(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法

摘要

本发明提供了一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：（1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；（2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；（3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；（4）将步骤（3）得到的萃取物依次使用制备型HPLC和半制备型HPLC进行分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。本发明制备方法条件温和，步骤简单，制得产品纯度高，对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备有着开创性意义。

权利要求

1.一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：（1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；

（2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；

（3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；

（4）将步骤（3）得到的萃取物使用C18柱进行HPLC分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛，具体为：使用制备型色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为15ml/min，检测波长315nm，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）醇与水的混合溶液为甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）具体为取盐杜仲粉，60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃浸提30分钟，过滤，残渣再用60%乙醇60℃浸提30分钟，合并两次提取液。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中性氧化铝为100-200目。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述步骤（2）采用95%的乙醇进行洗脱。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）有机溶剂为乙醚、氯仿、正丁醇中的一种或几种混合物。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）萃取次数为3次。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）之后还包括将收集的组分浓缩后，采用半制备柱HPLC进一步纯化的步骤，具体为：使用色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分。

说明书

(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法。

背景技术

[0002] (反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛为桂皮醛衍生物，结构如下：

[0003]

[0004] 文献“Cinnamaldehydes inhibit cyclin dependent kinase 4/cyclin D1. （Jeong, H.-W.; Kim, M.-R.; Son, K.-H. et al，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2000), 10(16), 1819-1822.）”首次公开了(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的结构，并发现桂皮醛具有抑制细胞周期蛋白激酶的活性。文献“Process for producing cinnamyl aldehydederivatives and use thereof as intermediate for aspartame derivative.（Mori, Kenichi; Fujita, Shinji; Funakoshi, etc，PCT Int. Appl. (2001), 29 pp.)中公开了(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的提取方法。目前，尚无对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备及活性的进一步研究，存在技术空白。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，采用天然物提取的方法，从中药材杜仲中提取得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。

[0006] 本发明具体技术方案如下：

[0007] 一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：

[0008] （1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；

[0009] （2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；

[0010] （3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；

[0011] （4）将步骤（3）得到的萃取物依次使用制备型HPLC和半制备型HPLC进行分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。

[0012] 上述杜仲优选盐杜仲，由如下方法制得：将杜仲干燥树皮浸入饱和NaCl溶液中15分钟，取出晾干，制成小块或小条，150-180℃烘烤4h，形成盐杜仲，此步骤为破坏杜仲胶，以使有效成分更多的溶出。

[0013] 上述杜仲可采用粉碎机粉碎，提高提取效率。

[0014] 上述醇与水的混合溶液为甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混合物。

[0015] 上述制备方法，步骤（1）优选条件为取盐杜仲粉，60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃浸提30分钟，过滤，残渣再用60%乙醇60℃浸提30分钟，合并两次提取液。

[0016] 上述制备方法，步骤（2）选用中性氧化铝层析柱，中性氧化铝可吸附去除提取液中无用的色素，优选100-200目的中性氧化铝，优选采用柱体积为φ60mm×80mm，填料预先用乙醇饱和。收集过柱后的流出液，滤液全部过柱后，在用100ml乙醇洗柱，并收集流出液。

[0017] 上述制备方法，所述醚类有机溶剂为乙醚、氯仿、正丁醇中的一种或几种混合物。

[0018] 上述制备方法，步骤（3）优选萃取次数为3次。

[0019] 上述制备方法，步骤（4）优选采用C18柱进行HPLC分离，优选分离条件为使用制备型色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1（体积比），流速为15ml/min，检测波长315nm，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分，纯度>95%。

[0020] 上述制备方法，步骤（4）之后还可以进一步将收集的组分浓缩后，再次进行HPLC的纯化，使用色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分，可获得高达99.5%以上的纯度。

[0021] 经测定，杜仲中(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的含量约为0.8克/kg，应用上述提取方法获得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛得率为55%左右。

[0022] 本发明制备方法条件温和，步骤简单，制得产品纯度高，对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备有着开创性意义。

附图说明

[0023] 图1为制备型HPLC分离杜仲提取液高效液相图谱。

[0024] 图2为半制备型HPLC制备(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的高效液相图谱。

[0025] 图3为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定质谱图。

[0026] 图4为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定核磁共振氢谱图。

[0027] 图5为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定核磁共振碳谱图。

具体实施方式

[0028] 实施例1 杜仲提取物的制备

[0029] 取杜仲干燥树皮，浸入饱和NaCl溶液中15分钟，取出晾干，制成小块或小条，150-180℃烘烤4h，粉碎机粉碎，制得盐杜仲粉。取100克盐杜仲粉，加入300ml 60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃水浴30分钟，滤液加入到填料为中性氧化铝（100-200目）层析柱中，柱体积为φ60mm×80mm，填料预先用乙醇饱和。收集过柱后的流出液，滤液全部过柱后，在用100ml乙醇洗柱，并收集流出液。抽滤漏斗滤纸减压过滤，残渣再一次60℃水浴30分钟，减压过滤，合并滤液。使用旋转蒸发仪60℃减压蒸发浓缩，直至剩余100ml左右时结束。分别使用100ml乙醚萃取浓缩液3次，收集合并乙醚萃取液，室温蒸发乙醚。使用
30ml 80%甲醇溶解乙醚蒸发后的产物，搅拌，8000rpm离心5分钟，取上清得到杜仲粗提物。

[0030] 实施例2 制备型HPLC分离杜仲提取液

[0031] 采用色谱条件为：色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为15ml/min，315nm检测，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分。（见图1，DZ_2标记的峰为(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛）。

[0032] 实施例3 半制备型HPLC制备(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛[0033] 使用旋转蒸发仪浓缩实施例2得到的组分，温度60℃，蒸发至剩余<10ml时结束。采用色谱条件为：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:
水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分，见图
2。

[0034] 实施例4 (反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的纯度鉴定

[0035] 分析型HPLC检测，检测条件：Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，保留时间为5.8分钟组分纯度>99.9%。(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛质谱鉴定图谱见图3，核磁共振氢谱图见图4，核磁共振碳谱图见图5。