一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法

摘要

本发明提供了一种桑黄菌丝体的培养基及其制备方法，以及用该培养基培养桑黄菌丝体的方法，该培养基包括大米和培养液。本发明的培养基采用大米作为原料不仅材料易取，而且非常经济，操作简单，且效果良好。

权利要求

1.一种桑黄菌丝体的培养基，其特征在于该培养基包括如下组分：大米和培养液，其中大米的重量(g)与培养液的体积(ml)比为x：(x+(0～30))，其中x＝30～60；

其中培养液含：2.5％葡萄糖、0.3％KH2PO3和0.15％MgSO4·7H2O。

2.一种制备权利要求1所述培养基的方法，其特征在于该方法为：配置培养液，将大米置于培养液中，高压灭菌。

3.一种利用权利要求1所述培养基培养桑黄菌丝体的方法，该方法为：将桑黄母种接种于培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天；

将培养好的菌丝体连同培养基至于30℃鼓风烘箱中烘干。

说明书

一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法

技术领域

[0001] 本发明涉及食用菌培养领域，具体的说涉及一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法。

背景技术

[0002] 鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)，俗称桑黄菇、桑耳，是近年来开发的一种多年生药用真菌，最早收载于李时珍《本草纲目》中。传统中医认为桑黄性甘、平，味苦、辛，归肝、膀胱经，用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭经、脾虚泄泻等。众多的实验研究表明，桑黄中的多糖和黄酮类化合物有重要的生物活性，在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复方面有重要作用。

[0003] 自由基是人体新陈代谢的产物，一般情况下，人体有能力清除自身所产生的自由基，但是随着人体的衰老，清除自由基的能力减弱。如果产生的自由基不能被及时清除，就会加速机体衰老，甚至使人体发生病变等。现有研究表明：药用真菌桑黄中的多糖和黄酮类物质具有很好的抗氧化作用；不过现在的研究多集中在桑黄子实体提取物及液体发酵的研究方面，而对固体发酵桑黄菌丝体及其抗氧化作用的研究较少。野生的子实体主要分布于黑龙江、陕西等林区，资源蕴藏量稀少，由于产量低导致价格昂贵。目前桑黄子实体主要靠人工栽培获得，但是人工栽培周期长，需要较大的人力财力投入。相比之下，发酵技术具有周期短、可控性好、实验环境简单等优点，是获得桑黄次生代谢产物的良好途径。而液体发酵在培养的过程中易污染，在一定培养时间内不能达到预期的生物量，培养过程中不好人为地控制。

发明内容

[0004] 本发明的目的之一在于提供一种桑黄菌丝体的培养基，该培养基包括如下组分：

[0005] 大米和培养液，其中大米的重量（g）与培养液的体积（ml）比为x：(x+（0-30），其中x≥10；

[0006] 其中培养液含：2.5%葡萄糖、0.3%KH2PO3和0.15%MgSO4·7H2O。

[0007] 上述培养基是通过如下方法配制的：

[0008] 配置培养液（2.5%葡萄糖，0.3%KH2PO3，0.15%MgSO4·7H2O），将大米置于培养液中，高压灭菌。

[0009] 本发明还提供了一种利用上述培养基培养桑黄菌丝体的方法，该方法包括如下步骤：

[0010] 将桑黄母种接种于上述培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天；

[0011] 将培养好的菌丝体连同培养基至于30℃鼓风烘箱中烘干。

[0012] 经上述米饭培养基发酵后的桑黄菌丝体具有抗氧化的生物活性作用，可作为食品添加剂应用，提高食品的营养价值。

[0013] 本发明的创新之处：

[0014] 1、使用本发明的培养基进行培养，相对液体培养具有方便易行、节约能源、不易污染的优点。

[0015] 2、本发明的培养基，采用大米作为原料不仅材料易取，而且非常经济，效果良好。在液体培养中动力能源消耗很大，而本发明培养菌种只需在一定的温度下静置培养，节省能源，并且生长状态也优于液体培养。同时通过抗氧化实验发现，培养的菌丝体有较强的抗氧化效果。如今食品添加剂受到广泛关注，大米作为一种营养安全的食品，培养的菌丝体可作为添加剂来提高食品的营养价值。

具体实施方式

[0016] 桑黄菌种（Phellinus baummii Pilat，来自中国微生物菌种保藏中心上海食用菌分中心，编号为：Phellinus baumii Pilat3249）。

[0017] 实施例1-4配制培养基

[0018] 配置2.5%葡萄糖，0.3%KH2PO3，0.15%MgSO4·7H2O的培养液，分别取60ml于250ml培养瓶中，然后分别称取30、40、50、60g的大米置于培养液中，浸泡6小时左右，121℃高压灭菌30min。大米（润庄香粳）由上海润庄农业科技有限公司提供。

[0019] 表1大米装量对生物量的影响

[0020]

[0021] 注：生物量的回收率是指最终烘干后的菌丝体与大米装量的比值。

[0022] 实施例5用实施例3的培养基进行培养

[0023] 将桑黄菌种长于PDA斜面上，生长周期为一周。

[0024] 取上述桑黄菌种接种于实施例1的培养基上，置于26℃生化培养箱中培养，生长周期25-30天。

[0025] 取出桑黄菌丝体，至于30℃的鼓风烘箱中烘干。

[0026] 实施例6菌丝体醇提物中黄酮含量的测定

[0027] 将烘干的菌丝体加入10倍体积的80%乙醇，浸泡24h，过滤；收集滤液，残渣再用10倍体积的80%乙醇浸泡过夜，重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，得到桑黄菌丝体醇提物。

[0028] 用NaNO2-Al(NO3)3比色法测定黄酮含量，烘干后的菌丝体醇提物中黄酮的重量百分比含量为40%。

[0029] 实施例7桑黄菌丝体抗氧化活性的测定

[0030] 桑黄菌丝体醇提物的来源同实施例6中；测定桑黄菌丝体醇提物的抗氧化活性，主要进行清除过氧化氢，超氧阴离子和DPPH实验。

[0031] 具体方法如下

[0032] 一、清除H2O2自由基实验

[0033] 将醇提物用70%乙醇配制成四个浓度，分别是1μg/mL，10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL。对H2O2的清除实验使用鲁米诺-H2O2发光反应体系，用80%乙醇做为空白对照。分别取5μL加入96孔板，由泵1泵入150μL鲁米诺-CBS溶液（pH9.5），泵2泵入
10μL6%H2O2，在20℃启动发光反应，每0.6s记录一次发光值，连续记录30s。发光程序如表
3-1：

[0034] 表3-1H2O2自由基的发光程序

[0035]

[0036] H2O2自由基清除率计算公式如下

[0037]

[0038] 结果表明，高浓度的桑黄菌丝体醇提物对H2O2自由基的清除率达到80%。

[0039] 二、清除超氧阴离子实验

[0040] 将醇提物用80%乙醇溶解配制成不同的浓度，即500μg/mL，800μg/mL，1000μg/mL，2000μg/mL，用80%乙醇做空白对照。采用鲁米诺-邻苯三酚-CBS体系的化学发光法。各浓度样品分别取10μL加入96孔板。由泵1泵入6.25×10-4mol/L邻苯三酚溶液，泵2泵入150μL鲁米诺-CBS溶液（pH10.2）。在20℃启动发光反应，每0.6S收集一次光信号，连续收集30S。

[0041] 发光程序如表3-2：

[0042] 表3-2清除超氧阴离子的发光程序

[0043]

[0044] 超氧阴离子的清除率公式同清除H2O2自由基清除率公式