心，得到血红素沉淀；

[0145] (10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥，得到血红素成品。

[0146] 结果表明：采用本实施例的方法，3吨血球得到约44公斤血红素，具体指标见表3：

[0147] 表3

[0148]

[0149] 结果可见，物料（如CMC-NA）粘度过高，会导致血红素得率和含量同时偏低。

[0150] 实施例4

[0151] 酶解与吸附顺序的对照

[0152] (1)将3吨来自猪的血球与3吨纯水混合，搅拌8小时，得到破膜的血红蛋白液体（即血红蛋白液体I）；所述的血球为新鲜健康血球；所述水为纯水；

[0153] (2)将破膜的6吨血红蛋白液I采用管式离心，以便去除细胞膜；离心转速为12000转/分钟，下端排渣口排出物为细胞膜；

[0154] (3)向除去细胞膜的溶液I中添加9公斤的酶活为40万IU/g的血蛋白酶，在温度58℃，pH8的条件下，酶解16小时最终获得酶解液II；

[0155] (4)将步骤（3）所得的酶解液II离心处理，收集沉淀I；

[0156] (5)将沉淀I溶于3吨纯水中，充分搅拌，获得均一的血红素悬浮液；向此溶液中添加9公斤的酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶，在温度55℃，pH10的条件下，酶解16小时最终获得酶解液Ⅲ；

[0157] (6)将所得的酶解液Ⅲ离心处理，收集沉淀，并将沉淀用水清洗4次，离心，得到血红素沉淀II；

[0158] (7)将血红素沉淀II溶于1吨纯水中，搅拌均匀，用浓度约为9%(w/v)的盐酸将其调节到pH3，搅拌3小时，获得溶液Ⅳ；

[0159] (8)将3吨浓度为1%CMC-NA溶液缓慢加入到溶液Ⅳ中，搅拌3h，静置10小时，得到混合液Ⅴ；

[0160] (9)将混合液Ⅴ离心，收集沉淀，并将沉淀用水清洗4次；

[0161] (10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中，搅拌均匀，进行喷雾干燥，得到血红素成品。

[0162] 结果表明：采用以上方法，3吨血球得到约100公斤的血红素，指标检测结果如表4：

[0163] 表4

[0164]

[0165] 结果可见，采用先酶解后吸附的工艺，血红素得率相差不大，但纯度较低。

[0166] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。