一种段木银耳拌种剂及其制作方法

摘要

本发明涉及一种段木银耳拌种剂，包括银耳孢子悬浮液40～50ml、葡萄糖18～20g、硫酸镁3～5g、硫酸锌2.5～2.7mg、硫酸铁2～2.5mg、硫酸铜0.1～0.5mg、磷酸二氢钾2～3g、维生素B10.1～0.2mg、维生素B60.3～0.5mg、烟酸0.3～0.5mg、吲哚丁酸0.2～0.4mg、激动素0.5～1mg，其余为无菌水，配成1000ml混合液。本发明还涉及银耳拌种剂的制作方法。将拌种剂应用于银耳菌种拌种时，可以弥补银耳菌种中的银耳菌数量不足的现象，此外，在拌种剂中添加单糖及微生素和矿质元素等，有助于银耳菌丝快速定植生长，提高银耳菌的自身吸收利用营养的能力，从而提高出耳率和单产。

权利要求

1.一种段木银耳拌种剂，其特征在于：其配方由以下组份组成：

银耳孢子悬浮液40～50ml 、葡萄糖18～20g、硫酸镁3～5g、硫酸锌2.5～2.7mg、硫酸铁2～2.5mg、硫酸铜0.1～0.5mg、磷酸二氢钾2～3g、维生素B10.1～0.2mg、维生素B60.3～0.5mg、烟酸0.3～0.5mg、吲哚丁酸0.2～0.4mg、激动素0.5～1mg，其余为无菌水，配成1000ml混合液；

所述银耳孢子悬浮液采用耳木分离纯化的银耳菌丝作为种源，并在接种时人为制造受热、搅动、浸水的三种刺激影响，使银耳菌丝在转管后培养转化成酵母状节孢子，为配制孢子悬浮液提供基质。

2.一种权利要求1所述的段木银耳拌种剂制作方法，其特征在于：所述的银耳孢子悬浮液的制作方法包括如下步骤：（1）获取银耳纯菌种：采用耳木分离法获得分离纯化的银耳菌丝；

（2）配制试管培养基：在试管上制作PDA斜面培养基，试管高压灭菌后冷却干燥，至试管培养基表面无游离水而试管管壁存有冷凝水；

（3）接种：用无菌操作法，将接种针在酒精灯火焰上灼烧一下，趁热用接种针将步骤（1）获得的银耳菌丝块捣碎，而后用接种针挑取少许银耳菌丝接入步骤（2）配制的试管PDA试管斜面培养基上；试管管壁有冷凝水；

（4）培养：接种工作完成后，将试管移入恒温室培养，至斜面培养基表面出现节孢子，且节孢子菌团总面积占斜面培养基面积的20%-30%；

（5）稀释：用无菌水冲洗试管培养基表面，得到银耳孢子悬浮液，然后用无菌水稀释，每支试管配成500ml稀释液，备用。

3.一种权利要求2所述的段木银耳拌种剂制作方法，其特征在于：

所述步骤（2）中，试管高压灭菌的工艺参数为，上压0.05MPa后放冷气，然后上压至

0.15MPa、126℃时保持30分钟；冷却干燥温度为25℃～30℃，时间为5～7天。

说明书

一种段木银耳拌种剂及其制作方法

技术领域

[0001] 本发明涉及农业技术领域，尤其涉及一种段木银耳栽培菌种所使用的拌种剂及其制作方法。

背景技术

[0002] 段木栽培的银耳菌种是由银耳菌和香灰菌配对后制作的混合菌种。其中银耳菌丝的特点：能直接利用简单的糖类（碳水化合物），如单糖和双糖，但不能利用多糖，不能直接利用纤维素、半纤维素、木质素和淀粉等大分子化合物，只有通过香灰菌（耳友菌丝，羽毛状菌丝）伴生作为“开路先锋”将基质中的大分子化合物分解为简单的小分子化合物才能被吸收利用；银耳菌丝生长速度缓慢；银耳菌丝易扭结、胶质化形成原基（耳芽）；耐旱耐低温但不耐湿不耐高温。香灰菌丝的特点：与银耳菌丝相反，香灰菌具有较高的纤维素酶、半纤维素酶和多酚氧化酶活性，分解纤维素和半纤维素的能力较强，生长速度极快；香灰菌丝初期白色，后期会分泌黑色素，使培养基变黑；香灰菌丝不耐旱，基质干燥后即死亡。在生产过程中，银耳栽培必须注意银耳菌和香灰菌合理的配比，有研究表明，银耳菌丝与香灰菌丝两者比例应达到1000：1也不过分。因此为了保证银耳菌和香灰菌混合均匀，在接种前进行拌种预处理。由于银耳菌丝主要生长于培养基表层，菌丝致密、结实，香灰菌丝则整瓶（整袋）培养基都有。菌种的预处理先用接种刀把菌种表层的银耳原基挖弃，把表层2cm左右捣碎，再把下层较疏松的香灰菌丝挖起与之混合拌匀。但这样的拌种预处理方法，存在着如下的问题：

[0003] 1、资源浪费大。由于考虑到银耳菌丝与香灰菌丝的合理配比，一般原种和栽培种只能装半瓶培养基，且在利用时，瓶内下部的香灰菌要舍弃不用，一般每瓶原种接种40～50瓶栽培种，一瓶栽培种只能接80～100孔，而传统段木银耳栽培属生料接种，菌种浪费大，接种量大，若按标准制作菌种，一瓶菌种最多只能接种段木25公斤左右。

[0004] 2、银耳菌与香灰菌配比不合理：由于传统段木银耳栽培用种量大，栽培种培养料装量较多，个别菌种厂家为了降低生产成本和运输方便，将银耳栽培种使用塑料袋制作，装袋量较大，每袋装干料0.4公斤左右且全部利用，一般1瓶（袋）菌种可接种40～50公斤段木，香灰菌丝量多占优势，银耳菌丝总量相对较少（银耳菌只相当于现有标准接种量的一半），银耳菌丝和香灰菌丝配比不合理。

[0005] 由于以上因素，造成在传统段木银耳栽培产区，即使拌种后，其银耳菌丝总量也严重不足，造成出耳率降低或银耳子实体长势弱，甚至出现“瞎棒”现象，直接影响产量和产品商品性，生产效益呈逐年下滑态势。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种段木银耳拌种剂，使银耳菌和香灰菌配比合理，并为银耳菌丝接种段木后补充一部分能量，满足银耳菌丝在段木上恢复初期起步的营养需要，促进银耳菌丝迅速恢复、定植生长，进而为提高段木银耳的产量和质量奠定良好的基础。

[0007] 本发明的另一个目的是提供一种上述段木银耳拌种剂的制作方法。

[0008] 为解决上述技术问题，本发明的段木银耳拌种剂配方如下：

[0009] 银耳孢子悬浮液40～50ml、葡萄糖18～20g、硫酸镁3～5g、硫酸锌2.5～2.7mg、硫酸铁2～2.5mg、硫酸铜0.1～0.5mg、磷酸二氢钾2～3g、维生素B10.1～0.2mg、维生素B60.3～0.5mg、烟酸0.3～0.5mg、吲哚丁酸0.2～0.4mg、激动素0.5～1mg，其余为无菌水，配成1000ml混合液。

[0010] 本发明的拌种剂应用银耳孢子悬浮液原理，并添加微量元素和小分子糖类，如糖、镁、锌、铁、铜、磷、钾等矿质元素、维生素B1和B6；还添加了烟酸、吲哚丁酸、激动素等物质。烟酸又称尼克酸、维生素PP，主要参与氨基酸的合成和降解，并参与DNA的复制、修复和细胞分化；吲哚丁酸的生理作用类似内源生长素，刺激细胞分裂和组织分化；激动素是一种非天然的细胞分裂素，具有促进细胞分裂的作用。

[0011] 通过上述优选组分的合理配比所配制的拌种剂，更有利地促进细胞分化，使银耳菌丝快速定植。在银耳菌种拌种时，每瓶菌种添加本发明的拌种剂一份，与菌种一起拌种，拌种均匀后即可接种使用。可以增加接种时菌种中的银耳孢子数量，使银耳菌和香灰菌配对比例达到相应科学合理，并提供银耳萌发定植初期营养，加速银耳菌丝生长，提高出耳率。

[0012] 上述段木银耳拌种剂中的银耳孢子悬浮液制作方法如下：

[0013] （1） 获取银耳纯菌种：采用耳木分离法获得分离纯化的银耳菌丝；

[0014] （2） 配制试管培养基：在试管上制作PDA斜面培养基，试管高压灭菌后冷却，至培养基表面无游离水而试管管壁存有冷凝水；

[0015] （3） 接种：用无菌操作法，将步骤（1）获得的银耳菌丝接入步骤（2）配制的管壁有冷凝水的试管斜面培养基上；

[0016] （4） 培养：接种工作完成后，将试管移入恒温室培养，至培养基表面出现较多的节孢子，即节孢子菌团总面积占斜面培养基面积的20%-30%。

[0017] （5） 稀释：用无菌水冲洗试管培养基表面，得到银耳孢子悬浮液，然后用无菌水稀释，每支试管配成500ml稀释液，备用。

[0018] 由于银耳是四极性异宗结合的菌类，银耳有丝状体相和酵母相两相，营养体能在环境或其他因素的影响下，在酵母型和菌丝型两种形态间发生可逆互变，银耳菌丝只要受到环境条件的刺激，如受热、搅动、浸水都可以断裂成酵母状节孢子，以芽殖方式进行无性繁殖，在适宜条件下再萌发形成菌丝，完成其生活史。利用银耳菌丝培养的特异变化特别是其不耐湿的特性，本发明配制孢子悬浮液采用耳木分离纯化的银耳菌丝作为种源，并在接种时人为制造受热、搅动、浸水的三种刺激影响，使其发生特异变化，使银耳菌丝在转管后培养转化成酵母状节孢子，为配制孢子悬浮液提供基质。

[0019] 采用本发明方法制作的银耳孢子悬浮液比子实体弹射孢子悬浮液相比，有以下特点，一是后者采用的是子实体弹射孢子，子实体成熟时，耳片表面产生许多担孢子，将担孢子弹射到PDA培养基上，使担孢子在适宜的条件下芽殖形成酵母状分生孢子，再制作成孢子悬浮液，此方法所制孢子悬浮液属于有性繁殖，易产生分化，遗传性状不太稳定，而采用耳木分离法获取的银耳菌丝属无性繁殖，其遗传性状十分稳定不易分化；二是采用耳木分离法获取纯化的银耳菌丝在制成孢子时，利用的是其对环境的特异性可逆性变化原理，其产生的节孢子耐受力、抗逆性强，有利于促进拌种后快速萌发成菌丝，从而弥补混合菌种中银耳菌丝量不足，实现银耳菌和香灰菌合理的配比。

具体实施方式

[0020] 下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但不应将此理解为发明的上述主题的范围仅限于下述实施例。

[0021] 实施例1

[0022] 段木银耳拌种剂其配方由以下组份组成：

[0023] 银耳孢子悬浮液40ml、葡萄糖18g、硫酸镁3g、硫酸锌2.5mg、硫酸铁2mg、硫酸铜0.1mg、磷酸二氢钾3g、维生素B10.2mg、维生素B60.3mg、烟酸0.5mg、吲哚丁酸0.4mg、激动素1mg；其余为无菌水，配成1000ml混合液。

[0024] 上述段木银耳拌种剂制作方法如下：

[0025] 1、制取银耳孢子悬浮液

[0026] （1）获取银耳纯菌种：采用耳木分离法获得分离纯化的银耳菌丝；

[0027] （2） 配制试管培养基：在试管上制作PDA斜面培养基，将试管高压灭菌，高压灭菌工艺参数为，上压0.05MPa后放冷气，然后上压至0.15MPa、126℃时保持30分钟。然后将试管在25℃～30℃冷却干燥5～7天，至试管培养基表面无游离水而试管管壁存有冷凝水；

[0028] （3） 接种：用无菌操作法，将接种针在酒精灯火焰上灼烧一下，趁热用接种针将步骤（1）获得的银耳菌丝块捣碎，而后用接种针挑取少取银耳菌丝接入步骤（2）配制的试管PDA试管斜面培养基上；试管管壁有冷凝水；

[0029] （4） 培养：接种工作完成后，将试管移入恒温室在23℃～25℃温度条件下培养5天，至培养基表面出现较多的节孢子，即节孢子菌团总面积占斜面培养基面积的20%-30%。无齿轮状的节孢子呈乳白状隆起，边缘光滑。镜检孢子呈桃状或芝麻状。

[0030] （5） 稀释：在无菌条件下，如超净工作台等环境下，用无菌水冲洗试管培养基表面，得到银耳孢子悬浮液，然后用无菌水稀释，每支试管配成500ml稀释液，备用。

[0031] 2、按照上述段木银耳拌种剂配方中的组分和重量，称取除银耳孢子悬浮液、无菌水之外的各组分，然后用无菌水溶解；

[0032] 葡萄糖18g、硫酸镁3g、硫酸锌2.5mg、硫酸铁2mg、硫酸铜0.1mg、磷酸二氢钾3g、维生素B10.2mg、维生素B60.3mg、烟酸0.5mg、吲哚丁酸0.4mg、激动素1mg；

[0033] 3、在无菌条件下，量取步骤1中获得银耳孢子悬浮液40ml，然后与步骤2配制的溶液混合，再添加无菌水配成1000ml混合液，即得本发明的段木银耳拌种剂。将混合液分装于容积为10ml的容器内，备用，保质期30天。

[0034] 实施例2

[0035] 段木银耳拌种剂其配方由以下组份组成：

[0036] 银耳孢子悬浮液50ml、葡萄糖20g、硫酸镁5g、硫酸锌2.7mg、硫酸铁2.5mg、硫酸铜0.5mg、磷酸二氢钾2g、维生素B10.1mg、维生素B60.5mg、烟酸0.3mg、吲哚丁酸0.2mg、激动素0.5mg，其余为无菌水，配成1000ml混合液。

[0037] 本实施例段木银耳拌种剂制作方法的步骤1同实施例1。

[0038] 步骤2按照上述段木银耳拌种剂配方中的组分和重量，称取除银耳孢子悬浮液、