一种人参刺五加口服液及其生产工艺

摘要

本发明提供了一种人参刺五加口服液及其生产工艺。按重量计，原料配比为人参1份，刺五加10~20份，纯化水15~40份。采用以下指标体系严格控制产品质量：紫丁香苷含量≥2.0mg/100ml，PH值为4.0~6.0，可溶性固形物含量≥1.0%。本发明的生产工艺省去醇沉的步骤，避免了人参多糖的损失，从而保证了口服液抗疲劳的效果好；整个工艺流程采取无菌操作、高温灭菌和合适的包装材料保证产品的微生物安全，产品稳定，无需加入防腐剂，食品安全可靠。？

权利要求

1.一种人参刺五加口服液的生产工艺，其特征在于：按重量计，原料配比为人参1份，刺五加10~20份，纯化水15~40份；

所述的人参刺五加口服液含紫丁香苷≥2.0mg/100ml，PH值为4.0~6.0，可溶性固形物≥1.0%；

具体步骤如下：

A　取刺五加10~20份、人参1份加水，煎煮提取2次，每次2小时，第1次加水体积为药材重量的14倍，第2次加水体积为药材重量的12倍，滤过，滤液合并，得滤液A，PH值为

4.0~6.0；

B　在温度不大于70℃的条件下，滤液A的体积减压浓缩至原料重量的6倍，50℃下测得相对密度1.01-1.02，备用；

上述A步骤和B步骤的体积重量比为L/kg；

C　取浓缩液，静置，冷藏过夜，过滤，得滤液B；

D 滤液B中加纯化水15~40份至总量，混合均匀，得混合液；

E　混合液灌装，得瓶装口服液；

F　在120~125℃下瓶装口服液热压灭菌15min，质检合格，外包装，即得。

2.根据权利要求1所述的一种人参刺五加口服液的生产工艺，其特征在于：所述的工艺中用到的包装瓶与瓶盖经检验合格、清洗、烘干后备用，检验标准为YBB 0003《钠钙玻璃管制口服液体瓶(试行)》。

3.根据权利要求1所述的一种人参刺五加口服液的生产工艺，其特征在于：所述的工艺操作环境均为10万级洁净。

说明书

一种人参刺五加口服液及其生产工艺

技术领域

[0001] 本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种人参刺五加口服液及其生产工艺。

背景技术

[0002] 随着人们生活节奏的加快和社会竞争的加剧，现代不规律的生活作息、高度的工作压力、睡眠质量不佳等原因，导致人类面临慢性疲劳综合症的威胁，影响了人类的健康。

[0003] 人参，味甘、微苦，平。归脾、肺、心经。《药性论》言其：“主五藏气不足，五劳七伤虚损，瘦弱吐逆，不下食，……补五脏六腑，保中守神。”《药类法象》称：人参“治脾肺阳气不足，及能补肺，气促、短气、少气。补而缓中，泻脾肺胃中火邪，善治短气。”有良好的大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津止渴作用。

[0004] 刺五加，味辛、微苦，温。归脾、肾、心经。《中药大辞典》总结：刺五加“具有较人参更好的‘适应原’样作用，增强机体抵抗力方面，作用相当广泛，能增强机对有害刺激因素的抵抗能力，能调节病理过程，使之趋于正常化。”《全国中成药产品集》称：其“扶正固本，补肾健脾，益智安神。适用于脾肾不足，腰膝酸软，神经衰弱，失眠，食欲不振，体虚无力。”《中药现代研究与临床应用》云其：“益气健脾，补肾安神”。

[0005] 两者合用，补益肺、脾、心、肾之气，振奋脏腑机能，共同发挥补气扶正的作用，可有效缓解体力疲劳，广泛出现在目前的抗疲劳保健品及药物的配方中。

[0006] 如CN03111170.X，名称为“一种用于抗疲劳的口服液”的发明专利。公开了一种用于抗疲劳的口服液，其配方是(按重量比)：人参1-7、刺五加1-7、红景天0.1-0.7、麦门冬0.1-0.7、白砂糖0-6、苯甲酸钠0-0.15、去离子水15-30。其生产工艺为：原料中加入8倍水，加热回流提取三次，合并三次提取液，过滤，浓缩至密度为1.18-1.2的浸膏时，加入乙醇，沉降72小时，过滤，滤液中加水、白砂糖，加热煮沸，过滤，滤液中加入苯甲酸钠，加入去离子水至所需容积，混合，装瓶。

[0007] 该专利的抗疲劳口服液存在以下缺点：

[0008] 1、生产工艺中采用醇沉的方法除去杂质，而人参中起到明显抗疲劳作用的物质为人参多糖，以人参果胶为主要代表成分，果胶是一类可以溶于水的化学物质，但是本类物质不溶于乙醇，如果采用乙醇来醇沉的话，会导致人参多糖大量损失，无法保证本品的抗疲劳效果。

[0009] 2、口服液中加入苯甲酸钠作为防腐剂，虽然苯甲酸钠为常用的化学防腐剂，但是由于中药化学成分复杂，不能避免中药中有可能会出现与本品发生化学成分的物质，所以避免使用本品可以更好的保证本品的服用安全性。

发明内容

[0010] 本发明针对上述技术问题，提供了一种人参刺五加抗疲劳口服液及其生产工艺。本发明的口服液主要成分为人参与刺五加，配方主要针对体力疲劳属于气虚的人群，结合现代医药学在缓解体力疲劳方面的研究成果，采用益气扶正的保健方法，合理选择原料配伍，是具有缓解体力疲劳保健功能的保健食品。

[0011] 为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：

[0012] 一种人参刺五加口服液，其特征在于：按重量计，原料配比为人参1份，刺五加10~20份，纯化水15~40份。

[0013] 所述的人参刺五加口服液中含紫丁香苷≥2.0mg/100ml，PH值为4.0~6.0，可溶性固形物≥1.0%。

[0014] 本发明选择紫丁香苷作为含量指标成分，是由于紫丁香苷为刺五加中抗疲劳的有效成分之一，采用该指标成分可以很好的衡量本品的抗疲劳的效果。

[0015] 本发明限定PH值范围为4.0~6.0，是由于产品在该PH 范围内，没有明显的沉淀出现，同时主要的有效成分紫丁香苷含量保持稳定。

[0016] 本发明限定可溶性固形物≥1.0%，是由于产品为中药提取的口服液，选用可溶性固形物可以衡量从中药中提取出的有效成分的总量在1.0%以上。

[0017] 所述的人参刺五加口服液的生产工艺，具体步骤如下：

[0018] A　取刺五加10~20份、人参1份加水，煎煮提取2次，每次2小时，第1次加水体积为药材重量的14倍，第2次加水体积为药材重量的12倍，滤过，滤液合并，得滤液A，PH值为4.0~6.0。

[0019] 在上述加水量的条件下，人参和刺五加中的主要功效成分可以尽可能多的提取出来。

[0020] B　在温度不大于70℃的条件下，滤液A的体积减压浓缩至原料重量的6倍，相对密度1.01-1.02（50℃测），备用。

[0021] 上述A步骤和B步骤的体积重量比为L/kg。

[0022] 本发明限定药液浓缩到相对密度1.01-1.02（50℃）的范围内，药液体积基本浓缩到规定的体积。

[0023] C　取浓缩液，静置，冷藏过夜，过滤，得滤液B。

[0024] D 滤液B中加纯化水15~40份至总量，混合均匀，得混合液。

[0025] E　混合液灌装，得瓶装口服液。

[0026] F　在120~125℃下瓶装口服液热压灭菌15min，质检合格，外包装，即得。

[0027] 这里的灭菌温度和时间是针对本发明产品的特性，具有较好的热稳定性，考虑到本发明未添加任何的防腐剂，因此采用安全性最高的灭菌方法，可以很好的保证产品的服用安全性。

[0028] 所述的工艺中用到的包装瓶与瓶盖经检验合格、清洗、烘干后备用，检验标准为YBB 0003《钠钙玻璃管制口服液体瓶(试行)》。

[0029] 所述的工艺操作均在10万级洁净的环境下进行。

[0030] 本发明的有益效果表现在：

[0031] 1、本发明选取人参与刺五加为1：15的配料比，是根据《关于批准人参（人工种植）为新资源食品的公告》（卫生部公告2012年第17号）对于人参日服用剂量的相关规定，人参日服用剂量为≤3克/天，考虑到在实际的服用过程中有可能会出现一天多次服用的情况，为了更好的保证本品的服用安全性，则确定了本品中的人参剂量为1g/瓶。在确定了人参的服用剂量的前提下，根据《中华人民共和国药典》（一部）刺五加日用剂量的规定，选取了本处方的人参与刺五加的最佳比例为1：10~20。在该剂量下，人体服用后不会出现人参服用后常见的“燥性”，人体没有任何的不适，而且抗疲劳效果明显。

[0032] 2、本发明的生产工艺在煎煮过程中，以人参和刺五加的提取率为指标，严格计算控制了加水量与药材的比例，保证了人参和刺五加中的主要功效成分可以尽可能多的提取出来，从而保证了药效。

[0033] 3、本发明的生产工艺省去醇沉的步骤，避免了人参多糖的损失，从而进一步保证了口服液抗疲劳的效果好。

[0034] 4、本发明选择紫丁香苷含量作为产品指标，紫丁香苷为刺五加中的主要抗疲劳功效成分之一，本发明对刺五加药材中的紫丁香苷的提取率进行科学分析，得出紫丁香苷含量≥2.0mg/100ml，从而保证了产品的质量可控性。

[0035] 5、本发明限定产品的PH值范围为4.0~6.0，产品在该PH 范围内，没有明显的沉淀出现，同时主要的有效成分紫丁香苷含量保持稳定；限定可溶性固形物≥1.0%，用于衡量产品从中药中提取出的有效成分的总量在1.0%以上。进一步保证了产品的质量稳定性和药效。

[0036] 6、本发明的整个工艺流程采取无菌操作、高温灭菌和合适的包装材料保证产品的微生物安全，在稳定性研究中采用微生物限度指标进行检测，产品的稳定性研究过程中没有出现不合格的现象。因此，产品稳定，无需加入防腐剂，食品安全可靠。

具体实施方式

[0037] 下面结合具体实施方式对本发明的实质性内容作进一步详细的描述。

[0038] 实施例1

[0039] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加10份，纯化水15份。

[0040] 实施例2

[0041] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加15份，纯化水26份。

[0042] 实施例3

[0043] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加20份，纯化水40份。

[0044] 紫丁香苷含量2.0mg/100ml，PH值为4.0，可溶性固形物1.0%。

[0045] 实施例4

[0046] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加14份，纯化水25份。

[0047] 紫丁香苷含量5.2mg/100ml，PH值为6.0，可溶性固形物3.3%。

[0048] 实施例5

[0049] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加16份，纯化水28份。

[0050] 紫丁香苷含量4.6mg/100ml，PH值为5.0，可溶性固形物3.6%。

[0051] 实施例6

[0052] 一种人参刺五加口服液，按重量计，原料配比为人参1份，刺五加15份，纯化水30份。

[0053] 紫丁香苷含量6.4mg/100ml，PH值为5.2，可溶性固形物2.5%。

[0054] 实施例7

[0055] 人参刺五加口服液的生产工艺：

[0056] A　取刺五加15份、人参1份加水，煎煮提取2次，每次2小时，第1次加水体积为药材重量的14倍，第2次加水体积为药材重量的12倍，滤过，滤液合并，得滤液A，PH值为6.0。

[0057] B　在室温下，滤液A的体积减压浓缩至原料重量的6倍，相对密度1.01（50℃测），备用。

[0058] 上述A步骤和B步骤的体积重量比为L/kg。

[0059] C　取浓缩液，静置，冷藏过夜，过滤，得滤液B。

[0060] D 滤液B中加纯化水26份至总量，混合均匀，得混合液。

[0061] E　混合液灌装，100ml/瓶，得瓶装口服液。

[0062] F　在120℃下瓶装口服液热压灭菌15min，质检合格，外包装，即得。

[0063] 实施例8

[0064] 人参刺五加口服液的生产工艺：

[0065] A　取刺五加10份、人参1份加水，煎煮提取2次，每次2小时，第1次加水体积为药材重量的14倍，第2次加水体积为药材重量的12倍，滤过，滤液合并，得滤液A，PH值为4.0。

[0066] B　在70℃下，滤液A的体积减压浓缩至原料重量的6倍，相对密度1.02（50℃测），备用。

[0067] 上述A步骤和B步骤的体积重量比为L/kg。

[0068] C　取浓缩液，静置，冷藏过夜，过滤，得滤液B。

[0069] D 滤液B中加纯化水15份至总量，混合均匀，得混合液。

[0070] E　混合液灌装，100ml/瓶，得瓶装口服液。

[0071] F　在125℃下瓶装口服液热压灭菌15min，质检合格，外包装，即得。

[0072] 所述的工艺中用到的包装瓶与瓶盖经检验合格、清洗、烘干后备用，检验标准为YBB 0003《钠钙玻璃管制口服液体瓶(试行)》。

[0073] 实施例9

[0074] 人参刺五加口服液的生产工艺：

[0075] A　取刺五加20份、人参1份加水，煎煮提取2次，每次2小时，第1次加水体积为药材重量的14倍，第2次加水体积为药材重量的12倍，滤过，滤液合并，得滤液A，PH值为5.5。

[0076] B　在50℃下，滤液A的体积减压浓缩至原料重量的6倍，相对密度1.015（50℃测），备用。

[0077] 上述A步骤和B步骤的体积重量比为L/kg。

[0078] C　取浓缩液，静置，冷藏过夜，过滤，得滤液B。

[0079] D 滤液B中加纯化水40份至总量，混合均匀，得混合液。

[0080] E　混合液灌装，得瓶装口服液。

[0081] F　在122℃下瓶装口服液热压灭菌15min，质检合格，外包装，即得。

[0082] 所述的工艺中用到的包装瓶与瓶盖经检验合格、清洗、烘干后备用，检验标准为YBB 0003《钠钙玻璃管制口服液体瓶(试行)》。

[0083] 工艺卫生要求

[0084] （一）物流与人流分离

[0085] 1、物流程序

[0086] 原料→浸提→浓缩→混匀→灌装→灭菌→包装→成品（单向顺流，无往复运动）[0087] 2、物净程序：

[0088] 一般区物料→外观检查→外部清洁→（脱去外包装）→插挂物料标示牌→一般区存放

[0089] 洁净区物料→外观检查→外部清洁→（脱去外包装）→插挂物料标示牌→缓冲间（传递窗）→洁净区存放

[0090] 3、人净程序

[0091] 一般区：人员→门厅→更鞋（一）→更衣（一）→一般区岗位

[0092] 洁净区：人员→门厅→更鞋（一）→更衣（一）→缓冲洗手→更鞋（二）→纯化水洗手→更衣（二）→手消毒（带手套）→洁净区岗位

[0093] （二）生产环境洁净度要求

[0094] 1、一般生产区

[0095] （1）地面整洁，门窗玻璃、墙面、顶棚洁净完好。设备、管道、管线排列整齐并包扎光洁，无泡、冒、滴、漏，定期清洁维修。

[0096] （2）设备、容器、工具按生产管理要求放置，定期清洁并符合清洁要求。

[0097] （3）生产场所不得吸烟，不得吃食物，不得存放与生产无关的物品和私人杂物。

[0098] 2、洁净区

[0099] （1）除符合一般生产区要求外，必须做到设备、容器、工具、管道保持清洁。外包装材料未彻底清洁前不得进入本区域。

[0100] （2）区域内洁净度要求为10万级，利用层流式整体空调净化，温度控制在18-26℃，相对湿度控制在45-65%，换气次数≥15次/小时，中效过滤器（万级）为无纺布滤材（3个月换洗一次），风速≥0.3米/秒，空气压差符合要求，按规定方法检查菌落数≤10个。

[0101] （3）区域内具有溶解等岗位设置除尘器。

[0102] 3、质量部要指定专人定期检查生产区工艺卫生及洁净度。

[0103] 实施例10

[0104] 本发明人参刺五加口服液的稳定性检验结果如下：

[0105]

[0106] 本发明通过采用无菌操作、高温灭菌和合适的包装材料保证产品的微生物安全，在稳定性研究中采用微生物限度指标进行检测，发现产品在稳定性研究过程中没有出现不合格的现象。由此证明本产品稳定，无需加入防腐剂，食品安全可靠。

[0107] 实施例11

[0108] 本发明人参刺五加口服液的稳定性检验结果如下：

[0109]

[0110]

[0111] 实施例12

[0112] 本发明人参刺五加口服液的稳定性检验结果如下：

[0113]

[0114] 实施例13

[0115] 本发明人参刺五加口服液缓解体力疲劳功能的动物试验：

[0116] 1. 材料和方法

[0117] 1.1 样品：人参刺五加口服液，棕褐色液体，人体每日推荐量为100ml/60kg.BW（5倍浓缩液）。

[0118] 1.2实验动物：由四川省中医药科学院实验动物中心提供的雄性昆明种小鼠160只，体重18-22g，生产许可证号为SCXK（川）2008-19.SPF级，实验动物房为屏障系统，使用许可证号为SYXK(川)2011-043，温度20-25℃，相对湿度40-70%。

[0119] 1.3 剂量选择及配制：试验设 3.33ml/kg.BW、6.67ml/kg.BW、10.0ml/kg.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐量的10、20、30倍），分别取41.6ml、83.4ml、125.0ml受试物，各加蒸馏水定容至250ml混匀，冰柜保存，用完再配，另设蒸馏水对照组。试验分为一、二、三、四组，每组40只动物。

[0120] 1.4 主要仪器和试剂：上海天美科学仪器有限公司生产的UV1100分光光度计、美国贝克曼库尔特有限公司生产的CX4全自动生化分析仪、山东省科学院生物研究所生产的SBA-40C型生物传感分析仪、电子天平、振荡器、游泳箱、匀浆器、秒表、尿素试剂盒、蒽酮试剂、溶血剂、三氯乙酸、葡萄糖标准溶液、乳酸标准溶液。

[0121] 1.5 试验方法

[0122] 1.5.1 试验前用蒸馏水作溶剂配制受试物，按20ml/kg.BW经口灌胃小鼠，每天给予一次，连续给予30天。

[0123] 1.5.2 负重游泳试验：将试验一组各剂量组的动物末次给予受试物30min后，将鼠尾根部负荷5%体重的细保险丝，再将小鼠放入水温25±1.0℃，水深30cm的游泳箱中游泳，记录小鼠从游泳开始至死亡的时间，计算小鼠的游泳时间。

[0124] 1.5.3 血清尿素测定：将试验二组各剂量组的动物末次给予受试物30min后，将小鼠放入温度30℃的水中不负重游泳90min，休息60min之后，拔眼球采全血0.5ml，取血清按试剂盒说明书操作，用CX4全自动生化分析仪及美国贝克曼库尔特有限公司提供的试剂盒测定血清尿素含量。

[0125] 1.5.4 肝糖原测定：将试验三组各剂量组的动物末次给予受试物30min后，处死动物取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，称取约100mg肝脏，按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的蒽酮法测定肝糖原的含量。

[0126] 1.5.5 血乳酸测定：将试验四组各剂量组的动物末次给予受试物30min后，不负重在温度30℃的水中游泳10min后停止。乳酸测定方法：于游泳前、游泳后0min及游泳后休息20min各采血20μl，分别加入50μl溶血剂振荡混匀后，再用SBA-40C型生物传感分析仪测定。测定结果乘以稀释倍数3.5即为血乳酸含量。

[0127] 1.6 试验数据统计：试验数据统计采用SPSS 11.0 for windows软件包处理。数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett’s T3法进行两两比较。

[0128] 2. 结果

[0129] 2.1对小鼠体重的影响：

[0130] 由表1、2、3可见，各剂量组及对照组动物的初始体重经统计学处理，方差齐（P>0.05），且方差分析结果（P>0.05）表明各组动物的初始体重是均衡的。三个剂量组动物的中期体重和结束时体重与对照组比较，经统计学处理，均无显著性差异（P>0.05）。 [0131]

[0132]

[0133]

[0134] 2.2对小鼠负重游泳时间的影响：

[0135] 由表4可见，三个剂量组的负重游泳时间与对照组比较，经统计学处理，三个剂量组的负重游泳时间延长均有显著性差异（P<0.05，P<0.01， P<0.01）。

[0136]

[0137] 2.3人参刺五加口服液对小鼠运动后血清尿素的影响：

[0138] 由表5可见，三个剂量组小鼠运动后的血清尿素与对照组比较，经统计学处理，三个剂量组的血清尿素降低均有显著性差异（P<0.01）。

[0139]

[0140] 2.4人参刺五加口服液对小鼠肝糖原的影响：

[0141] 由表6可见，三个剂量组小鼠的肝糖原含量与对照组比较，经统计学处理，三个剂量组的肝糖原含量升高均有显著性差异（P<0.05）。

[0142]

[0143] 2.5人参刺五加口服液对小鼠运动后血乳酸水平的影响：

[0144] 由表7可见，三个剂量组的血乳酸曲线下面积与对照组比较，经统计学处理，三个剂量组的血乳酸曲线下面积均无显著性差异(P>0.05)。

[0145]

[0146] 3. 小结

[0147] 本发明的人参刺五加口服液连续30天经口灌胃给予雄性小鼠后，可见动物生长良好，体重持续增长。三个剂量组能明显延长小鼠负重游泳时间，负重游泳试验结果为阳性；三个剂量组的血清尿素降低有显著性差异，血清尿素测定结果为阳性；三个剂量组能显著升高肝糖原含量，肝糖原测定结果为阳性；三个剂量组血乳酸曲线下面积与对照组之间无显著性差异，测定结果为阴性。按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的规定，本发明的人参刺五加口服液对动物具有明显缓解体力疲劳功能。

[0148] 实施例14

[0149] 本发明人参刺五加口服液安全性毒理学评价试验：

[0150] 1. 材料和方法

[0151] 1.1 样品：人参刺五加口服液，内容物为棕褐色液体，人体每日推荐量100ml/60kg.BW(20倍浓缩液)。试验时用蒸馏水作溶剂配制受试物。

[0152] 1.2 试验动物：昆明种小鼠和SD大鼠由四川省中医药科学院实验动物中心、成都达硕生物科技有限公司及成都生物制品研究所实验动物中心提供，生产许可证号分别为SCXK（川）2008-19.SPF级、SCXK（川）2008-24.SPF级和SCXK（川）2010-126.SPF级。试验动物房为屏障系统，使用许可证号为SYXK（川）2011-043，温度20-25℃，相对湿度40%-70%。 [0153] 1.3仪器和试剂：

[0154] 1.3.1 主要仪器：CX4型全自动生化分析仪、XT-2000i型全自动血细胞分析仪、METTLER电子天平、OLYMPUS BH-2型显微镜、解剖器械、超净工作台。

[0155] 1.3.2 主要试剂：生化试剂盒、环磷酰胺、1，8—二羟基蒽醌、叠氮化钠、2-氨基芴、4-硝基喹啉-N氧化物、丝裂霉素C、S-9混合液。

[0156] 1.4 大、小鼠急性毒性试验：分别采用昆明种小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，小鼠体重

[0157] 18-22g，大鼠体重180-220g，大、小鼠分别随机分成两组，共4组，每组同系同性10只动物。试验按最大耐受剂量法设15000mg/kg.BW一个剂量组，称取90g受试物加蒸馏水定容至120ml备用，大、小鼠均按20ml/kg.BW一次经口灌胃给予受试物。灌胃前动物禁食16h，不限饮水，观察一周内动物的中毒症状及死亡情况，试验结束称体重后处死动物作大体解剖。

[0158] 1.5 遗传毒性试验：

[0159] 1.5.1 Ames试验：使用自制经β-萘黄酮与苯巴比妥诱导雄性大鼠肝S9，按标准方法制成S9混合液后作为活化系统，用间接致突变物（20μg/皿2-氨基芴用于TA97、TA98、TA100，50μg/皿1，8-二羟基蒽醌用于TA102菌）测定S9活性。试验采用TA97、TA98、TA100、TA102四种菌株，受试物设8、40、200、1000、5000µg/皿五个剂量组及溶剂对照组（蒸馏水）、自发对照组和阳性对照组。首先配制受试物工作液：准确称取5.0g受试物，加蒸馏水至100ml混匀即为最高工作浓度50mg/ml，试验时取该工作液100μl加入平皿即为最高受试物终浓度（5000µg/皿），以最高浓度为基础用蒸馏水5倍往下稀释即得以下浓度。高压蒸汽灭菌。在加和不加S9的试验条件下进行平板掺入法试验 。每组作三个平行皿，重复试验一次。－S9阳性对照物：TA97和TA98用0.5μg /皿的4-硝基喹啉-N-氧化物；TA100用1.5μg /皿的叠氮化钠（NaN3）； TA102用1.0μg /皿的丝裂霉素C（MMC）；+S9阳性对照物TA102用50μg /皿的1，8－二羟基蒽醌，其余三个菌株均采用20μg /皿的2-氨基芴（2-AF）。每皿加入阳性对照的体积为0.1ml。

[0160] 1.5.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用昆明种小鼠50只，体重25-30g，雌雄各半，试验设2500mg/kg.BW、5000mg/kg.BW、10000mg/㎏.BW三个剂量组，另设溶剂（蒸馏水）对照组及环磷酰胺阳性对照组(CP，40mg/kg.BW)。称取2.5g、5.0g、10.0g受试物分别加蒸馏水至20ml，另称取0.04gCP加蒸馏水至20ml混匀即可。灌胃体积按20ml/kg.BW，试验采用30h两次灌胃法，两次间隔24h，于第二次给受试物后6h脱颈椎处死动物，取胸骨髓按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版)中的规定进行制片，固定， Giemsa染色后，在油镜下每只小鼠计数1000个嗜多染红细胞（PCE）中含微核细胞数，计算微核的千分率。观察200个红细胞中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值（PCE/NCE）。

[0161] 1.5.3 小鼠精子畸形试验：采用雄性昆明种小鼠25只，体重28-33g，将小鼠随机分为5组，每组5只动物，试验设2500mg/kg.BW、5000mg/kg.BW、10000mg/㎏.BW三个剂量组，另设溶剂(蒸馏水)对照组和环磷酰胺阳性对照组(CP，40mg/㎏.BW)。取10g、20g、40g受试物分别加蒸馏水至80ml，另称取0.04g CP，加蒸馏水至20ml混匀即可。灌胃体积按20ml/kg.BW每日经口灌胃一次 ，连续灌胃5天，于首次给受试物后第35天，脱颈椎处死动物取双侧附睾进行制片，按《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版)中的规定，甲醇固定，1%伊红染色后，在高倍镜下每只动物计数1000条完整精子，记录精子畸形、畸形类型及计算精子畸形率。

[0162] 1.6 30天喂养试验：选用断乳SD大鼠80只，雌雄各半，体重为64-78g，试验设2.08ml/㎏.BW、4.17ml/㎏.BW、8.33ml/㎏.BW三个剂量组（分别相当于人体推荐摄入量的25、50、100倍），另设蒸馏水对照组，每组20只大鼠，雌雄各半。试验采用灌胃法，首先配制受试物溶液，即分别称取52.1ml、104.2ml、208.3ml受试物，各加蒸馏水定容至250ml混匀备用，用完再配。每天按10ml/Kg.BW一次经口灌胃给予受试物，连续30天.每天每只大鼠单笼喂养。每天观察动物的一般表现，每周计算两次进食量，并称一次体重，根据食物摄入量，计算食物利用率，试验结束时，禁食16h，称重经股动脉放血后处死动物，采血用XT-2000i型全自动血细胞分析仪测定血液学指标，用美国贝克曼库尔特有限公司生产的CX4型全自动生化分析仪及广州标佳科技有限公司提供的试剂盒，测定血生化指标，解剖动物观察内脏改变，称肝、肾、脾、睾丸重，计算其脏体比，取肝、肾、脾、胃肠、睾丸（卵巢）作组织病理学检查。试验期间动物自由进食、饮水。

[0163] 1.7试验数据统计：小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用卡方检验，小鼠精子畸形试验采用

[0164] 秩和检验，30天喂养试验数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如

[0165] P值小于0.05，则用Dunnett’s T3法进行两两比较，上述统计均用SPSS 11.0 for Windows

[0166] 软件处理。

[0167] 2、结果

[0168] 2.1 急性毒性试验：给受试物后大、小鼠的一般表现和行为均未见异常，观察期内未见动物死亡（表8），试验结束时，处死动物大体解剖肉眼未见异常。本发明人参刺五加口服液对大、小鼠急性经口MTD值均大于15000mg/㎏.BW，按急性毒性分级属无毒级。

[0169]

[0170] 2.2. 遗传毒性试验

[0171] 2.2.1 Ames试验：由表9、表10中可见无论在加和不加S9条件下，受试物各剂量组的平均回变菌落数均未超过溶剂对照组二倍，而阳性对照组的平均回变菌落数均超过溶剂对照组二倍以上，呈现明显阳性反应，上述结果表明该受试物未诱导四种菌株回变菌落数增加。

[0172]

[0173]

[0174] 2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：结果见表11，受试物三个剂量组的微核千分率与阴性对照组比较，经卡方检验，雌雄鼠的微核率均无显著性差异（P>0.05），而环磷酰胺阳性对照组则非常显著高于阴性对照组（P<0.01）。结果未见受试物诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率增高。

[0175]

[0176] 2.2.3小鼠精子畸形试验：结果见表12，受试物三个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较，经秩和检验无显著性差异（P> 0.05），而环磷酰胺阳性对照组则非常显著高于阴性对照组（P<0.01）。精子畸形类型主要表现以不定形、无钩为主。上述结果表明受试物未诱发小鼠精子畸形率增高。

[0177]

[0178] 2.3 大鼠30天喂养试验

[0179] 试验期间动物健康状况良好，体重持续增长，每组大鼠每天给予不同剂量的受试物后均未出现中毒症状，也未见动物死亡。

[0180] 2.3.1对大鼠体重的影响

[0181] 由表13可见，三个剂量组雌雄大鼠的初始体重、1-4周体重以及第30天的体重与对照组相比较，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。

[0182]

[0183] 2.3.2对大鼠每周进食量的影响

[0184] 由表14可见，三个剂量组雌雄大鼠的每周进食量与对照组相比较，经统计学处理，均无显著性差异（P>0.05）。

[0185]

[0186] 2.3.3对大鼠食物利用率的影响

[0187] 结果见表15，三个剂量组雌雄大鼠的每周食物利用率以及总食物利用率与对照组相比较，经统计学处理，无显著性差异（P>0.05）。

[0188]

[0189] 2.3.4对大鼠血液学的影响

[0190] 由表16可见，三个剂量组雌雄大鼠的血液学指标检测结果与对照组相比较，经统计学处理，除雄性低剂量组嗜碱性细胞显著升高(P＜0.01)外，其余各剂量组均无显著性差异（P>0.05）。以上所测值在本室正常值范围内。

[0191]

[0192] 2.3.5 对大鼠末期血生化的影响

[0193] 由表17可见，三个剂量组雌雄大鼠的末期血生化指标检测结果与对照组相比较，经统计学处理，剂量组各项指标均无显著性差异（P>0.05）。

[0194]

[0195] 2.3.6对大鼠脏体比的影响

[0196] 结果见表18，三个剂量组雌雄大鼠的肝体比、脾体比、肾体比以及雄鼠的睾丸体比值与对照组相比较，经统计学处理，均无显著性差异（P>0.05）。

[0197]

[0198] 2.3.7病理学检查

[0199] 试验结束后处死动物，进行大体解剖，肉眼未见异常改变。组织病理学检查结果显示：对照组有1例肾组织间质局灶性轻度炎症细胞浸润，有1例肾组织局灶性肾小管矿物质沉着；细胞浸润，其余受检组织均未见异常。受试物高剂量组有1例肾组织局灶性肾小管矿物质沉着，有1例肾组织间质局灶性轻度炎症以上所发现均为动物自发病变，未见受试物高剂量组引起动物中毒性损伤改变（见表19-25）。

[0200]

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