雷公藤多甙对治疗免疫重建不全的新用途

摘要

本发明的目的是提供雷公藤多甙及其主要活性成分雷公类酯醇在治疗抑制过度免疫激活及炎症的应用，主要应用于治疗免疫重建不全相关疾病方面。所述雷公藤多甙的有效成分为雷公藤内酯醇，其分子式为C20H24O3，分子量为360.4，化学式为7，8，9，11-β-12，13-α-环氧基-14β-羟基松香-3，4-α，β-不饱和γ-内酯。

权利要求

1.雷公藤多甙在制造药物中的用途，该药物用于治疗免疫重建不全，所述雷公藤多甙的有效成分为雷公藤内酯醇，其分子式为C20H24O3，分子量为360.4。

2.雷公藤内酯醇在制造药物中的用途，该药物用于治疗免疫重建不全，所述雷公藤内酯醇分子式为C20H24O3，分子量为360.4。

说明书

雷公藤多甙对治疗免疫重建不全的新用途

技术领域

[0001] 本发明属药物用途，涉及雷公藤多甙对免疫重建不全患者的治疗的应用。

背景技术

[0002] 雷公藤多甙是一种传统中药，已在临床应用于治疗炎症性疾病，如类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等。体外研究显示雷公藤多甙对免疫的影响包括：免疫抑制、抗炎和抗增殖效果，该中药可在转录水平抑制淋巴细胞激活，起到抑制过度的免疫激活的作用。

[0003] 获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所致致死性传染病，随着高效抗逆转录病毒治疗(Highly Active Antiretroviral Therapy，HAART)在临床的广泛应用，AIDS相关疾病的病死率显著下降，而非AIDS相关疾病的病死率显著上升。非AIDS相关疾病临床表现多样，包括心血管疾病、肾脏疾病、认知功能障碍、骨质疏松、肝硬化等。

[0004] 免疫重建指艾滋病患者、骨髓移植或其它存在严重免疫抑制的患者免疫系统功能恢复的过程。而当免疫重建过程产生障碍时称之为免疫重建不全。免疫重建不全主要发生于艾滋病患者，这些患者又被称为免疫无应答(Immune non-responders，INRs)。对于艾滋病患者而言，免疫无应答是指经过正规抗病毒治疗1年后，病毒载量在检测下限以下，但CD4细胞持续不增长的情况(<250／uL)。此类患者因易并发各种机会性感染、肿瘤等，病死率很高[1-2】】目前国际尚无安全有效的治疗方案。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供雷公藤多甙及其主要活性成分雷公藤内酯醇在治疗抑制过度免疫激活及炎症的应用，主要应用于治疗免疫重建不全相关疾病方面。

[0006] 目前雷公藤多甙主要以片剂形式生产销售，其有效活性成分为雷公藤内酯醇，分子式C20H24O3，分子量为360.4，化学式为7，8，9，11-β-12，13-α-环氧基-14β-羟基松香-3，4-α，β-不饱和γ-内酯，结构式如图1所示。雷公藤多甙主要应用于自身免疫性疾病，目前国际上尚无将其应用于免疫重建不全患者的相关研究，这是首次评价雷公藤多甙对免疫激活及炎症抑制作用效力的研究。入选本试验为免疫学无应答者，其定义为经抗逆转录病毒治疗后血浆HIV载量<50copies／ml大于12月并且CD4+T淋巴细胞计数仍小于200／ul或CD4+T细胞增长小于20％。这是国际上首次评价雷公藤多甙对免疫重建的作用。本申请人认为HIV感染引起的异常免疫激活及炎症是非AIDS相关疾病与免疫重建不全的重要发病机制，抑制过度的免疫激活与炎症，可能起到促进HIV／AIDS患者CD4+T淋巴细胞恢复，降低非AIDS相关疾病的发生，本发明研究并发现了雷公藤多甙及其主要有效活性成分雷公藤内酯醇对于HIV／AIDS患者过度免疫激活与炎症的抑制作用，为HIV／AIDS患者免疫重建不全及非AIDS相关疾病的治疗开创了新的治疗药物。

[0007] 本发明的意义在于：(1)能提高HIV／AIDS患者CD4+T淋巴细胞，促进免疫功能重建，可用于免疫学无应答者的治疗。该药促进CD4+T淋巴细胞的机制是通过降低白介素-6(IL-6)等炎症因子水平介导的。(2)能够抑制HIV／AIDS患者的过度的免疫激活及炎症水平，而HIV／AIDS患者的非AIDS疾病的重要发病机制就是免疫激活与炎症的持续存在，为治疗HIV／AIDS患者的非AIDS疾病提供了依据。

附图说明

[0008] 结合附图和本发明优选实施例的详细说明阅读本发明能够更好地理解本发明上述和其它目的、特征、优势和工业重要性。

[0009] 图1是主要有效成分的结构图；

[0010] 图2是描述本发明技术方案的研究流程图；

[0011] 图3是对HIV／AIDS患者的CD4+T淋巴细胞计数的影响示意图；

[0012] 图4是对HIV／AIDS患者的CD4+T淋巴细胞激活标志物的影响示意图；

[0013] 图5是对HIV／AIDS患者的CD8+T淋巴细胞激活标志物的影响示意图；

具体实施方式

[0014] 目前雷公藤多甙主要以片剂形式生产销售，其有效活性成分为雷公藤内酯醇，分子式C20H24O3，分子量为360.4，化学式为7，8，9，11-β-12，13-α-环氧基-14β-羟基松香-3，4-α，β-不饱和γ-内酯，结构式如图1所示。对于本发明而言，可以采用各个厂家生产的该类药品，例如浙江得恩德制药有限公司生产的雷公藤多甙片，规格为10mg/片。

[0015] 雷公藤多甙主要应用于自身免疫性疾病，目前国际上尚无将其应用于HIV／AIDS患者的相关研究，这是首次在HIV／AIDS患者中评价雷公藤多甙对免疫激活及炎症抑制作用效力的研究。入选本试验为免疫学无应答者，其定义为经抗逆转录病毒治疗后血浆HIV载量<50copies／ml大于12月并且CD4+T淋巴细胞计数仍小于200／ul或CD4+T细胞增长小于20％。这是国际上首次在HIV／AIDS患者中评价雷公藤多甙对免疫重建的作用。本申请人认为HIV感染引起的异常免疫激活及炎症是非AIDS相关疾病与免疫重建不全的重要发病机制，抑制过度的免疫激活与炎症，可能起到促进HIV／AIDS患者CD4+T淋巴细胞恢复，降低非AIDS相关疾病的发生，本发明研究并发现了雷公藤多甙及其主要有效活性成分雷公藤内酯醇对于HIV／AIDS患者过度免疫激活与炎症的抑制作用，为HIV／AIDS患者免疫重建不全及非AIDS相关疾病的治疗开创了新的治疗药物。

[0016] 下面介绍本发明方案的研究方法与步骤。

[0017] 1.入选标准：年龄18-65岁；经抗病毒治疗后血浆HIV载量<40拷贝／ml大于12月并且CD4+T淋巴细胞计数仍小于200／ul或CD4+T细胞增长小于20％；自愿签署知情同意书，并能保证接受随访；在试验进行过程中无计划迁离当前的试验地点。

[0018] 排除标准：入选时有现症(国家艾滋病诊疗指南规定的)机会性感染或AIDS-相关的恶性肿瘤；入选前3个月发生过机会性感染，但是调查者认为病情稳定小于14天的患者；筛选期内检测到下列结果：血色素<9g／dl、白细胞计数<3000／ul、嗜中性粒细胞数<1500／ul、血小板计数<75000／ul、血肌酐>1.5倍ULN、天门冬氨酸氨基转移酶／丙氨酸氨基转移酶/碱性磷酸酶>3倍ULN、总胆红素>2倍ULN；妊娠期、哺乳期妇女；有生育计划者；有心血管疾病者。

[0019] 2.研究流程

[0020] 研究人员筛选出符合方案要求的受试者后，按研究方案在抗病毒的基础上给予雷公藤多甙。每日服用三次，每次20mg，连服12个月。在治疗后的每3个月进行随访一次，共随访18个月。在服药前采用流式细胞仪检测患者CD4+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞激活标志物、CD8+T淋巴细胞激活标志物、炎症因子等指标。服药3个月后，复查上述指标，并评价患者是否出现不良反应。详细的流程见图2。

[0021] 结果显示：试验中的患者服用雷公藤多甙3个月后，CD4+T淋巴细胞较服药前出现显著的升高，试验中的患者服药前CD4+T淋巴细胞均值为194±72／ul，服药3个月后CD4+T淋巴细胞均值较服药前出现显著的升高，达222±58／ul(P<0.05)(图3)。同时发现CD4T淋巴细胞激活标志物CD38+HLA-DR+CD4+／CD4+，CD38+CD4+／CD4+比例较服药前显著下降(如图4所示)，CD8T淋巴细胞激活标志物CD38+HLA-DR+CD8+／CD8+，CD38+CD8+／CD8+比例较服药前显著下降(如图5所示)，炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)与单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平较服药前显著降低(如表1所示)，表明雷公藤多甙能够促进免疫无应答的HIV／AIDS患者CD4+T淋巴细胞恢复，能够降低HIV／AIDS患者过度的免疫激活及炎症的水平，为雷公藤多甙治疗HIV／AIDS患者免疫无应答及非AIDS相关疾病提供理论依据。

[0022] 表1雷公藤多甙对HIV／AIDS患者的炎症因子的影响

[0023]

[0024] 以下结合实施例进一步说明本发明的试验和发明内容。

[0025] 对符合入选条件的HIV／AIDS患者在服药前采用流式细胞仪对CD4+T淋巴细胞计数、CD4+T淋巴细胞激活标志物、CD8+T淋巴细胞激活标志物及炎症因子进行检测。服用雷公藤多甙3个月后随诊，对上述指标进行检测。

[0026] 实验步骤与方法

[0027] 1.流式细胞仪检测

[0028] 实验步骤：

[0029] 流式细胞仪标本的制备：(以下操作均在室温下进行)：

[0030] 1)加单克隆抗体：取支标本检测管，按如下顺序加入10μl相应的单克隆抗体：FITC-γ ／PE-γ ／PE-cy5-γ；FITC-CD3／ PE-CD8／ PEcy3-CD4；FITC-HLA-DR ／PE-CD38／Pecy5-CD8；FITC-14／PE-16；

[0031] 2)每管再分别加入100μl混匀全血，振荡混匀后避光孵育20分钟；

[0032] 3)溶血：在每管中加入500μl免洗溶血素，振荡混匀，避光溶血10分钟；

[0033] 4)洗涤：于每管中加入2ml洗液，振荡混匀，1500转／分钟的速度下，离心5分钟，离心完毕后，弃上清；加入1ml洗液，振荡混匀，2小时内完成检测；

[0034] 检测：用FLOW CHECK校准流式细胞仪的光路和液路，确定其CV值小于2％。用FITC-γ／PE-γ／PE-cy5-γ管设立荧光染色阴阳分界线，然后进行标本检测，检测过程中，根据仪器分析软件(EPCIS XL-II)进行荧光补偿，每管至少取淋巴细胞群中颗粒数20000个。

[0035] 2.流式细胞仪测定炎症因子方法：

[0036] 1)稀释待检测的血浆样本，使用Assay Diluent对待检测的患者冻存血浆进行1∶5稀释。

[0037] 2)配制标准品，使用AssayDiluent按照1∶256、1∶128、1∶64、1∶32、1∶16、1∶8、1∶4、1∶2、1∶1倍比稀释。

[0038] 3)配制捕获微球，吸出所需要量的每种微球入离心管充分混匀，加入1ml洗液洗涤1次，加入稀释液，充分混悬。

[0039] 4)配制荧光检测试剂，吸出所需要量的荧光检测试剂入稀释液，充分混悬。

[0040] 5)每个检测管中加入50ul配制好的捕获微球。

[0041] 6)向每个检测管中加入配制好的标准样品及稀释好的待检测样本[0042] 7)室温、避光孵育1小时。

[0043] 8)每管中加入检测试剂50ul。

[0044] 9)室温、避光孵育2小时。

[0045] 10)每管中加入1ml洗液，离心2000转／分，5分钟。

[0046] 11)小心弃掉上清。

[0047] 12)每管中加入300ul洗液。

[0048] 13)上机检测样本。

[0049] 本发明的保护范围并不限于上述的实施例，显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变形而不脱离本发明的范围和精神。倘若这些改动和变形属于本发明权利要求及其等同技术的范围内，则本发明的意图也包含这些改动和变形在内。