替比夫定脂质体固体制剂

摘要

本发明公开了一种替比夫定脂质体固体制剂及其制法，通过将活性成分替比夫定和特定的组合的蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂、吐温80制备成脂质体，极大提高了药物的稳定性、溶出度和生物利用度，而且作用平稳持久，疗效显著。本发明制剂提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用。

权利要求

1.一种替比夫定脂质体，其特征在于主要由以下重量配比的成分制成：其中：蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3:1。

2.根据权利要求1所述的替比夫定脂质体，其特征在于主要由以下重量配比的成分制成：其中：蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3:1。

3.一种制备权利要求1或2的替比夫定脂质体的方法，该方法包括以下步骤：（a）将蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂、吐温80溶解于有机溶剂中，搅拌使其溶解；

（b）将上述溶液置于茄形瓶中，45℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（c）将替比夫定溶解于一定的缓冲溶液，并将溶有替比夫定的缓冲溶液加入到茄形瓶中，继续在45℃水浴常压旋转，使薄膜溶胀水合；

（d）将上述溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液置于-20℃冰箱中冷冻过夜，然后取出融化，反复冻融三次，喷雾干燥制得替比夫定脂质体粉末。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，步骤（a）中所述的有机溶剂选自体积比为2：1的乙醇和异丙醇的混合溶剂；步骤（c）中所述的缓冲盐溶液选自pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液。

5.一种替比夫定脂质体固体制剂，其特征在于由权利要求1或2所述的替比夫定脂质体和其他药用辅料制成，其中基于6重量份的替比夫定而言，其他药用辅料的量为20-60份。

6.根据权利要求5所述的替比夫定脂质体固体制剂，其为片剂或胶囊。

7.一种权利要求5所述的替比夫定脂质体固体制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）替比夫定脂质体的制备：将替比夫定、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂和吐温80一起制备成脂质体粉末；

（2）替比夫定脂质体固体制剂的制备：将脂质体粉末和其他药用辅料混合制备替比夫定脂质体固体制剂，其包括稀释剂20-50份、崩解剂1-2份、粘合剂1-2份、润滑剂0.05-1份及适量润湿剂。

8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤（1）替比夫定脂质体的制备包括以下子步骤：（a）将蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂、吐温80溶解于有机溶剂中，搅拌使其溶解；

（b）将上述溶液置于茄形瓶中，45℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

（c）将替比夫定溶解于一定的缓冲溶液，并将溶有替比夫定的缓冲溶液加入到茄形瓶中，继续在45℃水浴常压旋转，使薄膜溶胀水合；

（d）将上述溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液置于-20℃冰箱中冷冻过夜，然后取出融化，反复冻融三次，喷雾干燥制得替比夫定脂质体粉末；

其中，子步骤（a）中所述的有机溶剂选自体积比为2：1的为乙醇和异丙醇的混合溶剂；

子步骤（c）中所述的缓冲盐溶液选自pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤（2）替比夫定质体固体制剂的制备包括以下子步骤：（e）将替比夫定脂质体粉末和稀释剂、崩解剂和粘合剂混合，过筛混合均匀，加入润湿剂制备软材，过筛制粒，干燥；

（f）将干颗粒和润滑剂混合均匀，过筛整粒；（g）压片，制得替比夫定脂质体固体制剂。

说明书

替比夫定脂质体固体制剂

技术领域

[0001] 本发明涉及一种替比夫定的新制剂，具体涉及替比夫定脂质体固体制剂和制法，属于医药技术领域。

背景技术

[0002] 乙肝是乙型肝炎病毒感染引起的常见传染病，乙肝的发病机制为乙肝病毒感染人体后病毒本身并不直接引起肝细胞的病变，只是在肝细胞内生存复制其所复制的抗原表达在肝细胞膜上激发人体的免疫系统来辨认从而对已感染发生攻击和清楚反应。其中急性乙肝是机体的免疫功能健全免疫系统被激活后识别乙肝病毒攻击已感染病毒的肝细胞并清除之；慢性乙肝是乙肝病毒侵入机体后的免疫功能被激活但处于低下或者耐受状态对已感染病毒的肝细胞反复攻击但是又不能完全清除之导致肝组织慢性炎症反复发作。慢性肝炎限定为病程至少为6个月，病情无改善的持续或复发性肝炎。慢性肝炎有众多的病因，我国当前主要是慢性乙型肝炎。我国不仅慢性肝炎的极大多数由乙型肝炎病毒引起，大多数其他慢性肝病，包括肝硬化或肝细胞癌，也由慢性乙肝病毒感染进展而来。就这一点而言，可以认为慢性无症状携带者是慢性乙型肝炎的潜伏期；但也有发病发病既是慢性乙型肝炎表现的所谓原发性慢性乙型肝炎。世界各地乙型肝炎感染的表现不同。我国因多在婴幼儿期感染而免疫耐受，表现长时期的病毒血症而病变轻微。临床稳定的病人也可复发加重，常与HBe血清转换和病毒清除相关。慢性乙型肝炎常表现为“沉默”，临床表现并不经常与病变的重度一致。即使已发展为失代偿的慢性肝病，也常无急性发作的过去史HBeAg及HBVDNA在血清中存在的时间越长，进展为肝纤维的可能性越大。因此必须加强抗病毒治疗，预防肝纤维化形成和发展。目前疗效肯定的抗病毒药物有两大类：干扰素和核苷类似物。。

[0003] 替比夫定，它的化学名称为：1-[(2S,4R,5S)-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-yl]-5-甲基-1H-嘧啶-2,4-二酮，分子式：C10H14N2O5，分子量：242.23，结构式如下：

[0004]

[0005] 目前国内外已批准用于抗HBV治疗的核苷类似物包括拉米夫定（LAM）和恩替卡韦（ETV），以及核苷酸类似物阿德福韦酯（ADV）。现有的核苷类似物能在短期内有效的抑制病毒复制，服用方便而且副作用少；但治疗时间长，病毒和宿主之间的复杂而动态的关系决定了耐药发生的必然性。所以研发一种快速有效的抗病毒药物，尽量降低耐药发生的几率，是目前抗乙肝研究中主要目标。

[0006] 替比夫定是一种新型的核苷类似物，由瑞士诺华公司于07年引入中国，通过了Ⅲ期临床研究，该实验为随机、双盲、双模拟实验，对332名成年慢性乙肝患者使用替比夫定或拉米夫定的治疗效果进行为期两年的对比。该实验中大部分患者为HBeAg阳性（290）。实验数据显示替比夫定拥有更好的安全性。

[0007] 目前国内上市药中有替比夫定普通片，然而这种剂型却存在以下问题：由于制备技术等原因，大多数药物的口服制剂服用后均存在着溶散时间长、溶出度低、吸收较差、服药次数多、释药不可控，肝肠首过效应和生物利用度较低等问题，从而影响药效的发挥，也直接影响着治疗效果，所以其生物利用度较低。

[0008] 现有技术中还有一些关于替比夫定制剂技术的报道。例如，专利文献CN1903183A公开了一种替比夫定的分散片及其制法，分散片主要有主药和可药用载体构成，其中可药用载体包括崩解剂、填充剂、表面活性剂、润湿粘合剂等，采用湿法制粒，压片。这种常规制作的固体制剂，存在均匀性不够好，生物利用度低等问题。

[0009] 专利文献CN101254177A公开了一种替比夫定咀嚼片及其制备方法，其由替比夫定和其他药用辅料组成。包括填充剂、粘合剂、矫味剂、润滑剂等，虽然咀嚼片服用方便，但是其吸收率不高，生物利用度低。

[0010] 专利文献CN101686938A公开了一种包含替比夫定口服药物溶液及其制备方法，由替比夫定、可药用溶剂系统、一种或多种味道增强剂或味道掩蔽剂、防腐剂以及适于使得药物稳定和防腐的缓冲系统组成，这种口服溶液添加物过于繁多，且防腐剂对人体有一定的危害性，其生物利用度也不够高。

[0011] 然而，上述方法制备的替比夫定制剂，虽然筛选了特定的辅料进行制备，具有一定得优点；但药品的溶出度和生物利用度仍有待提高，且药品的长期稳定性不理想，不利于长期存放。

[0012] 脂质体是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统的一种新剂型。脂质体作为药物载体，具有诸多优点：如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，提高生物利用度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。

[0013] 不过，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的替比夫定脂质体是亟待解决的课题。

[0014] 普通脂质体主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

[0015] 申请人通过大量的实验发现，采用特定赋形剂和替比夫定制成的脂质体固体制剂有效的克服了主药稳定性差的问题，同时提高了药物的溶出度，延缓释放，增加了药物在体内的保留时间。

发明内容

[0016] 为了形成品质优良的替比夫定脂质体固体制剂，重要的是寻找能与替比夫定良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以便形成品质优良的替比夫定脂质体，使得该脂质体的溶出性优异且生物利用度高，以及寻找能与替比夫定脂质体形成固体制剂的药用辅料。

[0017] 为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的替比夫定、蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂和吐温80能制成替比夫定脂质体，其中，作为药物活性成分的替比夫定包封率高，溶出性好，所得固体制剂中的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

[0018] 本发明的目的之一是提供一种替比夫定脂质体，其主要由以下重量配比的成分制成：

[0019]

[0020] 优选地，蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3：1。

[0021] 本发明的具体实施方式之一，本发明提供的替比夫定脂质体，主要由以下重量配比的成分制成：

[0022]

[0023] 优选地，蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3：1。

[0024] 本发明的具体实施方式之一，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3：1。

[0025] 在本发明的替比夫定脂质体中，使用的磷脂材料为蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油以重量比2:1的组合物，其中蛋黄卵磷脂是一种天然磷脂，二棕榈酰磷脂酰甘油是一种合成磷脂。

[0026] 作为用于形成脂质体的磷脂，其种类繁多，常用的有天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂包括硬脂酰胺、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。

[0027] 本发明人经过长期认真的研究，经过大量的筛选试验，发现采用一般的磷脂和附加剂为膜材制备的替比夫定脂质体在高温40℃、相对湿度75%±5%的加速试验下，稳定性和包封率不佳。

[0028] 本发明人经过锐意研究发现，在通常的磷脂材料中，适当量的作为天然磷脂的蛋黄卵磷脂和作为合成磷脂的二棕榈酰磷脂酰甘油以重量比2:1的组合磷脂能用于形成品质优良的替比夫定脂质体。通过本发明中提供的方法能形成适当大小、适当结构成分的包封率高的脂质体，而且这些成分，尤其是替比夫定在所形成的脂质体中不渗漏，并且脂质体中替比夫定的溶出性优异。如果使用用量比为除了2:1以外的蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油组合磷脂，或者选用其它磷脂材料如卵磷脂等，则所形成的脂质体的稳定性差、包封率低、溶出性差，不能实现本发明的目的。

[0029] 在本发明的替比夫定脂质体中，相对于6重量份的替比夫定而言，蛋黄卵磷脂的用量为30-80重量份，二棕榈酰磷脂酰甘油的用量为15-40重量份，蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1。如果蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的用量分别低于30重量份和15重量份，会有大量游离的替比夫定未被包封，脂质体的载药量低，稳定性也会下降，溶出性也会受到不利影响；反之，蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的用量分别高于80重量份和40重量份，则作为药物活性成分的替比夫定的包封率下降。

[0030] 在本发明的替比夫定脂质体中，胆固醇乙酰脂和吐温80用于调节脂质体的膜稳定性和通透性。

[0031] 胆固醇乙酰脂是一种双亲性分子，与蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇乙酰脂掺入蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油形成的双层膜中，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇乙酰脂可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇乙酰脂可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇乙酰脂能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

[0032] 本发明人经过研究发现，当蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3：1时，能形成稳定的替比夫定脂质体。当蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比高于3：1时，膜稳定性降低；当蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比低于3：1时，脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的替比夫定易于释放。

[0033] 此外，研究发现，当蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油的重量和与胆固醇乙酰脂的重量比为3：1时，所形成的脂质体溶出性优异。

[0034] 研究表明，脂质体的稳定性和溶出性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，溶出性越好，生物利用度越高。因此，本发明的替比夫定脂质体的稳定性高、溶出性优异，是导致药物生物利用度高的因素之一。

[0035] 此外，本发明人研究发现，在本发明的替比夫定脂质体中，相对于6重量份的替比夫定而言，蛋黄卵磷脂的用量为30-80重量份，二棕榈酰磷脂酰甘油的用量为15-40重量份，蛋黄卵磷脂与二棕榈酰磷脂酰甘油的重量比为2:1，所形成的替比夫定脂质体的包封率高。

[0036] 在本发明的替比夫定脂质体中，使用吐温80来进一步改进脂质体膜的稳定性和包封率。吐温80是一种非离子表面活性剂，当用于蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油组合磷脂形成的双层膜中时，不仅能进一步提高替比夫定的溶解性，从而提高包封率；而且能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高替比夫定脂质体的稳定性。

[0037] 在本发明的替比夫定脂质体中，相对于6重量份的替比夫定而言，吐温80的用量为1-20重量份。如果吐温80的用量低于1重量份，则由于其用量过低导致对脂质体的稳定性和包封率改进不够，反之，如果吐温80的用量高于20重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于破坏而泄露活性成分。

[0038] 在本发明的替比夫定脂质体中，通过适量配比的胆固醇乙酰脂和吐温80的对蛋黄卵磷脂和二棕榈酰磷脂酰甘油组合磷脂膜结构的协同调节促进作用，能形成包封率高、稳定性高的替比夫定脂质体，其溶出性优异，缓释效果好，生物利用度高。

[0039] 本发明的另一个目的，本发明提供一种替比夫定脂质体的制备方法，该方法包括以下步骤：

[0040] （a）将蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂、吐温80溶解于有机溶剂中，搅拌使其溶解；

[0041] （b）将上述溶液置于茄形瓶中，45℃水浴减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

[0042] （c）将替比夫定溶解于一定的缓冲溶液，并将溶有替比夫定的缓冲溶液加入到茄形瓶中，继续在45℃水浴常压旋转，使薄膜溶胀水合；

[0043] （d）将上述溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液置于-20℃冰箱中冷冻过夜，然后取出融化，反复冻融三次，喷雾干燥制得替比夫定脂质体粉末。

[0044] 在本发明替比夫定脂质体制备方法的一个优选的实施方案中，步骤（a）中所述的有机溶剂选自乙醇、氯仿、二氯甲烷、甲醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、苯甲醇、叔丁醇、乙腈、正己烷中的一种或几种，优选体积比为2：1的为乙醇和异丙醇的混合溶剂。

[0045] 在本发明替比夫定脂质体制备方法的一个优选的实施方案中，步骤（c）中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的一种，优选pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液。

[0046] 通过上述方法，能制备颗粒小且粒径分布均匀的替比夫定脂质体，其包封率高，稳定性高，溶出性好，生物利用度高。

[0047] 研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的替比夫定脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

[0048] 本发明的另一个目的，提供一种替比夫定脂质体固体制剂，其主要由替比夫定脂质体和其他药用辅料制成。

[0049] 在本文中，所用术语“其他药用辅料”或“药用辅料”的意思与赋形剂的意思相同，是指为了制备替比夫定脂质体固体制剂而使用的除了替比夫定脂质体以外的药用物料，包括稀释剂、崩解剂、粘合剂、润湿剂、润滑剂及其组合。

[0050] 在本文中，所用术语“其他药用辅料的量”是指上述药用辅料的重量之和，即基于6重量份的替比夫定而言，其他药用辅料的总量为20-60份。

[0051] 各种药用辅料的用量可以由本领域技术人员根据各辅料在固体制剂中的一般用量进行选择，这在本领域技术人员的能力范围内。

[0052] 在本发明替比夫定脂质体固体制剂的一个优选的实施方案中，所述稀释剂选自淀粉、乳糖、糖粉、可压性淀粉、山梨醇、微晶纤维素、糊精中的一种或几种，优选为微晶纤维素。

[0053] 在本发明替比夫定脂质体固体制剂的一个优选的实施方案中，所述崩解剂选自低取代羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、干淀粉中的一种或几种，优选低取代羟丙纤维素。

[0054] 在本发明替比夫定脂质体固体制剂的一个优选的实施方案中，所述粘合剂选自聚维酮K30、淀粉浆、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、阿拉伯胶、黄原胶中的一种，优选为聚维酮K30。

[0055] 在本发明替比夫定脂质体固体制剂的一个优选的实施方案中，所述润湿剂为10-80%的乙醇溶液，优选40%的乙醇溶液。

[0056] 在本发明替比夫定脂质体固体制剂的一个优选的实施方案中，所述润滑剂选自硬脂酸镁、硬脂酸锌、月桂醇硫酸钠、滑石粉、微粉硅胶、聚乙二醇4000、硬脂酸中的一种或几种，优选为硬脂酸镁。

[0057] 作为具体的实施方式之一，本发明所述的替比夫定脂质体固体制剂，主要由按重量份的下列组分制成：

[0058] 基于替比夫定6份、微晶纤维素20-50份、低取代羟丙纤维素1-2份、1-2份聚维酮K30、硬脂酸镁0.05-1份及40%的乙醇溶液适量。

[0059] 作为本发明具体实施方式，本发明提供的替比夫定脂质体固体制剂是口服制剂，为片剂。

[0060] 在本发明的具体实施方式中，考虑到药物的有效剂量和用药的便利性，在本发明的替比夫定脂质体固体制剂的优选实施方案中，制剂的规格为每单位制剂替比夫定为约600mg。

[0061] 本发明的另一个目的之一，本发明提供上述替比夫定脂质体固体制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

[0062] （e）将替比夫定脂质体粉末和稀释剂、崩解剂和粘合剂混合，过筛混合均匀，加入润湿剂制备软材，过筛制粒，干燥；

[0063] （f）将干颗粒和润滑剂混合均匀，过筛整粒；

[0064] （g）压片，制得替比夫定脂质体固体制剂。

[0065] 在本发明的方法中，还可以根据需要对脂质体和/或脂质体固体制剂进行灭菌。灭菌方法没有特殊要求，可以使用制药领域中常用的脂质体灭菌方法，如加热灭菌、过滤除菌、辐射灭菌或无菌操作等。

[0066] 本发明的优点：

[0067] 本发明先通过活性成分替比夫定与蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇乙酰脂、吐温80的特定重量的组合制备成脂质体，再和其它药用辅料混合制成固体制剂。所得固体制剂产品质量高，粒径均匀，稳定性高，包封率高，溶出性好，药物在血液循环中保留时间长，疗效显著，降低了毒副作用。

[0068] 本发明提供的替比夫定脂质体固体制剂的制备方法提高了产品质量，设备简单，易于操作，且方法简单，适合于工业化大生产。

[0069] 在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量计。

附图说明

[0070] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

[0071] 图1是替比夫定脂质体固体制剂的释放曲线。

[0072] 其中：

[0073]

具体实施方式

[0074] 以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

[0075] 实施例1替比夫定脂质体片

[0076] 所用原辅料如下：

[0077]

[0078] 采用以下生产工艺制备替比夫定脂质体片：

[0079] （1）精确称取3000g蛋黄卵磷脂、1500g二棕榈酰磷脂酰甘油、1500g胆固醇乙酰脂、600g吐温80，溶解于5000ml体积比为2：1的乙醇和异丙醇混合溶剂中，搅拌使其溶解；

[0080] （2）将上述溶液置于茄形瓶中，45℃水浴减压除去乙醇和异丙醇，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

[0081] （3）将600g替比夫定溶于5000ml pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中，并将该溶液加入到上述茄形瓶中，继续在45℃水浴常压旋转，使薄膜溶胀水合；

[0082] （4）将上述溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液置于-20℃冰箱中冷冻过夜，然后取出融化，反复冻融三次，喷雾干燥制得替比夫定脂质体粉末；

[0083] （5）将替比夫定脂质体固体粉末和2000g微晶纤维素、600g低取代羟丙纤维素和600g聚维酮K30混合，过筛混合均匀，加入100ml 40%的乙醇溶液制备软材，过筛制粒，干燥；

[0084] （6）将干颗粒和30g硬脂酸镁混合均匀，过筛整粒；

[0085] （7）压片，制得1000片替比夫定脂质体片。

[0086] 实施例2替比夫定脂质体片

[0087] 所用原辅料如下：

[0088]

[0089] 采用以下生产工艺制备替比夫定脂质体片：

[0090] （1）精确称取7000g蛋黄卵磷脂、3500g二棕榈酰磷脂酰甘油、3500g胆固醇乙酰脂、100g吐温80，溶解于10000ml体积比为2：1的乙醇和异丙醇混合溶剂中，搅拌使其溶解；

[0091] （2）将上述溶液置于茄形瓶中，45℃水浴减压除去乙醇和异丙醇，在瓶壁上形成均匀透明薄膜；

[0092] （3）将600g替比夫定溶于10000ml pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液中，并将该溶液加入到上述茄形瓶中，继续在45℃水浴常压旋转，使薄膜溶胀水合；

[0093] （4）将上述溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，将滤液置于-20℃冰箱中冷冻过夜，然后取出融化，反复冻融三次，喷雾干燥制得替比夫定脂质体粉末；

[0094] （5）将替比夫定脂质体固体粉末和2000g微晶纤维素、800g低取代羟丙纤维素和800g聚维酮K30混合，过筛混合均匀，加入200ml 40%的乙醇溶液制备软材，过筛制粒，干燥；

[0095] （6）将干颗粒和30g硬脂酸镁混合均匀，过筛整粒；

[0096] （7）压片，制得1000片替比夫定脂质体片。

[0097] 对比例1-3

[0098] 分别采用与实施例1-2中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的原辅料成分分别制成替比夫定脂质体片：

[0099] 表1对比例1-3中所用原辅料成分

[0100]

[0101] 其中，“/”表示未使用。

[0102] 试验例1包封率的测定

[0103] 量取在实施例1-2和对比例1-3中的步骤（4）中所得的替比夫定脂质体粉末0.5g溶于10ml水中，得混悬液，取混悬液0.5ml，加于SephadexG-50凝胶柱顶部，以磷酸盐缓冲液洗脱，流速1ml/min，收集4～11ml洗脱液(含脂质体),用氮气吹至体积约0.5ml，加无水乙醇破乳并定容至10ml，摇匀。精密吸取10ul溶液，进样，测定峰面积，计算脂质体重包封的替比夫定的含量；另精密量取替比夫定脂质体混悬液0.5ml，用无水乙醇定容至10ml，摇匀。精密吸取10ul溶液，测定脂质体混悬液中替比夫定的总量。计算包封率，结果示于下表2中：

[0104] 表2包封率的测定结果

[0105]

[0106] 由表2可知，与比较例中的脂质体相比，本发明的替比夫定脂质体的包封率要高出很多。

[0107] 通过比较实施例1和2与对比例1和2可知，本发明的脂质体具有更高的包封率。这表明，替比夫定脂质体的包封率与用于形成脂质体的成分种类直接相关。当使用本发明所用成分以外的成分时，所得替比夫定脂质体的包封率明显低于本发明。

[0108] 通过比较实施例1和2与重量配比不在本发明范围内的对比例3可知，本发明的脂质体具有更高的包封率。这表明，替比夫定脂质体的包封率不仅与用于形成脂质体的成分有关，还与各成分的用量直接相关。当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得替比夫定脂质体的包封率明显低于本发明。

[0109] 试验例2脂质体粒径的大小及粒度分布

[0110] 为了了解替比夫定脂质体准确的粒径参数及粒度分布，取在实施例1-2和对比例1-3中的步骤（4）中所得的适量脂质体粉末，直接用激光粒度分析仪（Easysizer20，欧美克公司）观察其外光，并测定粒径，用动态光散射处理软件处理，测量其直径并计算粒子直径的分布，结果示于下表3中：

[0111] 表3脂质体粒径

[0112]

[0113] 由表3可知，本发明实施例1-2中所得脂质体的平均粒径比对比例1-3中所得脂质体的平均粒径小很多，而且粒径大小均一，外观更好。

[0114] 通过比较实施例1和2与对比例1和2可知，本发明的脂质体具有更小的平均粒径，粒径分布更均匀，外观更好。这表明，替比夫定脂质体的粒径与用于形成脂质体的成分种类直接相关。当使用本发明所用成分以外的成分时，所得替比夫定脂质体的平均粒径、粒径分布和外观等性质明显劣于本发明。

[0115] 通过比较实施例1-2与重量配比不在本发明范围内的对比例3可知，本发明的脂质体具有更小的平均粒径，粒径分布更均匀，外观更好。这表明，替比夫定脂质体的粒径不仅与用于形成脂质体的成分有关，还与各成分的用量直接相关。当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得替比夫定脂质体的平均粒径、粒径分布和外观等性质明显劣于本发明。

[0116] 现有研究表明，脂质体颗粒大小和分布均匀程度与其包封率和稳定性以及在人体内的停留时间有关，脂质体颗粒越小、粒径分布越均匀，其包封率和稳定性越高，在人体循环系统内的停留时间越长（参见药物新剂型，第一版，第十八章，408－468页，朱盛山主编，化学工业出版社）。将该文献全文引入此处作为参考。

[0117] 因此，本发明的替比夫定脂质体平均粒径小、粒径分布均匀是进一步促进其包封率、稳定性、在体内的保留时间时间长、生物利用度等性能优异的一个因素。

[0118] 试验例3稳定性和溶出度考察

[0119] 将以上实施例1-2和对比例1-3制备的样品与上市的替比夫定片（北京诺华制药有限公司，批号20110221）在高温40℃，相对湿度75%±5%条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表4。

[0120] 表4稳定性和溶出度测定结果

[0121]

[0122] 由表4可知，上市和对比例1-3的替比夫定片溶出度低，加速6月时含量降低明显，有关物质升高；而本发明实施例1-2中制备的样品溶出度高，加速6个月后含量和有关物质均无显著变化。充分说明了本发明在提高稳定性和溶出度方面的优越性。

[0123] 试验例4体外释放研究

[0124] 精密吸取实施例1-2、对比例1-3的脂质体粉末各100mg(以替比夫定的量为准)溶于10ml水中，取混悬液各5ml置于透析袋中扎紧，释放介质为pH7.0的磷酸盐缓冲溶液（含0.25%的吐温20）100ml，水浴温度为37℃，搅拌转速为300rpm，分别于0.5、1、2、4、6、8、12、18、24h取样1ml，测定释放率，绘制释放曲线，结果如附图1中所示。

[0125] 结果表明，而本发明实施例1-2中所得替比夫定脂质体固体制剂释药缓慢，达到了很好缓释的效果，对比例1-3中所得替比夫定脂质体固体制剂缓释效果较差。

[0126] 工业实用性

[0127] 由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的替比夫定脂质体固体制剂具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，溶出性好，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

[0128] 以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

[0129] 本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。