本发明公开一种兴安悬钩子生物总碱的制备方法，该方法是将悬钩子果洗净，加15倍量85％的甲醇回流提取120分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至3波美，用体积比1∶1的盐酸∶水将浓缩液pH值调至2.5，放置20分钟，滤过；滤液上广谱型大孔树脂吸附柱，收集洗脱液，回收甲醇，浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并以体积比3∶1的丙酮∶甲醇洗杂质，继用体积比7∶1的丙酮∶甲醇洗脱，收集洗脱液；将所收集到的生物总碱洗脱液进行精制得悬钩子生物总碱成品，其含量在65％以上。本发明方法的最大特点是利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高。
1.一种兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
将悬钩子果洗净，加入原料质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美度浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40分钟后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～
80％的甲醇洗脱，得生物总碱半成品洗脱液，生物总碱半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1～3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5～7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得生物总碱洗脱液；将生物总碱洗脱液进行精制得悬钩子生物总碱。
2.如权利要求1所述的兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
称取洗净的悬钩子果，加入原料质量20倍量的85％甲醇回流提取180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美度浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得生物总碱半成品洗脱液，生物总碱半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得生物总碱洗脱液；将生物总碱洗脱液进行精制得悬钩子生物总碱。
3.如权利要求1或2所述的兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法中所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟
4.如权利要求1或2所述的兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法中所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物置于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶，硅胶活化条件为110摄氏度30分钟。
5.如权利要求1或2所述的兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制，按4g/100ml生物总碱洗脱液加入针剂活性炭，25～40摄氏度搅拌20～40分钟，滤过；滤液回收混合试剂后浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇
40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得悬钩子生物总碱成品。
6.如权利要求5所述的兴安悬钩子生物总碱的制备方法，其特征在于该方法中精制过程包括如下步骤：
按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得悬钩子生物总碱成品。
一种兴安悬钩子生物总碱的制备方法
技术领域：
[0001] 本发明属于天然有机化学领域，涉及一种生物总碱的制备方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法制备兴安悬钩子生物总碱的方法。背景技术：
[0002] 悬钩子Rubus corchorifolius Linn.f.，又名三月泡、四月泡、山抛子、刺葫芦、山莓、馒头菠、高脚菠、龙船泡、牛奶泡、树莓、泡儿刺，系蔷薇科Rosaceae，蔷薇亚科悬钩子属Rubus，L中的一种落叶灌木。兴安悬钩子中含有油酸、亚油酸、亚麻酸、软脂酸，山萘素苷、异鼠李素等黄酮类化合物，还含有萜类化合物、鞣质和生物碱。
[0003] 悬钩子生物总碱为兴安悬钩子果实提取物的有效成分，经科学研究及临床应用证明，悬钩子生物总碱具有对高脂饮食动物模型中肝细胞脂肪变性及肝内脂类聚集有明显的改善或逆转效果，并能降低血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，升高高密度脂蛋白胆固醇含量，悬钩子总生物碱对非酒精性脂肪肝有较好的治疗作用，尤其针对单纯性脂肪肝的药效较佳。近年来，人们发现天然植物兴安悬钩子果实中含有大量的生物碱，从中提取生物碱并且取得了可喜进展，原料兴安悬钩子来源较广。
发明内容
[0004] 本发明目的在于提供一种兴安悬钩子生物总碱的制备方法；本发明目的还在于提供一种方便快捷、原料来源丰富、生产成本低廉、分离效果明显、提取纯度高的利用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化悬钩子生物总碱的方法。
[0005] 本发明目的是通过如下技术方案实现的。
[0006] 本发明兴安悬钩子生物总碱的制备方法包括如下步骤：
[0007] 将悬钩子果洗净，加入原料质量15～20倍量的85％～100％甲醇回流提取120～180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至3～5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.5～3，放置20～40分钟后滤过；滤液上HPD400、HPD100、DM-130或AB-
8广谱型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％～20％的甲醇洗杂质，然后用50％～80％的甲醇洗脱，得生物总碱半成品洗脱液，生物总碱半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1～3∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5～7∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得生物总碱洗脱液；将生物总碱洗脱液进行精制得悬钩子生物总碱，其含量在66％以上。
[0008] 本发明兴安悬钩子生物总碱的制备方法包括如下步骤：
[0009] 称取洗净的悬钩子果，加入原料质量20倍量的85％甲醇回流提取180分钟，滤过；滤液回收甲醇后浓缩至5波美得浓缩液，然后用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至3，放置40分钟后滤过；滤液上HPD400型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用5％的甲醇洗杂质，然后用50％的甲醇洗脱，得生物总碱半成品洗脱液，生物总碱半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为1∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为5∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得生物总碱洗脱液；将生物总碱洗脱液进行精制得悬钩子生物总碱。
[0010] 所述大孔树脂吸附步骤采用湿法装柱，保留液面，将调pH值后的滤液通过吸附柱，流速每分钟0.05ml/g树脂。
[0011] 所述硅胶层析步骤采用湿法装柱，保留液面，将半成品按重量1∶1拌活化后硅胶，并将拌好的混合物至于硅胶柱上方，洗脱流速每分钟0.1ml/g硅胶。硅胶活化条件为，110摄氏度30分钟。
[0012] 本发明中采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25～40摄氏度搅拌20～40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用7～9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得悬钩子生物总碱成品。
[0013] 本发明中精制过程包括如下步骤：
[0014] 按4g/100ml洗脱液加入针剂活性炭，25摄氏度搅拌40分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体；中间体用9倍甲醇40摄氏度热溶，滤过；滤液放凉析出晶体，抽滤得悬钩子生物总碱成品。
[0015] 本发明中精制过程中成品用7倍甲醇重结晶，过滤母液，回收甲醇，浓缩干燥得生物总碱半成品。
[0016] 本发明应用大孔吸附树脂-硅胶层析耦合法富集纯化悬钩子生物总碱，对悬钩子生物总碱的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量45％以上的生物总碱半成品和含量66％以上的生物总碱终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
[0017] 本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附生物总碱，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
[0018] 本发明选用硅胶层析法纯化并结合活性炭与重结晶精制，分离效果更佳。具体实施方式：
[0019] 实施例1：
[0020] 称取悬钩子果10kg，洗净，加18倍量90％的甲醇回流提取140分钟，滤过；滤液，回收甲醇，浓缩至4波美，用体积比1∶1的盐酸∶水溶液将浓缩液pH值调至2.8，放置40分钟，滤过；滤液上HPD100型大孔树脂吸附柱，吸附完毕用水洗杂质，再用15％的甲醇洗杂质，然后用70％的甲醇洗脱，得生物总碱半成品洗脱液，生物总碱半成品洗脱液回收甲醇后浓缩干燥得生物总碱半成品；将所得生物总碱半成品上硅胶层析柱，并用丙酮∶甲醇的体积比为2∶1的丙酮与甲醇混合物洗杂质，然后用丙酮∶甲醇的体积比为6∶1的丙酮与甲醇混合物洗脱，得生物总碱洗脱液2L；加入80g针剂活性炭，30摄氏度搅拌30分钟，滤过；滤液，回收混合试剂，浓缩干燥得中间体35g；中间体用8倍甲醇40摄氏度热溶，滤过：滤液放凉析出晶体，抽滤得悬钩子生物总碱成品20g，含量68％。
[0021] 实施例2：
