一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用

摘要

本发明涉及医药领域，公开了一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用，本发明所述药物组合物包括反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇。

权利要求

1.一种药物组合物，包括反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和

2-莰醇；

反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇的摩尔比为6：1～

2：1；

所述2-莰醇为(+)-2-莰醇。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇的摩尔比为4：1～2：1。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇的摩尔比为4：1或3：1或2：1。

4.根据权利要求1～3中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，还包括溶剂。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述溶剂为水、水溶性有机溶剂、或者为水溶性有机溶剂与水的混合物。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述水溶性有机溶剂为丙二醇、乙醇、聚乙二醇。

7.根据权利要求1～6中任意一项所述的药物组合物在制备治疗脑血管病药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脑血管病为缺血性脑血管病。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脑血管病为脑梗塞。

说明书

一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，特别涉及一种药物组合物及其应用，更具体涉及一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用。

背景技术

[0002] 脑血管病是一组严重危害人类健康的疾病，目前已成为人类致残和死亡的重要原因之一。脑血管病(cerebrovascular disease，简称CVD)是指由于脑血管异常导致的脑部病变。脑卒中(stroke)一般指急性脑血管疾病。

[0003] 脑血管病可简单分为两类，一类是由于血液流动的减少或断流造成的缺血性脑血管病，另一类是由于血管破裂造成出血性脑血管病。缺血性脑血管病主要是脑梗塞(包括脑血栓形成和脑栓塞)，除了脑梗塞以外，还有一种在24小时内可以完全恢复，不留任何后遗症的缺血性脑血管病，被称为短暂性脑缺血发作或一过性脑缺血发作，医生习惯简称为TIA，也叫作小中风。

[0004] 目前为止，尚没有很好的缺血性脑损伤的治疗手段。反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠是临床上使用较多的一种治疗缺血性脑损伤的药物，其结构式如下：

[0005]

[0006] 反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠

[0007] 反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠是特异性血栓素TXA2合成酶抑制剂，能阻碍前列腺素H2(PGH2)生成血栓烷A2，促使血小板所衍生的前列腺素H2转向内皮细胞。内皮细胞用以合成前列腺素I2(PGI2)，从而改善TXA2与PGI2的平衡，因此有抑制血小板的聚集和扩张血管的作用。临床上，反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠用于治疗急性血栓性脑梗塞和脑梗塞所伴随的运动障碍，以及改善蛛网膜下腔出血手术后的脑血管痉挛收缩和并发脑缺血症状。

[0008] 尽管反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠在治疗缺血性脑损伤方面取得了不错的成效，但是其副作用不容忽视。临床上观察到了多种不良反应，包括：(1)出血的倾向；(2)肝肾偶有谷-草转氨酶(GOT)、谷-丙转氨酶(GPT)、尿素氮(BUN)升高；(3)消化系统偶有恶心、呕吐、腹泻、食欲不振、胀满感；(4)过敏反应：偶见荨麻疹、皮疹等；
(5)循环系统：偶有室上心律不齐、血压下降；(6)其他：偶有头痛、发烧、注射部位疼痛、休克及血小板减少等；(7)严重时可出现出血性脑梗塞、硬膜外血肿、脑内出血、消化道出血、皮下出血等，上述这些不良反应降低了其在临床的应用效果。

[0009] 2-莰醇，包括(+)-2-莰醇和(-)-2-莰醇，其结构式如下：

[0010]

[0011] (+)-2-莰醇 (-)-2-莰醇

发明内容

[0012] 本发明的目的是提供一种药物组合物，包括反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇，此药物组合物配合使用可以提高治疗脑血管病的效果。

[0013] 优选地，反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇的摩尔比为9∶1～1∶9，优选的摩尔比为9∶1～1∶1，优选的摩尔比为6∶1～2∶1，优选的摩尔比为6∶1、4∶1、3∶1、2∶1。

[0014] 所述的2-莰醇，包括(+)-2-莰醇和(-)-2-莰醇。

[0015] 上述的药物组合物中还可以含有溶剂，可以使反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇片更好地混合。所述溶剂可以选用水、水溶性有机溶剂、或者水溶性有机溶剂与水的混合物。常用的水溶性有机溶剂主要有醇类溶剂、醚类溶剂、酮类溶剂等。常用的醇类溶剂有乙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇等；常用的醚类溶剂有乙二醇单乙基醚、乙二醇单丁基醚等；常用的酮类溶剂有丙酮、N-甲基-2-吡咯烷酮。水溶性有机溶剂优选使用丙二醇、乙醇、聚乙二醇。

[0016] 本发明的另一个目的是提供一种将上述药物组合物用于制备治疗脑血管病药物中的应用。

[0017] 优选地，将上述药物组合物用于制备治疗缺血性脑血管病或者脑梗塞药物中的应用。

[0018] 本发明所提供的药物组合物，包括反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇，细胞试验显示反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇具有增效作用，不同浓度配比(2∶1～6∶1)的组方保护细胞OGD损伤的能力优于单方用药。协同性研究显示反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇组合物不同浓度点均发现CI＜1，说明两者具有协同作用。本发明所述药物组合物在治疗脑血管病时，可以显著增加治疗效果，可以减低反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠的起效剂量，并且毒性小。

[0019] 本发明提供的反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与2-莰醇的复方药物组合，两者组合提高了对缺血性脑损伤的保护效果。另外，复方的使用不仅未产生毒性，还由于反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠给药浓度的减少，降低了不良反应发生的风险。

附图说明

[0020] 图1为不同浓度Na2S2O4诱导的PC12细胞建立氧糖剥夺(Oxygen-glucose deprivation，OGD)模型；

[0021] 图2为不同浓度配比的复方组合对PC12的细胞毒性作用；

[0022] 图3为复方与单方对PC12细胞OGD损伤的保护作用。

[0023] **，p＜0.01，表示反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比为3∶1复方组与相同总摩尔剂量的(+)-2-莰醇单方组相比；#，p＜0.05，表示摩尔比3∶1的复方组与相同总摩尔的反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠单方组相比。

[0024] 图4为反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇和复方(摩尔比为3∶1组)保护PC-12细胞OGD损伤的中效图；

[0025] 图5为反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇和复方(摩尔比为3∶1组)保护PC-12细胞OGD损伤的量效曲线。

具体实施方式

[0026] 本发明公开了一种药物组合物及其在制备治疗脑血管病药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0027] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

[0028] 实施例1

[0029] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠2.50g(克)[即0.01mol(摩尔)]，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml(毫升)，即得。

[0030] 实施例2

[0031] 取(+)-2-莰醇1.54g(即0.01mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0032] 实施例3

[0033] 取(-)-2-莰醇1.54g(即0.01mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0034] 实施例4

[0035] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠2.50g(即0.01mol)，(-)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0036] 实施例5

[0037] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠2.50g(即0.01mol)，(+)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0038] 实施例6

[0039] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠5.0g(即0.02mol)，(+)-2-莰醇0.77g(0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0040] 实施例7

[0041] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠5.0g(即0.02mol)，(-)-2-莰醇0.77g(0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0042] 实施例8

[0043] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠2.5g(即0.01mol)，(+)-2-莰醇0.39g(即0.0025mol)，加入160g的聚乙二醇4000溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0044] 实施例9

[0045] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠7.5g(即0.03mol)，(+)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0046] 实施例10

[0047] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠7.5g(即0.03mol)，(-)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0048] 实施例11

[0049] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠3.75g(即0.015mol)，(+)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0050] 实施例12

[0051] 取反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠3.75g(即0.015mol)，(-)-2-莰醇0.77g(即0.005mol)，加入160g的丙二醇溶液中，搅拌使完全溶解，缓缓加入注射用水使之溶解并至1000ml，即得。

[0052] 实施例13：保护缺血性脑损伤的药物组合物复方比例筛选

[0053] 实验目的：筛选反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇复方比例范围。

[0054] 受试药物：反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠，原料药白色粉末，购自美国施瑞医药有限公司(武汉)，货号3B2-0700，批号WH20070201；储存液：100mM，DMSO溶解。

[0055] (+)-2-莰醇，原料药白色粉末，来自江苏先声药物研究有限公司，批号：090907-1.储存液：100mM，DMSO溶解。

[0056] 实验 试剂：MTS((3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxy-methoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)用于检测细胞活力，购自Promega公司，货号G3581。

[0057] 实验方法：

[0058] 1、化学性缺氧模型条件摸索

[0059] PC12细胞以105个细胞/mL的密度，100μL/孔接种至96孔培养板中，继续培养24h(小时)后用于化学性OGD(氧糖剥夺)模型造模：吸弃96孔板中原培养基(DMEM+10％FB S+5％HS)上清，用无糖DMEM洗两次。

[0060] 试验分组：

[0061] 正常组：加入含糖含氧的DMEM培养基，继续培养4h后换成正常的培养基恢复糖氧继续培养24h。

[0062] 模型组：加入含有不同浓度Na2S2O4(0.3125mM，0.625mM，1.25mM，2.5mM，5.0mM，10.0mM)的无糖DMEM培养基继续培养PC12细胞进行OGD处理，4h后换成正常的培养基恢复糖氧继续培养24h。然后，在正常组和模型组的培养基中直接加入10μL MTS，2h后酶标仪上OD492读板，计算细胞活性，从而确定合适化学性OGD条件。

[0063] 2、检测药物对原代神经元细胞的毒性

[0064] PC12细胞以105个细胞/mL的密度，100μL/孔接种至96孔培养板中，继续培养24h后，培养基换成含有反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇或反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇不同比例的混合物的培养基(DMEM+10％FB S)培养24h，药物总浓度设置0.16μM，0.8μM，4μM，20μM，
100μM共5个浓度，其中反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇的混合物设置反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比为9∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶9，MTS检测OD492计算细胞活力，从而确定药物的细胞毒性。

[0065] 3.筛选能够保护细胞OGD损伤的复方比例

[0066] 在保证无毒(或低毒)的药物浓度条件下，检测反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠或(+)-2-莰醇，以及两者组合复方对神经元OGD损伤的保护作用。

[0067] 不同组方用药设计如下：反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇或反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇不同比例的混合物设置0.16μM，0.8μM，4μM，20μM，100μM共5个浓度，其中反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇的混合物每个浓度设置反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比为9∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶9，共计35组，每组n＝3。

[0068] 为了进一步扩大筛选有效组合范围，不同用药组设计如下：反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠、(+)-2-莰醇或反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇不同比例的混合物设置0.16μM，0.8μM，4μM，20μM，100μM共5个浓度，其中反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇的混合物每个浓度设置反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比为2∶1、4∶1、6∶1共计27组，每组n＝3。

[0069] 4.反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇协同性分析

[0070] 为了分析反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇摩尔比为3∶1时，保护细胞OGD损伤的协同作用，扩大样本量，n＝6。

[0071] 药物保护效应(Fa)计算公式为：Fa＝(OD给药组-OD模型组)/(OD正常组-OD模型组)[0072] 由此，得出药物剂量和药效之间的关系，利用CalcuSyn软件计算协同系数CI值，从而分析药物之间的协同性。CI＞1，表示两药有拮抗作用；CI＝1，表示两药有相加作用；CI＜1，表示两药有协同作用。

[0073] 实验结果：

[0074] 1.化学性缺氧模型条件摸索

[0075] 根据图1结果发现，随着Na2S2O4浓度的增大，OGD后在恢复糖氧24h后PC12细胞活力呈现剂量依赖性降低。选择含10mM Na2S2O4的无糖培养基作为PC12细胞化学性缺氧时所用培养基(见图1)。

[0076] 2.不同浓度配比的复方组合对PC12细胞毒性

[0077] 由图2可见，在所有含有反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠或(+)-2-莰醇单方和反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇不同比例的复方配比各药物浓度点中，均未发现药物对PC12有明显细胞毒作用(见图2)。

[0078] 3.不同浓度配比的复方组合对PC12细胞OGD损伤的保护作用

[0079] 结果如表1所示，O，表示反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠；B，表示(+)-2-莰醇；O:B，表示反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比复方组合。

[0080]

[0081]

[0082] 4.反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇协同性研究

[0083] 为了研究反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和2-莰醇组合物增效是否是发生协同作用，我们选用两者摩尔比为3∶1配比组合，扩大实验样本量(n＝6)来进行实验。实验结果表明，复方反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠∶2-莰醇为3∶1组的保护作用明显强于单方组(见图3)。

[0084] 由中效图和量效曲线图，发现复方反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠∶2-莰醇摩尔比为3∶1组保护效应(Fa)优于单方组(见图4-5)。

[0085] 由表3可见，反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠与(+)-2-莰醇摩尔比3∶1组合，不同浓度点均发现CI＜1，说明反式-3-[4-(1H-咪唑-1-基甲基)苯基]-2-丙烯酸钠和(+)-2-莰醇摩尔比为3∶1时有协同作用。

[0086] 表3摩尔比3∶1组合Fa-CI关系及协同性分析*

[0087]

[0088] *，根据周特氏方程，利用CalcuSyn软件计算协同系数CI值，从而分析药物之间的协同性。CI＞1表示拮抗作用，CI＝1表示相加作用，CI＜1表示协同作用。

[0089] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。