本发明公开了麻竹（Dendrocalamus latiflorus Munro）花药诱导体胚并获得再生植株的方法，属于生物技术和现代农业技术领域。本发明包括外植体的选择、外植体的预处理、外植体的消毒与接种、体胚诱导与增殖、体胚分化、组培苗生根培养与移栽，其特征在于，麻竹花药体胚诱导与增殖培养基为M8+2 mg?L-1 NAA+0.5 mg?L-1 6-BA+15 mg?L-1 PAA+7.5 mg?L-1 STS+500 mg?L-1 CH+100 mg?L-1 Proline+100 mg?L-1 Glutamin+5.4% Maltose+0.8% Agar，pH5.8，所述体胚分化培养基上MS+1 mg?L-1 NAA+0.5 mg?L-16-BA+4 mg?L-1KT+3%Sucrose+0.8% Agar，pH5.8；所述麻竹花药组培苗生根培养基为1/2MS+ 3%Sucrose+0.8% Agar 3%,pH5.8。利用本发明得到的再生苗可用于麻竹品种选育。
1.一种麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法，包括外植体的选择、外植体的预处理、外植体的消毒与接种、体胚诱导与增殖、体胚分化、组培苗生根培养与移栽，其特征在于，所述外植体经消毒后先在添加植物生长调节剂的改良M8 培养基上诱导出愈伤组织并形成体胚，再转移至分化培养基生成植株，在生根培养基上生长3-5 周后，移植至泥炭土蛭石基质中于温室或光照培养箱内培养，所述的分化培养基为MS+1 mg•L-1 NAA+0.5 mg•L-1
6-BA+4 mg•L-1 KT+3%Sucrose+0.8% Agar，pH5.8，所述的生根培养基为1/2MS+ 3%Sucrose+
0.8% Agar，pH5.8，所述的改良M8 培养基为M8+2 mg•L-1 NAA+0.5 mg•L-1 6-BA+15 mg•L-1 -1 -1 -1 -1PAA+7.5 mg•L STS+500mg•L CH+100 mg•L Proline+100 mg•L Glutamin+5.4% Maltose +0.8% Agar，pH5.8。
2.根据权利要求1 所述的一种麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法，其特征在于，所述的外植体为麻竹未成熟花药，从外观上观察，小穗呈淡紫色，长1.2cm，顶端小花柱头稍微露出，花药呈淡黄色。
3.根据权利要求1 所述的一种麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法，其特征在于，所述外植体在接种前先经过2-6 天的4-15℃预处理。
4.根据权利要求1 所述的一种麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法，其特征在于，所述外植体采用流水冲洗1小时，70% 乙醇表面消毒，消毒时间为30秒，无菌水冲洗3-5次后，1%-3% 次氯酸钠进行表面消毒，消毒时间控制在10-15分钟，无菌水冲洗3-5次。
5.根据权利要求1 所述的一种麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法，其特征在于，所述体胚诱导与增殖时，培养条件为暗培养；温度为22-28℃；当诱导体胚分化时，光照条件为人工辅助光1000-3000lux，光照时间14-16 小时/天；温度为22-27℃。
麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及麻竹的组织培养技术，特别是一种从麻竹花药诱导体胚，最终获得再生植株的方法，属于生物技术和现代农业技术领域。
背景技术
[0002] 麻竹(Dendrocalamus latiflorus Munro)为禾本科竹亚科牡竹属麻竹亚属，原产中国，自然分布于福建、台湾、广东、广西、贵州和云南等省，是我国华南及东南沿海地区重要的优良、速生、笋材两用的大型丛生竹种之一。麻竹很少开花，品种选育主要以自然界优良无性系选育为主，遗传改良受到限制。虽然以麻竹营养器官为外植体能够获得愈伤组织，但难以诱导分化，获得再生植株。1990年Tsay首先报道了麻竹花药离体培养（Plant Cell Rep 9, 349–351）。他们在含2，4-D的培养基上诱导出胚性愈伤并获得再生植株，经过15个月的培养获得了十几棵单倍体植株，移栽生长6个月后死亡，此后未见相关报道。利用花药离体培养可在短期内获得性状丰富的单倍体或纯合的二倍体植株，大幅度缩短育种周期，提高选择效率。对于麻竹来说，通过花药培养诱导胚性愈伤组织，建立植株再生体系，突破麻竹组织培养技术的瓶颈，将为现代生物技术应用于麻竹育种开辟新的途径。
发明内容
[0003] 本发明提供一种麻竹花药培养方法，通过选择处于特定发育时期的未成熟花药、添加植物生长调节剂、优化培养条件来提高麻竹胚性愈伤组织的诱导率和再生植株的成功率，
[0004] 本发明的具体描述如下：
[0005] 1、所述的麻竹花药应选择小孢子的发育时期为单核靠边期的花药，此时从外观上观察，小穗呈淡紫色，长1.2cm左右，顶端小花柱头稍微露出，花药呈淡黄色。
[0006] 2、所述的外植体在接种前先经过2-6天的低温（4-15℃）预处理。
[0007] 3、所述的外植体采用流水冲洗1小时，70%乙醇表面消毒，消毒时间为30秒， 无菌水冲洗3-5次后，2% 次氯酸钠进行表面消毒，消毒时间控制在10-15分钟，无菌水冲洗3-5次。
[0008] 4、所述的体胚诱导与增殖时，培养条件为暗培养；温度为22-28℃。
[0009] 5、所述的体胚分化时，光照条件为人工辅助光1000-3000lux，光照时间14-16小时/天；温度为22-27℃。
[0010] 6、所述体胚诱导与增殖培养基M8+2 mg•L-1NAA+0.5 mg•L-16-BA+15 mg•L-1PAA+7.5 mg•L-1STS+500 mg•L-1CH+100 mg•L-1 Proline+100 mg•L-1 Glutamin+5.4% Maltose+
0.8% Agar, pH5.8。
[0011] 7、所述体胚分化培养基为MS+1 mg•L-1 NAA+0.5 mg•L-16-BA+4 mg•L-1KT+3%Sucrose+0.8% Agar, pH5.8。
[0012] 8、所述的麻竹生根培养基为1/2MS+ 3%Sucrose+0.8% Agar 3%, pH5.8。
