一种抑制鳗弧菌的中草药配方

摘要

本发明公开了一种抑制鳗弧菌的中草药配方，特点是包括五味子、石榴皮、艾叶、芦荟、枯矾、儿茶、稀签草、地榆、半边莲、功劳叶、槟榔、木瓜、乌桕、灸没药、白头翁、茵陈、天南星、黄芩、穿心莲、虎杖片、使君子、蒲公英、蛇麻子、马齿苋、连翘、龙胆草、苍术、丹皮、牵牛子、公丁香、紫花地丁、威灵仙、龙葵、五倍子、黄芪、白花蛇舌草、柴胡、吴芋、乌梅、大青叶、车前草、羲术中的至少一种，其中石榴皮、艾叶、五味子和芦荟以1：4：1：4的质量比混合而成的配方抑菌效果最佳，优点是天然、无毒无残留、不产生耐药性、价格低廉。

权利要求

1. 一种抑制鳗弧菌的中草药组合物，其特征在于：该中草药由以下原料和重量比组 成：石榴皮、艾叶、五味子和芦荟以1 :4 :1 :4的比例混合而成。

说明书

一种抑制鳗弧菌的中草药配方

技术领域

[0001] 本发明涉及一种中草药配方，尤其是涉及一种抑制鳗弧菌的中草药配方。

背景技术

[0002] 鳗弧菌（Κζϋο 是一种有鞭毛的革兰氏阴性条件致病细菌，当水产 养殖动物在不良的环境条件下，遭遇不利刺激或受伤时，会诱发疾病的产生。鳗弧菌能引起 世界范围内的50多种海、淡水养殖鱼类及其它水产动物发病，流行广泛，温带和亚寒带都 常有发生。我国的林克冰等在1999年就有关于弧菌在我国危害的报道。鳗弧菌的感染途 径有多种，主要包括皮肤、鳃、侧线以及肠道等。感染后会引起全身性的组织病变，不同的鱼 虾感染鳗弧菌后会有不同的症状，但主要症状是体表出血。由鳗弧菌引起的细菌性败血症 是近年来在我国流行范围广，感染鱼类死亡率高，危害损失大的水产养殖鱼类急性传染性 疾病，每年给水产养殖造成巨大经济损失。据报道，鳗弧菌能感染牙鲆、鲈鱼、鲑鱼、黄鱼、虹 鳟、鳗鲡、香鱼、鳕鱼、大菱鲆等；它是多种对虾的致病菌，对罗氏沼虾、栉孔扇贝等虾类、贝 类的免疫系统具有强烈的刺激作用，是弧菌中危害较高的菌。

[0003] 目前对于鳗弧菌引起的疾病的防治手段主要是利用化学药品、抗生素或减活、灭 活疫苗，其中主要以投放喂食抗生素为主要手段。但长期滥用药物或抗生素会引起水环境 污染，从而导致养殖环境恶化，生态平衡失调，并且细菌还会产生耐药性，药物残留还对食 用者构成潜在的威胁，而中草药无抗药性，无残留，无环境污染，不引发药源性疾病且抑菌 杀菌效果明显，越来越引起人们的关注。

发明内容

[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种不仅可以避免细菌耐药性、毒素积累和环 境污染，而且可以降低生产成本的抑制鳗弧菌的中草药配方。

[0005] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种抑制鳗弧菌的中草药配方， 包括五味子、石榴皮、艾叶、芦荟、枯矾、儿茶、稀签草、地榆、半边莲、功劳叶、槟榔、木瓜、乌 桕、灸没药、白头翁、茵陈、天南星、黄苳、穿心莲、虎杖片、使君子、蒲公英、蛇麻子、马齿苋、 连翘、龙胆草、苍术、丹皮、牵牛子、公丁香、紫花地丁、威灵仙、龙葵、五倍子、黄芪、白花蛇舌 草、柴胡、吴芋、乌梅、大青叶、车前草、羲术中的至少一种。

[0006] 该中草药由以下原料和重量比组成：石榴皮、艾叶、五味子和芦荟以1 :4 :1 :4的 比例混合而成。该配方组成的抑菌药剂，抑菌效果最佳，其最小抑菌浓度MIC为3. 906mg/ mL〇

[0007] 与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种抑制鳗弧菌的中草药配方，采用 中草药防治鱼病，不仅可以避免细菌耐药性、毒素积累和环境污染等问题，而且可以降低 生产成本，具有天然、无毒无残留、不产生耐药性、价格低廉等优点，不会对人和动物造成毒 副作用，并且制作工序简单，容易操作，易于实现工厂化生产。

具体实施方式

[0008] 以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

[0009] 实施例1

[0010] 本发明一种抑制鳗弧菌的中草药配方，下述42种中草药对鳗弧菌均具不同程度 的抑菌作用。

[0011] 首先，五味子、石榴皮和艾叶对鳗弧菌的抑菌作用最强，最小抑菌浓度（MIC)均达 到了 12. 5mg/mL。其次，芦荟、枯矾、儿茶、稀签草对鳗弧菌也有较强的抑菌作用，其MIC均为 25mg/mL。此外，地榆、半边莲、功劳叶、槟榔、木瓜、乌桕、灸没药、白头翁、茵陈、天南星、黄芩 等植物对鳗弧菌也有一定的抑菌作用，其MIC均为50mg/mL。穿心莲、虎杖片、使君子、蒲公 英、蛇麻子、马齿苋、连翘、龙胆草、苍术、丹皮、牵牛子、公丁香、紫花地丁、威灵仙、龙葵、五 倍子、黄芪、白花蛇舌草、柴胡、吴芋、乌梅、大青叶、车前草、羲术的23种草药对鳗弧菌的抑 制作用并不很明显，其MIC均为100mg/mL。因此，可选用上述42种中草药中的至少一种作 为鳗弧菌的抑制药剂(单一一种药剂或任意几种的混合药剂)，具体见表1。

[0012] 表1中草药对鳗弧菌的最小抑菌浓度MIC (mg/ml)

[0013]

[0014] 实施例2

[0015] 本发明一种抑制鳗弧菌的中草药配方，该中草药由以下原料和重量比组成：石榴 皮、艾叶、五味子和芦荟以1 :4 :1 :4的比例混合而成。结果表明，该配方对鳗弧菌具有显著 的抑菌效果，均比单味药及其它组合的中草药复合配方的抑菌效果明显，其最小抑菌浓度 MIC 为 3. 906mg/mL。

[0016] 石榴皮、艾叶、五味子和芦荟以1 :1 :1 :1的比例混合而成的中草药复合配方最小 抑菌浓度MIC为25mg/mL，石榴皮、艾叶、五味子和芦荟以4 :1 :4 :8的比例混合而成的中草 药复合配方最小抑菌浓度MIC为26. 563mg/mL，均没有最佳中草药配伍的抑菌效果好。

[0017] 实施例3

[0018] 中草药对鳗弧菌的体外抑菌试验

[0019] 1、中草药选材及其药液制备

[0020] 本研究选取的86种中草药均购自宁波市北京市同仁堂药店。86种中草药分别 是：五味子、五倍子、乌梅、威灵仙、儿茶、地锦草、紫花地丁、枯矾、夏枯草、鹅不食、诃子肉、 苏叶、漏芦子、决明子、木瓜、板蓝根、黄连、千里光、芦荟、公丁香、乌桕、艾叶、虎杖片、鹤虱、 龙胆草、蛇莓草、功劳叶、连翘、没药、大黄、佩兰、榧子、茵陈、黄柏、吴芋、穿心莲、苏子、金银 花、马齿览、黄苗、甘草、天南星、青蒿、半边莲、白巧、石菖蒲、白£、莱菔子、紫毙、白花蛇舌 草、鱼腥草、苦参片、蒲公英、首乌、苍术、篇蓄、紫苏梗、覆盆子、百部、厚朴、蛇麻子、马鞭草、 大青叶、百鲜皮、丹皮、牛蒡子、知母、贯众、乌药、郁金、白果、黄芩、牵牛子、车前草、使君子、 龙葵、白头翁、重楼、北柴胡、野菊花、地榆、石榴皮、稀签草、生紫、槟榔、羲术。

[0021] 将86种中草药分别进行粉碎、称重，按料液比1:10浸泡30min，用文火煎煮煮沸 30min，过滤，滤渣再进行第二次水提，方法同前，合并两次滤液，将两次合并的滤液在100°C 下加热浓缩至150mL，浓度为200mg/ml。其中挥发性中药要注意砂锅的盖子不能掀开，以免 有效成分的散失。高温灭菌后置4°C冰箱中保存备用。使用前要先离心，然后再超净工作台 上进行分装。

[0022] 2、中草药对鳗弧菌最小抑菌浓度的测定

[0023] 采用二倍稀释法测定各药物的最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC)。中草药煎煮液的质量浓度为200 mg/mL，然后采用二倍稀释法稀释 中草药原液，用无菌微量移液器吸取20 μ L活化的鳗弧菌菌液(鳗弧菌液的浓度为5. 0 X 107 个/mL)，接种到lmL含不同中草药浓度梯度的试管中(第1到第8管的质量浓度依次为100 mg/mL,50 mg/mL,25 mg/mL, 12.5 mg/mL,6.25 mg/mL,3.13 mg/mL, 1.56 mg/mL和 0.78 mg/ mL)，另设阴性对照管与阳性对照管，阴性对照管为不添加菌液和中草药的LB培养基，阳性 对照管为不添加中草药只添加菌液的LB培养基。接种后将试管置于28°C恒温培养24 h后 观察结果。

[0024] 最小抑菌浓度判定标准为：首先在阳性对照管生长菌呈浑浊状，而阴性对照管呈 透明状的前提下，再观察其他管的浑浊情况，以判断不同质量浓度药液的抑菌作用，如管内 呈浑浊，证明有细菌生长。如试管内澄清透明，证明无细菌生长。以肉眼观察不浑浊管的最 小药物浓度作为该中草药对该菌株的最小抑菌菌浓度MIC。对于药液颜色深而难于判断的 试管，做进一步平板涂布培养，在28°C下培养2d后，根据平板上菌体生长情况来确定试管 内菌体生长情况，以液体培养24h抑制菌体生长最低浓度为该中草药最小抑菌浓度。

[0025] 3、抑菌实验结果

[0026] 各中草药对鳗弧菌的体外抑菌作用，结果如表1所示，86种中草药中有42种中草 药对鳗弧菌具不同程度的抑菌作用。首先，五味子、石榴皮和艾叶对鳗弧菌的抑菌作用最 强，MIC均达到了 12. 5mg/mL。其次，芦荟、枯矾、儿茶、稀签草对鳗弧菌也有较强的抑菌作 用，其MIC均为25mg/mL。此外，地榆、半边莲、功劳叶、槟榔、木瓜、乌桕、灸没药、白头翁、茵 陈、天南星、黄芩等植物对鳗弧菌也有一定的抑菌作用，其MIC均为50mg/mL。穿心莲、虎杖 片、使君子、蒲公英、蛇麻子、马齿苋、连翘、龙胆草、苍术、丹皮、牵牛子、公丁香、紫花地丁、 威灵仙、龙葵、五倍子、黄芪、白花蛇舌草、柴胡、吴芋、乌梅、大青叶、车前草、羲术等23种草 药对鳗弧菌的抑制作用并不很明显，其MIC均为100mg/mL。地肤子、鹤虱、苏叶、地锦草、 贯众瓣、蛇莓草、漏芦子、决明子、苦参片、黄柏、千里光、篇蓄、紫苏梗、青蒿、佩兰、夏枯草、 石菖蒲、板蓝根、榧子、首乌、白芷、白果、莱菔子、诃子肉、苏子、郁金、鹅不食、白芍、百部、厚 朴、生紫、野菊花、大黄、知母、百鲜皮、甘草、金银花、马鞭草、覆盆子、乌药、牛蒡子、重楼、黄 连、鱼腥草等的44种中草药在试验浓度下对鳗弧菌无抑菌作用。

[0027] 实施例4

[0028] 抑菌效果最优的中草药配方设计

[0029] 从实施例1的42种中草药中选取来源丰富、价格便宜且对鳗弧菌抑菌效果最显 著的四种最常用的中草药，即石榴皮、艾叶、五味子和芦荟，用其进行正交试验，根据正交试 验方法设计出不同的中草药配方，再采用上述方法测试不同中草药配方对鳗弧菌的抑菌效 果。

[0030] 为了研究不同中草药配伍对鳗弧菌的最小抑菌浓度，本研究选用四因素四水平 L16(45)的正交试验设计方法。正交试验中四个因素（如表2所示）分别是石榴皮、艾叶、五 味子和芦荟，四个水平分别是6.25 mg/ml、12.5 mg/ml、25mg/ml和50mg/ml。以正交试验的 16种配方(如表3所示)为母液，通过上述实施例3所述二倍稀释法测定鳗弧菌的最小抑菌 浓度，分析各因素对鳗弧菌的最小抑菌浓度的差异显著性。最后通过正交试验结果找到各 因素的最佳浓度配比，并测定最佳中草药配比对鳗弧菌的最小抑菌浓度，验证正交试验分 析得到的结果。

[0031] 表2正交试验因素水平表

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[0033] 表3中草药对鳗弧菌抑菌作用正交试验结果

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[0035] 直观分析表3可看出，四个因素的极差从大到小依次为Rc > RA > RB > RD，极差相 差越大，说明对鳗弧菌的抑菌作用越强，四个因素对鳗弧菌的抑菌作用的影响由大到小依 次为五味子 > 石榴皮 > 艾叶 > 芦荟。并且从平均值上看，均值越小说明抑菌作用越强，因此 得出最优水平为A2B4C 2D4，说明对鳗弧菌抑菌作用最强的中草药复方药剂配方是由石榴皮、 艾叶、五味子和芦荟以1 :4 :1 :4的比例混合而成的。以最优配方配制复合药剂进行验证实 验，实验结果表明，其MIC为3.906mg/mL。即石榴皮、艾叶、五味子和芦荟按质量比1 :4 :1 : 4的比例混合可作为鳗弧菌抑菌药物的首选配伍组合。

[0036] 当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的 普通技术人员在本发明的实质范围内，作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的 保护范围。