GLP-1类似物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了GLP-1类似物及其制备方法与应用。所述GLP-1类似物具有下列通式A：7HAEX10TFTSDVSX18YLEX22QAX25KEFIX30WLX33KGRG37n1X1n2X2。本发明的GLP-1类似物能够有效增加GLP-1的血液半衰期，克服其因为半衰期短而无法在临床上使用的现状，在糖尿病、肥胖症治疗药物领域较有应用前景。本发明还公开了所述GLP-1类似物的制备方法及其应用。

权利要求

1.一种GLP-1类似物， 所述GLP-1类似物为：

SEQ ID NO 7: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAA；

SEQ ID NO 8: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAAAAAA；

SEQ ID NO 9: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYY；

SEQ ID NO 10: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYY；

SEQ ID NO 11: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYYYY；

SEQ ID NO 12: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKK；

SEQ ID NO 13: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKK；

SEQ ID NO 14: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKK；

SEQ ID NO 15: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKK；

SEQ ID NO 16: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKK；

SEQ ID NO 17: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKK；

SEQ ID NO 18: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKK；

SEQ ID NO 19: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKKKK；

SEQ ID NO 20: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIII；

SEQ ID NO 21: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIII；

SEQ ID NO 22: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIII；

SEQ ID NO 23: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIII；

SEQ ID NO 24: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIII；

SEQ ID NO 25: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIIIII；

SEQ ID NO 26: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIIIIIII；

SEQ ID NO 27: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMM；

SEQ ID NO 28: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMM；

SEQ ID NO 29: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMM；

SEQ ID NO 30: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMM；

SEQ ID NO 31: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 32: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 33: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 34: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 35: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 36: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

SEQ ID NO 37: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRR；

SEQ ID NO 38: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRR；

SEQ ID NO 39: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRR；

SEQ ID NO 40: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRR；

SEQ ID NO 41: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRRRR；

SEQ ID NO 42: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAA；

SEQ ID NO 43: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAA；

SEQ ID NO 44: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAA；

SEQ ID NO 45: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAA；

SEQ ID NO 46: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAAAA；

SEQ ID NO 47: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYY；

SEQ ID NO 48: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYY；

SEQ ID NO 49: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYY；

SEQ ID NO 50: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYY；

SEQ ID NO 51: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYYYY；

SEQ ID NO 52: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKK；

SEQ ID NO 53: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKK；

SEQ ID NO 54: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKK；

SEQ ID NO 55: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKK；

SEQ ID NO 56: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKKKK；

SEQ ID NO 57: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIII；

SEQ ID NO 58: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

SEQ ID NO 59: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

SEQ ID NO 60: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIIIII；

SEQ ID NO 61: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMM；

SEQ ID NO 62: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMM；

SEQ ID NO 63: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMM；

SEQ ID NO 64: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMMMM；

SEQ ID NO 65: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRA；

SEQ ID NO 66: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRY；

SEQ ID NO 67: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRK；

SEQ ID NO 68: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRI；

SEQ ID NO 70: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRM；

SEQ ID NO 71: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRAA；

SEQ ID NO 72: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRAA；

SEQ ID NO 73: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRYY；

SEQ ID NO 74: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRKKKK；

SEQ ID NO 75: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRIIIIII；

SEQ ID NO 76: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMM；

SEQ ID NO 77: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMMMM；

SEQ ID NO 78: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAYY；

SEQ ID NO 79: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAYY；

SEQ ID NO 80: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAYY；

SEQ ID NO 81: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAIIII；

SEQ ID NO 82: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAIIIIII；

SEQ ID NO 83: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMM；

SEQ ID NO 84: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMMMM；

SEQ ID NO 85: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CYYYYKK；

SEQ ID NO 86: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIRR；

SEQ ID NO 87: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIAA；

SEQ ID NO 88: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIYY；

SEQ ID NO 89: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIKK；

SEQ ID NO 90: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIIIMM；

SEQ ID NO 91: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMRR；

SEQ ID NO 92: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMAA:SEQ ID NO 93: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMKK；

SEQ ID NO 94: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMMMII。

2.权利要求1所述的GLP-1类似物的制备方法，所述制备方法包括Fmoc策略的固相多肽合成。

3.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物包含权利要求1所述的GLP-1类似物和一种或多种药学上可接受的辅料。

4.权利要求1所述的GLP-1类似物在制备治疗糖尿病、肥胖症药物中的应用。

说明书

GLP-1类似物及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明涉及糖尿病相关的药物领域，具体而言，本发明涉及一种具有延长的胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类的体内半衰期的GLP-1类似物。本发明还涉及该GLP-1类似物的制备方法以及其在制备糖尿病药物中的应用。

背景技术

[0002] 本发明涉及的GLP-1氨基酸（glucagon-likepeptide-1，以下简称：GLP-1)是主要由小肠L细胞分泌的一种37个组成的多肽，其活性形式为GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH2 (Mojsov S, J Clin Invest. 1987 Feb; 79(2): 616-9)。GLP-1明显减低人用餐后的血糖，能刺激胰岛素的产生，同时还能起到一定减肥效应，并且不会引起低血糖症（Drucker D J, Diabetes. 1998 Feb; 47(2): 159-69)。近期研究还表明GLP-1有胰腺再生作用（Drucker D J, 2003Dec;144(12):5145-8)。此外，因为GLP-1为完全人源化多肽，作为临床药物在安全上具有较大优势。然而，GLP-1（7-37）的血清半衰期仅仅为3-5分钟，每天多次注射给药在临床使用中非常不方便。

[0003] 目前已经有不少研究采用GLP-1类似物融合蛋白技术解决GLP-1类似物在体内的存留时间（CN90101167.3、CN200710018734.2、CN200410054397.9、CN01820232.2、CN200380110152.7、CN200510039265.3、CN200610127237.1、CN200910009642.7），然 而，现有的技术与临床理想的目标还有很大距离,普遍都还没有达到临床标准,最近Novo Norisk生产的利拉鲁肽为GLP-1类似物,其对GLP-1进行了棕榈酸的修饰,并于2009年于美国上市。但是利拉鲁肽也存在半衰期短的问题，其剂型仍需每日注射。

[0004] 因此，目前存在对解决GLP-1体内半衰期短的方法的需求。

发明内容

[0005] 除非另外指出，本文所述的“Fmoc策略”是指以聚合物树脂作为固相反应基质，将氨基端Fmoc保护的氨基酸在偶联试剂的存在下依次缩合，从而合成多肽的合成方法。其具体方法参见Fmoc solid phase peptide synthesis: a practical approach, 2000, Oxford University Press.

[0006] 本发明的一个目的是针对临床上GLP-1类似物在体内存留时间较短，需要每天注射给药的缺限，提供一种半衰期较长的GLP-1的类似物。

[0007] 本发明的另一个目的是提供一种GLP-1类似物在制备治疗糖尿病的药物中的应用，以及该GLP-1类似物在制备治疗和/或预防肥胖症的药物中的应用。

[0008] 本发明的又一个目的是提供一种以GLP-1类似物作为有效成分的药用组合物，其包含上述GLP-1类似物。其中，所述的药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料, 并且所述药物组合物优选为注射剂，进一步优选为冻干粉针或溶液注射剂。

[0009] 用于实现上述目的的技术方案如下：

[0010] 一方面，本发明提供一种GLP-1类似物，所述GLP-1类似物具有下列通式A：

[0011] 7HAEX10T FTSDVS X18YLEX22QA X25K EFIX30W LX33KGR G37n1X1 n2X2[0012] 通式A，

[0013] 其中，X10为甘氨酸或半胱氨酸，X18为丝氨酸或半胱氨酸，X22为甘氨酸或者半胱氨酸，X25为丙氨酸或半胱氨酸，X30为丙氨酸或半胱氨酸，X33为缬氨酸或半胱氨酸，并且X10、X18、X25、X30和X33中有且只有两个为半胱氨酸；n1X1表示有n1个X1，n1=0~30，且X1为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；n2X2表示有n2个X2，n2=0~30，且X2为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；n1、n2不同时为0，以及通式A中含有的两个半胱氨酸均形成二硫键。

[0014] 优选地，所述GLP-1类似物具有下列通式I：

[0015] 7HAEX10T FTSDVS X18YLEGQA X25K EFIX30W LX33KGR G37n1X1 n2X2[0016] 通式I，

[0017] 其中n1=1～30，n2=1～30。

[0018] 所述具有通式I的GLP-1类似物如：

[0019] SEQ ID NO 1: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GRR；

[0020] SEQ ID NO 2: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GAAAA；

[0021] SEQ ID NO 3: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GYYYYY；或[0022] SEQ ID NO 4: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GKKKKKK；

[0023] SEQ ID NO5: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GIIIIIII；

[0024] SEQ ID NO 6: HAECT FTSDVS CYLEGQA AK EFIAW LVKGR GMMMMMM。

[0025] 优选地，所述GLP-1类似物具有下列通式II：

[0026] 7HAEGT FTSDVS X18YLEGQA X25K EFIAW LVKGR G37n1X1 n2X2

[0027] 通式II，

[0028] n1=1～20，n2=1～20，并且其中X1为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸。

[0029] 优选地，n1=1～20，n2=1～20；

[0030] 进一步优选地，所述n1=1～10，n2=1～10；n1=n2;

[0031] 所述GLP-1类似物为：

[0032] SEQ ID NO 7: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAA；

[0033] SEQ ID NO 8: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAAAAAA；

[0034] SEQ ID NO 9: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYY；

[0035] SEQ ID NO 10: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYY；

[0036] SEQ ID NO 11: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYYYY；

[0037] SEQ ID NO 12: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKK；

[0038] SEQ ID NO 13: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKK；

[0039] SEQ ID NO 14: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKK；

[0040] SEQ ID NO 15: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKK；

[0041] SEQ ID NO 16: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKK；

[0042] SEQ ID NO 17: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKK；

[0043] SEQ ID NO 18: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKK；

[0044] SEQ ID NO 19: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKKKK；

[0045] SEQ ID NO 20: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIII；

[0046] SEQ ID NO 21: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIII；

[0047] SEQ ID NO 22: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIII；

[0048] SEQ ID NO 23: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIII；

[0049] SEQ ID NO 24: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIII；

[0050] SEQ ID NO 25: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIIIII；

[0051] SEQ ID NO 26: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGRGIIIIIIIIIIIIIIIIIIII；

[0052] SEQ ID NO 27: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMM；

[0053] SEQ ID NO 28: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMM；

[0054] SEQ ID NO 29: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMM；

[0055] SEQ ID NO 30: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMM；

[0056] SEQ ID NO 31: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMM；

[0057] SEQ ID NO 32: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMM；

[0058] SEQ ID NO 33: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMM；

[0059] SEQ ID NO 34: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0060] SEQ ID NO 35: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0061] SEQ ID NO 36: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGRGMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0062] 此外，具有通式A的GLP-1类似物还可以具有下列通式III：

[0063] 7HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR G37n1X1 n2X2通式III，

[0064] 其中，n1=1～30，n2=0～30，X1为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；

[0065] 优选地，n1=1～20，n2=1～20；

[0066] 或者n1=1～10，n2=1～16；

[0067] 更优选地，n1=1～4，n2=1～6。

[0068] 优选地，所述GLP-1类似物为：

[0069] SEQ ID NO 37: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRR；

[0070] SEQ ID NO 38: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRR；

[0071] SEQ ID NO 39: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRR；

[0072] SEQ ID NO 40: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRR；

[0073] SEQ ID NO 41: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRRRR；

[0074] SEQ ID NO 42: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAA；

[0075] SEQ ID NO 43: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAA；

[0076] SEQ ID NO 44: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAA；

[0077] SEQ ID NO 45: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAA；

[0078] SEQ ID NO 46: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAAAA；

[0079] SEQ ID NO 47: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYY；

[0080] SEQ ID NO 48: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYY；

[0081] SEQ ID NO 49: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYY；

[0082] SEQ ID NO 50: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYY；

[0083] SEQ ID NO 51: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYYYY；

[0084] SEQ ID NO 52: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKK；

[0085] SEQ ID NO 53: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKK；

[0086] SEQ ID NO 54: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKK；

[0087] SEQ ID NO 55: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKK；

[0088] SEQ ID NO 56: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKKKK；或[0089] SEQ ID NO 57: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIII；

[0090] SEQ ID NO 58: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

[0091] SEQ ID NO 59: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

[0092] SEQ ID NO 60: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIIIII；

[0093] SEQ ID NO 61: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMM；

[0094] SEQ ID NO 62: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMM；

[0095] SEQ ID NO 63: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMM；

[0096] SEQ ID NO 64: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMMMM。

[0097] 另外，所述具有通式A的GLP-1类似物还可以具有下列通式IV：

[0098] HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR Cn1X1 n2X2通式IV

[0099] 其中，n1=0～30，n2=0～30，X1为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸，X2为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；

[0100] 优选地n1=1～15，n2=1～15，n1≠n2；

[0101] 或者，n1=1～10，n2=1～10，n1≠n2；

[0102] 更优选地，n1=1～6，n2=1～10，n1≠n2。

[0103] 优选地，所述GLP-1类似物为：

[0104] SEQ ID NO 65: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRA；

[0105] SEQ ID NO 66: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRY；

[0106] SEQ ID NO 67: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRK；

[0107] SEQ ID NO 68: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRI；

[0108] SEQ ID NO 70: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRM；

[0109] SEQ ID NO 71: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRAA；

[0110] SEQ ID NO 72: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRAA；

[0111] SEQ ID NO 73: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRYY；

[0112] SEQ ID NO 74: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRKKKK；

[0113] SEQ ID NO 75: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRIIIIII；

[0114] SEQ ID NO 76: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMM；

[0115] SEQ ID NO 77: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMMMM；

[0116] SEQ ID NO 78: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAYY；

[0117] SEQ ID NO 79: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAYY；

[0118] SEQ ID NO 80: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAYY；

[0119] SEQ ID NO 81: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAIIII；

[0120] SEQ ID NO 82: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAIIIIII；

[0121] SEQ ID NO 83: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMM；

[0122] SEQ ID NO 84: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMMMM；

[0123] SEQ ID NO 85: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CYYYYKK；

[0124] SEQ ID NO 86: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIRR；

[0125] SEQ ID NO 87: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIAA；

[0126] SEQ ID NO 88: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIYY；

[0127] SEQ ID NO 89: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIKK；

[0128] SEQ ID NO 90: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIIIMM；

[0129] SEQ ID NO 91: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMRR；

[0130] SEQ ID NO 92: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMAA:

[0131] SEQ ID NO 93: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMKK或

[0132] SEQ ID NO 94: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMMMII。

[0133] 另一方面，本发明提供上述GLP-1类似物的制备方法，所述制备方法包括Fmoc策略的固相多肽合成。

[0134] 又一方面，本发明提供上述GLP-1类似物在制备治疗糖尿病，肥胖症和糖尿病、肥胖症相关疾病以及预防肥胖症的药物中的应用。

[0135] 并且，本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-8中任一项所述的GLP-1类似物和一种或多种药学上可接受的辅料；

[0136] 优选地，所述药物组合物为注射剂，进一步优选为冻干粉针或溶液注射剂。

[0137] 以下是本发明的详细描述：

[0138] （1）GLP-1类似物

[0139] 本发明所述的GLP-1类似物的通式如下：

[0140] 通式A：

[0141] 7HAEX10T FTSDVS X18YLEX22QA X25K EFIX30W LX33KGR G37n1X1 n2X2[0142] 7HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EFIAW LVKGR G37为人源GLP-1序列，上述通式A的GLP-1类似物为人工序列，分别在第10、18、22、25、30或33位氨基酸上进行了修饰，由半胱氨酸取代了原有的氨基酸。并且在上述的氨基酸通式中X1可为Arg, Ala, Tyr，Lys，Ile，Met；通式中的X2可为Arg, Ala, Tyr，Lys，Ile，Met。最后通式中的（n1及n2）指代在多肽的C末端含有n1及n2个带负电荷的氨基酸（Arg, Ala, Tyr，Lys，Ile，Met），n1=0～30，n2=0～30。在上述的多肽通式中，两个半胱氨酸均形成二硫键。

[0143] 优选地，GLP-1类似物的通式如下：

[0144] 7HAEX10T FTSDVS X18YLEGQA X25K EFIX30W LX33KGR G37n1X1 n2X2[0145] 通式I，

[0146] 其中n1=1～30，n2=1～30。

[0147] 基于18位的氨基酸和25位的氨基酸优选为半胱氨酸，此多肽的通式可优选为：

[0148] 通式II：

[0149] 7HAEGT FTSDVS CYLEGQA CK EFIAW LVKGR G37n1X1 n2X2

[0150] n1=1～20，n2=1～20，并且其中X1为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸，X2为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；

[0151] 优选地，n1=1～20，n2=1～20；

[0152] 进一步优选地，所述n1=1～10，n2=1～10；n1=n2。

[0153] 基于25和30位的氨基酸优选为半胱氨酸，此多肽的通式可优选为

[0154] HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR G37n1X1 n2X2

[0155] 通式III

[0156] 其中，n1=1～30，n2=0～30，X1精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸，X2为精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；

[0157] 优选地，n1=1～20，n2=1～20；

[0158] 或者n1=1～10，n2=1～16；

[0159] 更优选地，n1=1～4，n2=1～6

[0160] 基于30和37位的氨基酸优选为半胱氨酸，此多肽的通式可优选为

[0161] HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR Cn1X1 n2X2

[0162] 通式IV

[0163] 其中，n1=0～30，n2=0～30，精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸，X2精氨酸、丙氨酸、酪氨酸赖氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸；

[0164] 优选地n1=1～15，n2=1～15；

[0165] 或者，n1=1～10，n2=1～10；

[0166] 更优选地，n1=1～6，n2=1～10。

[0167] （2）本发明的药用组合物

[0168] 本发明的含有GLP-1类似物可以与一种或多种药学上可接受的辅料共同制成药用组合物，这些辅料包括：水溶性填充剂、PH调节剂、稳定剂、注射用水、渗透压调节剂等等。

[0169] 本发明所述的水溶性填充剂辅料为选自以下的一种或几种：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖等。

[0170] PH调节剂为选自以下的一种或一种：枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、盐酸等非挥发性的酸以及氢氧化钾、氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化铵、碳酸钠或碳酸钾或碳酸铵盐、碳酸氢钠或碳酸氢钾或碳酸氢铵盐等生理可接受的有机或无机酸、碱及盐等。

[0171] 稳定剂为选自以下的一种或几种：EDTA-2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷等。优选焦亚硫酸钠、磷酸氢二钾、精氨酸、聚乙二醇6000、三羟甲基氨基甲烷。

[0172] 渗透压调节剂是氯化钠、氯化钾的一种或两种的组合。

[0173] （3）注射剂的制备方法

[0174] 本发明的药用组合物可以通过肌肉、静脉内、皮下注射途经进行给药，优选的剂型为冻干粉或溶液注射剂。

[0175] 冷冻干燥注射剂的制备方法：取GLP-1类似物溶液适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5%活性炭，在0－10℃下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得白色疏松块状物，封口即得，每个规格含有GLP-1类似物在5µg到1mg之间。

[0176] 注射液的制备方法：取GLP-1类似物溶液或冻干粉适量，加入水溶性填充剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节PH值至4-8使其溶解，加水稀释至适当浓度，加入0.1-0.5%活性炭，在0－10℃下搅拌10-20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，封口即得，每个规格含有GLP-1类似物在5µg到1mg之间。

[0177] （4）药用组合物的用途

[0178] 本发明的GLP-1类似物可以用在制备糖尿病治疗药物方面。具体地，本发明的组合物可以静脉、肌肉或皮下注射剂形式给药。虽然剂量依治疗对象、给药方式、症状及其它因素而改变，本发明的GLP-1类似物在相当宽的剂量范围内是有效的。在成人的治疗中，剂量范围在5µg/人--1mg/人，每日一次或每几日一次给药。实际剂量应该由医生根据有关的情况来决定，这些情况包括被治疗者的身体状态、给药途径、年龄、体重、患者对药物的个体反应，患者症状的严重程度等等，因此上述剂量范围并不是以任何方式限制本发明的范围。

[0179] 本发明的GLP-1类似物克服了GLP-1半衰期短的问题，所提供的GLP-1类似物在体内的半衰期可达到8～72小时以上，较单独给药的GLP-1的半衰期（半衰期仅为3-5分钟）明显延长，极大地便利了其临床推广和应用。

[0180] 附图说明

[0181] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：

[0182] 图1为实施例2中含GLP-1类似物（SEQ ID NO 7—36）的降血糖实验；其中，图1-A表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 7—14）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的九个数据条从左到右依次代表SEQ7-14及对照；图1-B表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 15—22）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的九个数据条从左到右依次代表SEQ15-22及对照；
图1-C表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 23—30）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的九个数据条从左到右依次代表SEQ23-30及对照；图1-D表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 31—
36）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的七个数据条从左到右依次代表SEQ31-36及对照。

[0183] 图2为实施例3中含GLP-1类似物（SEQ ID NO 37—64）的降血糖实验；其中，图2-A表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 37—45）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十个数据条从左到右依次代表SEQ37-45及对照；图2-B表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 46—54）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十个数据条从左到右依次代表SEQ46-54及对照；
图2-C表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 55—64）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十一个数据条从左到右依次代表SEQ55-64及对照；

[0184] 图3为实施例4中含GLP-1类似物（SEQ ID NO 65—94）的降血糖实验；其中，图3-A表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 65—74）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十一个数据条从左到右依次代表SEQ65-74及对照；图3-B表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 75—
84）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十一个数据条从左到右依次代表SEQ75-84及对照；图3-C表示GLP-1类似物（SEQ ID NO 85—94）的降血糖实验，其中对应于每个时间点的十一个数据条从左到右依次代表SEQ85-94及对照；

[0185] 图4为血清样品中GLP-1类似物在不同时间点的浓度图；

[0186] 图5为实施例6中描述了GLP-1类似物在人血清中的稳定性的图；

[0187] 图6为实施例7中描述了GLP-1类似物在人血清中的稳定性的图。

[0188] 具体实施方式

[0189] 下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。本发明所用到的各种试剂均有市售。

[0190] 实施例１:多肽的固相合成

[0191] 使用Fmoc策略的固相多肽合成方法，使用CSBio公司生产的CS 336X型仪器进行本发明的多肽的合成。合成的方法按照生产商的仪器说明书进行。

[0192] 将制得的多肽使用HPLC C18半制备柱进行纯化，流动相为乙腈。经脱盐及冷冻干燥得到多肽冻干粉。本专利包含的多肽均含有二硫键，碳酸氢铵或其他还原剂用来形成多肽中的二硫键。

[0193] 实施例2：GLP-1类似物（通式II）相关的降血糖功能

[0194] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0195] SEQ ID NO 7: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAA；

[0196] SEQ ID NO 8: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAAAAAA；

[0197] SEQ ID NO 9: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYY；

[0198] SEQ ID NO 10: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYY；

[0199] SEQ ID NO 11: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GYYYYYYYYYY；

[0200] SEQ ID NO 12: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKK；

[0201] SEQ ID NO 13: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKK；

[0202] SEQ ID NO 14: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKK；

[0203] SEQ ID NO 15: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKK；

[0204] SEQ ID NO 16: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKK；

[0205] SEQ ID NO 17: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKK；

[0206] SEQ ID NO 18: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKK；

[0207] SEQ ID NO 19: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKKKKKKKKKKKKKKKK；

[0208] SEQ ID NO 20: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIII；

[0209] SEQ ID NO 21: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIII；

[0210] SEQ ID NO 22: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIII；

[0211] SEQ ID NO 23: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIII；

[0212] SEQ ID NO 24: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIII；

[0213] SEQ ID NO 25: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GIIIIIIIIIIIIIIIIII；

[0214] SEQ ID NO 26: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGRGIIIIIIIIIIIIIIIIIIII；

[0215] SEQ ID NO 27: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMM；

[0216] SEQ ID NO 28: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMM；

[0217] SEQ ID NO 29: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMM；

[0218] SEQ ID NO 30: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMM；

[0219] SEQ ID NO 31: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMM；

[0220] SEQ ID NO 32: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMM；

[0221] SEQ ID NO 33: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMM；

[0222] SEQ ID NO 34: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0223] SEQ ID NO 35: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0224] SEQ ID NO 36: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGRGMMMMMMMMMMMMMMMMMMMM；

[0225] 将上述多肽各1 mg溶于1 ml生理盐水，制成多肽溶液，将此多肽溶液皮下注射于昆明种小鼠（200 μl/只，6只/组，购自中科院上海实验动物中心），给药30分钟后将400微克葡萄糖注射于每只小鼠。分别于葡萄糖注射后4小时、24小时、48小时、72小时及96小时测定小鼠的血糖（注：每次测血糖前30分钟给相同剂量的葡萄糖），结果见图1，其中本实施例中的对照（空白）为向小鼠皮下注射生理盐水，用量200ul，葡萄糖的注射与其他试验组相同。

[0226] 实施例3：GLP-1类似物（通式III）相关的降血糖功能。

[0227] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0228] SEQ ID NO 37: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRR；

[0229] SEQ ID NO 38: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRR；

[0230] SEQ ID NO 39: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRR；

[0231] SEQ ID NO 40: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRR；

[0232] SEQ ID NO 41: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GRRRRRRRRRR；

[0233] SEQ ID NO 42: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAA；

[0234] SEQ ID NO 43: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAA；

[0235] SEQ ID NO 44: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAA；

[0236] SEQ ID NO 45: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAA；

[0237] SEQ ID NO 46: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GAAAAAAAAAA；

[0238] SEQ ID NO 47: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYY；

[0239] SEQ ID NO 48: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYY；

[0240] SEQ ID NO 49: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYY；

[0241] SEQ ID NO 50: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYY；

[0242] SEQ ID NO 51: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GYYYYYYYYYY；

[0243] SEQ ID NO 52: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKK；

[0244] SEQ ID NO 53: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKK；

[0245] SEQ ID NO 54: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKK；

[0246] SEQ ID NO 55: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKK；

[0247] SEQ ID NO 56: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GKKKKKKKKKK；或[0248] SEQ ID NO 57: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIII；

[0249] SEQ ID NO 58: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

[0250] SEQ ID NO 59: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIII；

[0251] SEQ ID NO 60: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GIIIIIIII；

[0252] SEQ ID NO 61: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMM；

[0253] SEQ ID NO 62: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMM；

[0254] SEQ ID NO 63: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMM；

[0255] SEQ ID NO 64: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GMMMMMMMM。

[0256] 将上述多肽各1 mg溶于1 ml生理盐水制成多肽溶液，将此多肽溶液皮下注射于小鼠（200μl/只，6只/组，购自中科院上海实验动物中心），给药30分钟后将400 微克葡萄糖注射于每只小鼠。分别于葡萄糖注射后4小时、24小时、48小时、72小时及96小时测定小鼠的血糖（注：每次测血糖前两个小时再次给相同剂量的葡萄糖），结果见图2，其中本实施例中的对照（空白）为向小鼠皮下注射生理盐水，用量200ul，葡萄糖的注射与其他试验组相同。

[0257] 实施例4：GLP-1类似物（通式IV）相关的降血糖功能

[0258] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0259] SEQ ID NO 65: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRA；

[0260] SEQ ID NO 66: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRY；

[0261] SEQ ID NO 67: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRK；

[0262] SEQ ID NO 68: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRI；

[0263] SEQ ID NO 70: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRM；

[0264] SEQ ID NO 71: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRAA；

[0265] SEQ ID NO 72: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRAA；

[0266] SEQ ID NO 73: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRYY；

[0267] SEQ ID NO 74: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRKKKK；

[0268] SEQ ID NO 75: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRIIIIII；

[0269] SEQ ID NO 76: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMM；

[0270] SEQ ID NO 77: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CRRRRRRMMMM；

[0271] SEQ ID NO 78: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAYY；

[0272] SEQ ID NO 79: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAYY；

[0273] SEQ ID NO 80: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAYY；

[0274] SEQ ID NO 81: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAIIII；

[0275] SEQ ID NO 82: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAIIIIII；

[0276] SEQ ID NO 83: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMM；

[0277] SEQ ID NO 84: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CAAAAAAMMMM；

[0278] SEQ ID NO 85: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CYYYYKK；

[0279] SEQ ID NO 86: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIRR；

[0280] SEQ ID NO 87: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIAA；

[0281] SEQ ID NO 88: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIYY；

[0282] SEQ ID NO 89: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIKK；

[0283] SEQ ID NO 90: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CIIIIIIIIMM；

[0284] SEQ ID NO 91: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMRR；

[0285] SEQ ID NO 92: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMAA:

[0286] SEQ ID NO 93: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMKK或

[0287] SEQ ID NO 94: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CMMMMII。

[0288] 将上述多肽各1 mg溶于1 ml生理盐水制成多肽溶液，将此多肽溶液皮下注射于小鼠（200μl/只，6只/组，购自中科院上海实验动物中心），给药30分钟后将400 微克葡萄糖注射于每只小鼠。分别于葡萄糖注射后4小时、24小时、48小时、72小时及96小时测定小鼠的血糖（注：每次测血糖前两个小时再次给相同剂量的葡萄糖），结果见图3，其中本实施例中的对照（空白）为向小鼠皮下注射生理盐水，用量200ul，葡萄糖的注射与其他试验组相同。

[0289] 实施例5：GLP-1类似物在人血清中的稳定性测定

[0290] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0291] SEQ ID NO 7: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GAA；

[0292] SEQ ID NO 13: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GKKKK；

[0293] SEQ ID NO 30: HAEGT FTSDVS CYLEGQACK EFIAW LVKGR GMMMMMMMM；

[0294] 用真空采血针（BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）取志愿者血样三份，静止20min后于离心机上4000rpm离心20分钟，取上层血清备用。

[0295] 将上述两 条多肽及GLP-1标 准品（购自 上海生工公 司，其序列 为：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG）各0.1mg溶于0.5 ml生理盐水中，充分溶解后分别加入到1ml血清中，将血清标记为空白组（0.1mg GLP-1溶于0.5 ml生理盐水中）、NO 7实验组（0.1mg 序列为SEQ ID NO 7的肽溶于0.5 ml生理盐水中）、NO 13实验组（0.1mg 序列为SEQ ID NO 13的肽溶于0.5 ml生理盐水中）、NO 30实验组（0.1mg 序列为SEQ ID NO
30的肽溶于0.5 ml生理盐水中）。于37℃孵育0, 0.5, 4, 8, 12, 24,48,72,96 h后，分别取50 μl血清混合物，用GLP-1 酶联免疫检测试剂盒（购自ALPCO Immunoassays）对各组血清进行检测，于SpectraMax M5 酶标仪上读取450nm的吸光度值，算出不同血清样品中GLP-1类似物在不同时间点的浓度，结果见图4。其中菱形代表对照组，正方形代表NO 5实验组，十字代表NO12实验组，正三角代表NO13实验组，倒三角代表NO21实验组。结果表明No 7、No 13及No 30实验组的半衰期>24h。

[0296] 实施例6：GLP-1类似物在人血清中的稳定性测定

[0297] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0298] SEQ ID NO 31: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GSS

[0299] SEQ ID NO 36: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GQQ

[0300] SEQ ID NO 56: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GSSSSSEEEEE[0301] 用真空采血针（BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）取志愿者血样三份，静止20分钟后于离心机上4000rpm离心20分钟，取上层血清备用。

[0302] 将 上 述 多 肽 及GLP-1 标 准 品（购 自 上 海 生 工 公 司，其 序 列 为：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG）各0.1mg溶于0.5 ml生理盐水中，充分溶解后分别加入到血清中，将血清标记为对照组（0.1mg GLP-1溶于0.5 ml生理盐水中）、SEQ ID NO 31: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GSS（0.1mg SEQ ID NO 31溶于0.5 ml生理盐水中）、SEQ ID NO 36: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GQQ（0.1mg SEQ ID NO
36溶于0.5 ml生理盐水中）和SEQ ID NO 56: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFICW LCKGR GSSSSSEEEEE（0.1mg SEQ ID NO 56溶于0.5 ml生理盐水中）。于37℃孵育0, 0.5, 4,
8, 12, 24, 48, 72及96 h后，分别取50 μl血清混合物， 用GLP-1 酶联免疫检测试剂盒（购自ALPCO Immunoassays）对各组血清进行检测，于SpectraMax M5 酶标仪上读取450nm的吸光值，算出不同血清样品中GLP-1类似物在不同时间点的浓度，结果见图5。其中倒三角代表代表对照组，空实心正方形代表NO 30实验组，实心右三角代表NO31实验组，上三角代表NO56实验组。结果表明NO30及No31实验组的半衰期为48h，NO56的半衰期也超过24小时。

[0303] 实施例7：GLP-1类似物在人血清中的稳定性测定

[0304] 本实施例中，采用的多肽如下：

[0305] SEQ ID NO 63: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CSSSSQQQQ[0306] SEQ ID NO 71: HAEGT FTSDVS SYLEGQA AK EFIAW LCKGR CSSSEEE；

[0307] 用真空采血针（BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ）取志愿者血样三份，而后立即于离心机上13000rpm离心20分钟，取上层血清备用。

[0308] 将 上 述 多 肽 及GLP-1 标 准 品（购 自 上 海 生 工 公 司，其 序 列 为： HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG）各0.1mg溶于0.5 ml生理盐水中，充分溶解后分别加入到血清中，将血清标记为空白组（0.1mg GLP-1溶于0.5 ml生理盐水中）、NO.28实验组（0.1mg 序列为SEQ ID NO 28的肽溶于0.5 ml生理盐水中）和NO 29实验组（0.1mg 序列为SEQ ID NO 29的肽溶于0.5 ml生理盐水中）。于37℃孵育0, 0.5, 1, 4, 8, 12,24及48h后，分别取50 μl血清混合物， 用GLP-1 酶联免疫检测试剂盒（购自ALPCO Immunoassays）对各组血清进行检测，于SpectraMax M5 酶标仪上读取吸光值，算出不同血清样品中GLP-1类似物在不同时间点的浓度，结果见图6。其中倒三角代表代表空白组， 空心圆圈NO 28实验组，实心圆圈代表NO29实验组。结果表明No28及No29实验组的半衰期为24h。